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Estudio de ubicuidad microbiana en la cafetería del departamento

de biología de la Universidad Nacional de Colombia

Microbial location study in the cafeteria of the biology department


of the National University of Colombia
Angie Fernanda Arias Landinez a, Katheryn Michel Camargo Jiménez b.
a
Departamento de Biología, Universidad Nacional de Colombia, Colombia. 1032503846, anfariasla@unal.edu.co
b
Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia, Colombia. 1026595103, kmcamargoji@unal.edu.co

INFORMACIÓN RESUMEN-ABSTRACT

Historia del informe: El principal objetivo de este estudio es la caracterización


macroscópica y microscópica de los microorganismos presentes en
Práctica: 23 de abril de 2019 el ambiente de la cafetería del departamento de biología de la
Entrega: 07 de mayo de 2019 Universidad Nacional de Colombia para evaluar la hipótesis
planteada por el grupo. La causa de las posibles intoxicaciones por
alimentos en los estudiantes consumidores de esta cafetería se debe
a la presencia de microorganismos patógenos en el ambiente. Para
la realización de este estudio se utilizó la exposición del medio de
cultivo al ambiente y la caracterización por medio de la tinción de
Gram. Finalmente se obtienen los microorganismos potencialmente
Palabras clave: patógenos, medio patógenos.
ambiente, medio de cultivo, The aim objective of this study is the macroscopic and microscopic
microorganismos. characterization of the microorganisms present in the cafeteria
environment of the biology department of the National University of
Keywords: pathogens,
Colombia to evaluate the hypothesis proposed by the group. The
environment, culture medium,
cause of possible food poisoning in the students who consume this
microorganisms.
cafeteria is due to the presence of pathogenic microorganisms in the
environment. To carry out this study, exposure of the culture
medium to the environment and characterization by means of Gram
staining was used. Finally, potentially pathogenic microorganisms
are obtained.

1. INTRODUCCIÓN

HABITAD MICROBIANA
Es muy difícil para un humano, que es del orden de 890,000 veces más grande que una
célula de E. coli, pensar en términos de hábitats microbianos, que son del orden de
micrómetros a milímetros de tamaño. En este lapso, las condiciones como el oxígeno o el
pH pueden cambiar dramáticamente. Esto crea microentornos, y los hábitats a menudo
son bastante irregulares en lugar de uniformes. Varios factores abióticos afectan a las
poblaciones microbianas en estos hábitats y ayudan a crear microambientes.
2

Habitantes Atmosféricos
Diversidad microbiana atmosférica
La comunidad microbiana de la atmósfera es potencialmente un vehículo para el
transporte de patógenos, pero se ha llevado a cabo poca investigación sobre este
importante hábitat. Nuestra falta de conocimiento es notada por Dale Griffin, quien cita
un artículo publicado por Fred C. Meier y Charles A. Lindbergh en 1935: "Aunque en
general se sabe que bacterias, esporas de hongos superiores y granos de polen están
presentes entre las partículas de polvo en la atmósfera cerca de la superficie de la tierra,
mucha información detallada de valor práctico aún no ha sido revelada por
investigaciones posteriores ".
Las tormentas de polvo elevan las partículas del suelo, a menudo con microorganismos
adheridos, en el aire. Muchos han pensado que la luz ultravioleta, la temperatura y la
desecación matarían a los microorganismos transportados, pero ahora estamos
aprendiendo que muchas bacterias y especialmente las esporas de hongos son resistentes
a estos factores estresantes. Los microorganismos sobreviven largas distancias y tiempos,
para aterrizar en terrenos distantes. El viaje a través de ambientes marinos resulta en
partículas de polvo que adquieren organismos marinos de los aerosoles marinos (Figura
1). Se han encontrado varias bacterias en el polvo transportado por la atmósfera,
incluyendo especies de Bacillus, un formador de esporas, géneros de Actinobacteria (por
ejemplo, Streptomyces, Microbacterium, Kocuria) y géneros de Alphaproteobacteria
como Sphingomonas. Estos corresponden a muchos de los grupos dominantes en los
suelos. Debido a su fuerte resistencia al estrés ambiental, muchas esporas de hongos se
encuentran asociadas con el polvo transportado en la atmósfera.

Fig. 1 Imágenes epifluorescentes y macroscópicas de bacterias, hongos y posibles partículas virales del
polvo (imágenes cortesía de Dale Griffin, USGS). Ver inserto para la representación del color.
Gran parte de los estudios en microbiología depende de la capacidad de cultivar y
mantener microorganismos en un laboratorio, y esto es sólo posible si se dispone de los
medios de cultivo adecuados. Un medio de cultivo es una preparación líquida o sólida
utilizada para el crecimiento, transporte, o mantenimiento de microorganismos. En los
hábitats naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas y complejas, que
contienen varias especies, en consecuencia, descripciones macroscópicas y microscópicas
de las colonias en los medios de cultivo y es fundamental para su estudio. (Prescott,2004).
En las descripciones microscópicas se tiene que para los procariotas se conocen diversas
morfologías, y las más comunes se describen con términos que forman parte del léxico
esencial de la microbiología. En la Figura 2. Se muestran algunos ejemplos de morfología
bacteriana. Una célula de morfología esférica u ovoide se conoce coco. Una forma
cilíndrica espirilos. Las células de algunos procariotas se unen en grupos tras la división
3

celular y a menudo forman disposiciones características. Por ejemplo, algunos cocos


forman cadenas largas (como la bacteria Streptococcus), otros se disponen formando
cubos tridimensionales (Sarcina), mientras que otros se agrupan en racimos
(Staphylococcus). Algunos grupos bacterianos son reconocibles inmediatamente por las
formas inusuales de sus células individuales. La morfología es un mal indicador de otras
propiedades celulares, y se trata de una característica condicionada genéticamente que ha
evolucionado para facilitar la ecología de la célula.

Fig. 2 Junto a cada dibujo hay una micrografía por contraste de fases en la que se muestra la morfología.
Coco (diámetro celular en la micrografía: 1,5μm); bacilo (1μm); espirilo (1μm)
Adicional a esto, se realiza la tinción de Gram, desarrollada en 1884 por el médico danés
Christian Gram, el cual es el método de tinción más empleado en bacteriología. Es un
ejemplo de tinción diferencial: procedimientos que se utilizan para distinguir los
organismos según sus propiedades de tinción. El uso de la tinción de Gram divide las
bacterias en dos clases: Gram negativa y Gram positiva. Donde se diferencian
principalmente por medio la coloración presentada, donde las Gram negativas son rosadas
y las Gram positivas son moradas y esto se debe principalmente a su composición en la
pared celular. A continuación, se observa una imagen donde se evidencia la
diferenciación con la tinción de Gram.

Fig. 3 Resultados de una tinción de Gram. Las células grampositivas (púrpura) son Staphylococcus
aureus; Las células gramnegativas (rosa rojizo) son Escherichia coli.
Para la caracterización macroscópica, se tiene en cuenta el desarrollo de colonias en las
superficies de agar, la cual ayuda a los microbiólogos a identificar microorganismos,
porque las especies individuales a menudo forman colonias de tamaño y aspecto
característicos (Figura 4b). Cuando una población mixta ha sido colocada correctamente,
a veces es posible identificar la colonia deseada en función de su apariencia general y
4

utilizarla para obtener un cultivo puro. La estructura microscópica de las colonias suele
ser tan variable como su aspecto visible.

Fig. 4 a) Variaciones en la morfología de la colonia bacteriana observadas a simple vista. La forma


general de la colonia y la forma del borde o margen pueden determinarse mirando hacia abajo en la parte
superior de la colonia. La naturaleza de la elevación de la colonia es evidente cuando se ve desde un lado
ya que la placa se mantiene al nivel de los ojos. b) Ejemplos de morfologías de colonias comúnmente
observadas.
La morfología de las células eucariotas representada por los hongos varía de una especie
a otra dando un rango interminable de características que son específicas para cada género
de hongo de interés. Debido a que en este estudio no se realiza evaluación de los hongos
ambientales no se amplía esa temática. Finalmente, teniendo en cuenta los conceptos
previos mostrados anteriormente se realiza un estudio en el laboratorio que tiene como
objetivo evaluar los microorganismos presentes en la atmosfera de la cafetería del
departamento de biología de la Universidad Nacional de Colombia y caracterizarlos tanto
macroscópica como microscópicamente para lograr un acercamiento a su clasificación
taxonómica.
2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Reactivos químicos y medio de cultivo
Agua destilada, colorante cristal violeta, colorante fucsina, disolución de yodo molecular
I2 y yoduro potásico KI (Lugol), disolución de etanol y acetona, solución limpiadora,
aceite de inmersión y cultivo sólido de agar nutritivo.
2.1.1 Materiales
Asa bacteriológica, mechero Bunsen, lamina portaobjetos, pipeta Pasteur, caja de Petri
2.2 Obtención de microorganismos
2.2.1 Zona de estudio
El estudio se llevó a cabo en la cafetería del Departamento de Biología ubicada en el
campus de la sede Bogotá de la Universidad Nacional de Colombia, en el costado oriental
del Departamento de Biología (Coordenadas latitudinales: 004° 38´37,6´´ N, 074°
05´04,8´´ W). La zona de exposición tiene una temperatura promedio de 14°C, humedad
alta, es una zona alejada de ventanales, su incidencia de luz es alta durante el día, no
cuenta con presencia de plantas próximas y en promedio pasan 2 o 3 personas por minuto.
2.2.2 Toma de muestra ambiental
La muestra fue tomada a las 2:20- 2:30 de la tarde del día 15 de abril de 2019. Con el fin
de realizar una estimación cualitativa de microorganismos en el ambiente de la cafetería
del departamento de biología. se realizó una exposición aérea de una caja de Petri estéril
que contenía un medio de cultivo AN (Agar Nutritivo), retirando la tapa por un período
de diez (10) minutos.
2.2.3 Incubación de la muestra
La caja de Petri expuesta en la cafetería del departamento de Biología fue llevada a
incubación durante siete (7) días en oscuridad, en el laboratorio de Microbiología 215 de
5

este mismo Departamento a una temperatura promedio de (25°C±2) en una incubadora


microbiológica.
2.2.4 Caracterización morfológica
Las características de las colonias expresadas en unidades formadoras de colonias (UFC)
(tamaño, forma, borde, elevación, superficie, consistencia, aspecto y pigmento) se
evaluaron visualmente, y la forma y el tamaño de las células se determinaron con un
microscopio óptico compuesto.
2.2.5 Caracterización microscópica
Para la obtención de estas características se realiza la tinción diferencial de Gram. Con el
asa bacteriológica previamente esterilizada y en la zona estéril (próxima al fuego del
mechero) se toma un poco de una colonia de bacteria y se realiza un frotis en una lamina
portaobjetos. Se realiza la fijación de la muestra sometiéndola a calor. Seguidamente se
agrega el colorante cristal violeta sobre el frotis de la muestra durante un (1) minuto,
después del tiempo transcurrido se retira el cristal violeta en exceso con agua destilada y
se añade una solución de Lugol durante un (1) minuto. El yodo actúa como mordiente. Se
retira el exceso de Lugol con agua destilada y se procede a agregar la solución etanol-
acetona durante treinta (30) segundos. Se retira el exceso de esta ultima solución con agua
destilada y finalmente se añade la colorante fucsina durante un (1) minuto y se retira el
exceso con agua destilada.
2.3 Visualización de características microscópicas
Se realiza la descripción de características en un microscopio óptico compuesto obtenido
del laboratorio 119 del departamento de Biología. Primeramente, se verifica el buen
estado del equipo, se procede a suministrar electricidad, verificar la luz transmitida y la
limpieza de sus objetivos (Limpiar estos con papel de arroz si es necesario). Para la
visualización de la muestra esta se localiza en la platina y se asegura con la pinza. Se
realiza la definición de la imagen en el aumento del objetivo de 10x y finalmente
agregando una gota de aceite de inmersión sobre la muestra se realiza la descripción
microscópica con el aumento del objetivo a 100x.

3. RESULTADOS
3.1 Caracterización macroscópica de las muestras

No hace parte de las


colonias de bacterias
seleccionadas para la
descripción.

Fig.5 Asignación de números a cada una de las colonias de bacterias obtenidas

3.1.1 Caracterización macroscópica de la muestra 1.


Tabla 1. Descripción macroscópica 1
6

Microorganismo Bacteria Imagen


Forma Circular
Borde Ondulado
Elevación Plana
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Beige
Luz transmitida Translucida
Luz reflejada Brillante

3.1.2 Caracterización macroscópica de la muestra 2


Tabla 2. Descripción macroscópica 2
Microorganismo Bacteria Imagen
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Convexa
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Beige
Luz transmitida Translucida
Luz reflejada Opaca

3.1.3 Caracterización macroscópica de la muestra 3


Tabla 3. Descripción macroscópica 3
Microorganismo Bacteria Imagen
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Convexa
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Amarillo
Luz transmitida Opaca
Luz reflejada Brillante
3.1.4 Caracterización macroscópica de la muestra 4
Tabla 4. Descripción macroscópica 4
Microorganismo Bacteria Imagen
Forma Circular
Borde Ondulado
Elevación Convexa
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Amarillo
Luz transmitida Opaca
Luz reflejada Brillante
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3.2 Caracterización microscópica de las muestras


3.2.1 Caracterización microscópica de la muestra 1
MUESTRA AUMENTO: Obj. 100x
ORIGEN: Ambiental TIPO: Fresca TINCIÓN: Gram
OBSERVACIONES:
En el esquema se pueden
observar que las células se
identifican como Bacilos y
que en esta muestra se
pueden encontrar las dos
tinciones diferenciales. Por
lo tanto, se cuenta con
Bacilos Gram positivos
(morados) y Gram
0,8µm negativos (rosados)
Bacilo Gram positivo Bacilo Gram negativo

3.2.2 Caracterización microscópica de la muestra 2

MUESTRA AUMENTO: Obj. 100x


ORIGEN: Ambiental TIPO: Fresca TINCIÓN: Gram
OBSERVACIONES:
En esta imagen obtenida se
puede observar que se
obtienen bacilos Gram
negativos, también se
obtiene que son formadores
de endosporas. En el
espacio intermedio se
obtiene con mayor claridad
la forma diferencial de la
0,8µm célula.
Bacilo Espacio intermedio

3.2.3 Caracterización microscópica de la muestra 3


MUESTRA AUMENTO: Obj. 100x
ORIGEN: Ambiental TIPO: Fresca TINCIÓN: Gram

Aglomeración
8

OBSERVACIONES:
En el esquema obtenido se
muestra la presencia de una
forma celular de coco y una
tinción diferencial que nos
indica que es Gram
positivo por su
pigmentación morada.
0,8µm

Coco

3.2.4 Caracterización microscópica de la muestra 4


MUESTRA AUMENTO: Obj. 100x
ORIGEN: Ambiental TIPO: Fresca TINCIÓN: Gram
OBSERVACIONES:
En la muestra 4 podemos
observar que su forma
celular al igual que la
muestra 3 se presenta en
forma de coco y se clasifica
entre las bacterias Gram
positivas por su
pigmentación debido al
0,8µm
cristal violeta.
Coco Aglomeración

4. DISCUSIÓN
Uno de los objetivos de este estudio fue aislar los microorganismos ambientales presentes
en la cafetería del departamento de Biología de la Universidad Nacional de Colombia,
Una motivación para este estudio fue la higiene que se puede obtener en un sitio donde
normalmente cerca de 500 estudiantes realizan sus comidas diarias. El estudio demostró
la presencia de cocos Gram positivos, Bacilos Gram negativos y Gram positivos en la
muestra aérea en el lugar mencionado anteriormente. Estos organismos pueden albergar
patógenos potenciales y la presencia de organismos patógenos que pueden presentar
graves riesgos para la salud de los consumidores en general y de las personas
inmunocomprometidas en particular.
Las bacterias de la muestra 1 corresponden a bacilos. En esta encontramos los dos tipos
de tinción diferencial en los bacilos, los cuales son bacilo Gram positivos y Gram
negativos. Si bien dentro de los bacilos Gram positivos (BGP) se encuentran algunos de
los patógenos más agresivos para el ser humano, la gran mayoría de las especies
bacterianas de este grupo no son patógenos primarios. Muchos forman parte de la flora
normal del cuerpo humano (piel, tracto gastrointestinal, cavidad oral) y se encuentran
ampliamente distribuidos en el ambiente. Por este motivo, se debe ser cuidadoso en la
interpretación del hallazgo de un BGP en un estudio microbiológico, ya que
frecuentemente se trata de contaminantes. (Joklik, 1994)
9

Las bacterias de la muestra 1 y 2, donde se evidencia también la presencia de Bacilos


Gram negativos y se conoce sobre estas que la envoltura celular de las bacterias Gram
negativas tiene una capa delgada de peptidoglicano intercalada entre dos membranas. El
espacio entre las dos membranas se conoce como el espacio periplásmico. La membrana
interna es la membrana común a la bacteria y la membrana externa evita la pérdida de
proteínas periplásmicas y forma una barrera protectora que evita la exposición de las
bacterias a enzimas hidrolíticas y sustancias tóxicas como la bilis en el tracto
gastrointestinal. Las proteínas de membrana (porinas) están presentes en la membrana
externa y sirven para regular el transporte a través de los poros de la membrana.
Incrustado en la capa externa de la proteína de la membrana externa está el
lipopolisacárido (LPS), que es en gran parte responsable de las propiedades endotóxicas
de este grupo de bacterias. La endotoxina es sinónimo de la pared celular Gram-negativa,
en particular el componente LPS. Es responsable de muchas de las manifestaciones
tóxicas de las infecciones con bacilos Gram negativos. La presencia intravascular de
endotoxinas estimula una cascada de producción de citoquinas proinflamatorias que
produce el temido cuadro clínico de la "septicemia gramnegativa" que se manifiesta por
fiebre, leucopenia, coagulación intravascular diseminada, shock y, a menudo, la muerte.
(Joklik, 1994)
En el caso de las muestras 3 y 4, se obtuvieron cocos, estos tienen estructura Gram
positiva, no flagelados, no móviles y no forman esporas. Las colonias son de tamaño
regular y con pigmentos blanquecinos, grises o amarillos, con tamaños entre 0,5 y 1,5
um). Hoy en día se conoce que el porcentaje de pacientes con infecciones graves causadas
por bacterias grampositivas ha aumentado en los últimos años, lo que representa casi la
mitad de los incidentes de septicemia e infecciones sistémicas graves. (Curtis, 2001)
Las caracterizaciones morfológicas obtenidas en las tablas 1,2,3 y 4 nos revelan más
acerca de las características que tenían las diferentes colonias de bacterias estudiadas.
Estas descripciones macroscópicas están sujetas a las condiciones en las que se han
cultivado debido a que, dependiendo del alimento, la temperatura, el pH, condiciones
externas, etc. Las bacterias pueden desarrollar diferentes tipos de pigmentación u formas
de estás. A nivel microscópico desarrollaran diferentes pigmentaciones, formas o
coloraciones dependiendo del tipo de célula que se obtenga, por ejemplo, para la tinción
diferencial de Gram, las bacterias se pueden identificar dependiendo de la composición
de su pared celular. Otras tinciones nos evidencian otras características presentes en la
célula. (Maldigan, 2015)
Finalmente, se comprueba la hipótesis de que las bacterias presentes en el ambiente de la
cafetería del departamento de biología en la Universidad Nacional de Colombia son
potencialmente patógenas, lo que causaría las diferentes intoxicaciones producidas en los
estudiantes consumidores. Se recomienda ampliar el estudio por medio de una
caracterización molecular de las bacterias para determinar su genero y especie.

5. CONCLUSIONES
Se estudio la presencia de microorganismos presentes en el ambiente de la cafetería del
departamento de Biología de la Universidad Nacional de Colombia por medio de la
metodología empleada para el estudio de la ubicuidad microbiana. Se caracterizan las
cepas de bacterias obtenidas para el ensayo tanto macroscópica y microscópicamente lo
que nos da únicamente un indicio de las especies de bacterias presentes en el ambiente.
Se realiza el principal objetivo de comprobar si estas bacterias obtenidas son
posiblemente patógenas.
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6. AGRADECIMIENTOS
Asesoría científica:
Jimena Sánchez Nieves
Sharon Villamil
7. REFERENCIAS

Atlas, R., y Bartha, R. (2002): Ecología microbiana y Microbiología ambiental. Ed.


Pearson Educación, Madrid.

Cuervo Lozada, J. P. (2010). Aislamiento y Caracterización de Bacillus sp como


fijadores biológicos de nitrógeno y solubilizadores de Fosfatos en dos muestras de
Biofertilizantes comerciales. Trabajo de grado para optar al título de Microbiología
Agrícola y Veterinaria. Pontificia Universidad Javeriana, Facultad de Ciencias Básicas -
Programa de Microbiología Agrícola y Veterinaria. Bogotá.

Joklik WK, Willett HP, Amos DB, Wilgert CM (1994). editores, Zinsser Microbiología.
20ª ed. BsAs. Panamericana.

Madigan, Michel T.; Martink, John M.; Bender, Kelly S.; Buckley, Daniel H.; Stahl,
David A. (2015) Brock. Biología de los Microorganismos. Madrid, España: Editorial
Pearson Education S.A. pp. 80-82

Pahissa, A. (2009) Infecciones producidas por Staphylocccus aureus. Barcelona,


España: Ed. Marge Medica Books. pp. 20-22.

Prescott, L.M.H., Klein, J.P., Prescot, D.A.L.M, Harley, J.P.&, Klein, D.A (2004)
Microbiología. McGraw-Hill.

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