HepG2 hace referencia a una célula tumoral.

HUVEC hace referencia a endotelio, derivada

HepG2-DsRed: se realizó una transfección, se transfiere ADN exógeno al
de endotelio umbilical
interior de la célula, para inducir que la célula exprese algo, en este caso
se induce que la célula HepG2 produzca una proteína fluorescente DsRed,
cada vez que veamos inmunofluorescencia roja, indicará que hay
presencia de células tumorales

HUVEC-C3: en esta se utilizó una sonda FRED (en FRED debe cumplirse
que la energía emitida de un fluoroforo sea capaz de excitar al otro ej: CFP
y YFP este es el más utilizado en FRED). Acá se utiliza un par fred que
entre ellos tiene un puente, el cual es una secuencia para una caspasa, es
un sitio de reconocimiento para caspasa 3 ( apoptosis). Células en verde
representan células vivas ya que hay FRED, mientras que los puntos
azules son células en apoptosis donde se activó caspasa 3 y corto el
puente, al quedar más lejos los fluoroforos no hay FRED. Con una
morfología ovalada, dispersas y sin contacto entre ellas.

Contraste de fase en HepG2: ordenamiento en “isla” es un monocultivo,

así actúan por si sola las células.

Contraste de fase HUVEC: orden más homogéneo, monocultivo.

Co-cultivo.

HepG2-DsRed: no hay cambio con el co-cultivo

HUVEC-C3 : hay diferenciación, cambio de morfología, cambio de

distribución y formación de estructuras particulares. Adoptan forma
tubular debido al angiogénesis.

Merged: superposición de imágenes, se superpone el rojo en el

verde, mismo plano, pero superpuesto los 2 canales, para poder ver
como se relacionan los 2 tipos celulares, células tumorales en rojo y
endoteliales bordeándolas en verde.

Enlarged: es un zoom de la zona punteada de HUVEC-C3

100 Um es un calibrador, para poder tener una proporción de lo que

estamos observando

Co-cultivo. Realizan de otra forma el cultivo, colocan todas las

células y las mezclan, y producen de igual forma la estructura y
diferenciación de endotelio.

HepG2-DsRed: sin cambios en co-cultivo

HUVEC-C3: el endotelio se diferencia igual en contacto con el

endotelio, sin importar el orden en que se haya cultivado. Adopta
de igual forma la estructura tubular diferenciada.
 Co-cultivo, en un cámara con una lámina que las separa entre sí, se
dejan crecer y se retira la separación y observamos como se
relacionan en la interfase los 2 tipos celulares.

Enlarged es un zoom del merged.

En la zona de interfase el contacto fue suficiente para producir lo

antes mostrado, la formación de estructuras tubulares desde la
interfase hacia dentro, las células comienzan a avanzar, proliferan y
avanzan. Y cambian la morfología de la célula endotelial.

Figura 2.

1:2 menos HepG2 y más HUVEC

1:1 misma cantidad

2:1 más HUVEC menos HepG2

La diferenciación fue mejor con la proporción de 2:1, cuando hay más HUVEC.

Después del día 2, el día 3 hay mayor diferenciación del endotelio, y después del día 5 empieza a revertirse el proceso.
 Se observa a nivel estructural más
interno de la célula que lleva a un
cambio dramático en la morfología.

En verde se ven las células HUVEC en

monocultivo y en co-cultivo, cambian su
morfología de aplanada a alargada y
ahora tienen contacto entre ellas, los
núcleos pasaron de ser redondos a
ovalados

Filamentos de actina en rojo,

esto corresponde a una
inmunofluorescencia.

Si comparamos el monocultivo
con el cocultivo, el monocultivo
era todo súper difuso, en el co-
cultivo se extiende, se
entrecruza y se observan las
zonas de contacto más
marcadas. Así como se
destribuyen la actina, se
distribuye la mitocondria

Microscopia confocal, cada columna muestra algo distinto, las medidas están relacionadas con el plano focal (distintas
profundidades) En las capas más profundas no hay tanto HUVEC son pequeñas prolongaciones, pero lo que más hay son
células tumorales. En las capas más superficiales hay más HUVEC y va formando las células epiteliales con una
estructura extendida.