FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS RECURSOS NATURALES Y DEL

AMBIENTE

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS RECURSOS NATURALES Y DEL

AMBIENTE

INFORME DE PRACTICA DE LABORATORIO # 6

Período académico (abril 2019-agosto2019)

DATOS INFORMATIVOS:

Carrera: Agroindustria Fecha: 03-07-2019

Curso: Segundo Ciclo A N° horas: 2

Asignatura: Biología Celular Código de la asignatura: BIC 125

Docente: Carlos Jácome P., Ph.D. PrerrequisitoBIO113CorrequisitoQGE 112

Estudiante: Cristian Quinaloa

TEMA:
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL:

 Realizar la separación de los principales pigmentos que se pueden encontrar en las células vegetales
por medio de la técnica de cromatografía en papel.

OBJETIVO ESPECIFICO:

 Determinar la relación que existe entre el coeficiente de partición y la permeabilidad de la

membrana.
 Describir los componentes y funciones de las membranas biológicas.
 Identificar factores que afectan la integridad de las membranas.
 FUNDAMENTO TEÓRICO

Según (Mendoza, 2016), afirma que. “Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con
diferentes colores: clorofila-a “verde intenso”, clorofila-b “verde”, carotenos “amarillo” y
xantofilas “amarillo anaranjado” en diferentes proporciones”.

Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que
permite su separación cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una
tira de papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una película
de un disolvente orgánico (etanol), ya que las más solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues
acompañaran fácilmente al disolventes a medida que este asciende.

Las menos solubles avanzaran menos en la tira de papel de filtro. Aparecerán, por tanto, varias
bandas de diferentes colores “hasta siete o más, dependiendo del material utilizado” que estarán
más o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los
pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en
la disolución.

La cromatografía se fundamenta en la separación de los componentes de una mezcla por sus

diferencias de adsorción. Estas diferencias van a ser debidas a las fuerzas de Van der Wals que se
establecen entre los componentes de la mezcla y una sustancia que actúa de fase estacionaria. La
cromatografía en papel es una técnica sencilla y barata de separación de diversos componentes
líquidos.

Sin embargo, lo que en realidad existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos
representados principalmente por dos tipos de clorofila “clorofila a y clorofila b”, por b-caroteno
y por xantofila.

Separación de mezclas:

La separación de mezclas, contempla diversas técnicas basadas en las propiedades que poseen los
componentes de la mezcla y a su vez si se encuentran en diferentes estados de la materia, entre esos
se encuentra la cromatografía y la filtración.
Cromatografía: “Escribir en colores”

Esta técnica de separación de mezcla cualitativa se basa en el principio de retención selectiva, por
esto se utiliza en mezclas homogéneas, entre esas líquido; a su vez la cromatografía también posee
diversas técnicas, una de las primeras y más efectiva es la cromatografía en papel, esta técnica es
efectiva debido a que la separación se produce al momento en el que una de las sustancias líquidas
asciende por un papel poroso, a distintas velocidades por diferencia de solubilidad y velocidad de
difusión, conteniendo dos fases representativas, la fase móvil y la fase estacionaria. La fase móvil
se caracteriza por tener carácter polar, como el metanol y etanol. La fase estacionaria se caracteriza
por tener carácter no polar, como la remolacha, la espinaca, la zanahoria, el repollo morado y la
tinta, entre otros. (Cases & Hens, 1998)

En la cromatografía, es la fase móvil la cual asciende por el papel poroso para así producir el mayor
o menor avance de los componentes de la mezcla, pues cuanto más solubles los componentes de la
fase estacionaria, mayor desplazamiento tendrán y entre más anchas sean las marcas mayor
abundancia en la mezcla, esto es observar gracias a que normalmente la fase móvil, o los solventes
son incoloros.

Por cromatografía se pueden separar cuatro clorofilas distintas:

 La clorofila A constituye de manera aproximada el75% de toda la clorofila de las plantas

verdes, estando presente también en las algas verdeazuladas y en células fotosintéticas más
complejas.
 La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras células fotosintéticas
complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere la energía a la clorofila
A, que se encarga de transformarla en energía química.
 Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias.

Las clorofilas actúan como catalizadores, es decir, como sustancias que aceleran o facilitan las
reacciones químicas, pero que no se agotan en las mismas. Entre los carotenoides hay también
muchos catalizadores e intervienen como pigmentos accesorios en la fotosíntesis, transfieren a la
clorofila la energía de la luz que absorben para su conversión en energía química
Pigmentos vegetales
Los pigmentos se caracterizan por absorber luz y presentar color por el reflejo de ciertos espectros
de luz; en los vegetales las hojas, los tallos y las raíces contienen diversos pigmentos entre ellos
las quinonas o flavinas (colorante de las flores), pero a pesar de esto son los pigmentos
fotosintéticos que absorben la luz solar, esos pigmentos son la clorofila y los carotenoides.
(Medicinales, 2014)

Estos pigmentos fotosintéticos utilizan la energía solar que absorben en su estructura molecular y
cumplen funciones dentro de la célula, la más importante es llevar a cabo la fotosíntesis, es decir,
que es fundamental para la existencia de los vegetales.

La espinaca, que es un vegetal, cuenta con los siguientes pigmentos:

 Clorofila: es el pigmento que lleva a cabo la fotosíntesis, esta absorbe toda la luz exceptuando
la de color verde, pues se refleja en el color verde característico de la espinaca.

Cuenta con la “clorofila a” y la “clorofila b”, la primera es de color verde azulado y se encarga de
la fotosíntesis, mientras la segunda es un pigmento de apoyo.

 Carotenoides: estos se descomponen en el cuerpo humano, al ser consumidos, y se convierten

en vitamina A. Se considera esencial para la salud; en las espinacas el pigmento beta
carotenoide es el más abundante. Se caracteriza por una coloración naranja presente en las
zanahorias.
 Feofitinas: este pigmento se considera un producto de la descomposición, pues pierde un ion
de magnesio que permanece en la hoja y esto permite una continua coloración verde en las
espinacas.
 Xantofilas: estos pigmentos son carotenoides oxidados, por tanto se produce un cambio en su
estructura, se caracterizan por ser de color amarillo.

La Clorofila, es el pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de absorber la
luz necesaria para realizar la fotosíntesis, proceso que posibilita la síntesis de sustancias orgánicas
a partir de las inorgánicas (CO2, H2O y sales minerales), mediante la transformación de la energía
luminosa en energía química. La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la
verde. Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas de los tallos de la plantas.
¿Dónde están los pigmentos?

Estos pigmentos se encuentran en el interior de las células vegetales específicamente en una

organela llamada cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plástidos que contienen pigmentos
clorofílicos. Los compuestos clorofílicos están ligados químicamente con las estructuras internas
del cloroplasto y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, existen
también en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarillo, anaranjados que son los
xantofilas y carotenides.

¿Cómo se dividen los solventes?

Los pigmentos clorofílicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero sí son
solubles en solventes orgánicos como por ejemplo alcohol etílico y acetona. A los solventes que
extraen simultáneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar extractan tés. Existen
otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por
ejemplo el tetracloruro de carbono y el éter de petróleo.

Pigmentos presentes en la tinta

La tinta contiene diversos pigmentos, los cuales se utilizan para la coloración en una superficie, de
esta forma creamos imágenes o textos. Es una mezcla homogénea, la cual depende del color final
y esta cuenta con diversos colores intermedios, como ejemplo podemos decir que el color negro,
contiene pigmentos de color azul, rojo, amarillo, marrón y morado, o el color verde con pigmentos
azules, verde y amarillo; estos se podrán observar mejor dependiendo del solvente que se use en la
fase móvil. (Alejandra & Antonio, 2015)

Filtración

La filtración es un método de separación de mezclas heterogéneas, es decir solido líquido, se

caracteriza por tener presencia de un papel poroso para permitir el paso de los líquidos pero
reteniendo la parte solida de la mezcla, este papel puede ser remplazado por el algodón debido a
que este cumple con las condiciones de la filtración; aunque esto depende de la especie, cantidad
y tamaño de partículas de la mezcla que se quieren separar.
 PROCIDIMIENTO:

1. Lave las hojas con abundante agua corriente y trócelas colocándolas en el mortero (evitando
las venaciones muy gruesas).
2. Adicione 50 o 60 ml de alcohol y triture sin golpear hasta que el líquido obtenga una coloración
verde intenso.
3. Filtrar el contenido en un matraz debidamente rotulado, para obtener una solución alcohólica
de pigmentos.
4. En una caja de Petri debidamente rotulada adicionar la solución.
5. Coloque un papel filtro doblado en ángulo dentro de la solución y deje reposar el tiempo que
sea necesario.
6. Retire el papel filtro de la caja Petri y deje secar.
7. Mida las diferentes bandas del cromatograma, siendo la primera banda la más cercana al borde
que tocaba la solución.
8. Obtener una imagen del cromatograma y señalar las diferentes bandas y grosores, así como el
nombre del pigmento al cual corresponde de acuerdo a la siguiente información: la velocidad
de difusión de mayor a menor es b- caroteno, xantofila, clorofila a y clorofila b.
9. Realizar un cuadro comparativo de todas las muestras.

RESULTADOS
 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

a) CONCLUSIONES
1. El presente práctica nos permitió acercarnos al tema de la cromofotografía en papel, es uno de
los métodos más usados, por lo cual es necesario aprender y entender cómo realizarlo
correctamente.
2. Al realizar la práctica, pudimos observar como los diferentes colorantes vegetales se separó, y
con ello nos permitió identificar los distintos componentes de cada uno de los pigmentos
vegetales.
3. Mucha de las separaciones que se realizan en los laboratorios requieren de la cromofotografía,
ya que son separaciones muy complejas de realizar. He ahí la razón de su importancia.
b) RECOMENDACIONES
1. Si se requieren mayores aumentos, bajar un poco la platina esto para evitar que los objetivos
topen con la muestra (debido a que mientras mayor sea el aumento, el objetivo aumenta de
largo) y girar el revólver a la derecha para colocar el objetivo que en aumentos le sigue,
posteriormente corregir levemente el enfoque con el tornillo micrométrico.
2. Aplicar la observación con diferentes lentes de objetivo.
3. El uso de bata es obligatorio y el estudiante será responsable de su adquisición.
BIBLIOGRAFÍA

Alejandra, M., & Antonio, N. (05 de Agosto de 2015). EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE

PIGMENTOS VEGETALES. Obtenido de Scribd: https://es.scribd.com/doc/16675209/6-
EXTRACCION-Y-SEPARACION-DE-PIGMENTOS-VEGETALES

Cases, V., & Hens, G. (Agos de 1998). cromatografia "Escribir en colores". Obtenido de
https://alquisabana.weebly.com/uploads/6/0/1/5/60153133/informe_cromatograf%C3%A
Da_corregido.pdf

Medicinales, P. (08 de Enero de 2014). Pigmentos Vegetales. Obtenido de

https://alquisabana.weebly.com/uploads/6/0/1/5/60153133/informe_cromatograf%C3%A
Da_corregido.pdf

Mendoza, U. (02 de Marzo de 2016). Separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía

en papel. Obtenido de SlideShare: https://es.slideshare.net/UrielMendoza5/separacin-de-
pigmentos-vegetales-mediante-cromatografa-en-papel?from_action=save
 ANEXO:

a) MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS E INSUMOS

Cristalería
Mortero y pistilo
Cajas de Petri
Matraz
Embudo de vidrio
Papel filtro No. 1 Alcohol de 96°
Hojas de distintas plantas
Lápiz
Hoja de apuntes
b) CUESTIONARIO
1. ¿Qué pigmentos son más abundantes?

El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un olor verde y verde intenso.

También existen otros pigmentos como son los carotenos que dan un color amarillo, y xantofilas que dan
un color amarillo-anaranjado.