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TURMA A
2019/01
LEQ III 2
INTRODUÇÃO
Bioquímica
LEQ III
Transferência
de massa Microbiologia
LEQ III 3
IMPORTÂNCIA LABORATÓRIO DE
ENGENHARIA QUÍMICA III
Práticas experimentais
Consolidação de inúmeros
conduzidas em laboratório,
conceitos estudados nas
sob a orientação e supervisão
disciplinas teóricas
de um professor
Desenvolvimento de
Espaço de integração entre a habilidades, hábitos e atitudes
vida acadêmica e necessárias para aquisição de
profissional competências profissionais e
pessoais
LEQ III 4
OBJETIVOS
• Objetivo Geral:
OBJETIVOS
• Objetivos Específicos:
Desenvolver o senso prático inerente ao engenheiro
PROGRAMA
PRIMEIRO MÓDULO (Bioquímica)
METODOLOGIA
Aulas
expositivas
Trabalho em Práticas
grupo de alunos Experimentais
Relatório Seminário
LEQ III 8
SISTEMA DE AVALIAÇÃO
Relatórios • 60% pontos
AN N
R
Nota Final 0,40 0,60
i 1 N i 1 N
A= Nota da Apresentação Seminário/tratamento dos dados
R= Nota dos relatórios
N= Número de aulas práticas
LEQ III 9
OBSERVAÇÕES
As notas e datas para vista serão disponibilizadas via
MOODLE. O horário de atendimento semanal será das
15:30 às 16:30 horas na quarta-feira
MOODLE
A falta de um dos membros do grupo no dia
Laboratório de
Engenharia Química da apresentação implicará em perda de 40%
III do valor da apresentação pelo grupo
Turma A
CONTRATO DIDÁTICO
Organizar Qual o papel do
Objetivos
Questões disparadoras
O que é?
BIBLIOGRAFIA
• Básica
▫ BAILEY, J.E.; OLLIS, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals. 2.ed.
McGraw Hill. 1986.
▫ BIRD, R.B.; STEWART, W.E.; LIGHTFOOT, E.N. Fenômenos de Transporte.
2.ed. LTC. 2004.
▫ BORZANI, W., SCHMIDEL, W., AQUARONE, E., LIMA, U. Biotecnologia
Industrial. Edgar Blucher, v. 2, 2001. 541 p.
▫ PERRY, J.; PERRY, R.; GREEN, D. Perrys Chemical Engineers Handbook.
8.ed. McGraw-Hill, New York. 2008.
▫ REED, G.; NAGODAWITHANA, T. Enzyme in Food Processing. .ed. Academic
Press, New York. 1993.
LEQ III 12
BIBLIOGRAFIA
• Complementar
▫ AIBA, S.,Biochemical Engineering. Second Edition, Academic Press, 1973.
▫ ARMOUR, M.-A. Hazardous Laboratory Chemicals Disposal Guide. 3.ed. CRC Press. 2007.
▫ BORZANI, W., SCHMIDEL, W., AQUARONE, E., LIMA, U. Biotecnologia Industrial. Edgar Blucher, v.1,
2001, 254 p.
▫ BORZANI, W., SCHMIDEL, W., AQUARONE, E., LIMA, U. Biotecnologia Industrial. Edgar Blucher, v.3,
2001, 616 p.
▫ CUSSLER, E. Difusion: Mass transfer in fluid systems. Cambridge University Press. 1984.
▫ LINDEBURG, M. Practice Problems for the Chemical Engineering PE Exam: A Companion to the
Chemical Engineering Reference Manual. 6.ed. Professional Publications, Inc. 2003.
▫ NRC. Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Disposal of Chemicals. NATIONAL
▫ PLAWSKY, J. L., Transport Phenomena Fundamentals, Third Edition, CRC Press, TAYLOR & FRANCIS
USA, 2014, 838 p.
▫ REID, C.; PRAUSNITZ, J.; POLING, B. Properties of Gases & Liquids. 5.ed. McGraw Hill. 2001.
▫ RESEARCH COUNCIL, National Academies Press. 2000.
▫ SCRAGG, A. Biotechnology for Engineers-biological systems in technological processes. Ellis Horwood
Limited. 1988.
LEQ III 13
CONTATOS
patriciavieira@ufu.br
1K 221 – Bloco 1K – Campus Santa Mônica
14
MÓDULO I - BIOQUÍMICA
LABORATÓRIO DE
ENGENHARIA QUÍMICA III
Objetivo
Determinar os parâmetros
cinéticos (Vmáx e Km) da
hidrólise da sacarose pela
enzima invertase, utilizando o
método de Lineweaver-Burk,
á temperatura constante.
Primeiro Módulo – LEQ III 17
Objetivo
Verificar a influência do pH sobre o
desempenho da enzima invertase na
catálise da reação de hidrólise da sacarose
Objetivo
Verificar a influência da
temperatura sobre o
desempenho da enzima
invertase na reação de
hidrólise da sacarose
Primeiro Módulo – LEQ III 19
Cinética Enzimática
SE Vmáx .S
ES v
Km S
ES P E
** Procedimento Gráfico de Lineweaver-Burk
1 Km 1 1
.
v Vmáx S Vmáx
Primeiro Módulo – LEQ III 21
Compreender o Km
O Km é uma constante
.
Primeiro Módulo – LEQ III 22
Compreender Vmáx
A velocidade máxima teórica
.
Primeiro Módulo – LEQ III 23
PROCEDIMENTOS
EXPERIMENTAIS
Primeiro Módulo – LEQ III 24
Material
encamisado
Solução de NaOH (80 g/L)
Banho termostatizado
DNS [ácido 3,5
dinitrosalicílico Tubos de Follin-Wu
(C7H4N2O7)] – (Tóxico) Suporte para os tubos de
Follin-Wu
Sal de Rochelle [tartarato
duplo de K e Na Bico de Bunsen
(KNaC4H4O6.4H2O)] Bacias de alumínio
Solução tampão de acetato Balões volumétricos de 1L
de sódio
Pipetas volumétricas de 1 e
Invertase (46 unidades de 2 mL
atividade / mg de sólido); Cronômetro
Glicose e Sacarose Espectrofotômetro
Primeiro Módulo – LEQ III 25
Curva de Calibração
Curva de Calibração
0,5 mL
25 mL
12,5 mL
1 mL de solução de
Diluições: DNS (cor amarelo)
0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2;
1,6; 1,8; 2,0; 2,2; 2,4; 2,6;
2,8; 3,0; 3,6 e 4,0 g/L
Água (branco)- 0,5 mL Ebulição
(zerar o
(5 min)
espectrofotômetro)
Resfriamento: Água fria
Primeiro Módulo – LEQ III 28
Curva de Calibração
12,5
mL
4
y = 3,4877x
y= ax+b
R2 = 0,9958 Espectrofotômetro
3,5
3
540nm
2,5
1,5
0,5
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4
Absorbância (Abs)
Primeiro Módulo – LEQ III 29
0,5 mL
12,5 mL
1 mL de
DNS
Concentrações 40 mL de amostra
sacarose: + 1 mL H2O
10, 20, 30, 50, 70 e (T=30ºC e
90 g/L Branco
pH=4,5)
pH= 4,5
T= 30ºC
Primeiro Módulo – LEQ III 30
DNS
Primeiro Módulo – LEQ III
31
0,5 mL
12,5
mL
1 mL de DNS
40 mL de amostra
Concentrações
sacarose: + 1 mL invertase
10, 20, 30, 50, 70 e 90 (pH=4,5 e T=30°C)
g/L
(t= 3, 6, 9, 12 e 15 min)
Água fria
Primeiro Módulo – LEQ III 32
0,0009
Calculada da 0,0008
CS= at+b
curva de 0,0007
glicose
0,0004
0,0003
0,0002
0,0001
0
-0,0001 0 5 10 15 20
tempo (min.)
Primeiro Módulo – LEQ III 33
5,00E-04
4,00E-04
3,00E-04
2,00E-04
1,00E-04
0,00E+00
0 20 40 60 80 100
[S]
1 Km 1 1
.
y= ax + b v Vmáx S Vmáx
a= Km/Vmax
b= 1/Vmax
Primeiro Módulo – LEQ III 34
A estrutura e a forma
do sítio ativo são Isto torna a
decorrência da atividade
Influência estrutura
do Meio tridimensional da enzimática
enzima e podem ser dependente do
sobre a afetadas por meio ambiente,
Atividade quaisquer agentes notadamente do
Enzimática capazes de provocar
mudanças pH e da
conformacionais temperatura.
na estrutura protéica
Primeiro Módulo – LEQ III 35
A velocidade da reação
diminui à medida que o pH
se afasta desse valor ótimo,
A maioria das enzimas
que é característico para
apresenta um valor de pH
cada enzima, mas com
para o qual a sua atividade frequência, está próximo do
é máxima pH neutro
Primeiro Módulo – LEQ III 36
125
Atividade Relativa (%)
75
50 amilase
salivar
25
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
pH
Primeiro Módulo – LEQ III 37
2
E E E = forma ativa da enzima
E
2
Estado de E , E = formas inativas da
ionização do sítio enzima obtidas pela inclusão e
ativo exclusão de H
do sítio ativo de
E.
[ H ][ E ] [E0]=[E]+[E-]+[E-2]
K1 E0= fração total de enzima
[E] presente.
[ H ][ E 2 ]
K2 K1 e K2 = constantes de
[E ] equilíbrio
Primeiro Módulo – LEQ III 39
1
[H ]
K2 Fração Ativa
K1 [H ]
[ H ]ótimo K1K 2 y Máximo com relação a H
1
pH ótimo pK1 pK 2
ou 2
pK1 log K1
pK 2 log K 2
Primeiro Módulo – LEQ III 40
k [ E ] K3
Vmax K [ E0 ]. y
0
[H ] K2
1
K1 [H ]
Avalia os parâmetros K1 e K2
Primeiro Módulo – LEQ III 41
k [ E ] K3
Vmax K [ E0 ]. y
0
[H ] K2
1
K1 [H ]
V
1
pH ótimo pK1 pK 2
2
pK1 log K1
pK 2 log K 2
Primeiro Módulo – LEQ III 42
k [ E ] K3
Vmax K [ E0 ]. y
0
[H ] K2
1
K1 [H ]
V
Associar V x H ---- modelo não linear ---- encontra-
se as constante K1, K2 e K3 ;
pH= -log [ H ] ---- [ H ]= 10
-pH [ H ]ótimo K1K 2
Primeiro Módulo – LEQ III 43
PROCEDIMENTOS
EXPERIMENTAIS
Primeiro Módulo – LEQ III 44
Tampões: 3; 4; 4,5; 5; 6 e 7
Solução
sacarose (Solução de Citrato – fosfato: ácido
cítrico (0,1 mol/L) + hidrogenofosfato
(conhecida)
de sódio (0,2 mol/L))
50 g/L + T= 30ºC
LEQ III – LEQ III
Primeiro Módulo 46
0,5 mL
1 mL de
DNS
Concentrações 40 mL de amostra
sacarose: 50 g/L + 1 mL H2O- T=30ºC
Tampões
Branco
Primeiro Módulo – LEQ III 47
0,5 mL 12,5
mL
1 mL de DNS
40 mL de amostra
pH= 3; 4; 4,5; 5; 6 e 7
+ 1 mL invertase - T= 30ºC
(t= 3, 6, 9, 12 e 15 min)
LEQ III
0,0045
pH= 3,0
Calculada da
0,004
0,0035
CS= at+b
curva de
calibração da
0,0025
0,002
glicose 0,0015
0,001
0,0005
0
0 5 10 15 20
-0,0005
tem po (m in.)
Primeiro Módulo – LEQ III 49
y ax 2 bx c
6,00E-04
5,00E-04
v (mol/L*min.)
4,00E-04
3,00E-04
2,00E-04
Determinação de pH teórico
k[ E0 ] =K3 Modelo não
Vmax K [ E0 ]. y
[H ] K2 linear
1
K1 [H ]
Vmax ≅ v
Ajustar o modelo
aos dados v e [ H ]
Ajuste ao modelo não linear:
K1=
K2=
pH= -log[H+ ]
K3=
[ H ]ótimo K1K 2
Primeiro Módulo – LEQ III 51
pH experimental
6,00E-04
5,00E-04
pH teórico
v (mol/L*min.)
4,00E-04
1
3,00E-04
pH ótimo pK1 pK 2
2,00E-04
2
1,00E-04 pH ótimo exp
0,00E+00 pK1 log K1
2 3 4 5 6 7 8
pH pK 2 log K 2
Primeiro Módulo – LEQ III 52
Ea Ea e K0 – estimados
K K 0 .exp experimentalmente
RT
Primeiro Módulo – LEQ III 53
Atividade Enzimática
Ei
Ea
Temperatura
Primeiro Módulo – LEQ III 54
Ea
K K 0 .exp Ea e K0 – estimados
RT experimentalmente
K=V
Linearizando:
Ea
ln v ln K 0
RT
Primeiro Módulo – LEQ III 55
PROCEDIMENTOS
EXPERIMENTAIS
Primeiro Módulo – LEQ III 56
Branco 12,5 mL
1 mL de
DNS
Primeiro Módulo – LEQ III 58
0,5 mL 12,5
mL
1 mL de DNS
40 mL de amostra
Banho ajustado: + 1 mL invertase
20; 25; 30; 40; 50; (T= 20...70ºC e pH=4,5)
60 e 70ºC (t= 3, 6, 9, 12 e 15 min)
LEQ III
Determinação de Parâmetros
Cinéticos (Ea e K0)
0,005
Calculada da 0,0045
CS= at+b
curva de
0,004
Conc. Glicose (g/L) 0,0035 T= 20 C
calibração da 0,003
0,0025
glicose 0,002
0,0015
0,001
0,0005
0
0 5 10 15 20
tem po (m in.)
Primeiro Módulo – LEQ III 60
6,00E-04
5,00E-04
4,00E-04
3,00E-04
2,00E-04
1,00E-04
0,00E+00
3 13 23 33 43 53 63 73 83
T (ºC)
Primeiro Módulo – LEQ III 61
LEQ III
Ea Linearizando:
K K 0 .exp
RT ln K ln K0
Ea
RT
K=v
Ea e K0 – estimados
experimentalmente
Primeiro Módulo – LEQ III 62
OBSERVAÇÕES IMPORTANTES