Enzimas en Medicina Biotecnología Enzimática

Alteraciones de la concentración enzimática en suero,

1.- Aumentos de la actividad enzimática
(a). Incremento patológico de la permeabilidad de membrana.
(b). Muerte y destrucción celular.
(c). Inducción enzimática.
(d). Proliferación celular.
2. Disminuciones de la actividad enzimática
(a). Intoxicaciones
(b). Enfermedades crónicas
(c). Alteraciones del estado nutritivo
Algunas enzimas con interés diagnóstico
1. Aminotransferasas
2. Creatin kinasa
3. Fosfatasa alcalina
4. g-Glutamil transferasa
5. a-Amilasa
6. Fosfatasa ácida
7. Lactato deshidrogenasa
8. Seudocolinesterasa
1). Aminotransferasas (Transaminasas)
Catalizan la interconversión reversible de aminoácidos y cetoácidos. Utilizan piridoxal
fosfato como cofactor

COOH COOH COOH COOH

H2N CH + C O C O + H2N CH
R1 R2 R1 R2
Su papel es importantísimo en el metabolismo de aminoácidos. En clínica se
determinan las siguientes:
EC 2.6.1.1, Aspartato aminotransferasa (AST, GOT)

EC 2.6.1.2, Alanina aminotransferasa (ALT, GPT)

Aspartato aminotransferasa, EC 2.6.1.1 (AST, GOT)

- COO- -
COO-
COO COO +
+ C O H3N CH
H3N CH C O
+ CH2 + CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
COO- COO-
COO- COO-

Aspartato -Cetoglutarato Oxalacetato Glutamato

Aparece en citosol y mitocondrias de tejidos metabólicamente muy activos. Su nivel se

eleva en el suero ante afecciones hepáticas y miocárdicas.

COO- COO-
COO - COO- +
+ C O H3N CH
H3N CH C O
+ CH2 + CH2
CH3 CH3
CH2 CH2
COO- COO-
Alanina Piruvato
-Cetoglutarato Glutamato
Alanina aminotransferasa, EC 2.6.1.2 (ALT, GPT)

Enzima citosólica, de elevada concentración en el parénquima hepático. Se considera

casi específica de lesión hepática.
2). Creatin kinasa, EC 2.7.3.2 (CK, CPK)

CH3 CH3 O
ATP ADP
N CH2 COOH N CH2 CO O P O-
HN C HN C
NH2 O-
NH2

Creatina Creatin fosfato

Creatin fosfato es una forma de almacenamiento de enlaces ricos en energía en el

tejido muscular. Es el prototipo de los compuestos conocidos como fosfágenos.
+
La CK se presenta en forma de tres isoenzimas
específicas de tejido:
MM
- Forma MM (músculo esquelético)
- Forma MB (músculo miocárdico)
- Forma BB (cerebro)
MB
La isoenzima MB es un marcador precoz de
infarto de miocardio. Un nivel muy elevado es
BB mal pronóstico
Las isoenzimas se distinguen electroforéticamente
o por métodos inmunológicos

-
 3). Fosfatasa alcalina, EC 3.1.3.1

O O
R O P O- + H2O R OH + HO P O-
O- O-

Hidroliza con baja especificidad fosfomonoésteres, a un pH alto (de ahí el nombre). No

se conoce con certeza cuál es su función metabólica. Aparece en gran cantidad de
tejidos.
La fosfatasa alcalina presenta varias isoenzimas:
- Ósea
- Hepática
- Intestinal
- Placentaria
Las más importantes son las dos primeras. Se pueden distinguir por su
termoestabilidad, siendo la ósea más termolábil.
Ósea: Propia del tejido óseo en crecimiento y de enfermedades que cursan con
neoformación ósea
Hepática: Propia de las células del árbol biliar: se eleva en las colestasis
(obstrucciones biliares) asociada a partículas de elevado peso molecular
4). g-Glutamil transferasa, EC 2.3.2.2 (GGT)

GSH + aa -Glu-aa + Cys-Gly

Tiene un importante papel en el transporte de aminoácidos a través de membranas.
Aparece, como la fosfatasa alcalina, en obstrucciones biliares asociada a fracciones
de alto peso molecular.
Es una enzima inducible, y su concentración en suero aumenta con xenobióticos
(alcohol, drogas, etc.).
5). a-Amilasa, EC 3.2.1.1
Es una enzima producida por las glándulas salivales y el páncreas.
Es un marcador muy importante de afecciones pancreáticas agudas (pancreatitis).
Puede incluso aparecer en la orina, debido a su bajo peso molecular (amilasuria).

O O
R O P O- + H2O R OH + HO P O-
O- O-
 6).Fosfatasa ácida, EC 3.1.3.2
Hidroliza fosfomonoésteres con baja especificidad. Presenta varias isoenzimas, una de
las cuales (Fosfatasa ácida prostática) es un marcador muy fiable del cáncer de
próstata y que se emplea en el diagnóstico precoz del mismo.

Enzimas en Terapéutica: producidas por recombinación

 Adagen (adenosine deaminase) Enzon, Inc. Autorizado su uso pediátrico en
inmunodeficiencias congénitas.
 Ceredase (alglucerase) Genzyme Corp. Autorizado su empleo en
enfermedad de Gaucher tipo 1
 Cerezyme (imiglucerase) Genzyme Corp. Autorizado su empleo en
enfermedad de Gaucher tipo 1
 Pulmozyme (Dnase) Genentech, Inc. Autorizado su empleo en fibrosis
quística
 Activase (recombinant alteplase) Genentech, Inc. Autorizado en infarto de
miocardio y embolia pulmonar

Biotecnología enzimática
- Procesos industriales enzimáticos:
* Industrias del almidón
* Detergentes
* Industrias lácteas
* Industrias de la fruta
* Antibióticos
- Biosensores y biochips
 ENZIMAS

Catalizadores •No hacen factibles las reacciones imposibles

biológicos

Aceleradores •Sin consumirse en una reacción, aumentan

notablemente su velocidad

•Prácticamente todas las reacciones químicas que tienen

Posibilitan la vida lugar en los seres vivos están catalizadas por enzimas.

Las enzimas son proteínas altamente especializadas. Función: catálisis (o regulación

de la velocidad) de las reacciones químicas en los seres vivos.
Las enzimas son proteínas* que catalizan reacciones químicas
 Muchas reacciones requerirían condiciones extremas de presión, temperatura
o pH sin catalizador, pero ocurren en condiciones fisiológicas con enzimas.
Ej. Glc ----> CO2 + H2O en un calorímetro = Ø
Las enz. aceleran a 1010 a 1014 veces más rápido que las reacciones no catalizadas.
Ureasa en orina = 1014 (significa que una reacción que catalizada toma 1 segundo
podría tomar 3 millones de años sin estar catalizada).
* En su mayoría son proteínas, hay ARN con capacidad catalítica (ribozimas)
 Estructura de una enzima
Las proteínas enzimáticas están formadas por una gran cantidad de aminoácidos (AA),
que cumplen funciones diferenciadas:
No esenciales, estructurales, de unión y catalíticas.
• Los AA no esenciales pueden ser reemplazados y, en algunos casos,
eliminados sin pérdida significativa en la función o conformación de una
enzima.
• Los AA estructurales = conformación de la enzima, "forman su esqueleto".
• Los AA de unión = asociación entre la enzima y el sustrato.
• Los AA catalíticos = transformación del sustrato.
Aspectos generales de las enzimas
 Las enzimas son catalizadores específicos: cada enzima cataliza un solo tipo
de reacción y casi siempre actúa sobre
– un único sustrato o
– un grupo muy reducido de ellos.
Sustrato: sustancia sobre la que actúa la enzima

Mecanismo de la reacción enzimática

En toda reacción química se produce la

transformación de una sustancia inicial,
denominada sustrato (S), en una sustancia final o
producto (P), según la siguiente notación:

Reacción catalizada por una enzima:

Centro activo región concreta de la enzima donde el sustrato se une

Enzima y su sustrato Unión al centro activo Formación de productos

EL CENTRO ACTIVO COMPRENDE
 un sitio de unión formado por los aminoácidos que están en contacto directo
con el sustrato y
 un sitio catalítico, formado por los aminoácidos directamente implicados en el
mecanismo de la reacción
Centro activo: Es el sitio donde están los AA de unión al S y los AA que median el
efecto catalítico de la enzima. (uniones intermoleculares de la enzima c/el S en una
orientación tal que encajan correctamente, como las piezas en un rompecabezas).
El sustrato se une a la enzima luego se inicia la catálisis

Sitio de unión: es el que

le da la especificidad a la
enzima

Sitio catalítico

Nomenclatura
Hay varias formas de nombrar una enzima:
 nombres particulares
 nombre sistemático
 código de la comisión de enzimas (EC = Enzyme Comission) de la UIB

Nomenclatura: nombres particulares

 Antiguamente, los enzimas recibían nombres particulares, asignados por su
descubridor.
 Ejemplos: amilasa (hidrolisa el almidón)
Glucoquinasa Glc + ATP  Glc-6P + ADP
 Al ir aumentando el número de enzimas conocidas, se hizo necesaria una
nomenclatura sistemática que informara sobre la acción específica de cada
enzima y los sustratos sobre los que actuaba.

Nomenclatura: nombre sistemático

Consta actualmente de 3 partes:
 el sustrato preferente

 el tipo de reacción catalizada

 terminación "asa"

ejemplo: la glucoquinasa
 ATP:glucosa fosfo transferasa

Glc + ATP  Glc-6P + ADP

Comisión de Enzimas Nomenclatura: __.__.__.__.

El nombre es identificado por un código numérico:
 encabezado por las letras EC (enzyme commission)
 seguidas de cuatro números separados por puntos.
– el primer número indica a cual de las seis clases pertenece la enzima,
– el segundo se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo,
– el tercero y el cuarto se refieren a los grupos químicos específicos que
intervienen en la reacción y el nº de orden en la lista.

Clasificación y
Nomenclatura:
Comisión de Enzimas

Clases
1. Óxido-reductasas
2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas

Ej.: la ATP:glucosa fosfotransferasa

(glucoquinasa)
EC 2.7.1.2. Glc + ATP  Glc-6P + ADP
2: transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa el que acepta el Glucoquinasa
grupo fosfato.
Creatin fosfo quinasa
 Dímero: M (músculo) – B (cerebro) separables por electoforesis (método de
estudio)
 Cerebro = BB (CPK1 - rápida)
 Músculo esquelético= MM (CPK3 - lenta)
 Corazón = MB (CPK2 - intermedia) h. 6% de la CPK total = 10-50 UI/L a 30ºC.

Lactato deshidrogenasa ó LDH

Tetramérica c/2 subunidades distintas: H de corazón y M de músculo, que se
combinan de 5 formas.
 LDH1 – HHHH – Miocardio y
 LDH2 – HHHM - Miocardio y GR.
 LDH3 - HHMM – Cerebro y riñón
 LDH4 – HMMM – Hígado y Músc. Esquel.
 LDH5 – MMMM – Músculo Esquelético.

Isoenzimas de Amilasa (AMI)

alfa-Amilasa ó α-amilasa, EC 3.2.1.1 (1,4-α-D-glucan glucanohidrolasa; glicogenasa)
metaloenzima (dependiente de Ca). Corta enlaces glicosídicos alfa-1,4 al azar o at
random. En animales es la mayor enzima digestiva y su pH óptimo es 6.7-7.0. En el
Hº amilasa salivar y pancreática son alfa-amilasas. Esta forma es también hallada en
plantas, hongos y bacterias (Bacillus).
β-Amilasa (EC 3.2.1.2 ) (1,4-α-D-glucan maltohidrolasa; glicogenasa) es también
sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Cataliza la hidrólisis del segundo enlace α-
1,4 glicosídico desde el extremo no reductor, separando 2 unidades de glucosa
(maltosa). Presente en semillas y granos de cereales; en muchos microorganismos
que degradan el almidón extracelular. Los tejidos animales no contienen β-amilasa,
pero puede estar presente en microorganismos del TD. El pH óptimo es 4.0-5.0.
 γ-Amilasa (EC 3.2.1.3 ) ó Glucan 1,4-alfa-glucosidasa ó amiloglucosidasa ó
Exo-1,4-α-glucosidasa ó glucoamilasa; α-glucosidasa lisosomal; 1,4-α-D-glucan
glucohidrolasa.
 Rompe los enlaces α(1-6) glicosídicos, como también el último enlace α(1-
4)glicosídico del extremo no reductor de amilosa y amilopectina, produciendo
glucosa. Es más activa a pH 3.
MODO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
 La acción de los catalizadores consiste en disminuir la Energía de
activación
 Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la
Ea aún más que los catalizadores inorgánicos.
 Por ej, la descomposición del agua oxigenada (H2O2) puede ocurrir
o sin catalizador Ea= 18 Kcal/mol
o con un catalizador inorgánico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
o con una enzima específica (catalasa) Ea= 6 Kcal/mol
 Así, se puede calcular que el platino acelera la reacción 20.000 veces, mientras
que la catalasa la acelera 370.000 veces.
MODO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
Dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo del enzima:

 MODELO LLAVE-CERRADURA
 La estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias.
 Este modelo es válido en muchos casos, pero no es siempre correcto.

 MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

 el centro activo adopta la conformación idónea sólo en presencia del sustrato.
 La unión del sustrato al centro activo de la enzima desencadena un cambio
conformacional que da lugar a la formación del producto.

COFACTORES – COENZIMAS
A veces, una enzima requiere p/su función la presencia de sustancias no proteicas que
colaboran en la catálisis:
 Los cofactores. Pueden ser iones inorgánicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++
etc. Casi un tercio de las enzimas conocidos requieren cofactores.
 Cuando el cofactor es una molécula orgánica se llama coenzima.
 Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas.
 Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente a
la enzima se llaman grupos prostéticos.
  La forma catalíticamente activa de la enzima = holoenzima. La parte proteica
de una holoenzima se llama apoenzima (inactiva), de forma que:
apoenzima + grupo prostético= holoenzima
CINÉTICA ENZIMÁTICA
 La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas.
 La velocidad de una reacción catalizada por una enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar
la enzima.
 Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de la
reacción catalítica y de la especificidad de la enzima.

Factores que afectan la cinética enzimá tica

La actividad puede estar afectada por:

Efecto el pH
La mayoría de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.
Desviaciones de pocas décimas del pH óptimo pueden afectar drásticamente su
actividad. Por ello, los seres vivos han desarrollado sistemas más o menos complejos
para mantener estable el pH intracelular
Variaciones del pH del medio producen cambios en el estado de ionización de algunos
grupos de una enzima, afectando su estructura tridimensional y su actividad.
El cambio en la ionización de grupos químicos del sitio activo puede alterar el
reconocimiento del sustrato o la reactividad de los AA del sitio activo.
Todas las enzimas tienen dos valores límites de pH entre los cuales son efectivas,
más allá se desnaturaliza y deja de actuar.

Efecto de la Temperatura
Factor temperatura
Si aumenta la temperatura, aumenta la energía cinética de las partículas y su
movilidad produciéndose un aumento en el número de colisiones y la velocidad de la
transformación. Si la temperatura continúa aumentando, se comienzan a romper unio-
nes intermoleculares (responsables de la conformación) y, así, comienza a disminuir
su actividad. Si la TºC es excesiva, la enzima se desnaturaliza perdiendo totalmente
sus propiedades catalíticas.

Factores que afectan la cinética enzimática: INHIBIDORES

Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de una enzima: son los
inhibidores.
Inhibidores Reversibles
Pueden actuar de 3 modos:
 ocupan temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el S
original: inhibidor competitivo
 Se unen a otro sitio en la Enz y alteran su conformación espacial, impidiendo
su unión al S: inhibidor no competitivo
 Se unen al complejo E-S impidiendo la catálisis del sustrato: inhibidor
acompetitivo.
Regulación de la catálisis enzimática

 las concentraciones del sustrato y de los productos finales

 presencia de inhibidores
 modulación alostérica
 modificación covalente
 activación por proteolisis (zimógenos)
 isoenzimas
MODULACIÓN ALOSTÉRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R
(relajada) y T (tensa).
R es la forma más activa porque se une al sustrato con más afinidad. Las formas R y T
se encuentran en equilibrio R <==> T
ACTIVADORES ALOSTÉRICOS

 Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R actuando s/una región de la Enz

distinta del centro activo.
 Son los llamados moduladores positivos ó activadores alostéricos.
 El propio S es a menudo un modulador positivo.

INHIBIDORES ALOSTÉRICOS
• Las sustancias que favorecen la forma T y actúan en lugares distintos del
centro activo de la enzima y disminuyen la actividad enzimática: son los
moduladores alostéricos negativos.