LABORATORIO #6

AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE

ENZIMAS.

DIEGO ALEJANDRO AVILA RINCÓN-117003105

SANDRA MILENA HERNANDEZ TRUJILLO-117003116
OLGA DANIELA ROMERO ROBAYO-117003134
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

RESUMEN: en esta práctica se realizó un aislamiento y selección de

microorganismos a partir de una muestra de suelo y teniendo en cuenta el
correspondiente medio de cultivo para el microorganismo especifico, y obteniendo
al final un crecimiento excesivo de microorganismo lo cual afecto para hacer el
recuento y determinar los halos de hidrolisis de cada colonia.
MATERIALES Y MÉTODOS
-se pesó 10 de las muestra de suelo RESULTADOS Y DISCUSIONES
a investigar, y se realizaron
diluciones seriadas de 10 –1, 10 –2
10 – 3 Tabla #1 Recuento total y
específico sobre sustrato inductor
-posteriormente se sembró en
de actividad enzimática.
superficie 0 .1 ml de las dilución 10 –
3, y esta se llevó a incubación a
temperatura ambiente por horas.
Medio UFC/g UFC/g
-después del tiempo necesario se totales Con
procedió a hacer el recuento de todas halos
las colonias (las que presentan y no Almidón NO NO
presentar halos de hidrólisis), también Celulosa NO NO
se Adiciono el revelador Leche NO NO
correspondiente para cada muestra y
así poder determinar las verdaderas
colonias productoras de enzima,
realizando correctamente la medición Tabla #2 Halos de hidrólisis sobre
del halo teniendo en cuenta la sustrato específico.
fórmula. Para el almidón se utilizó
lugol, para la celulosa se añadió rojo
congo, mientras que el medio de
cultivo con leche no requirió ningún
revelador, por lo cual se observó
directamente.
 Medio Diámetro de los halos Grafica #3: Determinación de la
evaluado de hidrolisis en las proteasa en agar leche.
colonias más
representativas

Colonia 1 NO

Colonia 2 NO

Colonia 3 NO

DISCUSIONES
Grafica #1: Determinación de la
enzima amilasa en agar almidón.

Como se puede observar en las

imágenes, no fue posible determinar
las unidades formadoras de colonia
en cada cultivo. Debido a que hubo
un crecimiento excesivo de
microorganismos como bacterias y
hongos, por motivo de un mal manejo
en la siembra de las muestras ya que
podían contener muchos
microorganismos o el método
realizado no se llevó a cabo
Grafica #2: Determinación de la correctamente además factores como
celulasa en agar celulosa. el tiempo de incubación y
temperatura.
Puesto que los medios de cultivos no
fueron favorables para el conteo de
colonias se llevó a cabo un análisis
teórico para mostrar la forma
correcta de obtener los resultados
esperados.
Grafica #4: Proteasa en agar leche. lugares donde el almidón fue digerido
representando los halos.
Cuando la bacteria no hidroliza
el almidón todo el medio permanece
azul. La hidrólisis del almidón puede
ser evidenciada en ausencia de
bacterias, ya que la amilasa es una
enzima extracelular.
Grafica #6: Celulasa en agar
celulosa.

La producción de proteasas es
evidenciada por la presencia de un
halo transparente alrededor de las
colonias como producto de la
degradación de la caseína (proteína
de la leche) por parte de las
proteasas secretadas al medio.
Aunque todas ellas producen
proteasas extracelulares, las
bacterias que forman estas colonias Para determinar la capacidad de
pertenecen a distintos grupos producción de celulasas de una cepa,
taxonómicos y presentan diferentes se adiciona rojo congo y se detecta
morfologías. la presencia de halos claros alrededor
Grafica #5: Amilasa en agar de la colonia con este agente
almidón. revelador.

CONCLUSIONES
La determinación de colonias
formadores de enzimas como la
amilasa, proteasa, y celulasa, no fue
posible debido a que se obtuvo una
cantidad excesiva de
microorganismos, puesto que al
agregar los reveladores a cada uno
de los cultivos no se podía diferenciar
cada una de las colonias.
Al agregar Lugol el medio se tiñe de
azul o negro en presencia de almidón
y permanece transparente en los
CUESTIONARIO
1. En que sustratos y cómo presencia de enzimas
actúan las enzimas amilasas, lipolíticas?
proteasas y celulasas. RTA: el medio de cultivo para
RTA: estos microorganismos es el
La enzima amilasa actúa en agar tributirina que consta de
sustratos que contengan
almidón, de tal forma que lo
hidroliza y forma azucares BIBLIOGRAFÍA
simples, como la maltosa y
otros compuestos como
dextrinas.
En cuanto a la enzima celulasa
actúa en medios con celulosa
descomponiéndola en
múltiples monómeros de
glucosa.
Por último la proteasa actúa en
medios con proteínas
disponibles leche por ejemplo,
y se encargan de
descomponer los enlaces
peptídicos de estas.

2. En qué tipo de industrias son

usadas frecuentemente este
tipo de enzimas y por qué?
RTA: Las proteasas se usan
en los detergentes para lavar
la ropa y productos
alimenticios y también para
eliminar pelos de la piel de los
animales en cuero y con fines
médicos.
Las amilasas son utilizadas en
la industria textil y alimenticia,
gracias a su facultad de
descomponer el almidón.
Por último la celulosa es
utilizada en la industria del
papel.
3. En qué medio de cultivo puedo
aislar microorganismos con