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PRÁCTICA #1

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO


i. Introducción o Fundamento teórico
La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnóstica limitada, sin embargo,
su concentración varía de manera más o menos predecible en un gran número de condiciones
clínicas.
Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación de ateromas
dado que las complicaciones aterioscleróticas prevalecen en individuos hipercolesterolémicos
Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar además que el riesgo de contraer
enfermedad cardíaca coronaria (ECC) para los individuos varones de más de 40 años con
colesterolemia menor o igual a 2, 10 g/l es 3 veces menos que entre individuos con más de 2,30 g/l
y 6 veces menor que entre individuos con más de 2, 60 g/l.
Fundamento del método de determinación de Colesterol y principio de la reacción
El colesterol se determina después de la hidrolisis enzimática y la oxidación. El indicador es la
quinoneimina formada por el peróxido de hidrogeno y 4- aminoantipirina en presencia de fenol y
peroxidasa.
Fundamento químico de la determinación de Colesterol por método colorimétrico
Esteres de colesterol + H2O→ colesterol esterasa→ colesterol + acidos grasos
Colesterol + O2→ colesterol oxidasa→ colesten-3-ona + H2O2
2 H2O2 + 4- aminoantipirina + fenol→ peroxidasa→ quinoneimina + 4 H2O
ii. Objetivos
• Determinar la concentración de colesterol en suero
iii. Materiales y Reactivos
• Micropipetas 10 -100 ul y 1000 ul
• Tips
• Tubos de ensayo delgados (Espectrofotómetro)
• Gasa
• Kit comercial determinación de colesterol
• Suero
• Espectrofotómetro
• Agua destilada

iv. Procedimiento
1. Atemperar reactivos
2. Identificar Blanco de reactivo (B), Muestra (colocar solo el número de la muestra que
corresponde al paciente), estándar (ST)
3. Depositar 10 ul de muestra al tubo identificado como Muestra
4. Depositar 10 ul de estándar a los tubos de ensayo como ST
5. Depositar 1000 ul de reactivo enzimático (RGT) al blanco, a la muestra y al estándar.
6. Mezclar por vortex e incubar por 5 minutos a 37 °C (Baño maría seco)
7. Cumplido el tiempo de incubación, inmediatamente sacar del baño maría
6. Leer las absorbancias de la muestra y el estándar a una longitud de onda de 500 nm frente a un
blanco de reactivo antes de 60 minutos.
Cálculos Suero- Plasma
Estándar Colesterol: 200 mg/dl
C = 200 mg/dl x Δ A muestra
Δ A STD
Características de la prueba
Linealidad: El ensayo es lineal hasta 750 mg/ dl de colesterol en suero o plasma
Valores de referencia para el kit de colesterol
Sospechoso sobre: 220 mg/dl
Elevado sobre: 260 mg/dl
Se recomienda disminuir los niveles de colesterol a aproximadamente 180 mg/dl para adultos
menores de 30 años y a 200 mg/dl para adultos mayores de 30 años
BIBLIOGRAFÍA
• Alfonso Balcells. La clínica y el laboratorio.20° Edición. ELSEVIER. 2006. España