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1. Objetivo general.
Evaluar la cromatografía de los compuestos a través de los solventes
orgánicos y determinar el factor refracción de las distintas muestras.
2. Marco teórico.
2.1. Cromatografía.
La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente
versátil que presenta distintas variantes. En toda separación
cromatografía hay dos fases (solida, liquida o gas) una móvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo
un contacto íntimo. Las muestras se introducen en la fase móvil y los
componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la
móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo
diferente el recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la
separación. Si un componente esta la mayor parte del tiempo en la fase
móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que, si se encuentra
en la mayor parte, en la fase estacionaria, el producto queda retenido y
su salida es mucho más lenta. (Aran & Cuellar, 2016).
2.2. ¿En qué consiste la cromatografía?
La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como
finalidad la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad
de interacción de cada componente en otra sustancia. De forma general,
consiste en pasar una fase móvil (una muestra constituida por una
mezcla que contiene el compuesto deseado en el disolvente) a través de
una fase estacionaria fija sólida. La fase estacionaria retrasa el paso de
los componentes de la muestra, de forma que los componentes la
atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo. Cada uno
de los componentes de la mezcla presenta un tiempo característico de
paso por el sistema, denominado tiempo de retención. Cuando el
tiempo de retención del compuesto deseado difiere del de los otros
componentes de la mezcla, éste se puede separar mediante la
separación cromatografía (Harris, 2003).
2.3. ¿Para qué se utiliza la cromatografía?
La cromatografía se utiliza para lograr la separación de los componentes
de una mezcla como para medir la proporción de cada elemento en la
mezcla (Harris, 2003).
2.4. Clasificación.
Las distintas técnicas cromatograficas se pueden dividir atendiendo a
distintos criterios. Una clasificación, según este dispuesta la fase
estacionaria, es:
A. Cromatografía plana: la fase estacionaria se sitúa sobre una
superficie plana. Las principales técnicas son:
Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina
B. Cromatografía en columna: la fase estacionaria se sitúa dentro de
una columna. Según el fluido empleado como fase móvil pueden ser:
Cromatografía de líquidos
Cromatografía de gases
Cromatografía de líquidos supercríticos
2.5. Cromatografía en papel.
Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento
sofisticado. En esta técnica la fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de
la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego
el disolvente o mezcla de disolventes empleada como fase móvil (eluente
o eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una
porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un recipiente
que la contiene (Cámara de desarrollo). Después de unos minutos,
cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del
papel, se retira el papel y seca. Es importante que la cámara de
desarrollo permanezca bien tapada durante el proceso de ascenso
capilar de la fase móvil (desarrollo cromatográfico), pues de lo contrario
no se alcanza el equilibrio necesario entre el líquido (fase móvil) y el
vapor del líquido (ABBOT D. y Andrews R.S, 1970).
2.6. Determinación de RF.
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el
eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un
valor constante para cada compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de
la cubeta, temperatura, etc.). Debido a que es prácticamente
imposible reproducir exactamente las condiciones experimentales,
la comparación de una muestra con otra debe realizarse eluyendo
ambas en la misma placa (ABBOT D. y Andrews R.S, 1970).
3. Materiales.
Material vegetal
Mortero y pilón
Embudo
Tubos de ensayo
Vaso precipitado
Espátulas
Gradillas para tubos de ensayo
Placa Petri
Cuenta gotas
Alcohol de 96.
4. Metodología
A. Obtención de pigmentos
metodología según (palma, 2017)
Se cortó en pedazos las hojas verdes sin incluir la nervadura principal
y se colocó en un mortero.
Se agregó 5 ml de alcohol.
Se trituro las hojas hasta obtener una sustancia de color verde
intenso.
Se colocó el embudo en un matraz Erlenmeyer.
Se vertió la solución obtenida en el embudo y se dejó filtrar por la
gravedad.
Se realizó el mismo proceso con cada tipo de muestra.
B. Separación de pigmentos
metodología según (palma, 2017)
Se recortó 6 tiras de papel filtro de 15 x 5 cm.
Se dobló cada tira en forma de V para que se pueda mantener firme
sobre la misma.
Se agregó 5 gotas de cada uno de los colorantes extraídos, para
hacer la separación de los pigmentos con alcohol.
Se agregó 5 ml de alcohol en un vaso precipitado.
Se colocó las tiras de papel filtros recortados de cada muestra.
Se fijó el cronometro a 30 minutos y se dejó las muestras reposando.
Durante el transcurso del tiempo los pigmentos se iban separando
según su capacidad de absorción y afinidad con el solvente.
C. Para el cálculo.
Metodología según (palma, 2017)
Se diferenció entre el pigmento que recorrió más distancia. En caso
de las muestras vegetales se les reconoció mediante los olores,
carotenos = anaranjados o rojizos; xantofilas = amarillos; clorofila A
= verde claro; clorofila B = verde oscuro.
Con una regla se medió la distancia que recorrieron los pigmentos en
el tiempo determinado.
Se medió la distancia recorrida por el efluyente (alcohol).
Se calculó el valor RF (factor de retención) mediante la fórmula:
5. Resultados.
A. Primero se determinó la distancia recorrida del alcohol, durante un tiempo de
30 minutos, resultando.
Distancia recorrida = 6 cm
B. Después se trabajó con tinta artificial, se usaron 5 colores, las cuales eran
(negro, azul, verde, rosado y P.rojo) se realizó el análisis para cada tinta, se
medió la distancia recorrida de cada tinta y con la distancia del disolvente, se
determinó el factor de retención y estos fueron los siguientes resultados, tal
como se muestra en la tabla1.
Tabla 1
Muestra A B FR
En donde:
A = Distancia de la muestra (distancia recorrida de los distintos colores).
B = Distancia del solvente (distancia recorrida del alcohol etílico).
C. Luego se trabajó con la muestra vegetal(perejil), la cual fue triturado y
después colado, y con él cuenta gotas se le puso una pequeña cantidad de
muestra en la tira de papel, y a través de la distancia recorrida del perejil en
un tiempo determinado y la distancia el disolvente, se determinó el factor de
retención para la muestra vegetal, y estos fueron los siguientes resultados,
tal como se muestra en la tabla 2.
Tabla 2
Muestra A B FR
Tabla 3
Muestra A B FR
9. Bibliografía.
Herrera, C.; Bolaños, N.; Lutz, G. (2003) Química de Alimentos: Manual de
Laboratorio. Editoria Universidad de Costa Rica, 1ª edición, San José, Costa
Rica, Pp4.
Mancha de lapicero.
El color amarillento es
indicativo de presencia
de xantofilas.
CURSO:
INFORME DE LABORATORIO
Tema: CROMATOGRAFIA
Ciclo: V