Você está na página 1de 4

INFORME DE RESULTADOS LABORATORIO BIOQUIMICA I

TEMA: AISLACIÓN Y PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS: α-LACTOALBUMINA

(el presente informe no debe superar 6 páginas)

POR: Carolina Ángel, Jennifer Camargo, Eliana Herrera

1. Introducción al tema, efecto físico de la adición de sulfato de sodio y/o cambios de pH en la separación o aislamiento de las proteínas en
general, fundamento cuantificación espectrofotométrica por el método del biuret.(no olvide incluir bibliografía):

2. Resultados
2.1. Remoción de la caseína, separación y purificación de la α-lacto albúmina

Indique el efecto físico en la adición de cada uno de los siguientes reactivos en la práctica realizada:

Reactivo/muestra Efecto físico/químico observado Resultado obtenido

Adición Sulfato de sodio anhidro a la leche

Filtrado libre de caseína y pH ajustado a 3.0

Resuspensión proteica y ajuste de pH entre 8.5-


9.0
2.2. Fundamento químico de la prueba de biuret (incluya ecuación)
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la
reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre
(II) . El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta
(Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
[http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPROTEINAS]

2.3. Sustente por qué la medición espectrofotométrica se realizó a 540 nm

La reacción de biuret presenta un color violeta característico indicando la presencia de proteínas en una
mezcla. El reactivo de Biurte contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina de (NaOH o KOH). El color propio
de esta reacción se debe a la coordinación de un átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno, el cual se
basa en la desprotnocacion de los grupos amida para formar el enlace con cobre (II) o por el establecimiento
de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los átomos de oxígeno y de nitrógeno
del péptido presentando un máximo de absorción a 540 nm [http://bioquimicamarzo-
julio.blogspot.com.co/2014/07/reaccion-de-biuret.html]
2.4. Curva de calibrado

Se prepararon 8 tubos de ensayo y a cada uno se le añadió cierto volumen de albumina (5mg/mL) y cierto volumen de agua, se homogenizaron y de cada
muestra se tomó 0,75 mL y se les adiciono a cada uno de ellos 3 mL de reactivo de Biuret hasta que se homogenizo la solución. Se dejaron 20 minutos a
temperatura ambiente y se les midió la absorbancia a 540 nm tomando como el tubo No 1 como blanco.

TUBO No CONCENTRACION ABSORBANCIA


1 0 0
2 0,5 0,043
3 1 0,063
4 1,5 0,075
5 2 0,116
6 3 0,134
7 4 0,157
8 5 0,17
Muestra
problema 0,109

Para la obtención de la curva de calibración se obtuvo por el método de regresión lineal donde el eje X representa la concentración de la
proteína en mg/mL y el eje Y los valores de absorbancia de cada concentración.
CURVA DE CALIBRADO DE α-LACTOALBUMINA
0.2
0.18 y = 0.0327x + 0.0253

0.16
ABSORBANCIA (540 nm)

0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5 6
CONCENTRACION mg/mL

2.5. Concentración muestra problema obtenida a partir de la curva de calibrado (mg/mL):

ABSORVANCIA (540 nm) CONCENTRACION (mg/ml)


Muestra
problema 0,109 2,529745561

2.6. Concentración muestra de leche:

Para la determinación de la concentración de proteína en su muestra de leche, tenga en cuenta que la concentración de lactoalbúmina obtenida en el
numeral 2.4 (en mg/mL), debe ser pasada a miligramos para lo cual multiplique el valor obtenido por el volumen medido en la probeta en el numeral 3
de la guía experimental. Una vez obtenidos los miligramos, divida entre los mililitros de leche que fueron su punto de partida.

Concentración muestra de leche:

2.7. Rendimiento de la lactoalbumina aislada y purificada.

Concentración de lactoalbúmina en su muestra de leche

Concentración de lactoalbúmina reportada en la literatura para leche

3. Conclusiones (presentadas a partir de los objetivos planteados por cada uno, incluir los resultados generales obtenidos. El límite inferior de
conclusiones es de 5).
4. Bibliografía e Infografía (Normas Icontec o APA)