Fisiología

T.P. Nº3: Trasporte de glucosa en intestino evertido de rata

Alumno: Christian Milocco

Objetivos

Demostrar el transporte activo de D-glucosa en el intestino delgado de rata.

Comparar las capacidades absortivas de los distintos segmentos del intestino delgado.

Analizar las ventajas, desventajas y limitaciones de los estudios in vitro.

Procedimiento
Se anestesió a una rata Wistar de 450 gr de peso con una dosis de 1,00 ml de
pentobarbital sódico [30mg/ml]. Mediante una operación quirúrgica se le extrajo el
intestino delgado. Este fue seccionado en tres partes correspondiente aproximadamente
al duodeno, yeyuno e íleon. Los tres segmentos fueron evertidos, atados en un extremo y
se le agrego 0,5 ml de solución buffer libre de glucosa (Ringer-Krebs-fosfatos) y vueltos a
atar en el extremo libre. Los segmentos, que contienen solución buffer en su interior,
fueron puestos en un baño de solución buffer con glucosa (Ringer-Krebs-fosfatos-glucosa)
con una concentración de 10 mM. Luego de 30 minutos se le extrajo el buffer del interior.
Se realizaron mediciones de glucosa final al interior de los segmentos intestinales (Glucosa
serosa) y glucosa inicial y final del baño (Glucosa mucosa) utilizando el método
enzimático-oxidativo con calibración de un estándar (5,56 μmol/mL).

Los volúmenes recuperados de buffer del interior de cada segmento intestinal y el peso de
los mismos se detallan a continuación:

Volumen serosa duodeno: 0,31 ml Peso duodeno: 0,4778 gr.

Volumen serosa yeyuno: 0,4 ml Peso yeyuno: 0,4288 gr.

Volumen serosa íleon: 0,4 ml Peso íleon: 0,663 gr.

Resultados
Las mediciones de absorbancia arrojaron los siguientes resultados
 Concentracion (μmol/mL)
Abs. Blanco 0 0
Abs. Standard 0,269 5,56
Abs. Mucosa inicial 0,445 9,20
Abs. Mucosa final duodeno 0,376 7,77
Abs. Mucosa final yeyuno 0,383 7,91
Abs. Mucosa final íleon 0,402 8,30
Abs. Serosa final duodeno 0,103 2,12
Abs. Serosa final yeyuno 0,078 1,61
Abs. Serosa final íleon 0,050 1,03

Con estos valores calculamos la glucosa captada del medio, la glucosa transferida y el cociente
serosa-mucosa:

Duodeno 89,78
Glucosa captada [mol/h/g]
Yeyuno 90,25
Glu V m  (Gmi  Gmf )
QUptake  W t
Íleon 40,72

Donde t es 0,5 hs y W el peso del segmento intestinal.

Duodeno 2,75
Glucosa transferida
[mol/h/g]
Yeyuno 3,00
Glu (Gsf  Vsf )
Q 
transf W t
Íleon 1,24

Donde t es 0,5 hs y W el peso del segmento intestinal.

Duodeno 0,27
Cociente serosa-mucosa
Yeyuno 0,20
Gsf
S 
M Gmf
Íleon 0,12
A continuación se muestran los gráficos con las concentraciones de glucosa obtenidas en los
distintos segmentos del lado seroso y mucoso:

Glucosa en serosa
2.5
Concentracion (μmol/ml)

1.5
Duodeno
1 Yeyuno

0.5 Ileon

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (Horas)

Glucosa en mucosa
9.4
9.2
Concentracion (μmol/ml)

9
8.8
8.6
Duodeno
8.4
8.2 Yeyuno
8 Ileon
7.8
7.6
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (Horas)
Conclusiones
Como puede observarse en los gráficos la absorción de glucosa decrece en sentido distal en el
intestino, mostrando una significativa diferencia en el último segmento, el íleon. Esto es por la
menor densidad de trasportadores de glucosa a medida que se avanza en el intestino.
Glu
En el caso dado donde masa de glucosa transferida sea igual a cero ( Q  0 ) y una masa de
transf
Glu
glucosa captada desde el fluido mucosal positiva ( Q  0 ) puede deberse a que la
Uptake

concentración de glucosa serosa sea mayor que en el interior de la célula ya que el trasporte
basolateral de glucosa mediante los trasportadores Glut2 al líquido intersticial es a favor del
gradiente de concentración. O bien puede estar operando una inhibición o malfuncionamiento de
los transportadores mencionados.

Las condiciones experimentales in vitro difieren de las condiciones in vivo ya que en esta última no
se alcanza el equilibrio químico entre el medio intracelular y el medio seroso porque la glucosa
llega a la circulación y es distribuida al resto del organismo. Por otro lado, hay tejido dañado en la
manipulación del intestino y por lo tanto menor cantidad de transportadores.

En las condiciones experimentales en las que se realizó el ensayo no permiten un tiempo de

evaluación mayor a 30 minutos ya se a la temperatura que se trabajó comenzaría a degradar el
tejido.