CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA

Jorge Acuña1, Katherin Orozco1, Xilena Peña1 & Carlos Pérez1

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Universidad del Atlántico
Facultad de Ciencias Básicas
Programa de Biología

En esta práctica de laboratorio se analizó la cromatografía, es decir, la separación de dos compuestos en

una capa delgada, utilizando como sustancias el azul de metileno (C16H18ClN3S) y el permanganato de
potasio (KMnO4) en un extremo de la placa, donde se observó la fase estacionaria y la fase móvil. A su
vez se utilizó un indicador de luz ultravioleta, para mirar el revelado de las fases, contenidas en los
absorbentes y dando paso a obtener el Rf de dichos compuestos en la placa.

Palabras clave: cromatografía, fase móvil, fase estacionaria, placa.

Introducción
La cromatografía en capa delgada es una
técnica analítica rápida y sencilla, muy
utilizada en un laboratorio de química
orgánica. Permite la separación de los
componentes de una mezcla debido a la
influencia de dos efectos contrapuestos. El
método se basa en la remoción selectiva de
los componentes de una fase a medida que
esta base fluye a través de una segunda fase
estacionaria. La separación se debe a que
los componentes de la mezcla son atraídos
con distinta fuerza por la fase estacionaria a
medida que fluye a través de ella. Aquel
componente que es atraído con mayor
fuerza por la fase estacionaria va
quedándose atrás mientras que el
componente atraído con menor fuerza va
más adelante que los demás a medida que
van fluyendo a través de la fase
estacionaria. [1]
El término Rf se define como la razón: Rf =
Distancia recorrida por la zona/ Distancia recorrida
por el frente del disolvente. La determinación de un
Rf requiere, pues, la medición de las distancias
desde el punto de aplicación de la muestra hasta el
centro de la zona o banda en estudio y hasta el
borde extremo alcanzado por el frente del
disolvente.
Los valores de Rf permiten la identificación de los
componentes de la muestra, puesto que se pueden
comparar con los valores obtenidos con sustancias
patrón sometidas al mismo proceso cromatográfico.
En las obras de consulta que tratan de la
cromatografía de adsorción y de partición se suelen
encontrar gran cantidad de datos de Rf. La identidad
de dos valores de Rf no es suficiente para identificar
positivamente una especie química, pero
proporciona una evidencia circunstancial que puede
confirmarse por medio de algún reactivo específico.
[2]

La mayor parte de las placas de cromatografía

llevan un indicador fluorescente que permite la
visualización de los compuestos activos a la luz
ultravioleta (254 nm). El indicador absorbe la luz
UV y emite luz visible. La presencia de un
compuesto activo en el UV evita que el indicador
absorba la luz en la zona en la que se encuentra el
producto, y el resultado es la visualización de una
mancha en la placa que indica la presencia de un
Figura 1. Cromatografía en capa delgada compuesto.
(CCD).
En el caso de compuestos que no absorben cristales de la primera sustancia o
luz UV, la visualización (o revelado) del sustancia A (permanganato de potasio) y
cromatograma requiere utilizar un agente se le adicionó unas gotas de cloruro de
revelador. Este tiene que reaccionar con los metileno y etanol para disolverla, del
productos absorbidos proporcionando mismo modo se hizo con la segunda
coloreados. sustancia o sustancia B (azul de metileno).

Objetivos
Aplicar la cromatografía en capa delgada
como técnica de separación de una mezcla
de componentes.

 Conocer la eficiencia y aplicación

de la CCD.
 Analizar la influencia del eluyente
en la separación cromatográfica.
 Calcular valores de Rf de varias
sustancias. Figura 3. Permanganato de potasio en vidrio de reloj
preparado para la sustancia A.
Parte experimental
En esta práctica se llevó a cabo la
cromatografía en placa delgada de dos
compuestos orgánicos: permanganato de
potasio (KMnO4) y azul de metileno
(C16H18N3ClS), además, de la mezcla de
estos dos: KMnO4 + C16H18N3ClS.

Figura 4. Azul de metileno en vidrio de reloj preparado

para la sustancia B.

Posteriormente, con un tubo capilar, se toma el

Figura 2. Estructuras geométricas del
permanganato de potasio y azul de metileno
respectivamente.
Inicialmente se obtuvo una placa de
cromatografía (fase inmóvil), se trazó con
lápiz una línea inferior a 1 cm
aproximadamente del borde inferior y se
señaló sobre ella tres puntos, de forma que
no quedara uno tan cerca del otro ni del
borde lateral de la placa. Luego, en un
vidrio de reloj se agregaron unos cuantos
líquido de la sustancia A, y sobre el punto
correspondiente ya marcado sobre la placa, se añade
un poco de esta, generando una pequeña mancha
circular; en el siguiente punto se realiza el mismo
procedimiento con la sustancia B, (fig. 5.) y en el
último punto se mezclan ambas sustancias
agregando primero una a la placa y luego la otra.
Seguidamente, en un Beaker que contenía un poco
de eluyente (fase móvil), se introdujo la placa
cromatográfica, y fue tapado con el vidrio reloj para
que el eluyente ascendiera por capilaridad. Antes de
que el llegara al otro extremo de la placa, ésta se
sacó del Beaker y con un lápiz se hizo una señal
indicando hasta dónde llegó el eluyente y se dejó
secar.
Por último, se examinaron las manchas
corridas a lo largo de la placa. No hubo
necesidad de exponer la placa a la luz
ultravioleta ya que las sustancias ya estaban
teñidas y se pudo observar fácilmente.
Figura 5. Sustancia A, B y mix en la placa.
Discusión y resultados
Siguiendo con los procedimientos indicados
por el docente, luego de retirar la placa del
beaker, dejarla secar e iluminarla con luz
ultravioleta esta no tuvo ningún resultado
aparente, por consecuente se preparó una
mezcla de Diclorometanol al 50%, el cual
fue aumentado 10 veces para así lograr que
la fase móvil (líquido) se desplazara hasta la
línea límite de recorrido. (fig. #)
Figura #. Placa de vidrio sumergida en la
solución preparada de Diclorometanol
aumentado 10 veces.
Al finalizar la práctica de cromatografía en
capa delgada los resultados de la experiencia
fueron los siguientes:
Figura #. Resultado final de cromatografía en capa
delgada.
El valor de la constante de Rf se determinó gracias a
la toma de medidas luego de la finalización de los
procedimientos, en donde desde el punto inicial
hasta el centro del recorrido de la sustancia es el
valor de distancia del compuesto, mientras que
desde el punto inicial hasta el límite de la placa es
denominada la distancia fase móvil.
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙
Rf para azul de metileno:
1,05𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,25𝑐𝑚
4,2𝑐𝑚
Rf para la fase móvil mix:
1,2𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,28𝑐𝑚
4,2𝑐𝑚
Conclusiones
- Finalizada la práctica se pudo concluir que, la
cromatografía en capa delgada, funciona como
método de reconocimiento de sustancias que se
encuentran en una mezcla, debido al factor de
retención que cada una de estas posea en
específicos.
- La polaridad del eluyente es un componente
determinante para hallar el factor de retención, de
esta manera, se logró identificar la sustancia
teniendo en cuenta que el permanganato de potasio
es polar y el Diclorometanol, como eluyente, es
apolar, por lo tanto la distancia de la columna
aumentó.

Preguntas
1. ¿Cuáles son algunos criterios que
deben tenerse en cuenta en la elección
de absorbente en una separación
cromatográfica determinada?
Hay varios factores que deben tomarse en
cuenta en la elección de un adsorbente para
una separación cromatográfica determinada.
Desde luego debe ser insoluble en el
disolvente que se va a utilizar para la
separación y no debe reaccionar con las
sustancias que van a separarse ni debe
actuar como catalizador de sus
descomposición, transposición o fluorescente para ver en la lámpara
isomerización, ha de tener un compuesto
uniforme prescindiendo de su origen y debe
ser incoloro cuando sean de localizar
visualmente las unas correspondientes a
compuestos coloreados. El adsorbente no
debe ser ni de grano muy grueso ni muy
fino, el diámetro medio de las partículas
debe ser de unas 8 a 12 micras. El poder
adsorbente de un producto determinado
depende no solo de su naturaleza sino
también del disolvente utilizando en la
preparación del cromatograma. Por tanto no
es posible establecer una clasificación
rigurosa del poder adsorbente relativo a las
distintas sustancias que se pueden utilizar.
Sin embrago se puede establecer
aproximadamente la siguiente clasificación:
adsorbentes muy activos: alúmina con un
contenido de agua pequeña, carbón activado
y arcilla. Adsorbentes intermedios: gel de
sílice, acido silícico, carbonato de calcio,
fosfato de cálcico, magnesia y cal apagada,
adsorbentes débiles: sacarosa, inulina,
almidón y talco.
2. ¿En qué consiste la cromatografía de
CCD preparativa?
La cromatografía preparativa comprende un
amplio campo de aplicaciones, desde el
aislamiento de 1 µg. de muestra para
identificación espectroscópica hasta el
aislamiento de un compuesto puro de una
mezcla de 100 g. La cromatografía
preparativa se diferencia de la técnica
básica en muchos aspectos. La siembra de
la muestra se realiza mediante la ayuda de
una jeringuilla o tubo capilar. La siembra se
realiza a lo largo de una línea recta (existen
en el mercado diverso utensilios para evitar
torcerse). Si al terminar la primera siembra
todavía queda muestra, se seca la primera
siembra y se aplica la segunda, intentando
que ésta quede sobre la anterior, para así
conseguir que el frente sea lo más estrecho
posible. La siembra debe realizarse a lo
ancho de la placa. Una vez sembrada la
muestra se desarrolla la cromatografía. Se
utiliza un adsorbente con indicador
ultravioleta donde han quedado las manchas
de los diferentes compuestos, dichas
manchas se marcan. Localizados los
compuestos, éstos se extraen de la fase
estacionaria, uno a uno, con la ayuda de una
espátula, sobre un papel de filtro u otro
soporte. Posteriormente se coloca cada
componente en un Erlenmeyer, y se mezcla
con un disolvente (metanol). Una vez
disuelto el compuesto se filtra varias veces
para separar el compuesto y la fase
estacionaria. Una vez separado se elimina el
disolvente (destilación), con lo cual se
obtiene el componente separado.
El proceso a seguir es el siguiente: se raya
la placa separando totalmente una pequeña
franja de placa, sobre la cual se aplica el
revelador químico, y a partir de esta franja
se marcan las franjas de compuestos.
3. Usted tiene un compuesto impuro y
quisiera saber cuántas sustancias
están contaminando su compuesto.
Explique cómo lo haría utilizando
cromatografía de capa delgada o de
papel.
Al realizar el procedimiento respectivo para
una cromatografía de capa delgada la cual
separa compuestos orgánicos de una
muestra sirve para determinar si el
compuesto orgánico esta impuro y que
sustancias lo están contaminando. Por
consiguiente en la placa cromatografía de
capa delgada al mirar el extendido de las
sustancias en la placa se mostraran puntos o
manchas al ser absorbida o atraídas con Bibliografía
mayor fuerza por la capa estacionaria, por 1. Durst, H.D. Gokel, G.k. Química
ende entre menos manchas allá en el orgánica experimental. 1995.
extendido menos impura será esas manchas Editorial Reverté. Pag 79.
corresponderán a las sustancias que Barcelona España.
contaminan.
2. Pickering, W.F. Química analítica
moderna. 1980. Editorial Reverté
4. Investigue el nombre que reciben los s.a. Pag 563. Barcelona, Bogotá,
reveladores de yodo y ácido México.
sulfocrómico. ¿Por qué?
3. Cromatografía de capa delgada,
Si los compuestos separados no son separación de los pigmentos de una
coloreados es necesario revelar la posición planta. Alonso Marrugo González
de dichos compuestos, para ello existen dos Profesor Químico- MsC-PhD.
tipos de métodos: químicos y físicos. Universidad de Cartagena.
Métodos químicos: Consisten en realizar
una reacción química entre un reactivo
revelador y los componentes separados,
para ello se pulveriza la placa con los
reactivos reveladores.
Generalmente se utiliza como reactivo
revelador yodo, el cual forma complejos
coloreados con los componentes orgánicos
(con tonos amarillo-marrón), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo
que es conveniente señalar las manchas
aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es
el ácido sulfúrico, que reacciona con los
componentes orgánicos produciendo
manchas negras luego de ser carbonizadas.
También es utilizado el permanganato
potásico, que deja unas manchas de color
amarillo. El tamaño de las manchas no está
relacionado con la cantidad de componente
separado.
Además de estos reveladores generales,
existen otros específicos: 2,4 -
dinitrofenilhidracina (para aldehídos y
acetonas). Verde de bromocresol (para
ácidos carboxílicos). Paradimetil
aminobenzaldehido (para aminas).
Ninhidrina (para aminoácidos).