UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA 6

TÉCNICAS DE TINCION

RESUMEN / PALABRAS CLAVE

1. OBJETIVOS
 Observar en el microscopio diferentes cultivos aplicando tinción.
 Aplicar diferentes técnicas de tinción.
 Determinar el tipo de microorganismos observados.
2. TEORÍA
2.1.Tinción.
2.2.Frotis
2.3.Tipos de tinción.
2.4.Tinción Gram
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
 Lámpara de alcohol
 Microscopio
 Porta y Cubre objetos.

3.2. Sustancias y reactivos

 Cultivos.
 Agua destilada
 Tinta china
 Alcohol Cetona
 Lugol
 Azul de metileno
 Cristal violeta
 Safranina
 Fucsina Fenica
 Alcohol-Acido
 HCl

3.3. Procedimiento
3.3.1. Tinción negativa.
3.3.2. Se coloca en el portaobjetos una pequeña gota de tinta china, esta no debe sobrepasar
los 4 milímetros.
3.3.3. Se coloca el inóculo sobre la gota de tinta china.
3.3.4. Con otra placa de vidrio se realiza el frotis
3.3.5. Observar al microscopio.
3.3.6. Tinción simple.
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3.3.7. Dependiendo del tipo de cultivo (sólido o líquido) se coloca los microorganismos en
la placa de observación.
3.3.8. Para medios líquidos
3.3.9. Se agita el tubo de muestra.
3.3.10. Se retira el tapon y se esteriliza con la lámpara de alcohol la boca del tubo al igual
que el asa de inoculación.
3.3.11. Se toma la muestra y se coloca en la placa delimitando un círculo en la mitad.
3.3.12. Para medios sólidos
3.3.13. Colocar una gota de agua en un extremo del portaobjetos
3.3.14. Con el asa bacteriológica estéril, tomar una pequeña cantidad de cultivo emulsionar y
extender uniformemente en una superficie aproximada de 1 cm2, dejar secar al aire.
3.3.15. Una vez colocados los microorganismos se procede a colocar el tinte.
3.3.16. Se coloca el tinte (azul de metileno) por 1 minuto.
3.3.17. Se lava con agua el tinte, y el remanente en la placa se quita con cuidado con papel
absorbente.
3.3.18. Se observa al microscopio.
3.3.19. Tinción Gram
3.3.20. Se realiza el paso 3.3.10. dependiendo si el medio es sólido o líquido.
3.3.21. Se cubre la muestra con violeta de genciana o cristal violeta por 10 segundos.
3.3.22. Lavar por con agua destilada, cuidando que no se arrastre la muestra y sacudir para
eliminar el exceso de agua.
3.3.23. Se coloca la solución de yodo. (Gram´s Iodine). 10 segundos
3.3.24. Lavar por con agua destilada, remover el exceso de agua
3.3.25. Decolorar alcohol cetona 70% /30% por 5 segundos.
3.3.26. Lavar con agua
3.3.27. Cubrir con Safranina durante 10 segundos.
3.3.28. Lavar con agua remover el exceso de agua usando papel absorbente.
3.3.29. Dejar secar al aire
3.3.30. Observar al microscopio
3.3.31. Tinción Ácido resistente.
3.3.32. Se realiza el paso 3.3.10. dependiendo si el medio es sólido o líquido.
3.3.33. Colocar Fucsina fenica por 10 segundos, luego colocar al calor del mechero hasta
que se note la presencia de vapores blancos
3.3.34. Dejar reposar por 10 minutos.
3.3.35. Lavar con Alcohol ácido.
3.3.36. Colocar Azul de metileno.
3.3.37. Lavar con agua destilada.
3.3.38. Fijar y observar en 40x y 100x con aceite de inmersión.

4.1 Datos Experimentales.

Tabla 4.1-1
Observaciones de técnicas de Tinción
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Técnica de Tinción Observación.

Tinción Negativa La muestra presentó una tinción de color negro debido al
colorante empleado (tinta china).

Tinción Simple La muestra de yogurt tuvo una coloración azul debido a

que utilizó azul de metileno como colorante.

Tinción Gram Los colorantes empleados fueron azul de metileno y

Tinción Ácido resistente
violeta de genciana, por lo tanto la muestra presento una
tinción violeta.
Los colores que se presentaron en este tipo de muestra
fueron dos, un color azul debido al azul de metileno
mayoritariamente por toda la superficie y un color fucsia
dispersos en diferentes secciones pequeñas debido a la
fucsina fénica.

4. RESULTADOS.
Tabla 4.1-1
Observaciones en el microscopio
Técnica de Tinción Observación.
Tinción Negativa Presencia de cocos, mediante el contraste se observó la
capsula bacteriana, tiende a una forma redonda.
La coloración de la bacteria es blanca en un fondo
oscuro.
Tinción Simple Coloración azulada, presencia de bacteria saprófita,
coco, tiende a un forma redonda.

Tinción Gram Presencia de bacterias Gram negativas debido a su color

rojizo, Bacilos forma de bastón.

Tinción Acido alcohol Presencia de bacterias ácido resistentes positivas,

resistente presencia de endoesporas.
Por la forma redonda indica la presencia de bacterias
ácido resistentes positivas, presencia de cocos y
esporas. La coloración emitida fue fucsia.

5. DISCUSIÓN
6. CONCLUSIONES

6.1. Los microorganismos como las bacterias son sensibles o presentan afinidad a los
colorantes, lo que permite observar su morfología, presencia de cápsulas, capas delgadas
o gruesas, etc. En la práctica se logró identificar dicha morfología mediante la aplicación
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de técnicas de tinción; para lograr una buena tinción de la muestra fue necesario colocar
en exceso el colorante, la fijación a la llama y el tiempo en que se dejó el teñido para que
así la muestra adquiera una mejor coloración. La tinción más sencilla de realizar fue la
simple ya que solo se utilizó un colorante y no fue necesario lavar la muestra, quedando
teñida de color azul y permitiéndonos la observación de la morfología de los
microorganismos como son cocos, bacilos de forma cilíndrica y espirilos de forma
helicoidal. Fátima Andrea Carvajal Suárez

7. CUESTIONARIO.
7.1.¿Cuál es la aplicación de las preparaciones en fresco?
7.2.¿Qué grupos microbianos se observan con las preparaciones en fresco?
7.3.¿Por qué se fija una muestra? ¿Cuándo se lo hace con calor y cuando sin calor?
7.4.¿Cómo están constituidos los colorantes?
7.5.¿Qué es una tinción diferencial?
7.6.¿Cuál es la diferencia entre tinción Gram y tinción Ziehl Neelsen y cuál es su
importancia?
7.7.De qué color se observan las bacterias ácido alcohol resistentes, indique la causa.
7.8.¿Qué tienen en común y en que se diferencian las paredes celulares de las Gram + y
Gram? Cite un ejemplo de cada uno de los grupos.

8. ANEXOS
8.1.Diagrama del equipo.
8.2.Reporte fotográfico de las observaciones realizadas.
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