Aspectos de la Microscopía Óptica: Iluminación de

Kölher y Tinciónes.

Moncada M1 Ortiz D2 & Ramírez J3

1. Estudiante curso Biología General, Facultad Ciencias de la Salud. Institución

Universitaria Colegio Mayor de Antioquia, Carrera 78 # 65 – 46,
smoncada@est.colmayor.edu.co Medellín – Colombia
2. Estudiante curso Biología General, Facultad Ciencias de la Salud. Institución
Universitaria Colegio Mayor de Antioquia, Carrera 78 # 65 – 46,
dortiz@est.colmayor.edu.co Medellín – Colombia
3. Estudiante curso Biología General, Facultad Ciencias de la Salud. Institución
Universitaria Colegio Mayor de Antioquia, Carrera 78 # 65 – 46,
joanar@est.colmayor.edu.co Medellín – Colombia

Resumen. Partiendo del protocolo para el buen uso y manejo del microscopio
[1] se llevó a cabo el reconocimiento de cada una de sus partes: componentes
mecánicos, componentes ópticos y componentes lumínicos, basados en
observaciones de diversos tejidos en preparaciones coloreadas y sin colorear.
Con dichas preparaciones se experimentaron combinaciones de intensidad
lumínica y objetivo de observación, con el fin de identificar las posiciones
adecuadas de los componentes ópticos al momento de hacer uso del
microscopio, intentando realizar un procedimiento similar a la iluminación de
Kölher [1]. Se obtuvieron imágenes de variadas calidades que permitieron la
familiarización con técnicas más adecuadas para el uso del microscopio
óptico de campo claro.

Palabras clave: Microscopía óptica, Iluminación de Kölher, Tinción.

1. INTRODUCCIÓN También, con los diferentes objetivos, y el control de

Con el paso del tiempo, el ser humano se ha visto a
la necesidad de conocer su entorno y
funcionamiento, desde el nivel general, hasta el
nivel celular y molecular. Desde la invención del
microscopio en el siglo XVI, el hombre ha podido
sumergirse en este mundo, empezando por observar
las células de un corcho, lo cual solo sería el primer
paso. Con el perfeccionamiento del microscopio y la
invención del microscopio óptico compuesto, el
hombre ha podido visualizar las células, no solo de
corcho, si no de animales, vegetales, hongos [2], y
de los diferentes reinos. A su vez, ha visto la
interacción de las organelas celulares con diferentes
tipos de tinciones [3][4], las cuales ha permitido
conocer más a fondo su funcionamiento [2].
la intensidad de luz a través del diafragma, ha
podido visualizar en base a la interacción célula-luz,
y mejorar la capacidad de resolución del instrumento
[2][5]. Si bien existe también el microscopio
electrónico cuya capacidad de resolución es mayor
que la del microscopio óptico, el adecuado uso del
sistema de lentes y luz pueden hacer del microscopio
óptico una herramienta que proporcione información
acertada en el estudio de la célula [1][5].
Esta experimentación pretende identificar como los
factores ya mencionados y la combinación de los
mismos influyen en la calidad de las imágenes
obtenidas en el microscopio óptico de campo claro,
partiendo del fenómeno de luz y las interacciones
con colorantes, con el fin de mejorar las técnicas de

1
observación [1]. Dadas las limitaciones técnicas para
aprender la técnica de Iluminación de Kohler, se
realizaron observaciones con el fin de evidenciar las
diferencias en las imágenes formadas por un
microscopio cuando se varía la intensidad de la luz
incidente..
2. METODOLOGÍA
Se realizaron montajes de diferentes tejidos y fueron
observados al microscopio en objetivos secos, según
lo propuso la guía [1]. Cada muestra fue observada a
diferentes intensidades de luz haciendo aperturas y
cierres del diafragma en cada objetivo seco (4X, 10X
y 40X). Algunas muestras fueron teñidas para
diferenciar sus tejidos o hacerlas visibles.
Las muestras observadas de manera directa fueron:
Corte de un tallo fresco, Cilantro en este caso; Corte
de Corcho, epitelio del bulbo de cebolla y mucosa
bucal humana.
Se procuró para el corcho y el tallo fresco obtener
cortes muy finos. El corte de corcho fue observado
directamente, sobre una placa portaobjetos y cubierto
con laminilla. El corte del tallo fresco y el epitelio de
la cebolla fueron observados en fresco (añadiendo
una gota de solución salina) y coloreados con Azul
de Metileno (añadiendo una gota del reactivo). El
epitelio de la cebolla se obtuvo extrayendo un trozo
del tejido superficial en la cara interior de una de las
capas del bulbo.
La muestra de mucosa bucal humana fue tomada
durante la sesión de práctica. Esta muestra se obtuvo
frotando un palillo en las paredes bucales del
donante, y esparciéndola en placa portaobjetos, Una
vez obtenida una cantidad de muestra deseada, se
agregó una gota de azul de metileno.
Todas las preparaciones fueron cubiertas con
laminilla cubreobjetos y observadas al microscopio
bajo los diferentes objetivos secos (4X, 10X y 40X)
variando la intensidad de la luz incidente mediante
el grado de apertura del condensador (posición del
diafragma), obteniendo diferentes imágenes, con el
fin de identificar factores influyentes
3. RESULTADOS
La tabla 1 muestra y compara las observaciones
obtenidas de una muestra delgada (epidermis de la
cebolla) y una muestra gruesa (Corte de un corcho).
El fondo gris en cada celda indica en cada fila
2
(Objetivo de observación) cual posición apertura del
diafragma permitió mayor observación, obteniendo
que del corte grueso (Corcho) la intensidad de luz
necesaria no coincidió con la sugerencia del
instrumento. Debido a que en esta muestra se
propuso obtener detalles del sector delgado del corte,
la observación en 4x requirió de mayor cantidad de
luz, pues el campo de observación incluyó sectores
que necesitaron intensidades mayores de luz.
En el caso de la cebolla teñida con Lugol,
encontramos que las intensidades de luz necesarias
para una observación óptima de estructuras
coincidieron en mayor medida con los parámetros
sugeridos por el instrumento en cuanto a la
intensidad lumínica en combinación con el objetivo
de observación: con el objetivo de 40X y posición del
diafragma mayor a 10X, dio como resultado
imágenes sobreexpuestas a la luz que no permitían
observar tantos detalles como las imágenes con el
diafragma en posición 10X.
La tabla 2 compara las observaciones entre muestras
coloreadas y sin colorear. Se evaluaron nuevamente
las células del tejido epitelial de la cebolla, las cuales
fueron visibles en presencia de coloración (Lugol),
en cambio no fue posible observar detalles sin la
tinción. Se observaron también células de la mucosa
bucal coloreadas con Azul de Metileno.
De nuevo, las muestras fueron expuestas a diferentes
intensidades de luz con ayuda del diafragma,
obteniendo imágenes de calidades diferentes según
el grado de exposición. Para estas muestras, la
posición del diafragma sugerida por el instrumento
coincidió con el objetivo utilizado en la observación.
Para el caso de la cebolla sin colorear, no fue posible
obtener imágenes en el objetivo de 40X.
Además de los tejidos ya mencionados, se
observaron otros tejidos coloreados y sin colorear,
obteniendo imágenes que permitieron diferenciar
estructuras de los tejidos o deficiencias en la
observación. Así, del mismo modo que el epitelio de
la cebolla, existen diversidad de muestras que deben
recibir tinciones o tratamiento con colorantes para
permitir su estudio. (Figura 1)
  Muchos tejidos, células y demás, al carecer
de pigmentos, deben ser teñidos para poder
ser visualizados a través del microscopio.
Las tinciones, en conjunto con el manejo
adecuado de la intensidad lumínica y los
objetivos llevarán a observaciones mejores y
a mayores detalles, potenciando la
capacidad de resolución del juego de lentes.

6. REFERENCIAS

1. Guía de laboratorio

2. http://abelgalois.blogspot.com/2010/07/docu
mental-bbc-la-celula-cell.html

3. https://www.infowine.com/intranet/libretti/li
bretto14427-01-1.pdf

4. http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
Fig. 1. Comparación tejidos con tinción y sin tinción. El espécimen 2014/ir141b.pdf
corresponde al corte transversal de un tallo de Cilantro. En la parte
superior, observaciones a 40X, en la parte inferior, observaciones a
10X. Las muestras a la izquierda observadas sin tinción, y a la 5. Karp
derecha coloreadas con Azul de Metileno.

4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
 Incluir teoría de que es lo que pasa con el
condensador, el diafragma y los lentes.
(esquema lentes y luz en un microscopio)
 Incluir teoría de colorantes
 Acoplar esa teoría con los resultados
(imágenes obtenidas)
 Importancia de la laminilla cubreobjetos
TODO REFERENCIADO!!! COMO EN LA
INTRODUCCIÓN.
5. CONCLUSIONES
 El conocimiento de los diferentes
componentes del microscopio óptico y su
adecuado manejo es determinante a la hora
de obtener observaciones claras de la célula
o cualquier espécimen que se desee
observar.
 A pesar de las lentes y el condensador
ofrecer una guía para las combinaciones
luz/poder de aumento durante la
observación, algunas muestras no se rigen
según esta guía. Para el caso del corcho, por
ejemplo, dado del grosor de la muestra, fue
necesario utilizar mayor cantidad de luz
(mayor apertura del diafragma) de modo
que el haz de luz pudiese atravesar la
muestra; mientras en la cebolla, al ser una
capa tan delgada, la cantidad de luz
necesaria coincidió en mayor medida con la
apertura del diafragma que sugiere el
instrumento.

3
4
 MetilenoColorante: Azul deCélulas mucosa bucal *Colorante: LugolEpidermis Cebolla.

100xmadiafrag aApertur ma 40xDiafrag aApertur ma 10XDiafrag aApertur 100xmadiafrag aApertur ma 40xDiafragaApertur ma 10XDiafragaApertur
Objetivo 10x
Con tinción*

5
Objetivo 40x
Objetivo 10x
Sin Tinción
TABLA 2: Comparación de imágenes obtenidas de tejidos con y sin tinción.

Objetivo 40x