EXTRACCIÓN Y CROMATOGRAFÍA

PRÁCTICA # 1

EXTRACTION AND CHROMATOGRAPHY

PRACTICE #1

Contreras Angulo, Mayra Alejandra​ ​ – Aguilar Kelly, Gisselle Alejandra

a​

Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Ingeniería y Administración.

Departamento de Ciencias Básicas. Laboratorio de Química Orgánica. Palmira. ​20-09-2018
mcontrera@unal.edu.co-gaguilark@unal.edu.co

1. MARCO TEÓRICO

1.1 Extracción
La extracción es la técnica más empleada para
proceder a la separación y purificación de los
componentes de una mezcla o para aislar un
compuesto orgánico de sus fuentes naturales.
Puede definirse como la separación de un
componente de una mezcla por medio de un
disolvente orgánico (inmiscible con el agua) en
contacto con una fase acuosa. Lo que en realidad
se realiza en una extracción es la transferencia de
una sustancia de una fase a otra, normalmente de
una fase acuosa a una orgánica.
Figura 1. ​Embudo de separación o decantación
Figure 1. ​Sedimentation funnel

1.1.1 Extracción discontinua

Se la llama también “extracción líquido-líquido”,
en este caso el procedimiento consiste en la
transferencia de una sustancia de una fase a otra
y se desarrolla entre dos líquidos inmiscibles,
esto quiere decir que son incapaces de ser
mezclados sin la división de fases.

1.1.2 Extracción continua

conocida también como “extracción
sólido-líquido”, en este tipo se dividen uno o
más componentes de una mezcla sólida a través
de un disolvente líquido. Se desarrolla en dos
etapas distintas. Se lleva a cabo un contacto del
disolvente con el sólido que permite la mezcla
del soluto o componente soluble al disolvente.
Esto se realiza a una temperatura ambiente o
cálida pero en este caso para impedir la pérdida
del disolvente se efectúa una ebullición a reflujo.
1.1.3 Extracción selectiva
Este tipo de extracción se utiliza para separar
mezclas de compuestos orgánicos según la
acidez, basicidad o de la neutralidad de los
mismos.
1.1.4 Extracción simple
De esta forma se dividen la sustancia acorde al
sistema de extracción que se utilice. La técnica
se basa en el grado de solubilidad de un
compuesto en un líquido en particular, por
ejemplos, si tenemos una sal disuelta en un
disolvente orgánico y agregamos uno acuoso
como agua entonces la sal desaparecerá del
disolvente orgánico y se disolverá en la fase
acuosa.
1.1.5 Extracción múltiple
Es un tipo de extracción a contracorriente que
efectúa la división por medio de tubos de
extracción. De esta forma, la fase inferior
permanece estable en cambio la fase superior es
móvil. Así se transfiere la fase superior de un
tubo al siguiente a través de un recipiente de
extracción.
1.2 Cromatografía
Es un método físico de preparación para la
caracterización de mezclas complejas, en el que
se aplican técnicas basadas en el principio de
retención selectiva, cuyo objetivo es separar los
distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes.
Existen muchos tipos de técnicas para esta pero
en todas ellas hay una fase móvil que consiste en
un fluido que arrastra a la muestra a través de
una fase estacionaria que se trata de un sólido o
un líquido fijado en un sólido.
1.2.1 Cromatografía en columna
La fase estacionaria solida se sitúa dentro de una
columna. Según el fluido empleado como fase
móvil liquida.
1.2.2 Cromatografía en papel
Es un proceso muy utilizado en los laboratorios
para realizar análisis cualitativos ya que pese a
no ser una técnica muy potente no requiere de
ningún tipo de equipamiento. La fase
estacionaria está constituida simplemente por
una tira de papel de filtro.
1.2.3 Cromatografía en capa delgada o fina
La fase estacionaria es una capa uniforme de un
absorbente mantenido sobre una placa, la cual
puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. Los
requisitos son un absorbente (por ejemplo, silica
gel)), placas, un dispositivo que mantenga las
placas durante la extensión, otro para aplicar la
capa de absorbente, y una cámara en la que se
desarrollen las placas cubiertas. La fase móvil es
líquida y la fase estacionaria consiste en un
sólido.
2. METODOLOGÍA
2.1 Extracción
1. Se trituro 30 g de
material vegetal
en un mortero
con 30 ml de
Metanol.
Figura 2. ​Trituración de material vegetal
f​igure 2. ​Grinding of plant material
2. Se extrajo la solución metanólica
presionando el material, tratando de
sacar la mayor cantidad posible. Se
descartó la solución. En esta operación
se extrajo la mayor cantidad de agua y
compuestos polares.
 pequeña mancha. Se retiró el capilar y
3. Se agregó al mortero 20 ml de Éter de se dejó secar el solvente en la placa.
Petróleo y se trituro el material Aplicando varias veces.
nuevamente.
Figura 3 ​Placa con solvente
4. Luego se filtró en f​ ​igure 3. ​Plate with solvent
un embudo tapado
con lana de vidrio y 4. Se destapo la cubeta e introdujo la
se recogió el placa verticalmente evitando que el
filtrado en un vaso solvente quedara por
de precipitados. encima de la mancha.
Se tapó la cubeta.
5. Se dejó que el
Figura 2. ​Filtración en embudo solvente ascendiera
f​igure 2. ​Funnel filtration unos 2 cm por debajo
del borde superior de
5. Se vertió el filtrado en un embudo de la placa. Se sacó la
separación y se agregue 30 ml de agua. placa y con un lápiz se
Se tapó el embudo y se agito. Se dejó marcar la altura del
reposar durante algunos minutos hasta solvente.
que las capas se separen.
Figura 4. ​Desplazamiento de los pigmentos
6. Se sacó la capa inferior y se descartó. ​ ​igure 4. ​Displacement of pigments
F
7. Se vertió la solución de Éter de
Petróleo en un erlenmeyer y se secó 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
agregando un poco de Sulfato de Sodio
Anhidro. Figura 4. ​Placa
con desplazamiento
8. Se descartó la solución y se recogió en de los pigmentos
un vaso de precipitados. Agregando que se utilizó para
una perla de vidrio y se evaporo el sacar lo Rf
solvente en un baño maría. figure 4​. Plate with
displacement of the
2.2 Parte cromatográfica pigments that was
used to remove the
1. Se vertió en una cubeta el eluyente Rf
(Hexano: acetona: Cloroformo). Se
tapó la cubeta y se dejó saturar de 20 a
30 minutos.
2. Se introdujo el capilar por el extremo
más fino, al extracto que contiene los Compuesto Color Rf Rf
pigmentos. (formula)
0,5
3. En la placa a una Xantofilas Amarillo Rf = 8,6 0,0581
1,8
distancia de 1 cm Clorofila A Verde C Rf = 8,6
0,2093
del borde inferior, Clorofila B Verde O Rf =
4,2
0,4883
8,6
colocando con 6,5
suavidad la punta Feofitina Gris Rf = 8,6
0,7558
7,1
del capilar, hasta Carotenos Naranja Rf = 8,6
0,8255
que se formó una
 Tabla 1. ​Cálculo del Rf para cada uno de los 3.2 ​Dé las estructuras del beta-caroteno,
compuestos. licopeno, clorofila. Explique a qué se debe que
Table 1. ​Calculation of the Rf for each of the sean coloreados​.
compounds.

3.1 Análisis de resultados

La fase móvil consistió en la mezcla de hexano, El beta-caroteno es la molécula que da a las
acetona y cloroformo, los cuales tienen en zanahorias su color naranja​.​ Es parte de una
común la característica de ser poco polares. La familia de compuestos químicos
fase estacionaria fue la placa de sílica gel. llamados carotenoides, los cuales se encuentran
en muchas frutas y verduras, así como
La separación de las sustancias que se observó es algunos productos de origen animal como las
gracias a las diferencias en los grados de yemas de huevo. Biológicamente el
beta-caroteno es el más importante precursor de
solubilidad de estas en disolventes apolares. De
la vitamina A.​ ​También tiene propiedades
esta manera, las moléculas del soluto se absorben
antioxidantes y pueden ayudar a prevenir el
en la fase estacionaria, y a medida que se
cáncer y otras enfermedades.
produce la elución, van siendo desplazadas por
las moléculas de disolvente de la fase móvil. La El ​beta-caroteno contiene 40 átomos de
retención del soluto se debe a la competencia que carbono, es decir, es un carotenoide C40.
se establece entre la fase móvil y éste, la cual
influye en la polaridad de ambos. Entonces, los ​El beta-caroteno es un miembro de una
componentes del soluto más polares se retienen familia de moléculas
más rápido que aquellos con una menor conocidas como los
polaridad. Por ésto, las primeras manchas que se carotenoides. Estos tienen
forman son de color verde que corresponden a una estructura básica
las clorofilas a y b y de color amarillo que compuesta de unidades de
corresponden a las xantofilas, porque son isopreno:
compuestos grandes y polares y las últimas son
los carotenos por ser pigmentos más apolares.
 Estos se unen extremo a extremo para dar
una cadena de conjugado que es común a
todos los carotenoides.
El beta-caroteno se compone de ocho
unidades de isopreno, que se cicla en cada
extremo.
La cadena larga conjugada es responsable del
color naranja del beta-caroteno.
La cadena de conjugado en carotenoides
significa que absorben en la región visible y por
lo tanto son de color. El espectro de absorción a
continuación muestra que el beta-caroteno
absorbe más fuertemente entre 400-500 nm. Esta
es la parte verde / azul del espectro. Así que el
beta-caroteno aparece de color naranja, ya que
los colores rojos / amarillo se reflejan de nuevo a
nosotros.
El ​licopeno​ es un ​pigmento​ vegetal, soluble
en ​grasas​, que aporta el color rojo característico
a los ​tomates​, ​sandías​ y en menor cantidad a
otras ​frutas​ y ​verduras​. Pertenece a la familia de
los ​carotinoides​ como el ​β-caroteno​, sustancias
que no sintetiza el cuerpo humano, sino
los ​vegetales​ y algunos ​microorganismos​,
debiéndolo tomar en la alimentación
como ​micronutriente​. Pertenece al grupo de los
carotenoides y su fórmula empírica es C​40​H​56. Su ​
estructura es la siguiente:
En las plantas, la ​clorofila a es el pigmento
involucrado directamente en la transformación
de la energía lumínica en energía química, las
células fotosintéticas casi siempre contienen un
segundo tipo de clorofila, la clorofila b y otro
grupo de pigmentos llamados carotenoides. Uno
de los carotenoides que se encuentran en las
plantas es el ß-caroteno; los carotenoides son
pigmentos rojos, anaranjados o amarillos, que en
las hojas verdes están enmascarados por las
clorofilas, que son más abundantes; sin embargo
en algunos tejidos, como los del tomate maduro,
predominan los colores reflejados por los
carotenoides.
Las otras clorofilas y los carotenoides pueden
absorber luz de longitudes de onda diferentes de
las que absorbe la clorofila a. Estos pigmentos
actúan como pantallas que transfieren la energía
a la clorofila a, extendiendo así la gama de luz
disponible para la fotosíntesis.
La clorofila puede convertir energía lumínica
en energía química solamente cuando está
asociada con ciertas proteínas e incluida en
una membrana especializada, y sin embargo,
sólo una fracción muy pequeña de la luz
dentro del espectro visible que incide en las
hojas de las plantas es finalmente
transformada en energía química. Su
estructura es la siguiente:
Esta estructura es un complejo de magnesio de
una dihidroporfirina. Contiene una cadena de
ácido porpiónico modificada en forma de beta
cetoester cíclico. Contiene también una cadena
de ácido propiónico esterificada con un alcohol
diterpénico, el fitol, característica que confiere
liposolubilidad a la molécula.

Un pigmento es cualquier sustancia que absorba
la luz. El color del pigmento está dado por la
longitud de onda no absorbida (y por lo tanto
reflejada). Los pigmentos negros absorben todas
las longitudes de onda que les llega. Los
pigmentos blancos reflejan prácticamente toda la
energía que les llega. Los pigmentos tienen un
espectro de absorción característico de cada uno
de ellos.
● Carotenos:​ Produce el color anaranjado.
Este es el carotenoide más abundante en la
naturaleza y el más importante para la dieta
humana, por lo que da su nombre a todo un
grupo de compuestos bioquímicos. Al ser
ingerido el caroteno natural es transformado
en Vitamina A en la mucosa del intestino
delgado y ésta es almacenada principalmente en
el hígado en forma de ésteres de retinol.

3.3. Identifique los compuestos que separó de ● Feofitina:​ Produce el color gris.
acuerdo a su coloración:
Feofitina es un compuesto químico que sirve
● Clorofila a:​ Produce el color verde claro. como transportador de electrones primer
● Clorofila b:​ Produce el color verde oscuro. intermedio en la ruta de transferencia de
electrones del fotosistema II en las plantas, y
La clorofila b se diferencia de la clorofila a el centro de reacción fotosintética se encuentra
solamente por estar sustituido el grupo metilo en bacterias púrpuras. Es un tipo de clorofila sin
(--CH​3​) del carbono 3 en el segundo anillo magnesio que interviene en la etapa luminosa de
pirrólico, por un grupo aldehído (--CHO). Esta la fotosíntesis.
diferencia es suficiente para causar un cambio
notable en la coloración como también en
el ​espectro de absorción​ de esta molécula. La
clorofila a es verde azulada, la clorofila b es de
color verde amarillento. Esta diferencia se
manifiesta en el espectro de absorción, en la b,
ambos máximos de absorción presentan una
tendencia o son desplazados hacia la parte verde,
es decir, el máximo en la parte roja es
desplazado hacia ondas más cortas y el máximo
en la parte azul hacia ondas más ​largas.

● Xantofilas:​ Produce el color amarillo.

Las xantofilas, son compuestos químicos

parecidos a los carotenos, y a diferencia de estos
últimos además de contener carbono e
hidrógeno contienen uno o más átomos de
oxígeno dentro de la molécula, pero al igual
que​ ​los carotenos​,​ presentan colores llamativos
(rojo, naranja y amarillo). Vegetales como el
pimiento amarillo y rojo representan una fuente
importante de xantofilas.

Una de las moléculas perteneciente a la familia

de las xantofilas es la luteína. Esta se encuentra Figura 5. ​Estructura química de compuestos y
en numerosas plantas. pigmento
 figure 5​. Chemical structure of compounds and ● Dirección Nacional de Servicios
pigment Académicos Virtuales. Fisiología
Vegetal. Recuperado el 1 de septiembre
de 2018, de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ci
encias/2000051/lecciones/cap02/anexo_
4. CONCLUSIONES 13.htm. Universidad Nacional de
Colombia
● A través del proceso de cromatografía es ● Revista DSalud. (2009). Clorofila, “la
posible separar y diferenciar sangre verde”. Recuperado el 9 de
detalladamente los compuestos o septiembre de 2018, de
pigmentos que posee cualquier material https://www.dsalud.com/reportaje/clorof
o mezcla, para identificar las cantidades ila-la-sangre-verde​/
de dichos componentes ● Universidad Iberoamericana. Práctica 2:
● La cromatografía es un método de Cromatografía en Columna. Recuperado
separación, en el cual juega un papel el 10 de septiembre de 2018, de
muy importante las características http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didac
químicas y físicas de las sustancias como tic/IngCienciasQuimicas/lqoa003.pdf
la polaridad, el punto de ebullición y la
densidad.
● Por medio de la cromatografía es posible
observar los cambios en las tonalidades
de los pigmentos fotosintéticos que
componen las plantas.
● Se obtuvo en mayor cantidad la clorofila
α, ya que esta es la que constituye
aproximadamente el 75% (Revista
DSalud, 2006) de toda la clorofila en las
plantas verdes y de color verde azulado.
De igual manera se obtuvo la clorofila
beta en menor proporción,
manifestándose con un color verde
amarillento leve.
● Entre más polar sea un compuesto, más
fuertemente se absorbe en la fase
estacionaria, por lo que su migración a lo
largo de ella es menor, siendo arrastrado
más lentamente por la fase móvil, que
los compuestos menos polares.

5. BIBLIOGRAFÍA

● Cubero, N., Monferrer, A., Villalta,J.

(2002). Tecnología de Alimentos,
Aditivos Alimentarios. Mundi-Prensa
Libros. Página 41.
● Allinger, N. Química Orgánica. Reverte,
1979 - 1476 páginas. Página 1079.