PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

RESUMEN
Se conocieron las técnicas de esterilización y los principios generales de preparación de
medios de cultivo. Los medios de cultivos solidos sintéticos (agar nutritivo y agar PDA)
permiten que la especie microbiológica crezca gracias a su composición y cumpliendo al
menos los requerimientos básicos de nutrientes; con los medios de cultivos se hizo una
siembra por agotamiento de estrías donde al final de la esta se observan con mayor claridad
las unidades formadoras de colonias.
Palabras clave: medios de cultivo, agar nutritivo, agar PDA.

ABSTRACT
The sterilization techniques and the general principles of preparation of culture media were
known. Synthetic solid culture media (nutritive agar and PDA agar) allow the
microbiological species to grow thanks to its composition and at least meet the basic
nutrient requirements; With the culture media, a seeding was made by striae depletion,
where colony forming units are observed more clearly at the end of the season.
Key words: culture media, nutritive agar, PDA agar.

1. INTRODUCCIÓN. MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos

Un medio de cultivo es un conjunto de
nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las
condiciones necesarias para el desarrollo
de los microorganismos. La diversidad
metabólica de estos es tan grande que la
variedad de medios de cultivo es enorme,
no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni
siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Son aquellos que permiten el crecimiento
de una gran variedad de
microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO.
Son aquellos que favorecen el
crecimiento de u determinado tipo de
microorganismo sin llegar a inhibir
totalmente el crecimiento de los demás.
que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado,
inhibiendo el desarrollo de los demás.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son
aquellos en los que se pone de manifiesto
propiedades que un determinado tipo de
microorganismos posee.
CONSTITUYENES HABITUALES
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
A continuación, se da una idea general
sobre algunos de los constituyentes
habituales de los medios de cultivo.
AGAR. Se utiliza como agente
gelificante para dar solidez a los medios
de cultivo. En el agar bacteriológico el
componente dominante es un
polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable
ventaja de que, a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado
como nutriente.
EXTRACTOS. Su preparación consiste
en que ciertos órganos o tejidos animales
o vegetales (p.a. carne, hígado, cerebro,
semillas, etc.) son extraídos con agua y
calor y posteriormente concentrados
hasta la forma final de pasta o polvo.
Estos preparados deshidratados son a
menudo empleados en la elaboración de
los medios de cultivo. Los más utilizados
son el extracto de carne, de levadura y el
de malta.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de
compuestos orgánicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por
digestión enzimática o química de
proteínas animales o vegetales (soja
caseína carne, etc.). Las peptonas son
muy ricas en pépticos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales
minerales.
SISTEMAS AMORTIGUADORES.
Para mantener el pH dentro del rango
optimo del crecimiento bacteriano a
veces, es necesario añadir algunos
componentes al medio de cultivo. Debido
a que la mayoría de las bacterias son
neutrófilos, se suelen emplear sales del
tipo de los fosfatos visaditos ò
bipotásicos u otras sustancias como las
peptonas para prevenir la desviación del
pH.
INDICADORES DE PH. Con el objeto
de poder detectar variaciones en el pH
debido a fermentaciones u otros
procesos, se hace necesario a veces
añadir indicadores acido-base que nos lo
indiquen.
AGENTES REDUCTORES. Con el
objetivo de crear en los medios de cultivo
condiciones que permitan el desarrollo de
los gérmenes microaerofilos ò anaerobios
se añaden estos agentes reductores
siendo, los más empleados la cisteína y el
tioglicolato entre otros.
AGENTES SELECTIVOS. La adición
de determinadas sustancias a un medio de
cultivo puede convertirlo en selectivo.
Así, por ejemplo, la adición de cristal
violeta, sales biliares, acida sódica,
telurito potasico, antibióticos, etc., a la
concentración adecuada hará que actúen
como agentes selectivos frene a
determinados microorganismos.
2. MATERIALES/ METODOS
En la práctica: preparación de medios de
cultivo se tomó un medio de cultivo
sintético (Agar nutritivo o Agar PDA) en
el este caso tomamos agar nutritivo y se
pesó 0.2g con ayuda de una espátula y
una Balanza calibrada, se trasladó a un
beaker con agua destilada y se disolvió,
luego de esto se llevó a una plancha de
calentamiento hasta que hirviera para
homogenizar y finalmente se incubo en
autoclave a 37°C por 24 horas. Con
ayuda de un asa de siembra (previamente
esterilizada con un mechero Bunsen
como dio indicaciones el docente) por
siembra en estría o siembra por
agotamiento con coliformes.
3. RESULTADOS

Figura No. 1. Resultados del Cultivo de
bacterias por método de agotamiento
4. ANALISIS DE RESULTADOS
Lo medios de cultivo utilizados
intervienen en el éxito o fracaso de un
proceso industrial. La selección del
medio de cultivo depende,
principalmente, del tipo de
microrganismo empleado, y el proceso
que se quiere obtener. (Krikorian, 2010).
Por lo tanto, en estas prácticas se
sembraron medios de cultivos de agar
nutritivo, ya que es un medio de cultivo
usado normalmente para todo tipo de
bacterias.
Estos son muy útiles porque
permanecen solidos incluso a altas
temperaturas, además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen
mejor las colonias pequeñas, en un
caldo de nutrientes, la bacteria crece en
el líquido, y aparece como una sustancia
espesa, con colonias difícilmente
observables. El agar nutritivo contiene
normalmente (p/v):0,5% de
peptona;0,3% de extracto de
carne/extracto de levadura; 1,5% de
agar;0,5% de cloruro de sodio; agua
destilada; pH casi neutro (6,8) a 25 °C.
Krikorian, A. D. (2010)., este cultivo se
dejó por 24 horas en incubación.
En la Figura No. 1. Resultados del
Cultivo de bacterias por método de
agotamiento, se observaron unidades
formadoras de colonia gracias a la
aislación al final de la siembra, estas se
aprecian con mayor facilidad y se notan
las diferencias como el color y la forma;
Se recomienda mejorar la siembra de
cepas, para un futuro llevar una
extracción de más calidad. Krikorian, A.
D. (2010).
5. CONCLUSIONES
• Para realizar prácticas en el laboratorio
de microbiología es necesario disponer
medios de cultivos estériles y resulta
necesario conocer la metodología de
preparación esterilización de estos.
• En la práctica se emplearon medios de
cultivo sólidos (agar nutritivo y agar
PDA), cabe resaltar que, para hacer
siembras en el laboratorio, es necesario
que los cultivos al menos satisfagan los
básicos necesarios por el microorganismo
que se va a sembrar.
• Por medio de la técnica por agotamiento
de estrías se observaron unidades
formadoras de colonias, al inicio su
cantidad era mayor, al final de éste las
colonias se aislaron mejor.
6. BIBLIOGRAFIA
• Recuperado de:
https://www.probiotek.com/productos/reactivo
s/medios-de-cultivo-reactivos/agar-
dedextrosa-y-papa/
• Recuperado de:
https://www.probiotek.com/productos/re
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reactivos/agar-nutritivo/
• Krikorian, A. D. (2010). Medios de
cultivo: generalidades, composición y
preparación. Cultivo de tejidos en la
agricultura: fundamentos y aplicaciones.
Cali.
• Srinivasan, D., Nathan, S., Suresh, T., &
Perumalsamy, P. L. (2001).
Antimicrobial activity of certain Indian
medicinal plants used in folkloric
medicine. Journal of
Ethnopharmacology, 74(3), 217-220.
7. CUESTIONARIO
 ¿Qué es el agar y cuál es su
origen?
El agar, también conocido como agar, es
una sustancia gelatinosa formada por
polisacáridos procedentes de la pared
celular de algas marinas. Se considera
una de las herramientas más necesarias
en la rama de biología.
Desde muchos siglos atrás ha sido
utilizada en la cocina de los países de
extremo oriente, aunque no fue hasta la
mitad del siglo XIX cuando su uso se
extendió por Europa, con usos como el
espesado y el aclarado de alimentos tan
variados como los helados y la cerveza,
respectivamente.
Sin embargo, lo que no se suele conocer
es que tuvo origen en la cocina de un
humilde matrimonio alemán.
Desde entonces, su uso está más que
extendido en laboratorios; desde los de
microbiología, en los que se utiliza como
medio selectivo para el cultivo de ciertos
tipos de microorganismos, hasta los de
biología molecular, en los que se utiliza
su porosidad para la separación por
tamaño de algunas partículas.
En 1881, un joven médico, llamado
Walter Hesse, decidió llevar su trabajo
más allá del simple tratamiento de
pacientes de un pueblo rural, en el que
estaba destinado, centrando su atención
también en la bacteriología y cómo la
contaminación ambiental y la falta de
higiene podían dar lugar a la propagación
de enfermedades.
Para ello, recogió varias muestras de aire
y agua, con el fin de cultivar las bacterias
presentes en ellas, pero se topó con un
gran problema al comprobar que la
gelatina que había utilizado para ello se
fundía con las temperaturas cálidas del
verano, haciéndose totalmente líquida y
estropeando todo el experimento.
Apesadumbrado por el problema y sin
saber cómo solucionarlo, un día decidió
compartir su pesar con su mujer,
Angelina Fanny Eilshemius, que
rápidamente extrapoló la situación a los
postres que ella elaboraba en su cocina,
ya que podía cocinar pasteles y gelatinas
sin que el resultado se derritiera con el
calor.
Para ello, la joven utilizaba agar, un
material basado en algas que había sido
utilizado por su familia desde muchos
años atrás. Utilizarlo no parecía nada
descabellado, por lo que Walter decidió
tomar una muestra del preciado
ingrediente, para probar a sembrar sobre
él las muestras que había recogido para
sus investigaciones.
Y cuál fue su sorpresa al comprobar
que, efectivamente, el agar era un
medio de siembra magnífico, pues
aportaba los nutrientes necesarios, a la
vez que se mantenía estable, sin
deteriorarse a causa de las altas
temperaturas o las enzimas secretadas
por las propias bacterias. Además, como
resultado, podía esterilizarse sin
problemas, a la vez que ofrecía
múltiples posibilidades para los cultivos
de todo tipo de bacterias, incluidas las
de crecimiento lento.
Hoy en día existen un sinfín de
opciones dentro del agar, pues se les
añaden otros recursos, como ciertos
antibióticos o colorantes selectivos, que
permiten discernir si en el medio está
creciendo un tipo concreto de bacterias.
 ¿Cuál es la composición de los
medios de cultivo Agar PDA y
Agar nutritivo?
Agar PDA: Tiene la infusión de papa
como fuente de almidones y la dextrosa
son la base para el crecimiento de
hongos y levaduras. El bajo pH (3.5)
evita el crecimiento de las bacterias.
Cuando se va a usar para el recuento de
hongos y levaduras, agregar al medio de
cultivo una vez esterilizado y enfriado
aproximadamente a 45ºC, 14 ml de una
solución estéril de ácido tartárico al
10% para obtener un pH aproximado de
3.5. Sembrar el medio de cultivo por
estría en la superficie o adicionar la
muestra para la técnica de vaciado en
placa. Incubar hasta 7 días a
temperatura ambiente.
PREPARACION AGAR DE
DEXTROSA Y
PAPA: Rehidratar 39 g del medio en un
litro de agua destilada. Reposar 10 a 15
minutos. Calentar agitando
frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para
disolverlo por completo. Esterilizar en
autoclave a 121ºC (15 lb de presión)
durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45ºC. Vaciar de
acuerdo a la técnica a seguir en cajas de
Petri estériles. Cuando se requiera el
medio inclinado en tubo, distribuirlo
antes de esterilizar. Si se acidifica el
medio, no sobrecalentar y fundir solo
una vez, para evitar la hidrólisis del
agar.
Agar nutritivo: El medio contiene
extracto de carne, peptona y agar, siendo
una formulación suficiente para el
desarrollo de los microorganismos. El
extracto de carne proporciona al medio
fuente de carbohidratos, de nitrógeno y
vitaminas. El empleo de este medio es de
acuerdo al tipo de estudio por realizar.
PREPARACION: Rehidratar 23 g del
medio en un litro de agua destilada.
Reposar 10 a 15 minutos. Calentar
agitando frecuentemente hasta el punto
de ebullición durante 1 minuto para
disolverlo por completo.
 Identifique la función
de cada componente
Agar PDA: utilizado para el cultivo de
hongos. Este producto está conforme a
los Requerimientos Armonizados de las
Farmacopeas USP/EP/JP. Es un medio de
propósito general para levaduras y mohos
que puede ser suplementado con ácidos o
antibióticos para inhibir el crecimiento
bacteriano. Es recomendado para uso con
métodos de conteo en placa para
alimentos, productos lácteos y pruebas
realizadas en cosméticos. El Agar Papa
Dextrosa (PDA) puede ser usado para el
cultivo de levaduras y mohos
clínicamente significativos. La base
(infusión de papa) nutricionalmente rica,
estimula la esporulación de los mohos y
la producción de pigmentos en algunos
dermatofitos.

Agar nutritivo: se utiliza para el cultivo

de una variedad de microorganismos en
un entorno de laboratorio. El agar
nutritivo no está destinado a ser utilizado
en el diagnóstico de enfermedades u otras
condiciones en humanos. El agar
nutritivo sigue siendo un medio de uso
general ampliamente utilizado para el
cultivo de microorganismos no
fastidiosos. Si es necesario, se pueden
agregar enriquecimientos a este medio.
El agar nutritivo, modificado mediante la
incorporación de 4metilumbeliferil-β-D-
glucurónido (MUG), se utiliza para la
detección fluorogénica de Escherichia
coli. Cumple con los métodos estándar de
la APHA y la Asociación de Químicos
Analíticos Oficiales (AOAC). El agar
nutritivo se especifica en muchos
métodos estándar para pruebas de
alimentos, agua y otros materiales.