PRACTICA DE LABORATORIO

EL CRECIMIENTO POBLACIONAL LABORATORIO

Sub sector: 3er Ciclo Profesor: Jorge Ochoa

Curso: II° A y B Fecha:
Objetivo de aprendizaje:
 Realizar cultivos bacterianos, incluyendo la preparación de los medios de cultivo, la inoculación, el conteo
de bacterias, y el seguimiento de ellas hasta su declive.
 Conocer el comportamiento poblacional de diferentes tipos de bacterias y hongos, relacionándolo con la
importancia que tiene en la naturaleza y en la industria
Integrantes:

INTRODUCCIÓN

Vivimos rodeados de microorganismos, a pesar de que no los veamos; casi todos son inofensivos, sin embargo,
algunos si son capaces de provocar enfermedades.

Existen varias clases de microorganismos: mohos, levaduras, bacterias, actinomicetos, protozoos, algas, virus,
entre otros. Estos microorganismos se hallan capacitados para acometer una extensa gama de reacciones
metabólicas y adaptarse a muchos ambientes diferentes. Las características del ambiente determinan cuáles
especies pueden multiplicarse.

Los ambientes capaces de albergar vida microbiana reflejan el amplio espectro evolutivo de estos organismos. Se
han encontrado especies que viven a temperaturas comprendidas entre el punto de congelación y el punto de
ebullición del agua, en agua dulce y en agua salada, en presencia y en ausencia de aire. Algunos, incluso, han
desarrollado ciclos de vida que incluyen una fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes.

En esta práctica haremos algunos cultivos de bacterias, con el fin de observar el crecimiento bacteriano y su
posterior declive.

PROCEDIMIENTO

A. Preparación del medio de cultivo Materiales

1. Lo primero que debes hacer es esterilizar las cajas de Petri que vas  Diez cajas Petri con tapadera
 Una olla mediana o beaker de 1000 mL
a utilizar; para ello colócalas dentro de un recipiente con agua  Una pinza para crisol
hirviendo (puede ser una olla o un beaker de 1000 mL), y déjalas  Un mechero Bunsen o de alcohol
hervir por unos 7 minutos.  Un trípode
 Una malla de asbesto
 Un beaker de 600 mL
2. Luego, con precaución y utilizando una pinza, sácalas del agua,  Una varilla agitadora de vidrio
colócalas cerca de un mechero encendido, y permite que se  Un sobre de gelatina sin sabor
 Un cubito o sabrosador de pollo
sequen bien (Fig. 1).
 Un refresco de cola
 Un vaso de plástico desechable
 Plástico trasparente para envolver
 Viñetas o cinta adhesiva

Figura 1. Secado de las cajas de Petri en las cercanías de un mechero encendido.

 3. Mientras tanto, en una olla mediana o un beaker de 600 mL, pon a calentar 500 mL de agua y disuelve en
ella un cubito o un sobre de sabrosador (hechos a base de caldo de pollo). Mantenla hirviendo durante 5
minutos.

4. Retírale la llama y disuelve la gelatina sin sabor, cuando el agua aún se encuentre caliente (puedes agitarla
utilizando una varilla agitadora).

5. Antes que se enfríe totalmente la mezcla, vierte aproximadamente medio centímetro sobre las cajas de
Petri que vas a utilizar.

6. Colócale la tapadera hasta la mitad (Fig. 2), y permite que se enfríen hasta alcanzar la temperatura
ambiente, siempre en las cercanías de un mechero encendido (Fig. 1).

Figura 2. Caja de Petri con medio de cultivo.

B. Cultivo de bacterias
1. Procede a realizar la siembra de bacterias (inoculación); para ello pasa suavemente las yemas de tus
dedos por la superficie del caldo de cultivo (Fig. 3). Hazlo primero con las manos tal como las tienes
en ese momento (sin lavar). Deberás hacerlo en dos cajas Petri.

Figura 3. Siembra de bacterias presentes en la mano.

2. Con una viñeta o un trozo de cinta adhesiva, rotula las cajas Petri en las que acabas de hacer la
siembra, como “Manos sin lavar”. Hazlo en la base, por la parte exterior (Fig. 4). Luego procede a
colocarle las tapaderas a las cajas Petri.

Figura 4. Rotulación de las cajas Petri.

3. Lava bien tus manos únicamente con agua; sécalas bien, y procede a aplicarte en las manos gel
desinfectante a base de alcohol; espera a que seque bien.

4. Ahora toca con tus manos dinero, ya sea en monedas o billetes, y realiza el mismo proceso de sembrado
con la yema de tus dedos en otras dos cajas Petri con caldo de cultivo, y rotúlalas debidamente.
 5. Aplica de nuevo gel desinfectante a base de alcohol en tus manos; espera a que sequen bien, y luego toca
cualquier objeto de uso cotidiano, como un pasamanos, la perilla de una puerta, el teclado de una
computadora o de un teléfono, entre otros; realiza el procedimiento de sembrado y etiquetado; cada vez
que hagas una siembra de un lugar diferente, debes desinfectar tus manos.

6. Finalmente, lava bien tus manos con agua y jabón antibacterial; sécalas bien, y procede a realizar el mismo
procedimiento de siembra con tus manos limpias en dos cajas Petri; rotúlalas debidamente.

7. Asegúrate de tapar bien las cajas Petri, y procede a sellar el contorno de cada una de ellas con un
envoltorio plástico (Fig. 5).

Figura 5. Sellado del contorno de las cajas Petri con envoltorio plástico.

8. Deberás tener dos cajas Petri de cada una de las siembras que has realizado; sepáralas de manera que
te quede una de cada una de ellas repartidas en dos set; deberás almacenarlos por dos días; un set
colócalo en un lugar cálido, pero sin que les dé la luz del sol directamente, y el otro set colócalo en un
lugar fresco y totalmente oscuro (por ejemplo, colocándole una caja invertida para evitar que penetre
la luz).

9. Coloca una tortilla o una rebanada de pan dentro de dos bolsas de plástico, y ciérralas bien (Fig. 6).
Almacénalas junto con las cajas Petri: una en un lugar cálido, y la otra en un lugar fresco y oscuro.

Figura 6. Rebanada de pan almacenada en bolsa plástica.

10. En dos vasos de plástico pequeños vierte unos 100 mL de refresco de cola (por ejemplo, Coca cola
o Pepsi cola), y colócales un envoltorio plástico en la abertura (Fig. 7). Almacénalos junto con las
cajas Petri: uno en un lugar cálido, y el otro en un lugar fresco y oscuro.
 Figura 7. Refresco de cola contenido en un vaso con envoltura de plástico.
11. Pasado dos días, observa lo que ha ocurrido en cada caja Petri, comparando el crecimiento de bacterias
en las diferentes siembras que realizaste, y entre las siembras almacenadas en un lugar cálido y las
almacenadas en un lugar fresco y oscuro, pero sin abrir las cajas Petri. Observa también lo acontecido
sobre la tortilla o rebanada de pan y en el vaso con refresco de cola, pero sin abrirlos. Anota todas las
observaciones en tu Cuaderno de Laboratorio.

12. Vuelve a colocar las cajas Petri, la tortilla o rebanada de pan y el vaso con refresco de cola en el mismo
lugar para almacenarlos. Regresa al día siguiente para observarlos detenidamente, comparando con las
observaciones del día anterior; luego vuelve a almacenarlos.

13. Regresa a observarlos de nuevo por dos días más, registrando todas tus observaciones en tu Cuaderno de
Laboratorio, y comparando siempre con lo observado el día anterior.

14. Finalmente, coloca agua a hervir en una olla mediana o un beaker de 1000 mL, retira el sello de plástico
de las cajas Petri con los cultivos y deposítalas dentro del agua hirviendo; mantenlas hirviendo por unos 3
minutos, y luego procede a lavarlas bien para su uso posterior.

15. La bolsa que contiene la tortilla o rebanada de pan y el vaso con refresco de cola puedes descartarlos
directamente en la basura común.

Responde:

a) ¿Por qué se deben colocar las cajas Petri en agua hirviendo antes de ser utilizadas?
b) Al momento de esperar a que se sequen las cajas Petri, ¿por qué se deben colocar cerca de la llama
encendida de un mechero?
c) ¿Por qué se agrega un cubito o sabroseador a base de caldo de pollo al medio de cultivo que preparamos?
d) ¿En cuál de los diferentes cultivos que realizaste se formaron menos colonias de bacterias? ¿A qué se
debe esto?
e) ¿En cuál de los diferentes cultivos que realizaste se formaron más colonias de bacterias? ¿A qué se debe
esto?
f) ¿Por qué se debe evitar que les dé directamente la luz del sol a los cultivos que almacenaste en un lugar
cálido?

g) ¿Qué ambiente es más propicio para el crecimiento de las colonias de bacterias: un lugar cálido y con
claridad, ¿o un lugar oscuro y fresco? ¿Y para el crecimiento de los hongos qué ambiente es más propicio?

h) ¿Qué diferencias puedes apreciar entre las colonias de bacterias contenidas en las cajas Petri y las
colonias de hongos en la tortilla o rebanada de pan y en el refresco de cola?

i) ¿Por qué al cabo de cierto tiempo las colonias de bacterias dejan de crecer y comienza su declive?
¿Ocurre lo mismo con las colonias de hongos?

j) ¿En cuál de las siembras el declive de las colonias de bacterias es más rápido y en cuál es más lento?
Explica tu respuesta.