Medio de película para la detección

de coliformes en agua, alimentos,

y en superficies
18
18.1. VISIÓN GENERAL
Objetivo: Para determinar la concentración de bacterias en las superficies utilizando medios unidos a una
película de plástico.

• Hidratar medios encuadernados

• Muestreo de superficies seleccionadas para E. colli y bacterias coliformes
• Incubar película durante 24 horas
• Identificar y contar colonias de E. colli y bacterias coliformes

18.2. TEORÍA Y SIGNIFICADO

La detección de bacterias en las superficies es importante en la evaluación de los
programas de saneamiento en las industrias alimentarias y médicas. Las superficies
y equipos en contacto con alimentos desempeñan un papel importante en la calidad
microbiológica de los productos alimenticios terminados. Las superficies que entran
en contacto con un producto alimenticio deben muestrearse periódicamente para
determinar el nivel de microorganismos presentes. De lo contrario, puede poner en
peligro el sabor y la vida útil del producto, así como la salud del consumidor. La
limpieza y desinfección adecuadas de las superficies también es importante para
prevenir la transmisión de patógenos en guardería y hospitales.

Dos procedimientos estándar de monitoreo ambiental para la detección de

coliformes y otras bacterias en las superficies son la placa de contacto directo
(también llamadas placas de Rodac) y el método de hisopo. Las placas Rodac son
pequeñas placas de Petri que contienen agar vertido hasta que se forma una
superficie convexa. La superficie de agar endurecida se presiona firmemente contra
la superficie a muestrear. En la técnica de hisopo, un hisopo de algodón estéril
previamente humedecido con solución salina taponada o caldo letheen se pasa sobre
la superficie a muestrear. El cabezal del hisopo se coloca en un tubo de solución
estéril de solución salina taponada o caldo y se rompe. El tubo se agita en vórtice y
la solución en el tubo se analiza mediante métodos de placa extendida o placa de
vertido.

PetrifilmTM es un medio seco (hidratado) unido a un papel recubierto de polietileno

impreso con una rejilla que se puede utilizar para controlar la calidad microbiana de
las superficies, Las placas PetrifilmTM también se pueden usar para muestrear
superficies o volúmenes de 1 ml de leche, agua u otros líquidos. Las placas
PetrifilmTM eliminan la necesidad de preparación de medios y autoclave y se pueden
almacenar por periodos prolongados antes de su uso.
 18.3. PROCEDIMIENTO
Primer Periodo
Materiales
2 placas de recuento de coliformes PetrifilmTM
2 pipetas de 1 ml
pera de succión
2 ml de caldo de nutrientes estéril o incubadora de agua
con peptona al 0,1% (p/v) fijada a 35 ± 0,5 °C
Muestra de comida o agua preparada de manera
Adecuada

Hidratación de una placa de PetrifilmTM

1. Coloque una placa PetrifilmTM en una superficie plana.

2. Levante la película superior y dispense 1 ml de caldo nutritivo

estéril o peptona al 0,1% sobre el centro de la película inferior
(Paso 1, Figura 18-1).

3. Vuelva a colocar la película superior sobre el diluyente con un

movimiento de balanceo para no atrapar burbujas de aire (Pasos 2
y 3, Figura 18-1).

4. Distribuya el diluyente con una presión hacia abajo en el centro

del esparcidor de plástico (con el lado empotrado hacia abajo). No
deslice el esparcidor por la película (Paso 4, Figura 18-1).

5. Retirar el esparcidor con un movimiento vertical (Paso 5, Figura

18-1) y deje reposar las placas durante 1 minuto para permitir la
solidificación del gel.

6. Permita un mínimo de 30 minutos para que el gel se solidifique

completamente antes de usar la placa para el muestreo de la
superficie.

Procedimiento de muestreo de superficie

7. Levante la película superior de la placa PetrifilmTM pre hidratada
(el gel se adherirá a la película superior).

8. Coloque el gel y la película superior en contacto con la superficie

a muestrear.

9. Frote con firmeza los dedos sobre toda la cara de la película del
área gelificada para asegurar un buen contacto con la superficie.

10. Levante la película de la superficie y vuelva a unir las hojas

superior e inferior del PetrifilmTM

11. Incube las placas en posición horizontal con el lado transparente

hacia arriba a 35 ± 0,5 °C durante 24 h.
 1. Dispense 1mL de muestra sobre la película de
fondo blanco, manteniendo la pipeta
perpendicular a la película.

2. Con un movimiento de rodadura, junte

las superficies de la película,
comenzando por la bisagra, evite atrapar
burbujas de aire. No dejes caer la
película.

3. No deje que la película

superior caiga sobre la
película inferior.

4. Use el lado plano del esparcidor para aplicar una

presión suave sobre el área circular definida por
el esparcidor. No retuerza ni deslice el
esparcidor.

5. Levante el esparcidor verticalmente y retírelo. Espere al menos 30

minutos después de la hidratación antes de usar la placa después de
la hidratación o un minuto después de la aplicación de la muestra
para que el gel se solidifique antes de incubar a 35 ± 0.5 ° C durante
24 horas.

Figura 18-1 Procedimiento para hidratar y aplicar una muestra de agua a una placa Petrifilm.
Muestreo de agua o alimentos
12. Coloque PetrifilmTM en una superficie plana. Levante la película superior.

13. Con la pipeta perpendicular a PetrifilmTM, dispense 1 ml de muestra en el

centro de la película inferior (Paso 1, Figura 18-1).

14. Con un movimiento de balanceo, baje la película superior para no atrapar

burbujas de aire. No deje caer la película superior (pasos 2 y 3, figura 18-
1).

15. Con el lado plano hacia abajo, coloque el esparcidor sobre la película
superior sobre el inóculo (Paso 4, Figura 18-1). Presione suavemente el
esparcidor para distribuir el inóculo sobre el área circular definida por el
esparcidor. No retuerza ni deslice el esparcidor.

16. Levante el esparcidor con un movimiento vertical. Espere 1 minuto a que

el gel se solidifique (Paso 5, Figura 18-1).

17. Incubar a 35 ± 0.5 ° C durante 24h.

Segundo período
Materiales
Placas incubadas de Muestreo de superficie, Periodo 1 placas incubadas de
Muestreo de agua o alimentos, Periodo 1.

Muestreo de superficie
1. Retire las placas de la incubadora y registre la cantidad de coliformes y
Escherichia coli. El indicador contenido en el PetrifilmTM reacciona con la
b-glucuronidasa producida por E. coli para formar un precipitado azul en el
medio. Todas las colonias azules (independientemente de la producción de
gas) se cuentan como E. coli. Los coliformes fermentan la lactosa en el
medio para producir gas que queda atrapado entre las películas de la placa.
Todas las colonias asociadas con burbujas de gas (las burbujas tienen menos
de un diámetro de colonia de la colonia) se cuentan como coliformes. Las
colonias rojas sin burbujas de gas son otros organismos gramnegativos.

Las bacterias coliformes y E. coli se pueden encontrar de forma rutinaria en

las superficies de los baños públicos, como la parte inferior de los asientos
de los inodoros, los lavamanos, los grifos y el piso.

Muestreo de agua o alimentos

1. Retire las placas de la incubadora y registre los resultados como se indica
arriba. La cantidad de E. coli o bacterias coliformes es la cantidad presente
en 1 ml de la muestra original.
18.4 . TRUCOS DEL OFICIO

HACER:
 Practicar una buena técnica aséptica durante todo el proceso de pre hidratación
para evitar la introducción de cualquier contaminación.

NO HACER:

 Toca el área de crecimiento bacteriano con tus dedos

18.5. PREGUNTAS Y PROBLEMAS

1. ¿Por qué es importante analizar las superficies para detectar la presencia de bacterias?

2. ¿Cuál es una posible fuente de E. coli en las superficies?

3. ¿Qué produce las colonias azules de E. coli en el PetrifilmTM?

18.6. REFERENCIA

Gerba, C.P., Wallis, C., y Melnick, J.L. 1975. Riesgos microbianos de los baños domésticos.
La producción de gotas y el destino de los organismos residuales. Microbiología Aplicada
y Ambiental 30, 229–237.