Microorganismos y su Importancia Biológica

NAVARRO M., Yuleidis Marcela; OSPINA A., Miguel Ángel; VILLAMIZAR G., Sara Gabriela; LÓPEZ
T., Leidy Juliana

Unidades tecnológicas de Santander. Laboratorio de biología. Grupo E-134. Tecnología en Recursos

Ambientales. Bucaramanga. Colombia

E- mail: yule-2912@hotmail.com

Octubre 15 de 2016

RESUMEN

Se dio inicio a la práctica de laboratorio Nº 6 con las instrucciones de la docente acerca de la

metodología que se debía seguir para lograr el objetivo principal de la práctica de laboratorio de
Biología, el cual se basó en la determinación de la importancia biológica de algunos microorganismos,
brevemente explicó cómo fijar una muestra, como hacerle el lavado cuando se le aplicara los reactivos
como el de; Safranina. Lugol, Violeta Cristal, Lactofenol y alcohol acetona, así mismo, nos indicó las
precauciones que se debe tener al manipular muestras con alto potencial de causar daños al
laboratorista. Terminada la explicación procedimos a realizar los pasos indicados, utilizando muestras
de queso descompuesto, de frutas y de pan, donde pudimos observar los hongos y algunas bacterias
como los cocos, estreptococos, entre otros.

Palabra clave: Caja Petri, microscopio, estereoscopio, reactivos, fijación, tinción de Gram.

ABSTRACT

Start the lab No. 6 with the instructions of the teacher on the methodology to be followed to achieve the
main objective of the lab of Biology, which was based on the determination of the biological importance
of some was given microorganisms, briefly explained how to set up a sample, such as washing him
when you apply the reagents like; Safranina. Lugol, Crystal Violet, Lactophenol alcohol and acetone,
also said the precautions we should take when handling samples with high potential for damage to the
laboratory worker. After the explanation proceeded to perform the steps using samples of spoiled
cheese, fruit and bread, where we observed fungi and some bacteria such as cocci, streptococci, among
others.

Keywords: Petri dish, microscope, stereoscope, reagents, fixing, Gram stain.

1
 INTRODUCCION

La formación de bacterias y clasificación según su estructura morfológica:

Morfología Microscópica

La forma de las bacterias está determinada por la rigidez de su pared celular. Básicamente, se
diferencian según su forma.

Existe una gran diversidad de bacterias, en cuanto a tamaño, metabolismo, hábitat, modo de vida, etc.

Morfología Macroscópica

La mayoría de las bacterias se multiplican rápidamente y son visibles como colonias cuando se les
siembra en medios de cultivo sólidos adecuados. Requieren una incubación de aproximadamente 24
horas en una atmósfera que favorezca su desarrollo, a temperatura óptima.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite identificar las bacterias porque las distintas
especies forman a menudo colonias con una forma, tamaño, color y aspecto característico.

Identificación microscópica

Las coloraciones que se usan para teñir los preparados de bacterias, se dividen en simples,
diferenciales y especiales. Las coloraciones simples, por ejemplo azul de metileno, permiten observar
la existencia de bacterias, su morfología, su agrupación, la presencia de esporos y la existencia de
otros tipos celulares. Las coloraciones diferenciales, por ejemplo con coloración de Gram y la de Ziehl
Nielseen, además de la anterior, permite la diferenciación de las bacterias porque usan diferentes
colorantes que se comportan distinto según el microorganismo en cuestión. Las coloraciones
especiales se usan para objetivar distintas estructuras como la cápsula, el núcleo, los flagelos, los
esporos, etc.

La coloración de Gram es la más usada en bacteriología y debe su nombre a quien la descubrió en

1884. Es una coloración diferencial, dado que las bacterias pueden clasificarse según su respuesta en
Gram positivas o Gram negativas. Las primeras se tiñen de color azul violeta y las segundas adquieren
un color rosado o rojo. La diferente reacción de las bacterias a la coloración de Gram se relaciona con
diferencias fundamentales en la pared celular de estas dos clases de células.
Los colorantes usados, su tiempo de aplicación y la diferente coloración que adoptan las bacterias
Gram positivas y Gram negativas en cada paso de la coloración de Gram (Tabla 1).

2
Tabla 1. Identificación de bacterias por la aplicación de colorantes.
Bacterias Gram Bacterias Gram
Solución Tiempo de aplicación
positivas negativas
Colorante Cristal
1 min Violeta Violeta
Violeta
Mordiente Lugol 1 min Violeta Violeta
Decolorante Alcohol
10 s Violeta Incolora
Acetona
Colorante de contraste
30 s Violeta Roja o rosada
Safranina

Bacterias

Las bacterias son microorganismos procariotas que presenta el tamaño de unos pocos micrómetros y
diversas formas incluyendo filamentos, esferas, barras, sacacorchos y hélices.

Superficie de Agar

Es una placa de Petri (recipiente redondo, de cristal o plástico, con una cubierta de la misma forma de
la placa) que contiene un medio de cultivo. Usada en microbiología para cultivar microorganismos o
pequeñas plantas. La placa se puede usar para estimar la concentración de microorganismos en un
cultivo, también se puede usar para generar para cultivos genéticamente puros.

Morfología

Disciplina que estudia la generación y las propiedades de la forma, y que se aplica en casi todas las
ramas de diseño o estructuración de un ser u objeto.

Colorante de Gram

Hongos: Reino al que pertenecen los organismos de clorofila, provistos de tallo, generalmente
filamentoso y ramificado mediante el cual absorben los principios orgánicos nutritivos del medio de
tamaño muy variado y reproducción preferentemente asexual (por esporas), viven parásitos o sobre
materias orgánicas en descomposición o parásitas de vegetales o animales.

La pared celular: Es una capa resistente, y no rígido porque soporta las fuerzas osmóticas y el
crecimiento, que se localiza al exterior de la membrana plasmática en las células de plantas, hongos,
algas, bacterias y arqueas.

3
Moho: Recubrimiento velloso o filamentoso producido por diversos tipos de hongos sobre materia
orgánica que provoca su descomposición; forma una capa de color negro, verde, azul o blanco. El
moho es un hongo que se encuentra tanto en el aire tanto en lugares húmedos y con baja luminosidad.

Proliferación: Reproducción o multiplicación de algún organismo vivo, especialmente de las células.

MATERIAL Y METODOLOGIA

Material biológico

 Moho de frutas
 Mohos de pan tajado
 Moho de queso

Material de laboratorio:

 1 mechero Bunsen
 1 caja de Petri
 1 asa bacteriológica
 Pipeta Pasteur
 Vaso de precipitado
 Portaobjetos
 Cubreobjetos

Equipo

 Microscopio óptico
 Estereoscopio

Reactivos

 Fucsina o Safranina
 Alcohol Acetona
 Azul de lactofenol
 Aceite de inmersión
 Mordiente Lugol

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METODOLOGÍA

 Morfología microscópica – Hongos

1. Se tomaron dos portaobjetos.
2. Se flameó el asa bacteriológica.
3. Directamente del queso se tomó la muestra a observar.
4. Se adicionó al portaobjeto una gota de azul de Lactofenol.
5. Se adicionó la muestra.
6. Se llevó al microscopio.

 Morfología macroscópica – Hongos

1. Se montó la muestra de banano, queso y pan tajado en la caja Petri.
2. Se llevó al estereoscopio.
3. Se ajustó el estereoscopio, para observar la muestra.

 Morfología microscópica - Bacterias

1. Se hizo el montaje del mechero Bunsen.
2. El asa bacteriológica fue flameada a la llama del mechero Bunsen, hasta tornarse de un rojo
incandescente.
3. Se recogió la muestra de banano en descomposición.
4. Esparciéndose por el portaobjeto.
5. La muestra se fijó mediante calentamiento, sin dejar la muestra sometida a la llama directamente
y por tiempo prolongado.
6. Se le aplicó 1 gota de Violeta cristal a la muestra dejándolo actuar durante 1 minuto.
7. La muestra se enjuagó a chorro con agua de manera vertical al chorro, para retirar el exceso de
Violeta cristal.
8. Posteriormente se le aplicó Lugol a la muestra en el portaobjeto, dejándolo actuar por 3 minutos,
sin realizar ningún enjuague en agua.
9. Se le adicionó decolorante Alcohol Acetona.
10. Nuevamente se enjuagó la muestra con agua a chorro y se secó al calor de la llama del mechero
Bunsen.
11. A la muestra ya seca se le adicionó safranina, dejándolo actuar por 1 minuto.
12. Se enjuagó la muestra por última vez para retirar el exceso del reactivo.
13. Finalmente se lleva la muestra al microscopio.

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En las siguientes tablas se observará los resultados obtenidos al finalizar el proceso descrito en la
metodología, por cada muestra observada y analizada:

Tabla 2. Microscopía de la morfología de los hongos en una muestra de queso, utilizando tinción de
Azul Lactofenol.

Observación Descripción

Se puede observar las microesporas del hongo en

forma redonda unas eran ovaladas que se cultivó
de manera espontánea en el queso, con mayor
claridad. El color de los hongos era azul casi
transparente.

100X

La tinción con el azul lactofenol, permitió

identificar en esta muestra los hongos del queso,
que por su forma redondeada puede inferirse que
son unicelulares. El color de los hongos era azul
pálido.

40X

6
Tabla 3. Microscopía de la morfología de los hongos en una muestra de levadura, utilizando tinción de
Azul Lactofenol.

Observación Descripción

Se pudo distinguir hongos agrupados en

colonias parecidas a las bacterianas, algunos
redondos u ovalados, el color que tenían era
un azul claro.

40X

Tabla 4. Macroscopía de la morfología de los hongos en una muestra de banano, pan y levadura.

Usando el estereoscopio

Observación Descripción
BANANO

Se apreciaron los hongos de la muestra de

banano, en forma de filamentos, que en su
parte superior tenían esporas de forma
redondeada y de color café. Las cuales se
clasificaron como hifas septadas

Oculares 25X, Lentes 4.0X

PAN TAJADO Se pudo distinguir una gran cantidad de
moho algunos con colores verdosos y otros
grisáceos, con forma de filamentos como
vellosidades, que se clasificó como hifa
septada, adheridos a la superficie del pan
tajado y esporas en las puntas de las hifas
de colores grisáceo, verdoso y algunos
Oculares 25X, Lentes 4.0X blanquecinos.

7
 LEVADURA

Se puede apreciar de los hongos de la

levadura con formas esféricas, ovaladas o
redondeadas, se pudo notar que se estaban
multiplicando.

Oculares 25X, Lentes 4.0X

Tabla 5. Microscopía de la morfología de las bacterias en unas muestras de banano y papaya en estado
de putrefacción, utilizando la tinción de Gram

Observación Descripción
BANANO

Se pudo distinguir en la muestra varios

tipos de baterías como los cocos,
estreptococos, entre otras, que tomaron
un color violeta debido a la tinción de
Gram utilizadas, indicando que eran Gram
positivas.

40X
PAPAYA
En la muestra se pudieron observar más
colonias de bacterias de diferentes tipos
unas que se tiñeron de color violeta y
otras con un color rosado pálido, que por
la tinción de Gram nos permite
identificarla como Gram positivas y Gram
negativas respectivamente. Las formas
de algunas de las bacterias observadas,
fueron, estreptococos, estafilococos,
algunos bacilos, entre otros.
40X

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DISCUSIÓN

El método de tinción o coloración de Gram permitió identificar y clasificar las bacterias observadas, que
claramente tomaban el color esperado: las Gram positivas tomaron colores violetas o azulados y las
Gram negativas un color rosado tenue, además de que se pudo apreciar y contrastar la teoría con la
práctica de laboratorio en lo que se refiere a la forma que adoptan las bacterias así como los hongos
observados en materia orgánica en descomposición.

Tal conocimiento es vital para la carrera que estamos cursando, puesto que nos permitirá clasificar las
distintas bacterias u hongos que se hallen en el medio ambiente en el que se realice el estudio de
campo. Así mismo, la importancia biológica de estos microorganismos para la vida.

EVALUACIÓN

1. Esplique la forma en que la coloración de Gram permite realizar la clasificación

taxonómica de las bacterias

Cuando se requiere conocer los detalles morfológicos de las bacterias es necesario recurrir a técnicas
de coloración. Los colorantes empleados pueden ser naturales o sintéticos. Entre los naturales suele
utilizarse el carmín y la hemotalilina pero son más utilizados los sintéticos, en su mayoría derivados de
la anilina. Las coloraciones pueden ser directas (contacto de la suspensión bacteriana con el colorante)
o indirecto (utilización de mordiente).

La técnica de coloración de Gram brinda un carácter taxonómico que permite distinguir empíricamente
entre bacterias grampositivas y gramnegativas. La diferente estructura química de la pared celular es
la responsable de esta propiedad. Las bacterias grampositivas forman un compuesto estable con el
violeta de genciana mordenteado por lugol y resisten la decoloración con la mezcla alcohol-acetona.

Así, las bacterias grampositivas aparecen teñidas de violeta y las gramnegativas se tiñen de rosado.
Esta coloración también permite distinguir entre los distintos tipos de células o agrupaciones
bacterianas: cocos, bacilos, estreptococos, diplococos, etc.

2. Qué géneros de bacterias son importantes desde el punto de vista ambiental como
indicadores de contaminación

El grupo de microorganismos coliformes es adecuado como indicador de contaminación bacteriana ya

que los coliformes. Son contaminantes comunes del tracto gastrointestinal tanto del hombre como de
los animales de sangre caliente. · Están presentes en el tracto gastrointestinal en grandes cantidades.
· Permanecen por más tiempo en el agua que las bacterias patógenas. · Se comportan de igual manera
que los patógenos en los sistemas de desinfección.

9
Los microorganismos que conforman el grupo de los coliformes totales; Escherichia, Enterobacter,
Klebsiella, Serratia, Edwarsiella y Citrobacter, viven como saprofitos independientes o como bacterias
intestinales; los coliformes fecales (Escherichia) son de origen intestinal

3. Identifique la formación de bacterias que se observan en la preparación e identifique si

son gram positivas o gam negativas.

El procedimiento puede resumirse de la siguiente manera: una vez que la preparación ha sido fijada a
la lámina portaobjeto, se añade el colorante cristal violeta, el cual se deja en contacto por 1 minuto y
las células se tiñen de color violeta, posteriormente se lava el exceso de colorante con agua destilada,
luego se añade la solución de lugol, que actúa como mordiente, y se deja en contacto por un 1 minuto.
El yodo se combina con el cristal violeta y forma un compuesto que precipita en el interior de la célula;
este complejo puede extraerse fácilmente con alcohol etílico de las gram negativas, pero no se remueve
fácilmente de las gram positivas. Una vez realizada la decoloración se añade el colorante de contraste,
la safranina, la cual se deja en contacto por 30 segundos; el exceso de colorante se elimina con agua
destilada. Las láminas así preparadas se secan a temperatura ambiente o con la ayuda de toallas
absorbentes. Este procedimiento se esquematiza en la siguiente figura:

Ilustración de la apariencia de cocos gram positivos y de bacilos gram negativos en diferentes estados
del procedimiento de tinción de Gram.

4. Bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram

Las gramnegativas tienen una capa de petidoglucano mucho más delgada es por ello que no retiene el
violeta cristal y por esto las células se tiñen con safranina y las observamos rojas [Sánchez Castillo,
Jampieer. 2010].

10
 5. Bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram

Son las baterías grampositivas, donde el colorante se queda atrapado en la capa gruesa de
péptidoglucanos que rodea a la célula [Sánchez Castillo, Jampieer. 2010].

6. ¿Quién estudia los microorganismos microscópicos?

La microbiología es el estudio de los microorganismos, de su biología, su ecología y, en nuestro caso

su utilización en la producción de bienes agrícolas o industriales y su actividad en la alteración y
deterioro de dichos bienes. Esta definición hace necesaria la de tres conceptos que se incluyen en ella:
microorganismo, biología y ecología. El conocimiento de la biología y la ecología microbiana son
imprescindibles para poder comprender de qué forma los microorganismos interaccionan con los seres
humanos y qué tipos de relaciones establecen con ellos.

7. El reino mónera está constituido por:

El reino mónera está constituido por 2 grupos, llamados cianobacterias (algas azul-verdosas) y
bacterias. Las primeras se caracterizan por efectuar su alimentación por procesos fotosintéticos, y las
bacterias alimentan por un proceso quimiosintético.

8. Composición química de los magnetosomas

Los magnetosomas son estructuras cristalinas que poseen algunas bacterias en su citoplasma. Estas
estructuras suelen estar rodeadas de una membrana, al igual que otros endosomas, y tiene una serie
de particularidades que los hacen únicos: (i) una estructura cristalina particular y de una extraordinaria
perfección, (ii) su tamaño es tan sólo de unos pocos nanómetros y (iii) su composición química tiene
una tremenda pureza, está constituida por magnetita (óxido de hierro) o grieguita (sulfuro de hierro) y
esta pureza no ha sido conseguida igual por ninguna síntesis o purificación llevada a cabo en el
laboratorio. Estas características las hacen que posean un alto interés por su interés biotecnológicos.

9. Bacterias halófilas son aquellas que:

Las bacterias halófilas, al pertenecer al grupo de microorganismos extremófilos capaces de vivir en

ambientes salinos, ofrecen una multitud de aplicaciones en varios campos de la biotecnología.

11
 10. En la tinción de Gram el orden de aplicación de las soluciones colorantes es

11. ¿Qué géneros de hongos son importantes desde el punto de vista ambiental como
descomponedores, indicadores de contaminación, formadores de simbiosis y controles
biológicos?

Algunos géneros de hongos por cada función.

Descomponedores Indicadores de Formadores de Controles

contaminación simbiosis biológicos
Acremonium Vibrio cholerae Microrrizas Coprinus
(Petróleo)
Aureobasidium Penicillium Umbilicaria Stropharia
(Petróleo)
Altenaria Apergillus Lobaria Agaricochaete
(Pesticidas)
Cladosporium Alternaria Usnea Antromycopsis
(Pesticidas)
Glomerella Escherichia coli Sticta Cantharocybe
(Pesticidas)
Aspergillus P. aeruginosa Glomaceae Hohenbuehelia
(Glomus,
Sclerocystis)
Mucor Acuolosporaceae Nematoctonus
Scopulariopsis Gigasporaceae Pleurotus
Resupinatus

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CONCLUSIONES

 Mediante la observación de las preparaciones de las muestras para observar bacterias y hongos
microscópicos bajo diferentes técnicas de tinción que permitieron establecer diferencias
morfológicas y estructurales entre y dentro de los microorganismos.
 Se pudieron identificar los diversos microorganismos, tales como: bacterias (cocos,
estreptococos) y hongos.
 Los diversos reactivos utilizados en la tinción de Gram nos permitieron poder observar en las
muestras las bacterias dado su coloración y clasificarlas en Gram positivas o Gran negativas.
 El azul de Lactofenol nos permitió observar la morfología de los hongos en las muestras
estudiadas.
 Con esta práctica se pudimos familiarizarnos aún más con el manejo del microscopio óptico
para la visualización de microorganismos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BERNSTEIN, R.; BERNSTEIN, S. 1998. Biología. Mc Graw-Hill. Colombia.

BIGGS, A.; KAPICKA, Ch.; LUNDGREEN, L. 2000. Biología. La dinámica de la vida. Mc Graw-Hill.
México.

CURTIS, H. 1985. Biología. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires.

ENKERLIN, E.C. 1995. Ciencia Ambiental y Desarrollo Sostenible. Editorial Thomson International.
México.

FRIED, G.H. 1990. Biología. Mc Graw-Hill. México.

GRAU CAIRO, Luis. Colectivo de Autores. Organización Dirección y Operaciones Fundamentales en

el Laboratorio de Química. La Habana Editorial Pueblo y Educación.1982. 619 p.

MADER, S.S. 2008. Biología. 9ª edición. Mc Graw-Hill. México.

PINZÓN T., Javier A. DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS. Manual de prácticas de laboratorio.

UTS. 2016.

STARR, C.: TAGGART, R. 2004. Biología. La Unidad y diversidad de la vida. 10ª. Thompson Editores.
México.

VILLEE, C.A. 1996. Biología. 9ª edición. Mc Graw-Hill. México.

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WEBGRAFÍA

https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria

https://es.wikipedia.org/wiki/Pared_celular

http://www.wordreference.com/definicion/proliferaci%C3%B3n

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf

http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/nova/artrevis2_4.pdf

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Morfolog%C3%ADa_y_T
inci%C3%B3n.pdf

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/01_morfologia_y_estructura.pdf

http://bionetla.com/biologia/Documentos/Reinos.pdf

https://books.google.com.co/books?id=Pc0JAwAAQBAJ&pg=PA182&dq=magnetosomas+en+human
os&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjpkOD9jajPAhVEwYMKHW9ACs8Q6AEIJzAC#v=onepage&q&f=false

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-25562004000100004

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

http://hongosdeargentina.org/los-hongos-como-posibles-bioindicadores/

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