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LAVADO Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES

L. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos pueden producir enfermedades cuando infectan personas, animales y


plantas y cuya gravedad oscila entre una infección débil, intoxicación e incluso la muerte.
Pueden contaminar los alimentos y producir cambios físicos y químicos en ellos, haciéndolos en
algunos casos incomibles e incluso venenosos. Los microorganismos son responsables también
de la alteración de muchos otros materiales, generando graves pérdidas económicas. Por ello es
indispensable disponer de procedimientos para controlar la contaminación y el crecimiento
microbiano. Las principales razones para controlar la contaminación y el crecimiento
microbiano.

Las principales razones para controlar a los microorganismos pueden resumirse de la siguiente
forma:

 Para evitar la transmisión de las enfermedades y las infecciones.


 Para eliminar los microorganismos de un hospedador que está infectado.
 Para eliminar microorganismos de diferentes materiales y así evitar su deterioro y
alteración.

II. OBJETIVOS

 Aprender a limpiar y preparar el material empleado en le laboratorio de microbiología.


 Conocer los tipos de esterilización del material de laboratorio.
 Aprender a preparar el material para su esterilización por medio del calor húmedo.

III. MARCO TEORICO

ESTERILIZACIÓN

La esterilización es la muerte y/ o eliminación de todo microorganismo. No existen grados de


esterilidad, un objeto es estéril o no lo es.

La dinámica de la esterilización dice que la proporción de microorganismos muertos en iguales


periodos de tiempo es constante. A mayor temperatura, mayor acción y menos tiempo
necesario para esterilizar. Esto es válido para cualquier procedimiento químico o físico excepto
filtración.

Este proceso se realiza sumergiendo el material en una bandeja o recipiente perforado con
detergente enzimático (de acuerdo al tiempo recomendado por el fabricante), pasando luego el
material por el chorro de agua.

Se procederá al prelavado manual del instrumental o equipos, sumergiendo los mismos en una
solución de detergente enzimático al 0,8% (ver recomendación del fabricante) en agua
corriente, cuya temperatura no sea superior a 45°C(Optar & Título, 2017)

Los métodos de esterilización se clasifican en :


1-FÍSICOS:

CALOR: Actúa por desnaturalización de proteínas y contribuye a la fusión de lípidos de


membranas.

CALOR HÚMEDO: la desnaturalización y coagulación se facilita en presencia de agua pues se


rompen los puentes de hidrógeno entre los grupos C = O----HN que constituye la estructura
secundaria y se agrega (también mediante puente de hidrógeno) una molécula de agua a cada
extremo de esas uniones rotas. Las proteínas en soluciones más diluidas coagulan a menor
temperatura que las concentradas. Esterilizar exclusivamente en calor húmedo: medios de
cultivos, recipientes contaminados, material de goma, y todo elemento que no resista las altas
temperaturas del calor seco.

La autoclave utiliza vapor a presión superior a la normal. Así, la temperatura del vapor de agua
asciende a 121ºC. El vapor saturado penetra en los recipientes tomando contacto con los
microorganismos a destruir, allí se condensa liberando calor. El calentamiento es rápido por la
gran cantidad de calor latente del vapor de agua, que libera al condensarse sobre la superficie
del objeto.

CALOR SECO: Deshidrata las bacterias, virus, etc. y facilita la coagulación o desnaturalización de
las proteínas. Se requieren mayores temperaturas para producir daño irreversible (muerte). Se
acepta que el calor seco actúe oxidando los constituyentes intracelulares. En el proceso de
esterilización son prioritarios los procesos oxidativos y de fusión de membranas por sobre la
desnaturalización. Resulta lento por la menor eficacia del calor seco y por la lentitud del
transporte del calor (convección y radiación).

NOTA:

Esterilizar exclusivamente a calor seco: Cera, vaselina, talco, recipientes cerrados herméticos de
vidrio o metálicos sin filo.

RADIACIONES

Luz ultravioleta: solamente para aire o para superficie o capas muy delgadas de líquidos pues
no penetra. Se

usa para consultorios, salas, laboratorios, cámaras, quirófanos. No atraviesan el vidrio. Las ondas
UV tienen suficiente energía para causar roturas en el ADN, produciendo la muerte del
organismo expuesto. Las cámaras de siembra vienen equipadas con una lámpara de luz UV para
mantener el área estéril, la cual se debe apagar cuando se ingresa a la cabina por la peligrosidad
a la exposición de las radiaciones (quemaduras, eritemas, cáncer de piel)

MECÁNICOS:

Filtración: para medios de cultivo, sueros y soluciones que se alteren con el calor. En la mayoría
de los filtros hay tres factores principales que intervienen en la retención de partículas
(bacterias, virus, proteínas, etc.):

a) Efecto mecánico de filtro, según el tamaño del poro.

b) Repulsión o atracción eléctrica


c) Absorción y adsorción Por b y c pueden resultar que el filtro retenga partículas menores que
el diámetro del poro. La mayoría de los filtros bacterianos tienen cargas negativas igual que las
bacterias y los virus. Se disminuye la retención por ésta causa, trabajando a pH entre 7 y 6.

Ultrafiltración: para separación y medición de virus. Membranas de ésteres de celulosa


biológicamente inertes que no retienen partículas por adsorción por lo tanto la retención de
partículas depende principalmente del tamaño de los poros.

2- QUÍMICOS:

Desinfectantes: son agentes antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos


(infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos tóxicos sobre
tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre materiales inertes.

Esterilización por gas plasma: Es una de las tecnologías posibles para esterilizar material termo
sensible. Consiste en crear un plasma (estado entre líquido y gas), aplicando una radiofrecuencia
a Peróxido de Hidrógeno que ejerce la acción biosida. El plasma es considerado como el cuarto
estado de la materia consistente en un conjunto de iones, electrones y partículas atómicas
neutras. Tiene la ventaja de no dejar ningún residuo tóxico ya que se convierte en agua y oxígeno
al final del proceso. El material no precisa aireación. El ciclo de esterilización es corto, dura entre
54 y 75 minutos.

Esterilización con óxido de etileno: este método se aplica a materiales termo sensibles, sondas,
instrumental vario. Este gas se administra mediante una autoclave especial. Para ejercer su
efecto necesita humedad y una temperatura moderada (60ºC). La desventaja es que genera
residuos contaminantes que deben recibir tratamiento antes de ser desechados. El material
tratado debe ser sometido a aireación forzada para eliminar los residuos tóxicos. El personal
debe protegerse adecuadamente. (López & Torres, 2006)

Desinfectantes de alto nivel:

Se caracterizan por actuar inclusive sobre los esporos bacterianos

(forma más resistentes dentro de los microorganismos), produciendo una esterilización química
si el tiempo de acción es el adecuado.

Se utilizan sobre instrumentos médicos o quirúrgicos termosensibles.

Son rápidamente efectivos sobre bacterias no esporuladas. Por lo general el número de esporos
en el material a desinfectar es insignificante, por lo que la esterilización es rápida. Dentro de
este grupo se encuentran:

I. Óxido de Etileno

II. Formaldehído al 8% en alcohol 70% III. Glutaraldehído al 2%

IV. Peróxido de Hidrógeno


Desinfectantes de mediano nivel:

Si bien no destruyen esporos, si lo hacen con gérmenes tipo: M.tuberculosis, hongos y virus no
lipídicos. Algunos agentes son: I. Compuestos clorados (por ej.: hipoclorito de sodio) II.
Compuestos iodados (iodóforos y alcohol iodado)

III. Compuestos fenólicos

IV. Alcoholes

V. Clorohexidina

Desinfectantes de bajo nivel:

I. Compuestos de Amonio cuaternario

II. Compuestos mercuriales

En la práctica estos compuestos se utilizan para la limpieza doméstica mientras que están
prácticamente en desuso en los hospitales y laboratorios debido al empleo de tácticas más
agresivas para la desinfección.(Miller, 2017)

IV. MATERILES Y PROCEDIMIENTO

 Papel craff
 Pavilo
 Detergente
 Cajas Petri
 Pipetas
 Detergente
 Agua destilada
 Piceta
 Autoclave
 Horno (estufa)

V. PROCEDIMIENTO

A) PREPARACION DE SOLUCION DESINFECTANTE

Hipoclorito de sodio

𝑉1𝐶1 = 𝑉2𝐶2
V1= cantidad de cloro a adicionar=?

C1= concentración de cloro indicado por el fabricante expresados en partes por millón
(ppm)=4%

V2= volumen de agua que se usara expresada en (ml)=2L=2000ml

C2= concentración requerida en ppm (1ppm=10000) =50ppm


CALCULOS

𝑉1𝐶1 = 𝑉2𝐶2
𝑉1 × 40000 = 2000𝑚𝑙 × 50𝑝𝑚𝑚
2000𝑚𝑙 × 50𝑝𝑝𝑚
𝑉1 =
40000𝑝𝑚𝑚
𝑉1 = 2.5𝑚𝑙 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑐𝑙𝑜𝑟𝑖𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑑𝑖𝑜

B) PREPARACION DE MATERIALES Y LAVADO.

1. Lavar perfectamente las cajas Petri y las pipetas con escobillón y detergente. Enjuagar
con abundante agua corriente.

2. Escurrir el exceso de agua y enjuagara el material con agua destilada con una piceta por
las paredes interiores. Deja escurrir el agua sobre el papel craff.
3. Una vez seco el material se procederá a envolver las cajas Petri y pipetas con papel craff.
Para tubos y matraces se elaboran tapones de algodón y gasa procurando q ajusten con
holgura. Y finalmente se les coloca un capuchón de papel craff.

4. Para lograr una esterilidad confiable el método estándar es el vapor saturado, en


autoclave, a una temperatura de 121 °C durante 15 minutos. En el caso de
descontaminación el tiempo puede extenderse a 30 minutos. Esta temperatura se logra
por vapor de agua a una atmósfera de presión sobre la presión atmosférica.

Normas de uso generales de la autoclave La utilización de la autoclave comprende los


siguientes pasos:

a. Controlar el nivel de agua: en caso necesario, completar con agua corriente

b. Mantener la posición abierta de la espita

c. Controlar las funciones de la válvula de seguridad

d. Introducir el material a esterilizar.

e. Cerrar la tapa

f. Encender la fuente de calor

g. Purgar para eliminar el aire de la cámara de esterilización

h. Cerrar la espita.

i. Cuando se alcanza la presión (indicadora de la temperatura) deseada se comienza a contar el


tiempo de esterilización.
j. Una vez concluido el proceso, apagar la fuente de calor y dejar disminuir la presión
espontáneamente. No enfriar artificialmente la autoclave.

k. Cuando el manómetro indica que la presión ha llegado a cero abrir la espita a fin de equilibrar
la presión.

Abrir la autoclave y retirar el material estéril. Cuando la autoclave no está en uso, la tapa debe
permanecer apoyada sobre el cuerpo de la autoclave.(Alcance de la Norma, 2005)

VI. RESULATADOS Y DISCUSIONES

En esta, practica no se obtuvieron resultados tangibles, ya que no hubo una verificación de la


esterilización sin embargo se espera que el material; haya quedado totalmente libre de todas
las formas de vida (incluyendo esporas bacterianas) tanto por el método de calor húmedo, por
consiguiente, se espera, de realizarse una prueba para la comprobación de la esterilidad del
equipo esta revelara la ausencia de microorganismos. si tal prueba mostrara crecimiento de
cualquier tipo de microorganismo, esto indicara una falla en la programación o el
funcionamiento del aparato o una contaminación posterior a la esterilización como
consecuencia de una mala preparación del material o un mal manejo de este proceso.

en ausencia de una verificación de la esterilización, solo podemos mencionar, en relación a los


objetivos, que se preparó completa y correctamente el material para esterilizarlo por ambos
métodos, es decir, con tapones de algodón y papel craft para el material de calor húmedo y con
papel aluminio para el de calor seco y se metió a esterilizar por los métodos correspondientes.

VII. COCLUSIONES

Pese a la ausencia de resultados tangibles, se desarrollan habilidades para esterilizar el material


del laboratorio por los métodos de calor húmedo, tomando en cuenta que el método escogido
corresponde a las necesidades de esterilizar que se desean de cumplir, teniendo como variantes:
el tipo de material. Naturaleza de los microorganismos q se desean erradicar.

La práctica se desarrolló normalmente no hubo inconvenientes, a excepción de que no podemos


usar la estufa por falta de tiempo, ya que demora 2 horas en estilizar.

Resaltamos también la importación de la limpieza en la zona de trabajo, donde se está


preparando los materiales para la esterilización.
VII. BIBLIOGRAFIA

 Alcance de la Norma, I. (2005). Norma técnica sobre esterilización y desinfección de


alto nivel para establecimientos de atención en salud. Anon Weber & Rutala Weber &
Rutala Gastmeier & Vonberg Machida et Al, 1–25. Retrieved from
http://web.minsal.cl/wp-content/uploads/2017/10/Norma-técnica-de-esterilización-y-
DAN-13-10-2017.pdf
 López, L., & Torres, C. (2006). Trabajo Práctico N ° 3 : Preparación del material para el
trabajo en Microbiología Limpieza y Esterilización. Retrieved from
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf
 Miller, M. J. (2017). A comprehensive review of the revised European Pharmacopoeia
Chapter 5.1.6 (part two). European Pharmaceutical Review, 22(6), 27–30.
 Optar, P., & Título, E. L. (2017). UNA-PUNO 2016 PRESENTADA POR : Repositorio
Institucional UNA-PUNO.