Fatores que afetam a atividade enzimática

Engenharia Enzimática
Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia – 8º período
Profª. Dra Karina G. Fiametti Colombo
Principais fatores que influenciam a velocidade
da reação:

 Efeito do pH

 Efeito da Temperatura

 Efeito da Concentração da Enzima

 Efeito da Concentração do Substrato

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 Efeito do pH:

 O pH do meio aquoso em que se desenvolve uma reação

enzimática afeta o estado de ionização da enzima e a velocidade
da reação.
 A atividade catalítica da enzima depende de seu estado de
ionização.

pH ótimo  Há aumento da atividade enzimática

com o aumento do pH até um certo
Atividade

ponto.

Enzimas têm um pH ótimo no qual

sua atividade é máxima.

0 2 4 6 8 10 12  Acima ou abaixo do pH ótimo a

pH atividade diminui.
Efeito do pH sobre a velocidade da enzima. 3
 Efeito do pH:

Atividade Enzimática

Efeito do pH sobre a atividade da enzima amilase

Enzima amilase isolada a partir de organismos diferentes foram comparados

quanto à sua atividade em diferentes níveis de pH 5
  Efeito da Temperatura:
Temperatura
ótima If the temperature continues to rise the
disulfide bonds and covalent bonds are
broken. This permanently destroys the
shape of the active site and so the catalytic
activity of the enzyme is lost permanently.
The rise in temperature permanently
denatures the enzyme.

Efeito da temperatura sobre a velocidade de

uma reação catalisada por enzima.
 Há aumento da velocidade da reação com o aumento da temperatura.

 Aumentar a temperatura pode ser útil, mas quando se alcança o ponto na qual a
desnaturação é atingida, há desaceleração da velocidade de reação.
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 Efeito da Temperatura:
 Efeito da Temperatura:

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  Efeito da Temperatura:
O uso de temperaturas elevadas
pode dificultar ou mesmo impedir
uma boa estimativa de v0; assim é
habitual usar temperaturas de
ensaio em que a enzima é
estável.

Esta figura mostra como pode variar a

quantidade de produto ao longo do tempo
para ensaios de uma mesma enzima a
várias temperaturas.

Se usássemos um tempo de incubação suficientemente curto poderíamos concluir que a

enzima era mais ativa a 60°C; nesse tempo muito curto a velocidade da reação enzimática foi
alta e ainda não houve tempo suficiente para que a desnaturação se processasse em
extensão apreciável. Temperaturas mais baixas facilitam a estimativa de v0 pois a
atividade varia menos ao longo do tempo de ensaio.
  Efeito da Temperatura:

• IMOBILIZAÇÃO: Tende a aumentar a estabilidade das enzimas.

Enzimas Termoestáveis
• Resistentes a desnaturação térmica
• Demanda industrial (mercado ~US$ 250 milhões)
 Efeito da Concentração da Enzima:

‘v’ é proporcional à [E]

Efeito da E sobre a velocidade inicial (v0).

A S está acima da necessária para atingir a velocidade máxima.

 A velocidade máxima da reação é diretamente proporcional à

concentração de enzima (existindo substrato em excesso).
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 Efeito da Concentração do Substrato:

‘v’ é função crescente da

[S] até um determinado
valor
A partir desta [S] 
superior  velocidade é
praticamente constante

Efeito da S sobre a velocidade inicial (v0).

 Em geral, a velocidade da reação aumenta à medida que a S

aumenta e, depois, se nivela.
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Afinal, o que é ATIVIDADE ENZIMÁTICA???

• Concentração enzimática desconhecida...

• Sua medida envolve velocidade da reação...

¨UMA UNIDADE (U) DE ATIVIDADE É A QUANTIDADE DE ENZIMA QUE CATALISA

A TRANSFORMAÇÃO DE 1 MICROMOL DE SUBSTRATO, OU A FORMAÇÃO DE 1
MICROMOL DE PRODUTO POR MINUTO¨, nas condições de ensaio (T, pH, S, etc)

U= micromoles produto/minuto
Formas de expressar a atividade enzimática
• Atividade de esterificação
Aulas práticas!
• Atividade de hidrólise
 Análise quantitativa da atividade enzimática
A análise quantitativa pode ser conduzida de várias maneiras:
• Ensaios diretos: medida direta da concentração do substrato ou
produto em função do tempo.
• Ensaios indiretos: quando a medida da concentração do substrato e
do produto são próximas, a geração do produto pode ser acoplada a
outra reação não enzimática, que produza um sinal mais conveniente.
• Ensaios acoplados: a reação enzimática de interesse é acoplada a
uma segunda reação enzimática, que pode ser convenientemente
medida, tendo como exemplo a reação da glicose oxidase
Determinação da quantidade de proteínas

• Realizada por diferentes métodos – os mais precisos são aqueles que

determinam as ligações peptídicas existentes nas moléculas proteicas
(Lowry, Bradford).
• Outros determinam elementos naturais a natureza proteica , tal como
nitrogênio orgânico (Keldhjal)