INTEGRANTES:

 MARITZA ADRIANO (712)

 DENNIS CHAMORRO (719)
 JOEL ALVAREZ ()
INTRODUCCIÓN

Bienvenidos al estudio de la biología molecular, campo de la Biología que resulta sumamente

interesante y fascinante. La información genética dirige el funcionamiento de la célula, determina
la apariencia externa de un organismo y sirve de unión entre generaciones en todas las especies.
El conocimiento de cómo se dan estos procesos es importante para el entendimiento de la vida y
de la biosfera, es por tanto imprescindible en la formación del Biofísico.

Los temas que estudia la genética tienen una relación directa con la biología molecular, la biología
celular, la fisiología, la evolución, la ecología, la sistemática y la etología. Y determina un mejor y
completo entendimiento de estas.

OBJETIVO(S):

GENERAL

 Comprender las leyes propuesta por Mendel y la herencia ligada al sexo.

ESPECÍFICOS

 El alumno adquirirá la información y destreza necesaria para manipular, mantener y

reconocer las cepas de Drosophila melanogaster que se le entreguen para experimentos
posteriores.
 El alumno demostrará experimentalmente la primera y segunda leyes de Mendel y
empleará la prueba estadística de x2 para determinar la probabilidad de que los resultados
observados se apegan a los teóricamente esperados en la segregación fenotípica de la
descendencia.
 El alumno demostrará experimentalmente la segregación de un rasgo cuyo Locus se halla
en el cromosoma sexual (X) y probará que existe diferencia en la descendencia al realizar
cruzas recíprocas en contraste de lo que ocurre con rasgos autosómico.

METODOLOGÍA

EXPERIMENTAL

 Permite explicar fenómenos, establecer relaciones, enunciar leyes que describen el

fenómeno.
ANALÍTICO

 Permite conocer el desarrollo de un evento experimental por sus partes para llegar a un
todo.
EQUIPOS Y MATERIALES:

Recipient
Frascos de Algodón, e de
Vidrio de Gasa o plástico
500 mL Esponja. de 30 cm
x 20 cm .
Fruta (plátano
- manzana –
guayaba)
Acetona Gelatina sin
sabor o Agar -
Agar

Estereosco
Vinagre Eterizador
pio

Foco de 25
Eter Pincel
W.

MATERIAL BIOLÓGICO

 Moscas Drosophila melanogaster tipo silvestre en sus diferentes estadios de desarrollo.

 Cepas mutante de Drosophila melanogaster en sus diferentes estadios de desarrollo: White,
Vestigial, Yellow, Ebony. Star, Brown y Black

MARCO TEORICO:

CICLO DE VIDA Drosophila melanogaster

Se ha designado a Drosophila melanogaster con varios nombres comunes como son: mosca de la
fruta y mosca del vinagre. Phylum: Artropoda Clase: Hexapoda Orden: Diptera Familia:
Drosophilidae Género: Drosophila Especie: melanogaster

El ciclo de vida de Drosophila melanogaster incluye cuatro fases: huevo, larva pupa y adulto. La
duración del ciclo varia con la temperatura de cultivo. A 25o C. el ciclo dura alrededor de 10 días,
pero a 20o C, puede durar alrededor de 15 días. Los cultivos de Drosophila no deben exponerse a
altas temperaturas 30o C. Lo cuál resulta en la esterilización o muerte de las moscas, ni a bajas
temperaturas (10o C. ) lo cual resulta en ciclos de vida prolongados (tal vez de 57 días), y reducir
viabilidad. La temperatura óptima de cultivo es de 25o C.
 Figura 1. Ciclo de la mosca de fruta

HUEVO (0.5 mm.)

Las hembras adultas son capaces de poner huevos dos días después de emerger del estado de
pupa, la puesta aumenta por día durante una semana hasta 50 o 75 huevecillos por día. Los ponen
sobre la superficie del alimento. El huevo es ovoide, con dos pequeñas proyecciones que emergen
de un extremo, éstas son aplanadas y la sirven al huevecillo para que no se hundan en el medio de
cultivo. Los huevos se pueden ver a simple vista sobre la superficie del alimento. El desarrollo
embrionario del huevo tarda aproximadamente 1 día a 25o C. La larva emerge del huevo.

LARVA ( 4-5 mm.)

Es blanca, segmentada y vermiforme. Tiene partes bucales de coloración negra (ganchos

mandibulares) en una región cefálica estrecha, que penetran en el alimento comiendo vorazmente.
No tiene ojos por lo que este animal es completamente ciego. Las larvas tampoco tienen apéndices
y deben empujarse comiendo para dezplazarse por su ambiente. Respiran por tráqueas y poseen
un par de espiráculos visibles (poros aéreos) en los extremos anteriores y posteriores del cuerpo.

La fase larvaria en el ciclo de Drosophila es una de rápido comer y crecer. Consiste de tres
subdivisiones llamadas estadios. El primero y segundo estadio terminan en mudas cada muda
implica una eliminación completa de la piel y partes orales de la larva y es el mecanismo por medio
del cual esta crece. El tercer estadio termina en la pupación. Inmediatamente antes de la pupación
la larva deja de comer, se arrastra hacia una superficie relativamente seca, y se revierte sus
espiráculos anteriores. La fase larvaría dura alrededor de 4 días a 25o C. es ese momento el tercer
estadío y mide aproximadamente 4.5 mm de largo.

PUPA (3mm.)

La pupa es considerada la fase re organizativa del ciclo de las mosca, durante el cual la mayoría de
las estructuras larvarias son destruidas y las estructuras adultas se desarrollan a partir de tejidos
embrionarios llamados anlagen (o también discos imaginables). Estos tejidos embrionarios han
permanecido latentes en el animal desde su diferenciación en el huevo. El animal empupa dentro
de la última piel larvaria, la cual es en un inicio suave y blanca pero gradualmente se endurece y
adquiere un color más oscuro. Los cambios anteriores resultan en el desarrollo de un individuo con
la forma corporal y las estructuras del adulto (imago). La fase de pupa tarda alrededor de 4 días a
25o centígrados, el adulto emerge del pupario.
 ADULTO (2 mm.)

El adulto es considerado la fase reproductiva del ciclo. La mosca emerge o eclosiona del
pupario forzando su salida por el extremo anterior del pupario. En un inicio, la mosca adulta es de
forma elongada con las alas no expandidas. Es una hora, las alas se expanden y el cuerpo
gradualmente adquiere una forma de adulto más definitiva. En un inicio los adultos son de un color
relativamente claro, dentro de las primeras pocas horas se obscurecen y adquieren el color
característico.

Los adultos de D. melanogaster pueden aparearse 6 horas después de haber emergido del pupario.
El esperma es almacenado en las espermatecas y en los receptáculos ventrales de la hembra y es
liberado gradualmente al oviducto a medida que se producen los huevos pasados por el oviducto
a la vagina. La hembra empieza a depositar huevos aproximadamente a los 2 días de haber
emergido, puede depositar hasta 50 a 75 huevos por días durante los primeros días. Después la
producción de huevos disminuye. El promedio de vida de las moscas adultas es de 37 días a 25o C.

REPRODUCCIÓN

Es una especie dioica (con sexos separados), polígama (los machos y las hembras pueden aparearse
múltiples veces) y de fecundación interna. Existe un cortejo bastante sofisticado, previo a la cópula,
que puede variar mucho de especie a especie. Las hembras suelen copular unas 3 o cuatro veces a
lo largo de su vida, aunque son capaces de guardar el esperma de su primera cópula durante toda
la vida.

DIFERENCIACIÓN DEL SEXO

Figura 2. Macho y hembra adultos. Tomada de www.sepiensa.org.mx

Tamaño: Las hembras son generalmente más grandes que los machos.

Forma: En el macho el extremo caudal es redondeado, mientras que en la hembra es alargado y

poco protuyente.

Color: La pigmentación oscura es más extensa en el extremo caudal del macho y los anillos rodean
el abdomen, mientras que en la hembra solo son dorsales

El abdomen de la hembra tiene 7 segmentos, mientras que el del macho tiene solo 5 segmentos.

Los machos tienen un peine sexual que consiste en una fila de aproximadamente 10 cerdas gruesas
en la superficie distal del segmento tarsal basal de la pata anterior.
 Si se requieren hembras vírgenes para una cruza, éstas pueden colectarse 10 a
12 horas después de que terminó la pupación, ya que en este tiempo las hembras
no permiten la cruza.

MEDIOS DE CULTIVO

Drosophila melanogaster crece sobre frutos suaves como la uva, el plátano y la ciruela,
especialmente cuando éstos están demasiado maduros y la fermentación se ha iniciado. Los
adultos y las larvas se alimentan con los jugos de las frutas fermentadas y de ahí que las levaduras
parecen ser un factor fundamental de su dieta. La D. melanogaster puede crecer prácticamente en
cualquier medio de fermentación.

PROCEDIMIENTO:

Medio de cultivo.

Solución 1. Agregar en un recipiente de vidrio o aluminio 500 ml de agua de la llave, póngalos a

calentar en una parrilla eléctrica, Hervir de 10 a 20 minutos), adicionar la gelatina sin sabor (tener
cuidado de agitar durante toda la ebullición)

Solución 2. En una licuadora adicionando una pequeña porción de agua homogenizar la fruta hasta
que tenga una contextura blanda.

Mezclar la solución 1 con la solución 2 y para evitar el crecimiento de hongos adicionar 10 mL de

Vinagre agitar inmediatamente, posteriormente vaciar el medio de cultivo a los frascos
previamente esterilizados (esterilización térmica), secarlos perfectamente vierta en ellos
aproximadamente 2 cm de altura de medio en cada frasco, una vez vertida la solución colocar en
un lugar fresco hasta su solidificación y colocar dentro del frasco un pedazo de cartón en forma de
U invertida para que las moscas puedan descansar y tapar con algodón, gasa o esponja.

MANEJO DE LAS MOSCAS

Una vez que el medio de cultivo esté listo colocar el recipiente en un lugar abierto por un lapso de
tiempo aproximadamente de 24 horas, para que las moscas de la fruta puedan depositarse en el
medio, una vez que se observe la presencia de un número considerable de Drosophila
melanogaster cerrar el frasco para evitar que se escapen.

Para el examen y selección de las moscas el primer paso es anestesiarlas, esto se hace poniendo
unas gotas de éter en el algodón del eterizador y uniendo la boca de éste a la boca de la botella de
cultivo. Debe hacerse pasar a las moscas de un frasco a otro por movimiento; se coloca
rápidamente la tapa del eterizador y se mantiene una forma vertical con la tapa hacia arriba por
30 s. Después de que haya cesado el movimiento de las moscas son transferidas a la placa del
estereoscopio para analizarlas. En caso de que empiecen a reaccionar antes de haber terminado el
análisis se usa el eterizador en el que se han puesto unas gotas de éter y se pone sobre el conjunto
 de moscas por unos segundos. Se debe tener cuidado para evitar una
sobreanestesia que mataría a las moscas.

COMPARACIÓN ENTRE CEPAS MUTANTES Y EL TIPO SILVESTRE DE D. melanogaster.

Para el desarrollo de esta práctica se utilizarán las siguientes cepas de Drosophila melanogaster:

FIGURA 3. Cepas de Drosophila melanogaster:

Una vez que las moscas son anestesiadas se procede a comparar el fenotipo de las moscas
mutantes con el de las silvestres manipulándolas con mucho cuidado y con la ayuda de un pincel
delgado, también realizar la comparación de los sexos de las moscas utilizando para esto los
esquemas adjuntos.

Pasar las moscas de cada una de las cepas a frascos con medio de cultivo diferentes, evitando que
las moscas escapen tapándolos inmediatamente.

PROCEDIMIENTO

PARA LA PRIMERA LEY DE MENDEL

En un frasco con medio de cultivo sembrar 2 hembras silvestres y 2 machos Ebony rotular con la
simbología adecuada la cruza e incluir los datos de la fecha de siembra y el nombre del grupo con
un marcador indeleble.

En un segundo vial realizar la cruza inversa 10 machos silvestres y 10 hembras Ebony. Rotular con
la simbología adecuada la cruza e incluir la fecha de siembra y el nombre del alumno con marcador
indeleble.

Mantener los cultivos a temperatura constante de 25°C anotar cuando se observen los huevos
sobre el medio, las larvas, las pupas y los adultos. Cuando se tengan larvas, sacar y sacrificar a los
progenitores.

Cuando emerjan todas las moscas de los cultivos (F1) observarlas al microscopio estereoscópico
contar y anotar el número de hembras y machos y el fenotipo que presenten.

Sembrar 10 parejas de la generación obtenida en frascos con medio de cultivo nuevo. Cuando se
obtengan los adultos de la segunda generación (F2) observarlas, contar y anotar el número de
hembras y machos de cada fenotipo. Elaborar el reporte de la práctica.

PROCEDIMIENTO

PARA LA SEGUNDA LEY DE MENDEL

En un frasco con medio de cultivo sembrar 2 hembras silvestres vírgenes ébano con alas vestigiales
(e vg) y 10 machos silvestres. Rotular con la simbología adecuada la cruza e incluir la fecha de
siembra y el nombre del alumno con marcador indeleble.
 En un segundo frasco realiza la cruza inversa sembrar 10 machos ébano
vestigiales y 10 hembras silvestres. Rotular con la simbología adecuada la cruza
e incluir los datos de la fecha de siembra y el nombre del alumno con marcador indeleble.

Mantener los cultivos a temperatura constante de 25°C anotar cuando se observen los huevos
sobre el medio, las larvas, las pupas y los adultos. Cuando se tengan larvas, sacar y sacrificar a los
progenitores.

Cuando emerjan todas las moscas de los cultivos (F1) observarlas al microscopio estereoscópico
contar y anotar el número de hembras y machos y el fenotipo que presenten.

Sembrar 10 parejas de la generación obtenida en frascos con medio de cultivo nuevo. Cuando se
obtengan los adultos de la segunda generación (F2) observarlas, contar y anotar el número de
hembras y machos de cada fenotipo. Elaborar el reporte de la práctica.

PROCEDIMIENTO

PARA HERENCIA LIGADA AL SEXO

Realizar una cruza utilizando 10 hembras vírgenes normales y 10 machos con ojos blancos. Al
quinto día eliminar a los progenitores y esperar a que emerja la F1. Observar los fenotipos de las
hembras y de los machos de la F1, y anotar sus observaciones en las hojas de registro. Colocar en
frasco con medio de cultivo nuevo toda la F1

Al quinto día eliminar a los progenitores y esperar que emerja la F2. Observar con ayuda del
microscopio de disección, los fenotipos de las hembras y de los machos. Anotar las observaciones
en la hoja de registro

REPORTE DE RESULTADOS

Anote las diferencias fenotípicas de las cepas mutantes y tipo silvestre observadas. Anote las
características fenotípicas que permiten diferenciar el sexo de las moscas. Dibuje esquemas de las
moscas observadas, haciendo notar las características fenotípicas que permiten diferenciar cepas
mutantes y el sexo de las mismas. Reporte el resultado de las cruzas de la siguiente forma:

Actividad Fecha
Cruza progenitora
Retirar a los progenitores
Emerge F1
Sembrar F1 x F1
Retirar a los progenitores
Emerge F2

GUÍA DE CRUZAS EN EL LABORATORIO

Escribir, con la nomenclatura adecuada, la cruza de los espacios destinados en la figura de la

siguiente para una cruza monohíbrida.

P ♂ Silvestre x ♀ Ebony

Fenotipo Fenotipo

Genotipo FF _ x ff
 Gametos
F
f

Genotipo F1 Ff

Fenotipo Silvestre

F1 X F1 ♂ Ff x♀ Ff

Fenotipo Fenotipo

Gametos F f F f
1 2

Cuadro de Punnett

F
♂ f 2
♀ 1

FF Ff
F 1

f Ff ff
2
 Escribir, con la nomenclatura adecuada, la cruza de los espacios
destinados en la figura de la siguiente para una cruza dihíbrida

P ♂ Silvestre x ♀ Ebony
Fenotipo Fenotipo

Genotipo SSEE _x ssee

Gametos
SE se

Genotipo F1 SsEe

Fenotipo Silvestre

F1 X F1 ♂ Silvestre x ♀ Ebony

Fenotipo Fenotipo

SE Se sE se
Gametos

1 2 3 4 1 2 3 4

BIBLIOGRAFÍA:
Hidalgo Miguel Ángel, Laboratorio de Física; Editorial Pearson Prentice Hall, 2008.
Gutiérrez Aranzeta Carlos, y otros; Introducción a las Mediciones: prácticas de
laboratorio; Instituto Politécnico Nacional, 2008.