Práctica 2

Extracción de proteínas totales de muestras de tejido foliar

de vitroplántulas de V. planifolia

Objetivo
Conocer la metodología y fundamentos de la extracción de proteínas en una
muestra vegetal para hacer una electroforesis.

Fundamento
Los primeros marcadores genéticos usados fueron los
marcadores morfológicos y los basados en proteínas.
Éstos últimos resultaron mucho más útiles dado su
mayor nivel de polimorfismo. Dentro de los marcadores
basasdos en proteíanas han sido muy utilizadas las
isoenzimas y las proteínas de reserva de la semilla de
los cereales. Los polimorfismos proteícos han sido
sustituidos por los marcadores de ADN, sin embargo,
siguen empleándose en estudios de diversidad.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las
biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico. Se trata
de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con
fines preparativos.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una
velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico)
con la resistencia al avance (fuerza de fricción o rozamiento) impuesta por el medio
en el que se desplaza. En unas condiciones determinadas de electroforesis, la
diferente movilidad de cada molécula definirá su separación en el espacio; al ir
transcurriendo el tiempo, se van separando progresivamente unas de otras.

Materiales
*hojas de vainilla tratada con ácido salicílico
*mortero con pistilo
*micropipetas y puntas
*tubos ependorff
*gradilla para tubos
*gel de poliacrilamida

Reactivos
*Solución de sacarosa al 20%
*buffer para electroforesis
*marcador para proteínas
*azul de bromofenol

Equipos
*Centrífuga
*Cámara electroforética
*fuente de poder

Observaciones

Materiales y
muestras
1. Se tomó 1.5 ml de
solución de sacarosa al
20% para extracción

Se maceraron las muestras

con ayuda del mortero

2. Se centrífugo a
14000 rpm x 10 min
 3. Se trasvasó 1
ml a otro tubo

4. Se cargó con buffer de cámara 1x, se agregó

también colorante para poder observar mejor los
pozos

5. Se cargó 30 microlitros en los pozos y se conectó la

fuente de poder a 50 volts por 20 min y luego a 100 volts
por 1 hr, después de tiñó el gel con azul de bromofenol
 Se añadió marcador de
diferentes proteínas

Resultados
Los geles no salieron bien y por ende no pudieron visualizarse.

Conclusiones
La extracción de proteínas totales de una planta para electroforesis es un proceso
sencillo pero que requiere del uso correcto de buffers y de seguir a cabalidad el
protocolo, pues hay que eliminar la actividad enzimática y la desnaturalización de
las proteínas, así como purificar la muestra de carbohidratos.
Mediante la electroforesis se puede separas las proteínas de cada muestra gracias
al efecto del peso molecular y de la carga que poseen, de modo que se puede
visualizar en el gel de manera clara y así determinar semejanzas y diferencias.

Referencias
Belén Picó, María José Diéz. (2009) Prácticas de biodiversidad y marcadores
molecuales. Universidad politécnica de Valencia. España.
Herráez A. (s.f.) Electroforesis de proteínas y de ácidos nucleicos. Consultado el 2
de julio de 2019, disponible enhttp://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm