ENTEROBACTERIACEAE

Enterobacterias, nombre común de una familia de bacterias Gram negativas que reciben este nombre
porque suelen encontrarse en el intestino de los mamíferos. Las especies que poseen flagelos son móviles;
el resto, inmóviles. La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven para
diferenciar los géneros y Pueden tener o no cápsulas. Nunca forman esporas. Son algo polimórficas.

CITROBACTER:

pertenece al grupo coliforme de bacterias entéricas.

El género Citrobacter es un grupo de bacilos gramnegativos aerobios que se encuentran frecuentemente en

el agua, suelo, comida y el tracto intestinal de animales y humanos. Se sabe que estos microorganismos
pueden producir infecciones importantes, especialmente en huéspedes inmunodepresivos. Son organismos
ubicuos y son causa frecuente de infecciones en el hombre. Destruyen las microvellosidades, formando
lesiones muy características denominadas de adherencia y eliminación. Clasificación científica

ENTEROBACTER:

Enterobacter es un género de bacterias Gram negativas facultativamente anaeróbicas de la familia de las

Enterobacteriaceae. Muchas de estas bacterias son patógenas y causa de infección oportunista en
huéspedes comprometidos, generalmente hospitalizados. Causa preferentemente infección del tracto
urinario y del tracto respiratorio.

*E. COLI:
Escherichia coli (E. coli) es una bacteria. Se encuentra generalmente en los intestinos animales —incluido el
humano— y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodor von Escherich,
bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre
de Escherichia coli, en honor a su descubridor.
Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además
produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram, es anaerobio
facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la
glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.

*SALMONELLA:
género de bacterias que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos,
anaerobios facultativos, con flagelos perítricos que rodean al microorganismo y no desarrolla cápsula ni
espora. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa pero no lactosa.

Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada
durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual

KLEBSIELLA:

Es un género de bacterias no mótiles, Gram-negativas, con una prominente cápsula de polisacáridos.[1] Es

un frecuente patógeno humano, los organismos bacteriales del género Klebsiella pueden liderar un amplio
rango de estados infecciosos, notablemente neumonía.

*PROTEUS:

Es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del
tracto urinario.[1] Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una β
galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TSI (Triple Sugar Iron). Son
oxidasa-negativas y ureasa-positivas. Algunas especies son mótiles.[2] Tienden a ser organismos
pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa.[3] Con la
excepción de P. mirabilis, todos los Proteus reaccionan como indol negativo

SHIGELLA:

Es un género de bacterias con forma de bastoncillo Gram negativas, no móviles, no formadoras de esporas e
incapaces de fermentar la lactosa, que puede ocasionar diarrea en los seres humanos. Fueron descubiertas
hace 100 años por el científico japonés Kiyoshi Shiga, de quien tomó su nombre.

*MORGANELLA:

Como todas las Enterobacterias, la Morganella habita en forma saprófita (comensal) en el tracto digestivo
bajo (colon) del hombre y otros animales, lo cual no quita que no se halle en el medio ambiente,
especialmente en la tierra.
En sí misma, y en su forma "comunitaria", Morganella no es una bacteria demasiado problemática, causando
específicamente infecciones urinarias (de las que de todos modos NO ES el germen más frecuentemente
hallado) que remiten con el tratamiento antibiótico adecuado. Si bien no es la más sensible a los
antibióticos, tampoco es la más resistente.
El gran problema se presenta cuando la infección por Morganella se produce estando internado en una sala.
Porque allí ya no se trata de una infección comunitaria por una Morganella sensible, sino una infección
nosocomial.
Las infecciones nosocomiales (especialmente en el C.T.I. que es donde yo trabajo) tienen la característica de
que sus gérmenes son microorganismos multirresistentes, que justamente por eso han logrado sobrevivir en
un ambiente intrahospitalario en el que se usan antibióticos potentes, a los cuales se han hecho resistentes.

*PROVIDENCIA:

Es el género de bacterias gram negativa de la familia Enterobacteriaceae. Algunas especies, P. stuartii por
ejemplo, son patógenos oportunistas en humanos y pueden causar infecciones urInarias, en particular en
pacientes con catéteres urinarios por largo tiempo o aquellos con quemaduras extensas. Algunas especies
son resistentes a la ampicilina y es posible ver organismos multiresistentes a antibióticos. Junto con Proteus
son organismos productoras de fenilalanina desaminasa.

SERRATIA:
Es un bacilo motil que puede crecer a una temperatura que oscila entre 5-40 ºC, en niveles de pH que varían
entre 5 y 9. El ambiente en el cual predomina es en condiciones húmedas, por esa razón es posible
encontrarla creciendo en los baños y las alcantarillas, aunque puede ser eliminada mediante la aplicación de
lejía y otros desinfectantes (sin abusar de la dosis, porque sino la bacteria puede volverse inmune a los
efectos de los desinfectantes).

Serratia marcescens puede provocar conjuntivitis, queratitis e infecciones en heridas, riñones y vías
urinarias, así como infecciones respiratorias, meningitis y endocarditis. Esta bacteria afecta especialmente a
pacientes hospitalizados y a pacientes que tienen la inmunidad disminuida por enfermedades sistémicas o
tratamientos médicos inmunosupresores

YERSINIA:

En un género de bacterias que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceae. Estas bacterias son
patógenos de animales, de donde pasan al ser humano produciendo enfermedades.

Las Yersinias son bacilos del tipo gramnegativos aerobios y anaerobios facultativos; son mótiles a 22°C, pero
no a 37°C, por flagelos anfriticos, o peritricos, forman forman pilis, y fimbrias. No forman cápsulas de gran
espesor ni esporas.
Las especies de Yersinia son: Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis.

AGARES

Mac Conkey Agar.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios
facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del
indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

AGAR XLD El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato)

es un medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos entéricos

Gram negativos, especialmente del género Shigella.

Fundamento

La degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y sacarosa) genera la producción
de ácido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa
porque es prácticamente fermentada por todas las enterobacterias con excepción de los microorganismos
pertenecientes al género Shigella. La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de los
microorganismos pertenecientes al género Salmonella, ya que sin la lisina estos microorganismos
rápidamente fermentan la xilosa produciendo la acidificación del medio y no se pueden diferenciar de otras
especies no patógenas. Como la cantidad de este carbohidrato es limitada, una vez que estos
microorganismos lo consumen, comienzan a utilizar la lisina lo cual produce la alcalinización del medio; este
hecho se evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo. En el caso de los coliformes lisina
positiva, para prevenir la alcalización del medio por la utilización de la lisina, se incorpora en el medio un
exceso de lactosa y sacarosa. El medio también tiene la capacidad de detectar la producción de H2S, a través
del sistema indicador tiosufalto de sodio y citrato férrico amonio. Cuando el microorganismo produce H2S se
observan colonias con el centro negro. Los microorganismos no patógenos productores de H2S no
descarboxilan la lisina; cuando están presentes estos microorganismos la reacción ácida producida por la
utilización de los carbohidratos previene en ennegrecimiento de las colonias. El desoxicolato de sodio es
utilizado como un inhibidor de los microorganismos Gram positivos.

Salmonella Shigella Agar.

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a
partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias
Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del
tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo
virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de
sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo

Hektoen Entérico Agar.

Este es un medio ideal para el aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella spp., a partir de heces y
alimentos.

Fundamento
El medio de cultivo contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante, y 2 sistemas
indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de la fermentación de carbohidratos, y
(ii) el citrato de hierro como un indicador de la formación de SH 2 a partir del tiosulfato.
El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la inhibición de estos microorganismos por las sales
biliares está disminuida por la adición de cantidades relativamente elevadas de peptona y carbohidratos.
El medio de cultivo, permite una buena diferenciación de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos
coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando así la identificación de Salmonella y
Shigella a partir de la muestra

E.M.B. Agar.

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor
rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de
hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.
como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en
C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras
que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede
ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la
incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo
de especies de Salmonella y Shigella.
AGAR BISMUTO SULFITO

Agar Bismuto Sulfito es un medio altamente selectivo, recomendado para aislamiento de Salmonella spp,
particularmente Salmonella thyphi, en heces

PRINCIPIOS Y APLICACION AGAR BISMUTO SULFITO

es una modificación de el Medio Wilson Blair, utilizado para la detección de Salmonella, en particular
Salmonella typhi de muestras clínicas. La Peptona y el Extracto de carne aportan nitrógeno, vitaminas,
minerales y amino ácidos esenciales para el crecimiento. La Dextrosa es el carbohidrato fermentable y
provee de carbono y energía. El indicador de Bismuto sulfito y el verde Brillante son inhibidores de bacterias
Gram positivas y de algunas bacterias del grupo coliformes. El Agar bacteriológico es el agente solidificante.
El sulfato ferroso se incluye para la producción de H2S. Cuando el H2S esta presente, el hierro es precipitado
dando colonias positivas características de color marrón a negro con brillo metálico. Las placas deben ser
uniformes, opacas, de color crema-verde palo. Se recomienda guardar las placas en refrigeración 4 días
antes de usar para reducir la inhibición y así poder aislar salmonella de muestras de heces débilmente
contaminadas

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

TSI

Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte
de la bacteria sumándole producción de gas. El cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a
amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre
solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa,
además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.

Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo. La presencia de
burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final
de la fermentación.

La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro debido a la reducción de
la sal de hierro presente en el medio.

A: Reacción acida. Color amarillo A/A: Fermentación 3 azucares

K: Reacción alcalina. Color roja naranja K/A: Fermentación de la glucosa

Burbujas: Producción de gas K/K: No hay fermentación de los 3

Precipitado negro: Formación H2S

UREA

Los microorganismos que poseen la enzima Ureasa tienen la capacidad de hidrolizar la urea contenida en el
medio con producción de amoniaco, para esta prueba se utiliza el caldo urea de stuart o agar urea de
christensen. El caldo sturat esta estabilizado con sales de fosfato a un pH de 6.8. el microorganismo en
estudio debe producir cantidades relativamente grandes a fin de superar el sistema estabilizador del medio
y elevar el pH del medio los suficiente como para virar el indicador (por encima de 8.0)
Un cambio de color Rojo fucsia indica que la urea fue hidrolizada por la ureasa del microorganismo.
Ausencia de cambio de color indica reacciona negativa

SIMMONS CITRATO

El citrato de sodio es una sal del acido cítrico, un compuesto orgánico simple que constituye uno de los
metabolitos del ciclo de los ácidos tricarboxilicos. Generalmente los microorganismos que emplean el citrato
como única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El metabolismo del
citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del
citrato por la enzima citritasa (citrato-oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio o
manganeso y de transportadores como citrato permeasas.

La citritasa actúa sobre el citrato produciendo acido oxalacetico y acetato; productos que son convertidos
enzimaticamente a piruvato y dióxido de carbono. Durante esta reacción el medio comienza a alcalinizarse
por el CO2 que se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un producto
alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de color del indicador de pH del medio de
verde a azul Prusia oscuro (indicador: azul de bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El
medio incluye citrato como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.

El desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica una prueba positiva y revela que el
microorganismo en estudio ha sido capaz de utilizar el citrato en el medio con la formación de productos
alcalinos. La prueba también es positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del microorganismo a
lo largo de la estría de inoculación.

SIM

El indol, es uno de los productos de la degradación metabólicas del amino acido triptofano. Las bacterias
que producen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de
Indol, acido piruvico y amoniaco. La prueba del indo esta basada en la formación de un complejo rojo
cuando el Indol reacciona con el grupo aldehído p-dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del
reactivo de Kovacs.

MEDIO DE CULTIVO: agar SIM o caldo triptofano

El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de los medio segundos después añadir el
reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Rojo de metilo

Determinar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos terminales
ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de
metilo es cuantitativa para la producción de acido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos
fuertes a partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta distinción puede
hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo
presenta color rojo cuando el pH desciende a 4.4.
El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio indica que la producción de acido es
suficiente como para bajar el pH a 4.4 y es una prueba positiva. Cuando ocurre la formación de un color
amarillo la prueba es negativa.

Vogues proskaver

Determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3
Butanodiol) a partir de la fermentación d ela glucosa. Los productos neutros formados en la presencia de
oxigeno atmosférico, alcalisis (Hidróxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en diacetilo, reactante
para el color producido en la reacción. El Alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color
rojo.

Una prueba positiva esta indicada por el desarrollo de un color rojo a los 15 minutos de añadido los
reactivos reveladores por la presencia de acetoina. Una prueba negativa da un color cobrizo.

LIA

Es un medio que sirve para demostrar la producción de dos enzimas: la lisina descarboxilasa y la lisina
desaminasa, además la presencia de sales de hierro sirve para detectar la producción de H2S por algunos
microorganismos.

La descarboxilacion de la lisina ocurre en ambiente anaeróbico o sea en el fondo del tubo y se pone de
manifiesto por la alcalinización del medio produciendo un viraje del indicador púrpura de bromocresol. La
presencia de glucosa en los componentes del LIA determina primero una reacción de fermentación,
produciendo acidificación y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable para la reacción de
descarboxilacion que ocurre después, volviendo a su color violeta original la parte del fondo del tubo.

La desaminacion de la lisina que se puede producir por los géneros Proteus y Providencia tiene lugar en la
parte superior del tubo produciendo acido a cetocarbonico que al combinarse con la sal de hierro y en
presencia de oxigeno forma un color violeta rojizo. La producción de H2S se evidencia por la presencia de un
precipitado negro por utilización de las sales de hierro.

A: Reacción acida. Color amarillo

K: Reacción alcalina. Color violeta

R: Reacción alcalina: color rojo

K/K: Descarboxilacion lisina

K/A: Fermentación glucosa. Descarboxilacion lisina

R/A: Desaminacion lisina. Fermentación glucosa

El