26

2017

Documentos de docencia | Course Work

GUÍA DE Coursework.ucc.edu.co
N° 26, diciembre de 2017
LABORATORIO. doi: https://doi.org/10.16925/greylit.2274

MICROBIOLOGÍA
BÁSICA
Maria Eugenia Castaño Orozco
Universidad Cooperativa de Colombia
Seccional Medellín

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 GUÍA DE
LABORATORIO.
MICROBIOLOGÍA
BÁSICA

Maria Eugenia Castaño Orozco

Acerca de la autora
Maria Eugenia Castaño-Orozco. Magister en Cien-
cias Básicas Biomédicas, profesora auxiliar del pro-
grama de Medicina, Universidad Cooperativa de
Colombia, seccional Medellín.
Correo electrónico:
mariae.castano@campusucc.edu.co

Cómo citar este documento

Castaño-Orozco ME. Guía de laboratorio. Microbio-
logía básica. (Documento de docencia N° 26). Bo-
gotá: Ediciones Universidad Cooperativa de Colom-
bia, 2017. Doi: https://doi.org/10.16925/greylit.2274

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TABLA DE CONTENIDO

O bjetivo general 6

I nformación general 6
Primera práctica 7
Segunda práctica 8
Tercera práctica 9
Cuarta práctica 10
Quinta práctica 14
Sexta práctica 15

R eferencias 16

ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Esquema de siembra de las muestras
en agares bacteriológicos 11
Figura 2. Esquema de la preparación de las placas 11
Figura 3. Ejemplo de lesiones compatibles
con hongos y toma de muestra 12
Figura 4. Ejemplo de estructuras compatibles con hongos 12
Figura 5. Esquema de siembra de las muestras en agar micológico 13
26 GUÍA DE LABORATORIO.
MICROBIOLOGÍA BÁSICA
Maria Eugenia Castaño Orozco

Resumen

Las enfermedades infecciosas son causadas por

microorganismos patógenos como las bacterias,
los virus, los parásitos o los hongos [1]. Las prác-
ticas de laboratorio de microbiología básica tienen
como propósito facilitar el aprendizaje de los prin-
cipales métodos de diagnóstico e identificación de
agentes etiológicos de las enfermedades infeccio-
sas humanas: medios de cultivo, tinciones, pruebas
inmunológicas y de microscopía [2] y relacionarlos
con los conocimientos adquiridos en el curso. Con
el desarrollo de las prácticas, el estudiante cono-
cerá y empleará los principales métodos de toma
de muestra utilizados para el diagnóstico de enfer-
medades infecciosas, así también, los métodos di-
rectos e indirectos más comunes en el laboratorio
de microbiología para la identificación de microor-
ganismos infecciosos: inmunológicos, de cultivo y
microscópicos.
Palabras clave: cultivo microbiano, identificación,
microscopio, microorganismos, morfología, tinción.
 6 · Serie documentos de docencia
O bjetivo general
Introducir al estudiante de medicina de pri-
mer semestre en los métodos de identificación
de microorganismos responsables de las prin-
cipales enfermedades infecciosas humanas.
I nformación general
Cada práctica será evaluada de acuerdo a
los siguientes aspectos: comportamiento en
el laboratorio (prácticas de bioseguridad y el
comportamiento grupal), trabajo individual y
grupal (orden en el trabajo y ejecución de las
técnicas), informe de laboratorio y/o evalua-
ción individual.
El informe de laboratorio debe incluir:
• Portada con el título de la práctica y los
nombres de los estudiantes del grupo de
trabajo.
• Introducción, en la que se resalten los
objetivos del grupo de trabajo para cada
práctica y los resultados esperados.
• Materiales y métodos experimentales.
De acuerdo con el tipo de práctica, un
esquema del procedimiento puede ser
suficiente.
• Resultados, lectura de placas histológicas,
observación de preparados conservados
y/o lectura de cultivos.
• Discusión, que incluya análisis de resul-
tados y conclusiones. Los datos acá in-
cluidos deben estar en correlación con
los objetivos planteados. Si se presentan
resultados incorrectos, también se deben
discutir en este apartado para identificar
causas de error y proponer ideas para me-
jorar los resultados y procesos. También
se sugieren modificaciones para mejorar
la práctica.
• Referencias bibliográficas, normativa Van-
couver.

1. PRIMERA PRÁCTICA
1.1 RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO,
BIOSEGURIDAD Y CUIDADO DEL
MICROSCOPIO
Para esta práctica se requiere de la lectura
previa del “Manual de Bioseguridad de Labo-
ratorios, Facultad de Medicina, Universidad
Cooperativa de Colombia sede Medellín” [3] y
del protocolo de manejo de accidentes de ries-
go biológico de la Universidad Cooperativa de
Colombia [4].
Asimismo, tendremos en cuenta las siguien-
tes recomendaciones para el cuidado de los
microscopios:
• Para su traslado se toma con una mano
el brazo del microscopio y con la otra se
sostiene la base.
• El sistema óptico y de iluminación nunca
deberá ser tocado con los dedos.
• Después de colocar el microscopio en una
superficie plana y estable, se conecta al
tomacorriente y se enciende; una vez en-
Guías de prácticas ·  7
cendido el microscopio, se evitará realizar
cualquier movimiento brusco.
• Colocar el portaobjetos sobre la platina
del microscopio; enfocar en el objetivo de
10X.
• Deslizar tornillo macrométrico, observan-
do lateralmente hasta que el objetivo que-
de cerca del portaobjetos.
• Observar a través de los oculares hasta
enfocar la preparación; afinar la imagen
moviendo lentamente el tornillo micro-
métrico. Si se desea mayor aumento, girar
el revolver hasta el objetivo adecuado.
• Si se utiliza el objeto de 100X es necesa-
rio colocar sobre la preparación una gota
de aceite de inmersión; observar y ajustar
cuidadosamente usando el micrométrico.
• Después de usar el objetivo de 100X se de-
berá limpiar con un paño suave.
• Luego de su uso, disminuir la luz hasta
cero y apagar el microscopio.
En esta práctica no se realizará informe de la-
boratorio.
 8 · Serie documentos de docencia

2. SEGUNDA PRÁCTICA

Identificación de las características más im-
portantes de parásitos macroscópicos y mi-
croscópicos de importancia médica en prepa-
rados histológicos y en solución de formol.
2.1. INTRODUCCIÓN
Una forma frecuente de clasificar las parasi-
tosis humanas es según su localización ana-
tómica. La identificación de parásitos intes-
tinales depende de su presencia en muestras
de materia fecal; para identificar aquellos de
localización extraintestinal, depende de su
demostración en sangre, tejidos, exudados,
esputo, aspirados, orina o lcr.
El diagnóstico y manejo de las infecciones por
parásitos se basa en la combinación de la in-
vestigación clínica y de la investigación por
parte del laboratorio [5]. Los procedimientos
del laboratorio para el diagnóstico incluyen:
demostración de los parásitos en los especí-
menes a estudiar macroscópicamente, me-
diante microscopía óptica (análisis de prepa-
rados en fresco) y a través de tinciones (Gram,
Giemsa) [6].
Desarrollo: El profesor hará una introducción
sobre Bioseguridad en el laboratorio y el diag-
nóstico de enfermedades parasitarias.
2.2. MATERIALES
• Colección de placas de parásitos
• Estereomicroscopio, microscopio y aceite
de inmersión
• Preparados de parásitos preservados en
formol
2.3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
• Observación de las placas de colección al
microscopio.
• Observación de los parásitos preparados
en solución de formol.
• Observación de los artrópodos a través del
estereomicroscopio.
• Discusión relacionada con las muestras
analizadas y las técnicas utilizadas para
el diagnóstico de parásitos.
2.4. EVALUACIÓN
Se evaluarán los temas de toma de muestra y
técnicas de diagnóstico en parasitología.

3. TERCERA PRÁCTICA
Morfología bacteriana y medios de cultivo.
3.1 INTRODUCCIÓN
Con el fin de familiarizar al estudiante con la
morfología de las bacterias bajo el objetivo
de 100X del microscopio óptico, durante esta
práctica los estudiantes visualizarán diferen-
tes tipos de preparados de laboratorio, tanto
de muestras biológicas como preparaciones
a partir de cultivos puros. Adicionalmente, se
hará un reconocimiento de los tipos de medio
de cultivo y técnicas de siembra.
3.2 MATERIALES
• Colección de bacterias patógenas
• Colección de muestras de flujo vaginal
Guías de prácticas ·  9
• Microscopio y aceite de inmersión
• Medios de cultivo estériles: agar nutritivo
y agar McConkey
• Asas bacteriológicas
3.3 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
• Observación de las placas de colección al
microscopio.
• Discusión sobre los tipos de medio de cul-
tivo para bacterias.
• Demostración de las técnicas de siembra
para aislamiento de bacterias.
3.4 EVALUACIÓN
Esta práctica no será evaluativa.
 10 · Serie documentos de docencia
4. CUARTA PRÁCTICA
Estudio de microbiota a través de cultivo, co-
loraciones y preparaciones histológicas; diag-
nóstico de micosis superficiales, (toma de
muestra, montaje de placas y siembra).
4.1 INTRODUCCIÓN
Una forma frecuente de clasificar las micosis
es según su localización anatomoclínica; se
describen como micosis superficiales, subcu-
táneas, sistémicas y micosis oportunistas [7].
El diagnóstico y manejo de las infecciones por
hongos se basa en la combinación de la inves-
tigación clínica y de la investigación por parte
del laboratorio.
4.2 MATERIALES
• Placas portaobjetos y cubreobjetos
• Aplicadores de algodón y de madera
• Lancetas
• Asas bacteriológicas
• koh al 10% con azul de lactofenol
• Agar micológico: sabouraud-dextrosa
• Agares bacteriológicos: McConkey y nutritivo
• Tinción de gram (cristal violeta, lugol, al-
cohol acetona, safranina)
• Microscopio
4.3 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
• Cada grupo de trabajo tendrá a disposi-
ción tres medios de cultivo que deberán
identificar con la ayuda de cinta.
• El estudio de la microbiota normal de la
boca y de la piel se hará a través de tinción
de gram y cultivo.
• El diagnóstico de micosis superficiales se
hará a través de koh y cultivo.
4.3.1 Estudio de la microbiota de la boca
Con ayuda de un palillo estéril, extraiga una
pequeña cantidad del sarro existente entre
los dientes; con cuidado deposítela en un lado
de cada caja de agar. Proceda a extender el
inóculo en la superficie con un asa bacterio-
lógica, por estrías. Con otro palillo, tome otra
muestra de sarro y extiéndala en dos placas
portaobjetos. A una de las placas adicione una
pequeña gota de solución salina y obsérvela
al microscopio luego de ponerle una lámina
cubreobjetos. La otra placa déjela secar, fíjela
al calor y realice la tinción de gram. Una vez
se seque, obsérvela en 100X.
4.3.2 Estudio de la microbiota de piel
Con un hisopo estéril, humedecido con solu-
ción salina estéril, frote la palma de la mano
y deposite el inóculo en el otro extremo de las
cajas de cultivo (McConkey y agar nutritivo);
no prepare placa para tinción de gram. Proce-
da a realizar el extendido con ayuda del asa
bacteriológica, ver figura 1 y 2.
 Guías de prácticas ·  11

FIGURA 1. Esquema de siembra de las muestras en agares bacteriológicos.

Fuente: elaboración propia

FIGURA 2. Esquema de la preparación de las placas.

Fuente: elaboración propia

4.3.3 Tinción de Gram 4.3.4 Diagnóstico de micosis superficiales

Después de fijar el frotis de carrillo (boca), cú-
bralo con cristal violeta durante un minuto.
Enjuague con agua. Cubra con lugol durante
un minuto y lave con agua. Decolore con al-
cohol-acetona unos segundos y lave con agua.
Cubra con Safranina durante 45 segundos y
lave con agua. Deje secar al aire libre y obser-
ve al microscopio con aceite de inmersión.
Hacer un análisis de la piel, cabello y uñas en
los compañeros de grupo buscando lesiones
compatibles con micosis. Realizar un raspado
con lanceta en lesiones de piel o uñas, o ex-
traer pelos con pinzas, ver figura 3.
 12 · Serie documentos de docencia

FIGURA 3. Ejemplo de lesiones compatibles con hongos y toma de muestra.

Fuente: elaboración propia

Colocar la muestra en una placa portaobjeto
para realizar el análisis directo; adicionar 1
gota de koh al 10%, colocar una laminilla en la
parte superior y dejar a temperatura ambien-
te durante 10 minutos. Calentar suavemente
la placa con ayuda de un mechero. Observar
al microscopio buscando elementos compati-
bles con hongos. Ver tipos de estructuras de
hongos en la figura 4.

FIGURA 4. Ejemplo de estructuras compatibles con hongos.

Fuente: elaboración propia

Con ayuda de la lanceta, sembrar la muestra protegido de la luz, hasta por 4 semanas. Ver
en el interior del agar Sabouraud. Incubar el el esquema en la figura 5.
medio sembrado a temperatura ambiente y
 Guías de prácticas ·  13

FIGURA 5. Esquema de siembra de las muestras en agar micológico.

Fuente: elaboración propia

4.4 EVALUACIÓN
Se evaluarán los temas de toma de muestra y técnicas de diagnóstico en micosis superficiales y
de microbiota.
 14 · Serie documentos de docencia
5. QUINTA PRÁCTICA
Lectura de cultivos. Identificación de bacterias
y hongos.
5.1 INTRODUCCIÓN
Después del período de incubación (24 horas
para las bacterias y 7 días para los hongos)
es necesario hacer el análisis macroscópico y
microscópico de los cultivos.
5.2 MATERIALES
• Placas portaobjetos y cubreobjetos
• Solución salina
• Cajas de cultivo de la práctica anterior
(agar Sabouraud-dextrosa, McConkey y
nutritivo)
• Tinción de gram
• Microscopio
5.3 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
Revise los cultivos macroscópicamente, verifi-
cando el crecimiento de colonias compatibles
con hongos en el agar Sabouraud y de bacte-
rias en los agares McConkey y nutritivo ¿Son
cultivos puros? ¿Cuántos tipos de colonias se
observan? Descríbalas. Haga un dibujo de sus
hallazgos, comparando los resultados obteni-
dos en las siembras de las mismas muestras
en los dos tipos de medios (McConkey y nu-
tritivo). Con la ayuda de un palo de madera
obtenga una pequeña porción de cada tipo
de colonia y realice un pequeño extendido en
una placa portaobjetos; déjela secar y proceda
a realizar una tinción de gram.
En el caso de observar crecimiento en el agar
Sabouraud, revise cuántos tipos de colonias
hay de acuerdo a su tamaño, textura y pigmen-
to. Obtenga una porción de una colonia y coló-
quela en una placa portaobjetos con solución
salina; coloque una placa cubreobjetos y ob-
sérvela al microscopio. Busque hifas, conidias,
conidióforos y otras estructuras que le permi-
tan identificar el género de hongo aislado.
5.4 EVALUACIÓN
Elaborar el informe reportando el crecimiento
obtenido durante la primera semana de incu-
bación.

6. SEXTA PRÁCTICA
Laboratorio de diagnóstico de virus. hepatitis b,
virus de la inmunodeficiencia humana y den-
gue.
6.1 INTRODUCCIÓN
Debido a su tamaño submicroscópico, no con-
tamos con herramientas necesarias para ob-
servar los virus; sin embargo, a través de prue-
bas inmunológicas podemos evidenciar no
solamente antígenos virales sino también los
anticuerpos que produce un individuo frente
a la infección por diferentes tipos de virus.
6.2 MATERIALES
• Pruebas rápidas de hepatitis b, virus de la
Inmunodeficiencia humana y dengue.
Guías de prácticas ·  15
• Muestras de suero humano.
6.3 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO
Ya que el procedimiento para cada prueba
está descrito por el fabricante, es necesario
leer detalladamente los insertos de las prue-
bas a realizar y seguir paso a paso la técnica.
Realizar las pruebas asignadas a la muestra
entregada, siguiendo las recomendaciones de
bioseguridad ya que se considera una mues-
tra potencialmente infecciosa.
6.4 EVALUACIÓN
A través de un quiz se evaluarán los conoci-
mientos de las técnicas conocidas durante la
práctica.
 16 · Serie documentos de docencia

R eferencias
[1] Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Introducción a la Microbiología. 9° ed. Buenos Aires: Editorial Panamericana;
2007.
[2] Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Manual de prácticas de laboratorio de Bacteriología y Mico-
logía. México: Universidad Autónoma del Estado de México; 2013.
[3] Universidad Cooperativa de Colombia. Manual de Bioseguridad. Medellín: Facultad de Medicina; 2014.
[4] Universidad Cooperativa de Colombia. Protocolo de manejo de accidentes de riesgo biológico. Medellín:
Facultad de Medicina; 2015.
[5] Kaminsky G. Manual de Parasitología. 3° ed. Honduras: Papelería e Imprenta Tegucigalpa; 2014.
[6] Olivas E. Manual de prácticas laboratorio de Parasitología clínica. Juárez: Universidad Autónoma de Ciudad
Juárez; 2012.
[7] González Cuellar FE. Diagnóstico por laboratorio de las infecciones por hongos. Revista de la Facultad
Ciencias de la Salud, Universidad del Cauca. 2005; 7(1):42-52.