Agar Sangre base

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos. Al ser

suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis.
Fundamento
Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de prácticamente todos los
microorganismos que pudieran estar presentes. Si se añade sangre se pueden determinar
las distintas formas de hemólisis que pudieran tener lugar. Si se calienta se obtiene el Agar
Chocolate, también muy empleado. Por la adición de distintos antibióticos se obtienen
medios con caracteres selectivos.
Fórmula (por litro):
Infusión de Corazón (a partir de 375 g)........................... 10,0 g
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,3 ±0,2
Preparación
Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante
1 minuto. Esterilizar a 121º C durante 30 minutos (para cantidades de más de 1 litro).
Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y esterilizar a 121º C durante 15 minutos.
Para preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de Sangre desfibrinada antes de
distribuir en placas. Para una mejor conservación de la placa de Agar Sangre y para obtener
halos hemolíticos más claros ajustar el pH a 6,8 ±0,2. Si se utiliza como medio basal se
obtendrán mejores crecimientos a pH 7,3 ±0,2.

Agar MacConkey
El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo de
bacilos Gram negativos. Por esta razón es un medio selectivo y además permite distinguir
entre bacilos fermentadores y no fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un medio
diferencial. Es uno de los medios de cultivo más utilizado en un laboratorio de
microbiología.
Fundamento
El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus
componentes, pues cada uno posee una finalidad que determina una propiedad del mismo.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesa-rios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbo-no fermentable, y la mezcla de sales biliares y
el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora
Gram positiva. El agar es el agente solidificante.Por fermentación de la lactosa, disminuye
el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo
neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los
microorganismos no fermentadores de lactosa producen colo-nias incoloras.
Ingredientes
Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares (medio
inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y algunas
especies de Staphylococcus), colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de
bacterias Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos que
fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.
Preparación
Para un litro de agar MacConkey se debe pesar 50 gr del medio deshidratado, luego se
coloca en una fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 10 minutos de
reposo se calienta mezclando constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.
Luego se coloca la fiola en el autoclave y se esteriliza a 121°C por 20 minutos. Culminado el
tiempo, se saca del autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, para
posteriormente servir en placas de Petri estériles dentro de una campana de flujo laminar
o frente al mechero de Bunsen.
Dejar solidificar y guardar en un portaplaquero de forma invertida y refrigerar en nevera a
2-8°C hasta su uso. Para obtener un agar MacConkey que inhiba el efecto swarning que
produce el género Proteus se usa un agar MacConkey bajo en sal.
 Agar nutritivo
El agar nutritivo es un medio de cultivo sólido no selectivo y no diferencial. En este medio
crecen todo tipo de bacterias no exigentes desde el punto de vista nutricional. Es un medio
simple y, a pesar de su nombre, contiene un valor nutritivo más bajo en comparación con
otros medios similares, como por ejemplo el agar infusión cerebro corazón o el agar soya
tripticasa.
Fundamento

Como ya se mencionó anteriormente, es un medio muy simple que se basa en proporcionar

sustancias nutritivas para el crecimiento bacteriano sin restricción y sin reacciones
complejas que interpretar. Como el medio es traslúcido, es ideal para contar colonias por
el método de sembrado por profundidad.
Ingredientes
Está compuesto principalmente de extracto de carne o extracto de levadura, peptonas o
digesto pancreático de gelatina, agar-agar, cloruro de sodio y agua destilada.
El extracto de carne o de levaduras y las peptonas representa las fuentes de carbono y
minerales esenciales (nitrógeno, fósforo y azufre), que serán utilizados por las bacterias
como fuente de energía y factores de crecimiento.
Así mismo, el agar-agar es la base de todos los medios sólidos de cultivo, viniendo a sustituir
la gelatina, que fue el primer compuesto base utilizado por Robert Koch para darle
consistencia sólida a sus medios. El agar es un polisacárido compuesto por galactosa,
galactomanano, agarosa y agaropectina. Se cuaja a 40°C y se funde cercano a los 100 ° C.
Por su parte, el cloruro de sodio brinda al medio la osmolaridad necesaria para el desarrollo
bacteriano. Finalmente, el agua sirve para hidratar y disolver los compuestos liofilizados.
Debe utilizarse agua destilada ajustada a pH neutro. No debe usarse agua corriente porque
contiene calcio y magnesio que pueden reaccionar con los fosfatos del medio y formar sales
insolubles.
Preparación
Para un litro de agar nutritivo se debe pesar 31 gr del medio deshidratado. Se colóca en una
fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 5 minutos de reposo, se calienta
sobre una fuente de calor y se mezcla constantemente hasta que hierva por 1 o 2 minutos.
Luego se coloca la fiola en un autoclave y se esteriliza a 121°C por 20 minutos.

Culminado el tiempo se saca del autoclave y se sirve en placas de Petri estériles, utilizando
para ello una campana de flujo laminar o el mechero de Bunsen.
Si las placas de Petri son desechables (plásticas) el medio debe distribuirse cuando el agar
tenga una temperatura aproximada de 50°C, para evitar que las mismas se deformen por el
calor excesivo.
Dejar solidificar y guardar en un portaplacas de forma invertida y refrigerar en nevera a 2-
8°C hasta su uso.
Las placas deben atemperarse antes de ser sembradas. Las placas de agar nutritivo no
deben utilizarse si están contaminadas o deshidratadas.

El pH del medio preparado debe quedar ajustado a 7,3 ± 0,2.

Agar CLED
El agar CLED (Cistina-Lactosa-Electrolitos-Deficiente) es un medio de cultivo sólido
diferencial, utilizado para el diagnóstico de infecciones de las vías urinarias. La composición
del medio de cultivo está diseñada para el buen crecimiento de los patógenos urinarios y es
ideal para la cuantificación de las unidades formadoras de colonias (UFC).
Fundamento
El medio de cultivo CLED posee como fuente de energía extracto de carne, hidrolizado
pancreático de caseína e hidrolizado de gelatina. Los mismos proporcionan los nutrientes
para el desarrollo de bacterias poco exigentes.
También contiene cistina, un aminoácido que permite el crecimiento de coliformes,
distinguibles por su pequeño tamaño. Así mismo, contiene como carbohidrato fermentable
la lactosa, por este motivo este medio es diferencial; pudiéndose distinguir las bacterias
fermentadoras de las no fermentadoras de lactosa.
Las bacterias fermentadoras hacen virar el pH del medio por la producción de ácidos,
desarrollando colonias de color amarillo, mientras que las bacterias no fermentadoras no
generan cambios en el medio, por tanto toman la coloración del agar original, color verde.

La reacción de fermentación es revelada gracias a la presencia del indicador de pH, que en

este medio es el azul de bromotimol. Por otra parte, la baja concentración de electrolitos
del medio inhibe el típico crecimiento invasivo del género Proteus, denominado efecto
swarming. Esto genera una ventaja con respecto a otros medios, ya que permite el contaje
de las UFC, incluyendo si está presente el género Proteus. Sin embargo, la baja
concentración de electrolitos inhibe el crecimiento de algunas especies del género Shigella,
siendo esta una desventaja con respecto a otros medios.
Ingredientes
El agar de CLED contiene:
Peptona 4g/l
'Lab Lemco' powder 3g/l
Triptona 4g/l
Lactosa 10g/l
L-Cistina 128 mg/l
Azul de bromotimol 20 mg/l
Agar No. 1 15g/l
Preparación
En una fiola con un litro de agua destilada disuelva 36,2 gr de agar CLED en polvo. Después
de 5 minutos de reposo, caliente el agar resuspendido, mezclando constantemente hasta
dejar hervir por 1 minuto.
Luego esterilizar a 121°C por 15 minutos en el autoclave. Culminado el tiempo, se retira del
autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C. Posteriormente se sirve
entre 15 – 20 ml en cada placa de Petri estéril.
El procedimiento de servido de las placas se debe llevar a cabo dentro en una campana de
flujo laminar o frente al mechero de Bunsen para evitar su contaminación. Las placas
servidas se dejan solidificar, se ordenan en un portaplaquero de forma invertida y se guarda
en nevera (2-8°C) hasta su uso.
El pH final del medio preparado debe quedar en 7,3 ± 0,2.
 Agar Salmonella-Shigella
El agar Salmonella-Shigella también conocido como agar SS, es un medio moderadamente
selectivo y diferencial, especialmente diseñado para el aislamiento de bacterias
enteropatógenas de los géneros Salmonella y Shigella, tanto de muestras ambientales como
clínicas.
Fundamento
Cada componente del medio de cultivo Salmonella-Shigella posee una función específica, y
el conjunto de la mezcla le brinda las propiedades que lo caracterizan.
El extracto de carne y la peptona (digerido de caseína y de tejido animal) proporcionan los
nutrientes requeridos (nitrógenos, carbono y vitaminas) para el desarrollo de los
microorganismos capaces de tolerar el resto de los componentes.
El agar-agar es el encargado de brindar la consistencia sólida al medio.
Este medio es altamente selectivo debido a que contiene sales biliares, citrato de sodio y
verde brillante. Por ello, inhibe el crecimiento de todas las bacterias Gram positivas y de la
mayoría de los bacilos Gram negativos, incluyendo algunos coliformes. Mientras que las
bacterias del género Salmonella y algunas cepas de Shigella si soportan estos compuestos.
Ingredientes
El agar SS tiene una composición compleja; está constituido por extracto de carne, peptona,
lactosa, sales biliares, citrato de sodio, tiosulfato de sodio, citrato férrico, agar, rojo neutro,
verde brillante y agua destilada. Dada su gran selectividad se pueden sembrar muestras con
abundante flora mixta.
Preparación
Este medio es muy sencillo de preparar.
Pesar 63 gr del medio comercial deshidratado y disolver en un litro de agua destilada.
Calentar la disolución y agitar. La mezcla puede llegar hasta la ebullición hasta durante
minutos.
Este medio no debe autoclavarse. Después de su disolución se sirve directamente sobre
placas estériles sencillas o dobles.
Al solidificar se ordenan de forma invertida en plaqueros y se guardan en nevera (2-8°C)
hasta su uso.
El medio después de preparado debe quedar a pH 7,2 ± 0.2 y con color rojo naranja.
Es importante dejar atemperar las placas antes de sembrar las muestras. Se puede sembrar
directamente la muestra original, descargando material en una parte del agar y luego a
partir de allí estriar por agotamiento.
En caso de usar caldos enriquecidos, pasar una porción del caldo selenito y sembrar con
espátula de drigalski.
Se incuba a 37°C durante 24 horas en aerobiosis.

Caldo soya tripticaseína

El caldo soya tripticaseína es un medio de cultivo líquido, muy nutritivo y no selectivo. Por
su gran versatilidad es uno de los medios de cultivo líquido más utilizado a nivel general en
el laboratorio de microbiología. También se le conoce con el nombre de caldo soya tripticasa
o digerido de caseína-soya, cuya abreviatura es TSB por sus siglas en inglés Tryptic Soy Broth
o CST por sus siglas en español. Sus usos son muy variados debido a su composición. Está
compuesto por tripteína, peptona de soya, cloruro de sodio, fosfato dipotásico y glucosa.
Fundamento
La tripteína, la peptona y la glucosa le proporcionan las propiedades nutritivas esenciales
para convertirlo en un medio ideal para un desarrollo microbiano rápido. Aproximadamente
en 6 a 8 horas de incubación ya se puede apreciar un crecimiento en la mayoría de los
microorganismos. Sin embargo, existen cepas de crecimiento lento que pueden durar días
en crecer.
El cloruro de sodio y el fosfato dipotásico actúan como equilibrio osmótico y regulador del
pH respectivamente. La presencia de crecimiento se evidencia por la aparición de turbidez
en el medio; si no hay crecimiento el medio permanece traslúcido. Por su color claro es
posible observar la producción de pigmentos, como el que se muestra en la imagen ubicada
al inicio del artículo, el cual corresponde al pigmento producido por Pseudomonas
aeruginosa.
Preparación
Para preparar el caldo soya tripticasa se deben pesar 30 gr del medio comercial
deshidratado en una balanza digital. Luego se disuelve en un litro de agua destilada
contenida en una fiola.
La mezcla se deja en reposo por 5 minutos y posteriormente se lleva a una fuente de calor
para ayudar a la disolución del medio. Se debe agitar frecuentemente mientras hierve por
1 minuto.
Una vez disuelto se distribuye en tubos del tamaño adecuado según se necesite. Se pueden
usar tubos con tapón de algodón o con tapas de baquelita. Posteriormente, se esterilizan
los tubos con el medio en el autoclave a 121°C por 15 minutos.
El pH del medio debe quedar en 7,3 ± 0,2

Se debe tener en cuenta que el color del medio de cultivo deshidratado es beige claro y
debe almacenarse entre 10 a 35°C, en lugar seco. Mientras que el caldo preparado es de
color ámbar claro y debe guardarse en nevera (2 a 8°C).

Agar XLD
El agar XLD o agar Xilosa Lisina Desoxicolato es un medio de cultivo sólido selectivo y
diferencial para el aislamiento de enteropatógenos. Taylor diseñó la fórmula del agar XL
(Xilosa, Lisina) con el fin de mejorar el aislamiento del género Shigella.
Fundamento
El agar XLD cuenta con el extracto de levadura, que sirve como fuente de nutrientes a los
microorganismos que se desarrollan en este agar. Además, la presencia de carbohidratos
(xilosa, sacarosa y lactosa) proporcionan energía a las bacterias que pueden fermentarlas.
Como sustancia inhibidora presenta desoxicolato sódico; este impide el crecimiento de las
bacterias Gram positivas, dándole el carácter selectivo al medio.
Finalmente, el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico; el agar es el agente
solidificante y el rojo de fenol detecta los cambios de pH, haciendo virar el color de las
colonias y del medio.
Ingredientes

El agar XLD está compuesto por extracto de levadura, desoxicolato de sodio, xilosa, lisina,
lactosa, sacarosa, tiosulfato sódico, citrato férrico de amonio, cloruro sódico, rojo fenol y
agar. En la mayoría de los laboratorios de bacteriología se usa el dúo agar XLD y agar SS para
el estudio de muestras fecales en busca de Shigella y Salmonella.
Otros laboratorios prefieren la combinación de CHROMagar Salmonella y agar XLD, entre
otras opciones disponibles. Estos dúos se pueden preparar en placas de Petri dobles. En un
lado colocan agar XLD y en el lado opuesto el otro medio elegido.
Preparación
Pesar 55 gr de medio XLD deshidratado y disolver en 1 litro de agua. Calentar y agitar la
mezcla hasta que llegue al punto de ebullición. No sobrecalentar, ya que el calor daña el
medio y crea un precipitado que altera la morfología de las colonias típicas.

Este medio no debe autoclavarse. Al disolver se debe pasar a un baño de María a 50°C. Al
enfriar se debe servir directamente sobre placas de Petri estériles. Pueden vertirse en placas
sencillas o en placas dobles. Se dejan solidificar y se guardan en nevera hasta su uso.
Atemperar antes de usar. Como es un medio no esterilizado se recomienda prepararlo
cercano a la fecha de su uso.
El pH final del medio debe quedar en 7,4 ± 0,2. El color del medio preparado es rojo naranja,
traslúcido, sin precipitado.
Si se cuenta con el agar base Xilosa Lisina (XL) se le puede agregar desoxicolato de sodio,
tiosulfato de sodio y citrato amónico de hierro. De esta manera se obtiene la fórmula del
agar XLD.

Agar Sabouraud
El agar Sabouraud, también conocido como agar dextrosa Sabouraud, es un medio de
cultivo sólido, especialmente enriquecido para el aislamiento y desarrollo de hongos, como
levaduras, mohos y dermatofitos.
Ingredientes y preparación
– 40 gr de dextrosa
– 10 gr de peptona
– 15 gr de agar-agar
– Medir 1000 ml de agua destilada
Se mezclan todos los ingredientes, se ajusta el pH a 5,6. Se procede a disolver los solutos
mediante ebullición, se distribuye 20 ml del medio en tubos de 25 x 150 mm, sin reborde y
con tapa de algodón preferiblemente.
Se llevan al autoclave durante 10 minutos a una atmósfera de presión (121°C). No se debe
exceder en el tiempo de autoclavado. Al salir del autoclave se inclinan los tubos con ayuda
de un soporte hasta que solidifiquen en pico de flauta.
Otra forma es disolver los ingredientes por calentamiento hasta que hierva. En la misma
fiola autoclavar durante 10 minutos y posteriormente distribuir 20 ml en placas de Petri.
Si se dispone de un medio agar dextrosa Sabouraud que ya contiene todos los ingredientes,
se procede a pesar la cantidad que especifique la casa comercial para un litro de agua. El
resto de los pasos es igual a los descritos anteriormente.
Fundamento
El agar dextrosa Sabouraud es un medio que en su formulación original es débilmente
selectivo, debido a su pH ácido de 5.6 ± 0.2, sin embargo aun así las bacterias pueden
desarrollarse, principalmente en incubaciones prolongadas.
El medio contiene peptona de caseína y digerido pancreático de tejido animal, que
proporcionan la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo de los microorganismos.
También contiene alta concentración de glucosa, que actúa como fuente de energía
favoreciendo el crecimiento de los hongos por encima de las bacterias. Todo ello mezclado
con agar-agar, componente que le brinda la consistencia adecuada.
Por otra parte, el agar dextrosa Sabouraud puede ser selectivo si se le agrega antibióticos.
Con antibióticos es especialmente útil en muestras de heridas, úlceras abiertas o cualquier
muestra en la que se sospeche gran contaminación bacteriana.

Agar TSI
El agar TSI o agar hierro triple azúcar es un medio de cultivo sólido que sirve como prueba
bioquímica para orientar la identificación inicial de los bacilos Gram negativos. Se
fundamenta en evidenciar la fermentación de los azúcares presentes, y la producción de
sulfuro de hidrógeno y gas.
Fundamentos
El cloruro de sodio es necesario para mantener el equilibrio osmótico del medio. En tanto
que el agar le da la consistencia sólida.
El pH del medio preparado está equilibrado a 7,3 y el indicador de pH (rojo de fenol) vira a
amarillo por debajo de 6,8. Esto quiere decir que pequeñas cantidades de ácidos producidos
por la fermentación de los azúcares harán virar el medio de color rojo-naranja a amarillo. Si
no ocurre fermentación habrá alcalinización del medio por el uso de las peptonas, virando
de rojo-naranja a rojo fuerte.
Cuando las bacterias metabolizan las proteínas presentes en el agar TSI, se producen aminas
que alcalinizan el medio (principalmente a nivel del bisel), debido a que la reacción necesita
oxígeno. Las aminas hacen virar el bisel a rojo fuerte.
Pero esto dependerá de la capacidad que tengan las bacterias de fermentar o no los
carbohidratos.
Ingredientes
Su composición y fundamento es muy similar a la prueba de Kligler hierro, con la diferencia
que este último contiene solo glucosa y lactosa. En cambio, -como su nombre lo indica- el
agar hierro triple azúcar contiene tres carbohidratos fermentables: glucosa, lactosa y
sacarosa.
Además, el medio TSI posee cuatro derivados proteicos que lo hacen ser un agar muy
nutritivo: extracto de levadura, extracto de carne, peptona y proteosa peptona. También
contiene sulfato ferroso de amonio, tiosulfato de sodio, cloruro de sodio, rojo de fenol y
agar.
Preparación
Pese 62,5 gr del medio agar hierro triple azúcar (TSI) deshidratado y disuelva en un litro de
agua destilada.
Caliente hasta disolver completamente el agar. Hervir por un minuto agitando
frecuentemente. Distribuir 4 ml del medio en tubos de ensayo 13/100 con tapa de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar de
forma inclinada. Se debe cuidar que tanto la base como el bisel tengan la misma distancia.

Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.

El color del medio deshidratado es beige claro y el medio preparado es de color rojo-naranja
El pH final del medio preparado es 7,3 ± 0,2.

Agar LIA (Lisina Hierro)

El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de
bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Este medio fue creado por Edwards y Fife,
basados en la fórmula de Falkow.
Fundamento
Peptonas y extracto de levadura
Como la mayoría de los medios de cultivos, el agar hierro lisina contiene componentes que
proporcionan la fuente de nutrientes necesarias para el crecimiento bacteriano. Estos
componentes están representados por las peptonas y el extracto de levadura.
Glucosa

Así mismo, este agar contiene como carbohidrato fermentable la glucosa. Se sabe que todas
las bacterias de la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa. Este paso es crucial,
porque se encargará de acidificar el medio, condición indispensable para que la enzima
lisina descarboxilasa -si está presente- actúe sobre su sustrato.
Ingredientes
Originalmente esta prueba era un caldo que contenía peptonas, extracto de levadura,
glucosa, L-lisina, púrpura de bromocresol y agua destilada. Edwards y Fife le agregaron agar-
agar, citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico.
Preparación
Pese 35 gr del medio lisina agar hierro deshidratado y disuelva en un litro de agua destilada.
Caliente hasta disolver completamente el agar, para ello deje hervir por un minuto agitando
frecuentemente. Distribuir 4 ml del medio en tubos de ensayo 13/100 con tapa de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar de
forma inclinada, de tal manera que quede una base profunda y un bisel corto.
Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.
El color del medio deshidratado es beige y del medio preparado color púrpura rojizo.
El pH final del medio preparado es 6,7 ± 0.2
El medio se torna amarillo con pH igual o menor a 5,2, y es morado a pH 6,5 para arriba.

Medio MIO
El medio MIO es una prueba bioquímica que se utiliza para ayudar en la identificación de
especies de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. El significado de sus
siglas (MIO) describe cada uno de los parámetros que se pueden observar en este medio;
motilidad, indol y ornitina. La motilidad es la capacidad del microorganismo de moverse por
la presencia de flagelos. Para que esta propiedad pueda ser observada la consistencia del
medio debe ser semisólida, por lo que la preparación lleva menos cantidad de agar.
Fundamento
Peptona, extracto de levadura y tripteína
Estos elementos contribuyen al poder nutritivo de este medio. Sirven como fuente de
nutrientes y aminoácidos esenciales para el desarrollo bacteriano. Además, la tripteína es
una fuente de triptófano para evidenciar la presencia de la enzima triptofanasa, que
degrada el triptófano por una desaminación reductiva liberando indol, ácido pirúvico,
amoníaco y energía.
Motilidad
La capacidad de la bacteria de moverse se evidenciará si se observa un medio turbio o si
hay una línea gruesa de crecimiento que se expande alrededor de la inoculación inicial. Una
prueba de motilidad negativa se evidenciará al observar una línea delgada de crecimiento,
y todo alrededor estará sin crecimiento. Es importante que la motilidad se lea antes de
revelar el indol, ya que el agregado del reactivo enturbia todo el medio.
Glucosa
La glucosa es el carbohidrato fermentable que además de aportar energía acidifica el medio,
condición necesaria para que pueda ocurrir la descarboxilación del aminoácido ornitina. La
fermentación de la glucosa debe ocurrir siempre, partiendo del principio de que todas las
bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa.
L-Ornitina
En caso de que la bacteria produzca la enzima ornitina descarboxilasa, esta podrá actuar
una vez que el medio haya sido acidificado por la fermentación de la glucosa. La enzima
ornitina descarboxilasa actúa sobre el grupo carboxilo del aminoácido produciendo una
amina llamada putresina que alcaliniza nuevamente el medio. Esta prueba debe leerse
después de 24 horas de incubación, pues si se intenta leer antes se puede malinterpretar la
prueba con un falso negativo.

Ingredientes
Es bastante nutritivo y está compuesto por glucosa, extracto de levadura, peptona,
tripteína, clorhidrato de L-ornitina, púrpura de bromocresol y agar.
Preparación
Pesar 31 gr del medio MIO y disolver en un litro de agua destilada.
Calentar hasta que hierva la mezcla durante un minuto, agitando frecuentemente hasta
disolver completamente el agar. Distribuir 4 ml del medio en tubos de ensayo 13/100 con
tapa de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar de
forma recta en una gradilla, de tal manera que se forme un taco semi sólido.
Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.
El color del medio deshidratado es beige y el del medio preparado de color púrpura
levemente opalescente.
El pH final del medio preparado es 6,5 ± 0.2
El medio se torna amarillo con pH ácido y es morado a pH alcalino.

Medio SIM
El medio SIM es un agar semisólido y diferencial, especialmente diseñado para ayudar a la
identificación de algunas bacterias, principalmente de la familia Enterobacteriaceae. Este
medio permite la ejecución de tres importantes pruebas: la producción de sulfuro de
hidrógeno (H2S), la formación de indol y la motilidad, de allí proviene el acrónimo SIM. Por
su gran utilidad no puede faltar en un laboratorio de bacteriología.
Fundamento
Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrien-tes para el desarrollo
microbiano. El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas y
particularmente de la tripteína y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar
indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas tripto-fanasa. El indol
producido se combina con el aldehido del reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo ReF
B1550361) o de Kovac ́s, para originar un compuesto de color rojo. A partir del tiosulfato
de sodio los microorganismos pueden gene-rar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro
presente formán-dose un compuesto de color negro.El agar es el agente solidificante y a
esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria
para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del me-dio o por
crecimiento que difunde mas allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.
Ingredientes
Está compuesto por tripteína, peptona, sulfato de hierro, sulfato de amonio, tiosulfato de
sodio y agar.
Preparación
Pesar 30 gr del medio deshidratado y disolver en un litro de agua destilada. La mezcla se
deja en reposo por 5 minutos y luego se calienta hasta hervir, agitando frecuentemente
hasta su completa disolución.
Distribuir la mezcla en tubos de ensayo con tapa de algodón y autoclavar a 121°C por 15
minutos. Sacar la gradilla de tubos del autoclave y dejar solidificar en posición vertical, para
que el medio quede en forma de taco.
Para su conservación se guarda en nevera hasta su uso. El medio preparado debe tener un
pH final de 7,3 ± 0,2.
Al momento de inocular el medio este debe estar a temperatura ambiente. El color del
medio es beige.
 Agar citrato de Simmons
El agar Citrato de Simmons es un medio sólido utilizado como prueba bioquímica de
identificación de microorganismos, especialmente de bacilos Gram negativos. El medio
original fue creado por Koser en 1923.
Fundamento
Algunas bacterias tienen la capacidad de sobrevivir en ausencia de fermentación o
producción de ácido láctico, necesitando conseguir energía a través de la utilización de otros
sustratos. En esta prueba la única fuente de carbono ofrecida es el citrato.
Las bacterias que son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones metabolizan el citrato
de forma rápida por una vía alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del ácido tricarboxílico
o el ciclo de fermentación del citrato.
El catabolismo del citrato por parte de las bacterias comprende un mecanismo enzimático
sin la intervención de la coenzima A. Esta enzima se conoce con el nombre de citricasa
(citrato oxalacetato-liasa) o citrato desmolasa. La reacción requiere la presencia de un
catión bivalente, que en ese caso es suministrado por el magnesio.
La reacción genera oxaloacetato y piruvato, que luego dan origen a ácidos orgánicos en
medio de un pH alcalino formado por la utilización de la fuente de nitrógeno. Estos ácidos
orgánicos son usados como fuente de carbono generando carbonatos y bicarbonatos,
alcalinizando aun más el medio.
Ingredientes
El medio Citrato de Koser consistía en un caldo que contenía fosfato de sodio, fosfato de
amonio, fosfato monopotásico, sulfato de magnesio y citrato de sodio.
Como puede verse, la única fuente de carbono del medio es el citrato, y de nitrógeno es el
fosfato de amonio, omitiéndose las proteínas y los carbohidratos como fuente de estos
elementos, comúnmente están presentes en otros medios.
Preparación
Pesar 24,2 gr del medio deshidratado para un litro de agua. Mezclar y dejar en reposo
durante 5 minutos aproximadamente. Terminar de disolver el medio calentando durante 1
o dos minutos, agitando frecuentemente.
Servir 4 ml en tubos de ensayo y autoclavar a 121°C durante 15 minutos. Al salir del
autoclave, inclinar con ayuda de un soporte de tal manera que el agar se solidifique en
forma de pico de flauta con poco taco o fondo y más bisel.
El pH final del medio citrato es de 6,9 (color verde). Este medio es muy sensible al cambio
de pH.
A pH 6 o por debajo, el medio se torna color amarillo. Este color no es observado en la
prueba con bacterias.
Y a pH 7,6 o por encima, el medio cambia a color azul de prusia intenso.

Caldo Urea
El caldo urea es un medio de cultivo líquido, utilizado para evidenciar la presencia de la
enzima ureasa en ciertos microorganismos. La ureasa es una enzima microbiana que se
produce de manera constitutiva, es decir, es sintetizada independientemente de estar o no
presente el sustrato sobre el que actúa.
Fundamento
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo
de fenol es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante. Las bacterias hidrolizan la
urea por medio de la enzima ureasa liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos
alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al
rojo. Es recomendado especialmente para la detección de la actividad ureásica en bacterias
que hidrolizan lentamente la urea ya que la fermentación de la glucosa presente activa
la enzima ureasa microbiana. Este es el caso de Klebsiella spp., Enterobacter spp y
Citrobacter spp.
Preparación
Pesar los gramos necesarios según las indicaciones de la casa comercial. Disolver en agua
destilada preferiblemente estéril. No usar calor para disolver, pues la urea es sensible al
calor.
Para esterilizar se utiliza el método de filtración con membranas. Para ello se usa un filtro
Millipore con poros de 0,45 µ de diámetro. No usar autoclave. Una vez filtrada la solución,
se distribuye en tubos estériles. Para obtener resultados confiables se debe trasvasar entre
1,5 ml como cantidad mínima a 3 ml como cantidad máxima por tubo.
Conservar en nevera y atemperar antes de usar.
Si no se dispone del método de filtración, el medio debe utilizarse de forma inmediata para
obtener resultados confiables.
Otra forma de preparar el caldo urea de Stuart es de la siguiente manera:
Algunas casas comerciales venden el medio base para la prueba de la urea, sin incluir la
urea.
Se pesa la cantidad indicada por la casa comercial. Se disuelve en agua destilada y se
esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Se deja reposar un poco y cuando el
medio esté tibio se agrega 100 ml de una solución de urea preparada al 20% y esterilizada
por filtración.
Se distribuye en tubos estériles, como fue descrito anteriormente.