UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERÍA

E.A.P. DE INGENIRÍA AGROINDUSTRIAL

TEMA: AISLAMIENTO Y SIEMBRA

DOCENTE: Ana García Pino

ASIGNATURA: Microbiología General

ESTUDIANTE:

- Saucedo Miñano, Anderson

I. INTRODUCCIÓN

En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino

integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar
con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros.

Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismos y

que procede generalmente de una sola célula; el crecimiento de esta origina, en medio
sólido, una masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia.

Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población microbiana mixta, se
utilizan las denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el
siglo XIX. En un principio, Lister utilizo diluciones seriadas en medio líquido con
esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es decir, microorganismos no
deseados, dificulto el aislamiento. La escuela de Robert Koch introdujo los medios
sólidos, complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo
así la separación física de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el
interior del mismo.

Teóricamente cada colonia procede de la multiplicación de una sola célula; sin

embargo, una colonia también puede ser el resultado de un agregado de células. Por
otra parte, no todas las células bacterianas son capaces de formar colonias, ya que no
crecen en medio de cultivos. Por tal razón, lo más correcto es hablar de unidades
formadoras de colonias (UFC) al referirnos al origen de una colonia. El aspecto de las
colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas.

MANEJO DE LAS MUESTRAS Y TOMA DEL INOCULO

La toma del inoculo de una muestra de un medio solido o liquido es simple, pero
requiere atención. Se recomienda lo siguiente:

1. Coloque frente al manipulador el mechero y la preparación o muestra que

contiene los microorganismos, así como el resto del material necesario (tubos,
placas, pipetas, etc.).
 2. Tome el asa de siembra y flamee el filamento hasta que este alcance un tono
incandescente. Enfríelo en la profundidad de la llama (entre 5 y 10 segundos).
Recuerde que las llamas frías son anaranjadas y no esterilizan. Las llamas muy
calientes son de color azul, y si esterilizan.
3. Tome con la otra mano el recipiente (tubo, placa, etc.) que contienes la muestra.
Si la muestra está en un tubo, quite el tapón con los dedos meñique y anular y
flamee la boca del tubo. Si la muestra está en una placa Petri, coloque la placa
sobre su mano izquierda o derecha, según sea el caso, y levante la tapa, con los
dedos pulgar e índice hasta un ángulo de 45°, esto se realiza cerca a la proximidad
del mechero.
4. Trabajando en todo momento en la proximidad de la llama, introduzca el asa de
siembra y tome una pequeña muestra del cultivo. Si el medio es líquido, agite
ligeramente el tubo y tome una muestra que quedara adherida por tensión
superficial en el extremo del filamento del asa de siembra. Si los están en forma
de colonia sobre un medio sólido, tome una pequeña porción de las colonias
mediante un ligero roce con asa de siembra.
5. Deposite el inoculo en un medio de cultivo estéril
6. Siembre sobre la superficie del medio de cultivo. Marque las placas con la
identificación del cultivo, la fecha y el nombre para que se desarrollen los
microorganismos
7. Antes de dejar el asa sobre la mesa, flaméela de nuevo con el objeto de
esterilizarla.

II. OBJETIVOS

1. Aislar un microorganismo de una mezcla de varios (suelos, vegetales y alimentos

en descomposición, etc.).
2. Obtención de cultivos puros de microorganismos a partir de un cultivo mixto,
mediante estría en medio sólido.
 III. MARCO TEORICO
Un medio de cultivo es el material alimenticio en que crecen los microorganismos y el
crecimiento de los mismos constituye el cultivo. El medio de cultivo debe reunir una serie de
condiciones: temperatura adecuada, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante. Los medios de cultivo se clasifican según diferentes criterios, los más
importantes son:
1. Según su estado físico:
a. Medios líquidos: Se presentan en este estado, se denominan caldos.
b. Medios solidos: Se preparan a partir de medios líquidos, agregándoles un agente
geltrificante, el más usado es el agar.
2. Según su utilización:
a. Medios básicos: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda
producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales.
b. Medios enriquecidos: Son aquellos que además de las sustancias nutritivas
normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de
microorganismos exigentes.
c. Medios selectivos: Son utilizados para favorecer el crecimiento de una población
microbiana específica contenida en una población polimicrobiana.
d. Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características
bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.
Para el estudio de los microorganismos es necesario tenerlos como cultivos puros (aquel que
contiene un solo tipo de microorganismo y que procede generalmente de una sola bacteria),
para la obtención de estos es necesario la realización de diversas técnicas de aislamiento,
como la técnica de siembra por agotamiento, con el cual se consigue una buena extensión de
la muestra, permitiendo el aislamiento de las colonias y su aislamiento.
 IV. MATERIALES Y MÉTODOS:
Materiales
 Cultivo de microrganismos
 Medio de cultivo agar nutritivo y agar sabouraud
 Agua destilada estéril
 Mechero de alcohol
 Asa de siembra

V. PROCEDIMIENTO

AISLAMIENTO MEDIANTE AGOTAMIENTO POR ESTRIAS.

Se trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inoculo

sobre un medio solido contenido en una placa de Petri. El objetivo final consiste en obtener
un número reducido de colonias distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa.
Al incubar esta cada una de las bacterias originara una colonia. Normalmente, una colonia
aislada es un cultivo puro.

Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se coloca una gota de Solución Salina
Fisiológica (SSF) y luego se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende
sobre un área pequeña de la superficie de la placa con agar común (AC) y agar Sabouraud
(AS).

Colocamos el asa sobre la muestra y hicimos estrías paralelas en el primer cuadrante, luego
continuar en el segundo, tercero y cuarto, cuadrante. En cada traspaso recoger muestra del
cuadrante anterior.

Llevar las placas incubar, a la temperatura adecuada siempre en posición invertida.

AISLAMIENTO DE HONGOS Y BACTERIAS AMBIENTALES.

1. Abra las placas que contienen los medios 1 agar común y 2 agar Sabouraud y exponga
al ambiente 5 minutos.
2. Transcurrido el tiempo, incube la placa con agar común a 37 °C y a temperatura
ambiente la placa con agar Sabouraud.
3. Revisamos a las 24 horas la placa con agar común y las 2 placas con agar Sabouraud.
4. Observamos las características macroscópicas de los microorganismos que han
crecido.
VI. RESULTADOS

AISLAMIENTO MEDIANTE AGOTAMIENTO POR ESTRÍAS

Se aprecian las
características de las
colonias.

Después de incubar las muestras, estas

células individuales, se dividen
repetidamente hasta formar una masa visible
sobre el Agar, las cuales se originaron a
partir de una sola célula dando lugar a una
colonia bacteriana.
AISLAMIENTO DE HONGOS Y BACTERIAS AMBIENTALES

CULTIVOS EN LOS DIFERENTES AGARES.

 Luego de haber armado los sistemas en las placas Petri fueron llevadas a sitios
estratégicos para sembrar los microorganismos:
 hubo dos muestras de agar Sabouraud, en la cual se logró identificar la
presencia de hongos.
 En el agar nutritivo se identificó la presencia de bacterias.
 VII. CONCLUSIONES:

 Es necesario recurrir a medios de cultivo para estudiar en profundidad las características

bacterianas.

 La técnica del agotamiento es la ideal si se quiere obtener colonias aisladas que permitan
el estudio de las mismas.

 Si fuese necesario las colonias se someterán a uno o más re-aislamientos, hasta obtener
cultivos puros; es decir, presenten la misma morfología y microscópicamente correspondan
a un solo tipo de bacteria.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

 https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/tecnicas-de-aislamiento
 1-García Gustavo, Gómez Guillermo, Velásquez Luis, Pineda Fabio, Saldarriaga
Yamillé; Manual de Laboratorio de Microbiología General; Medellín
 2-García Martos P, Fernández del Barrio M. T, Paredes Salido F; Microbiología
Clínica Practica; 2 ed; [Internet]; Universidad Cadiz; 1994 [Consultado 2014 Feb 07]
CUESTIONARIO:

MENCIONE OTROS 2 TIPOS DIFERENTES DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE

BACTERIAS.

- Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada
con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
 Medio de cultivo: Liquido
 Instrumento: Asa
 Finalidad: Poner la bacteria en suspensión.

- Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método
se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
 Medio de cultivo: Semisólido.
 Instrumento: Aguja bacteriológica.
 Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias.

2. ¿POR QUÉ LA PLACA SE DEBE INCUBAR CON EL MEDIO DE CULTIVO

HACIA ABAJO?
La caja Petri se coloca invertido porqué al estar el medio en la parte de abajo genera vapor y
al enfriarse con la tapa caen al medio pudiendo generar contaminación.

3. ¿QUÉ IMPORTANCIA TIENE REL ASPECTO DE UNA COLONIA?

Las colonias así formadas tienen dimensiones desde las mínimas apenas visibles hasta masas
de varios milímetros de diámetro. Presentan características no solo de volumen sino también
de forma y textura, y en algunos casos de color que, si bien hasta cierto punto depende de la
naturaleza de los medios de cultivo y de las condiciones de incubación, en circunstancias
establecidas son constantes y muchas veces de gran valor diferencial. La morfología de las
colonias constituye una de las características morfológicas de las bacterias indispensables
para su aislamiento.
4. ¿QUÉ LE INDICARÍA LA PRESENCIA DE UN BACILO O UN COCO EN LA
COLORACIÓN DE SUSPENSIÓN HECHO A PARTIR DE UNA COLONIA?
Este género es prototipo de la familia Bacillaceae Son BGP grandes y esporulados, no
exigente y en general móvil. Incluye bacterias aerobias y anaerobias facultativas. Están
ampliamente distribuidos en la naturaleza; algunos forman parte de la flora normal y suelen
ser contaminantes del laboratorio. Si hay presencia de colonia en un bacilo o un coco se
observara sus crecimientos, pero siempre en ausencia del MacConkey.

5. ¿POR QUÉ EN EL MEDIO AGAR SABOURAUD, NO PUEDEN CRECER LAS

BACTERIAS Y EN EL AGAR COMÚN NO PUEDEN CRECER LOS HONGOS?
Sabouraud Agar es un medio de uso general para el cultivo de dermatofitos. Hoyen día se
utiliza para el aislamiento y cultivo de todos los hongos. Las peptonas en Sabouraud Agar
son fuentes de factores de crecimiento nitrogenasa. La glucosa aporta una fuente de energía
para el crecimiento de microorganismos. La alta concentración de glucosa presenta una
ventaja para el crecimiento de hongos (estables osmóticamente), mientras que la mayoría de
las bacterias no tolera la alta concentración de azúcar. Además, el bajo pH es óptimo para los
hongos, pero no para muchas bacterias. Sabouraud Agar es sólo
levemente selectivo frente a las bacterias.