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GUÍA DE PRÁCTICAS
de
FISIOLOGÍA HUMANA
Autores:
Docentes del Curso:
Dr. Pedro Núñez Huamaní
Dr. Enrique Ávila Zamora
Dr. Edgar Daniel Zárate Sáez
(Docente responsable del Curso)
2019-II
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA
OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN
ANIMALES Y SERES HUMANOS.
MANEJO DE ANIMALES DE
EXPERIMENTACION.
Introducción
Definición de Bioseguridad:
Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en
salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biológicos, físicos, químicos y mecánicos.
Agentes de riesgo o causantes de daño: agentes biológicos trasmitidos por ingesta, inhalación, inoculación,
y por contacto directo a través de piel y mucosas.
La Bioseguridad implica una acción de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El
descuido de una persona es el riesgo de todos"
Riesgo Biológico: es la probabilidad de infectarse con un agente patógeno (agente patógeno se llama a
toda aquella noxa que es capaz de producir una enfermedad en la actividad laboral.
Exposición: Es un contacto que implica riesgo con un patógeno capaz de trasmitirse por la vía donde se
está produciendo la exposición.
Propósito de la Bioseguridad:
Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada área de
trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biológico y vigilancia del
cumplimiento de las normas de bioseguridad. Además promover, sugerir y establecer políticas que apoyen
la educación continua de los trabajadores de salud.
PRACTICAS DE SEGURIDAD
Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiológico o ingresa a él debe seguir reglas de seguridad.
Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditación académica,
sino porque consisten en prácticas que otorgan seguridad y protección al personal, alumnos e
investigadores que trabajan en los laboratorios bioquímicos, fisiológicos, bacteriológicos, biológicos,
químicos, etc. Muy especialmente en el campo médico donde trabajamos con muestras ó material
biológico que es considerado potencialmente patógeno ó patógeno. La máxima seguridad y protección es
necesaria en estos casos
PRACTICAS GENERALES
Se prohíbe fumar, comer y aplicarse cosméticos, para evitar la diseminación de agentes infecciosos o
productos químicos tóxicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes
infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo,
mandil, ó la bata de laboratorio. Estas prendas de protección externa no deben usarse fuera del laboratorio.
Los zapatos han de ser de punta y talón cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el
laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden
producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan más
tiempo en la córnea.
Se recomienda el uso de lentes de protección o protectores para la cara a las personas que usan lentes de
contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyería de tipo colgante,
el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras
superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como máquinas rotatorias o
centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier
otra sustancia biológica deberán usarse pipetas manuales automáticas.
DERRAMES . .
Es necesario desarrollar y tener políticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los
empleados acerca de la manera de manejar derrames químicos y biológicos. Existen en el comercio
estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institución el
laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.
LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminación de agentes infecciosos.
Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que éstos tengan huecos
microscópicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.
LIMPIEZA
No debe permitirse que la basura, los desperdicios biológicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se
acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes
etiológicos deben taparse cuando no se estén empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las
superficies de trabajo con algún desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de
laboratorio fisiológico es responsable de mantener el área de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya
servicio de limpieza adicional por parte de la institución.
ETIQUETAS Y SEÑALES
Todos los recipientes que contienen productos químicos deben etiquetarse con claridad, indicando el
nombre del producto y cualquier precaución para su manejo. Las áreas en que se almacenan productos
inflamables, peligrosos o tóxicos y carcinógenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente. Las áreas en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas
claramente con el signo de riesgo biológico.
DESECHO DE DESPERDICIOS
Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biológicos. El desecho de materiales
biológicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes específicas del
Ministerio de Salud Pública.
AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS.
Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo físico de infección potencial para el personal
de laboratorio fisiológico. Todas las agujas desechables y demás objetos punzantes deben colocarse en un
reclpl9nte resistente a la perforación y a prueba de fugas, marcado con el símbolo de riesgo biológico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las políticas de la institución, cuando están llenos hasta la mitad o
las tres cuartas partes. La mayoría de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos
punzantes. Inmediatamente después de usada una aguja deberá incinerarse y para ello existen en la
actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas.Nunca, deberá
reenfundarse ó volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algún dispositivo como
pinzas diseñadas para este fin, para evitar la punción cutánea accidental. Las agujas nunca deben cortarse,
ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros líquidos al medio.
SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS
Tipos de Incendio
En el laboratorio Fisiológico u otros laboratorios biológicos se requieren líquidos inflamables y
combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos también existe el riesgo potencial de incendios
eléctricos y de basura. El científico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de
afrontarlos en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.
Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o papel; los de la clase B
ocurren con líquidos inflamables; en los de la clase C participan circuitos eléctricos energetizados, sin
importar el combustible; y los de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuadocon el fin de controlar de manera
eficiente el fuego y evitar que se éste se extienda.
SEGURIDAD BIOLOGICA
Protección Personal
La dispersión epidémica del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupación
acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el
laboratorio. Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios médicos en general, fisiológicos,
bacteriólogos, biólogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo
para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana
(HIV). En 1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron
recomendaciones para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la
infección por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se
tomen precauciones congruentes al manejar sangre y líquidos corporales de todos los pacientes y las
muestras que se obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para
protección personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos
al manipular sangre y líquidos corporales en el laboratorio. La revisión de los CDC en 1988 recomendó
usar equipo de protección personal para manejar todas las sustancias biológicas y animales. Deben tratarse
todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras
enfermedades además de HBV y HIV que se transmiten a través de diversos líquidos del organismo
humano y de los animales.
En 1991 la OSHA publicó una regulación final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens
(Exposición ocupacional a patógenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrón debe
proporcionar equipo de protección personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos
entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La
regla también indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biológico y señala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposición a
todos los empleados que corran este riesgo.
Además de describir equipo de protección personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de
manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y
descontaminación del equipo.
Derrames
Es necesario que las personas que limpian algún derrame biológico utilicen guantes descartables y bata de
laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vacía desinfectante sobre ellas. Tras
dejarlo reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los
cojinetes absorbentes son útiles para derrames grandes) A continuación se coloca el material contaminado
en un recipiente para riesgos biológicos: bolsas plástico grueso color rojo en el Perú y bolsa de color
negro para basura doméstica.
Después de absorber la mayor parte de material, el área se limpia con un desinfect8nte de fuerza
intermedia o alta, por ejemplo, dilución de Lejía 1:10. La solución desinfectante se absorbe con material
desechable. El área se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar
un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biológico que contenga todos los materiales
necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan
dichas muestras.
SEGURIDAD QUIMICA
Manejo de Animales
La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instrucción
práctica directa. Pueden enunciarse aquí algunos principios generales.
El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. cobayas. ratones)., pequeños
arañazos cuando el animal trata de escapar; pero raras veces intenta éste lesionar al operador. En el caso de
las ratas, las cosas cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir mordeduras
peligrosas, También los monos deben manejarse con cuidado. En cualquier caso, es indispensable que aun
los pequeños arañazos de animales se traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con
material patológico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al
personal contra las consecuencias de la mordedura. Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse
médicamente cualquier lesión, por pequeña que sea.
TECNICA
1. Limpie la piel con una torunda de algodón con alcohol de 70º o con otro desinfectante adecuado
y deje secar.
2. Haga una punción profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estéril desechable. La punción
debe efectuarse de un golpe y rápidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del
lóbulo de la oreja).
3. La primera gota de sangre se elimina porque contiene desechos tisulares. La sangre no debe
exprimirse o se obtendrá una muestra diluida; peso sí puede hacerse presión a distancia del sitio
de la punción. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que
debe presionar sobre el sitio de lesión.
SANGRE VENOSA
Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas antecubitales, pero con frecuencia también se
puncionan las venas de las manos las muñecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes
prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo ó la yugular externa o la femoral) Las venas
deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan. Para
facilitar el examen se usa un torniquete de jebe.
EQUIPO.
La muestras se toman previa desinfección con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19
ó20 x1 (cuanto más bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar
la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtención de sangre para transfusiones).
TECNICA
1. El paciente debe estar acostado o sentado cómodamente y con el brazo apoyado en una mesa o
soporte. Algunas pacientes – en especiales los jóvenes – pueden sufrir malestar o incluso
desmayarse. Por tanto manténgase alerta ante señales como palidez o piel fría.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fácilmente. No efectué demasiada
presión ya que puede detener la circulación arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puño un par veces para obtener mayor distensión de las
venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan.
4. Una vez elegido el sitio de punción se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se
fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el
pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta
entre el pulgar y los tres últimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo índice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como guía. El bisel de la
aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y
dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensación de crujido. Cuando el
acceso a la vena no es tan perceptible, la punción se efectúa en dos tiempos: primero se punza la
piel y luego la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una tracción ligera sobre el
embolo evite realizar una tracción excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de
la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse
ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operación puede producir
hematomas; si se advierte señales de extravasación de sangre a los tejidos, retire la aguja de
inmediato y aplique presión local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puño. En cuanto se
adquiera la destreza necesaria, esta última operación se efectúa cuando la sangre termina de
entrar a la jeringa. El paciente debe mantener la presión con una torunda en el sitio de la punción
y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtención de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un
movimiento de torsión y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la
pared interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas.La sangre se
vacía suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemólisis. Si la determinación que
se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea
obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de 37 ª C para que el coágulo se forme
más rápido. La retracción del coágulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un
aplicador de madera. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.
USO DE VACUTAINER
En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre
venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos están sellados con un tapón de goma y extraen un volumen de
sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapón de goma alcancé
justo la línea guía. La aguja más corta se mete dentro del tapón de goma, pero no penetra y por lo tanto no
rompe el vació. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vacío y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se
retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer
para dosaje de gases arteriales.
SANGRE ARTERIAL
Para la determinación de gases se requiere punción arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el
latido por palpación muy cuidadosa. La punción es necesariamente más profunda y se requiere mayor
cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el médico.
ANTICOAGULANTES
Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico,
Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulación al sustraer el calcio del plasma
sanguíneo por precipitación o fijación en forma no ionizada, e inhibe la activación de los factores de la
coagulación.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulación de la sangre destinada a transfusiones. El
Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica.
La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos
globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con
rapidez formas dentadas en los hematíes, vacuolización en el citoplasma de los granulocitosy artefactos en
los núcleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta mezcla
de anticoagulantes no puede emplearse para determinados químicas de nitrógeno ni potasio.
El citrato trisódico en solución acuosa al 3.8%, se mezcla a razón de 1/9 con sangre para investigaciones
de coagulación. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentración de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal
di sódica o di potásica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el
recuento de las células sanguíneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio del
hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfológicos lo supera, ya que impide la
deformación y artefactos incluso después de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24hs si la sangre se refrigera. También es posible realizar el
recuento de plaquetas aun después de unas pocas horas.
La heparina, a razón de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamaño corpuscular ni el hematocrito. Es el
mejor anticoagulante para prevenir la hemólisis y para las pruebas de fragilidad osmótica. No resulta
satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por
que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teñidas con el colorante de Wright.
CUIDADO, INOCULACIÓN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES Y
DIAGNOSTICO DE SUS ENFERMEDADES
Fundamentos
1. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiológico es indispensable disponer de los
animales apropiados.
2. Los animales habrán de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar instalados con limpieza y
comodidad, así como adecuada y suficientemente alimentados.
3. Pocos métodos de inyección y sangría producen mayor dolor que los similares empleados en los
seres humanos, y todos los métodos operatorios de importancia habrán de efectuarse con el
animal anestesiado. Por otra parte estos animales habrán de ser tratados con la solicitud que
merecen por los servicios que prestan a la humanidad .
Chapas.
Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeñas chapas de aluminio que se fijan a una oreja
de animal por medio de una grapa o un hilo metálico que perfore estos órganos y atraviese también los
orificios de las chapas.
Para los animales de mayor tamaño pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las
casas de artículos veterinarios.
Descripción.
Cuando se use únicamente este método de identificación y haya que alojar juntos en una misma jaula
varios animales, deben seleccionarse los que presenten señales o colores diferentes .Para facilitar el
registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratón ,cobayo o conejo. Este método se utiliza
junto con el de la chapa metálica a fin de asegurar la identificación si la chapa se perdiera. Asimismo,
debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o seña particular .El sexo debe registrarse en la
descripción (macho y hembra).
Señales o marcas para identificación de animales
Los animales pequeños, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintándose la
piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohólicas saturadas de fucsina o ácido picrico).Las jaulas
habrán de rotularse.
PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS
LABORATORIOS DE FISIOLOGÍA
Las personas que trabajan en los laboratorios fisiológicos se hallan rodeadas de múltiples peligros, de
modo especial a causa de las infecciones que pueden contraer durante el manejo de los animales de
experimentación, ó durante el trabajo mismo con ellos como actos quirúrgicos, exposición de órganos, u
otros trabajos que así lo demanden los experimentos fisiológicos, ó al manipular productos sépticos
durante las investigaciones o sufrir quemaduras o la deglución accidental productos biológicos ó
producirse a heridas consecutivas rotura de cristales ,etc. A estos peligros están principalmente expuestos
los investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o distraen mientras trabajan con
animales de experimentación ó con productos infecciosos. ó con ácidos, álcalis, etc.
Las pipetas, tubos de ensayo y demás instrumentos empleados en la experimentación fisiológica también
se desinfectarán con una solución lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarán inmediatamente por
ebullición durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal.
Los recipientes, láminas portaobjetos u otro material contaminado con orina ò heces ò secreciones
biológicas de los animales, ò contaminados con productos biológicos humanos, no se volverán a tocar por
ningún concepto sino que se someterán a un proceso de desinfección inmediata, como hemos indicado
líneas más arriba
Los calentadores y demás aparatos eléctricos se comprobarán con frecuencia para verificar la exactitud de
su funcionamiento, reparando sin pérdida de tiempo sus averías a fin de evitar cortos circuitos incendios
.El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables .Siempre se
verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio , igualmente se
asegurará de cerrar la llave del balón contenedor del gas ó la llave general del gas del Laboratorio de ser el
caso. El éter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto eléctrico. Es
obligación del servicio de mantenimiento realizar revisiones periódicas de mantenimiento preventivo.
FISIOLOGÍA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE
FRAGILIDAD OSMÓTICA
Introducción
Todas las células del organismo están rodeadas de una membrana limitante, a través de la cual obtienen
sus alimentos y el oxígeno y excretan sus productos de deshecho y el C02 resultante de su metabolismo.
La membrana celular tiene propiedades bien establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan
y solo deja salir las secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras
palabras, es semipermeable. Estas funciones las realiza a través de diversos mecanismos, que hemos
revisado con detalle en las clases teóricas. En la presente práctica trataremos de una de ellas que es la
Osmosis. En general la osmosis significa el paso de líquidos y solutos a través de una membrana
semipermeable .Cuando dos soluciones de diferentes concentraciones están separadas por una membrana
semipermeable, el solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes de que rigen el
fenómeno de la ósmosis.
El agua es transportada a través de la membrana celular por una fuerza hidrostática llamada presión
osmótica, dicho de otro modo, la presión osmótica es la fuerza de atracción que ejercen las partículas
sobre el agua atrayéndola .La osmolaridad depende del número de partículas que se encuentran es
solución .La Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O , en medicina usamos el sub múltiplo
miliOsmol /Kg H20
Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partículas que se encuentran en 1
Litro ó Kg de solución. Cada partícula (átomo) ejerce una presión osmótica independientemente; por
ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presión osmótica de 1 Osmol /kg
agua; en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercerá una presión Osmótica de dos
Osmoles debido a las dos partículas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )
La capacidad de una partícula para producir un flujo de agua a través de la membrana celular se llama
tonicidad.
Una solución extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la célula haciendo que ésta se
hinche se llama hipotónica (Hipo osmolar)
Una solución que permite que el agua fluya hacia fuera de la célula se llama hipertónica. (Hiper osmolar)
La membrana del glóbulo rojo nos servirá en la presente práctica para demostrar este fenómeno y
asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos límites de resistencia normales a variaciones de la
tonicidad en el medio interno.
Aplicación clínica.
Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan
hemólisis por mayor fragilidad de la membrana , son defectos genéticos heterogéneos que afectan a las
proteínas constitutivas de la membrana del eritrocito .La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la en
la cual se ha demostrado una disminución de la proteína membranal Espectrina del hematíe, y el grado de
déficit de la proteína Espectrina parece asociarse con la gravedad clínica de esta enfermedad, pues los
hematíes son muy frágiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.
Fundamento
Se llama resistencia globular osmótica a la que presentan los hematíes suspendidos en soluciones salinas
hipotónicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y suspendemos dentro de ellas los hematíes
veremos que éstos se conservan sin alteración durante varias horas, y que una vez sedimentados
(espontáneamente ó por centrifugan), el líquido que sobrenada es claro y transparente como la misma
solución salina. Pero si efectuamos suspensiones de hematíes en soluciones de cloruro sódico a
concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una determinada
concentración empiezan a destruirse ,liberándose la Hb, lo que confiere al líquido una ligera coloración
rojiza que no desaparece por centrifugación .E esto se le llama hemólisis inicial o resistencia mínima, que
normalmente se presenta entre las concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemólisis de los hematíes va
aumentando en cantidad a medida que la solución de cloruro sódico va siendo más hipotónica hasta
presentarse una hemólisis total. Esta hemólisis total se observa entre las concentraciones de 0.34 a 0.30 %
Esta práctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glóbulos rojos a la hemólisis en
presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotónicas a temperatura ambiente y
veremos en cuál de ellas se presenta hemólisis inicial y total.
.
Reactivos y Equipos Necesarios
1.-Solución salina al 0.75 %
2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01
10 ml al 0.1
5 ml al 0.1
3.- Micropipetas de 0.1 ml
4.- Fiola de 100 ml
5.- Espectrofotómetro
6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada ó hematíes lavados.
7.- Agua destilada
8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde
Método
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 11, según la tabla adjunta,
haciendo las diluciones con agua destilada según lo indicado:
2.- Una vez hecha la distribución anterior, mezclar bien, por inversión cada uno de
los tubos.NO OLVIDAR ESTE PASO.
3.- Recién ahora, después de haber mezclad, añadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los
tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversión suave.
5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar
por inversión suave.
6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.
Examinar por simple inspección visual en cual de los tubos se inicia la hemólisis (hemólisis leve),
generalmente a partir del tubo Nº 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo
del líquido) y luego examinar en qué otro tubo la hemólisis es intensa (aproxim. en 0.36 % NaCl ).
En el Tubo Nº 19 se producirá hemólisis total y corresponde al 100% de Hemólisis.(Destrucción total de
los hematíes y no deja nada de sedimento).
Valores Normales:
Referencias Bicliográficas
S., Mellor Leslie ,J. Inwood, Linch R. Medical Laboratory Technology.W.B.Saunders Co.Phila.USA.
1996.
Clinical Diagnosis by Lab Methods. Todd. Stanford, W.B Saunders Co. Phila. USA. 2002
Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .Reich P.MD. Little Brown Co. BostonUSA.2004.
Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate.Lea Febiger. 1999.
Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. 1998.
Diagnótico Hematológico .Laboratorio y Clínica. Ciscar y Farrera. Edit.Jims 1998.
INTERCAMBIO DE LÍQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A
TRAVÉS DE MEMBRANAS
Introducción
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a través de los
epitelios dérmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular.
Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusión pasiva .Otras requieren consumir
energía para moverse a través de las membranas contra sus gradientes de concentración. Estos fenómenos
de difusión pasiva y transporte activo permiten la creación de una composición orgánica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente, sino que permite el
pasaje de muchas sustancias incluyendo el agua, el sodio, el cloro y la glucosa. La dirección del
intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentración de los solutos.
Cuando cambia la composición del liquido extracelular los riñones excretan las sustancias presentes en
excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.
Material
17 sapos
Beakers
Agua destilada
Solución de NaCI 7.5%
Solución de dextrosa al 15 %
Balanza
Urinómetro
Tubos de ensayo
Pipetas de Pasteur
Goteros
Pinzas mosquito
Método
Experimento Nº 1: Preparación del animal
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente húmedo para que
estén adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vacía la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina
formada en condiciones experimentales. Sise coloca un sapo en una solución de dextrosa y luego se
encuentra dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a través de la piel hasta alcanzar una
concentración suficiente en liquido extracelular que obligase a los riñones a excretar el exceso en la
orina.Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones
para producir cambios en la composición de los líquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y después de haber vaciado sus vejigas. Los cambios
de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y después de la exposición a distintas
condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la
piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Después de esto se pesa al sapo y se
registra su peso.
Experimento Nº2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solución en el saco linfático dorsal. Esta solución puede ser hipotónica,
hipertónicas o isotónicas; de cloruro de sodio o dextrosa, también inyectaremos en algunos casos agua
destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el liquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de líquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de él. El líquido debe
cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyección debe permanecer por encima del nivel .Se
tapa el beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Se registra los cambios
obtenidos:
Saco Linfático
Baño (Inyectar 4ml)
tubo Baño Saco Peso del Glucosa Peso al final Glucosa pos
externo linfático sapo al basal del experimento
(inyectar inicio del (inicial) experimento (final)
4 ml). experimento
2* NaCl Agua
0.68%
4 agua NaCl
0.68%
6* NaCl NaCl
1.36% 0.68%
8 NaCl NaCl
0.68% 1.36%
10 Dextrosa Agua
3.87%
12 agua Dextrosa
3.87%
14* Dextrosa Dextrosa
7.74% 3.87%
16* Dextrosa Dextrosa
al 3.87% al 7.74%
Experimento Nº 3
Después de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vacía comprimiendo
el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la
ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso después de recolectar la orina
del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento.
Se debe tomar en cuenta el peso después de inyectar los 4ml.de solución en los sacos dorsales .Se calcula
el porcentaje de variación de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina
formada durante el experimento.
Material
Sapos grandes Tabla de fijación para batracios
Miógrafo Alambre de cobre
Estimulador eléctrico Alambre de zinc
Equipo de disección Quimógrafo
Método
Experimento N°1
Se anestesia al sapo por destrucción del cerebro y la médula espinal.
Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la región anterior homóloga al tronco. Se continúa la incisión
de la piel en cinturón. Una vez completado el cinturón, se desprende la piel de un tirón hacia abajo. En la
región dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.
Se levanta el urostilo con la pinza de disección y se seccionan los elementos paravertebralmente y en
dirección cefálica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso
transverso de la novena vértebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen
por tres raíces más arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios ciáticos. Por debajo se
observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.
Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios
ciáticos.
Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios ciáticos y se realiza una ligadura lo mas proximal
posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reacción muscular.
Se secciona el nervio proximalmente a la médula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda
del hilo se puede efectuar la disección del nervio ciático, no siendo necesario manipularlo con ningún
instrumento.
Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el músculo piriforme, después se lo aísla por disección
roma entre el semimembranoso por dentro y el bíceps por fuera. A todo lo largo del nervio se irá
seccionando sus colaterales y se lo aislará hasta la rodilla, comprobando que exista conexión funcional
entre el nervio y el músculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se
seque humedeciéndolo constantemente en solución fisiológica.
Experimento N° 3
Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrándola
fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la disección de la aponeurosis, que en
el sapo se continúa hacia la pierna por el tendón de Aquiles que tiene un sesamoideo.
Se libera el tendón de Aquiles por disección roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su inserción
superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fémur un poco por encima
de esta. Se libera el fragmento de fémur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.
Con este mismo hilo se fija al miógrafo. El hilo amarrado a la aponeurosis plantar se fija a la otra barra del
miógrafo.
Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la preparación neuromuscular.
Con el estimulador eléctrico se realiza el estimulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente.
Humedecer constantemente la preparación con un gotero.
Experimento N° 5: tetania
Se realizan estimulaciones intensas y continuadas y se obtiene una serie de contracciones sucesivas antes
de que el músculo alcance su relajación completa. Se continúa hasta obtener una contracción permanente.
Se colocan 10 gramos de peso, con lo que la línea basal del quimógrafo desciende. A continuación se
estimula al músculo y se obtiene un trazado. Se aumentan otros 10 gramos de peso con lo que la línea
basal desciende aún más. Se vuelve a estimular el músculo y se obtiene un trazado.
Repetir varias veces el procedimiento, incrementando sucesivamente el peso.
Discusión
PLACA MIONEURAL
1. Introducción
La placa mioneural media la transmisión de la señal de la fibra nerviosa motora a la célula muscular. Salvo
en el caso de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A
medida que el axón del nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una
fibra muscular. Estás ramas terminales son de poco diámetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad
de conducción en ellas es baja. La placa mioneural es una discontinuidad entre la célula nerviosa y la
muscular donde la transmisión del impulso de despolarización queda a cargo de un mediador químico, la
acetilcolina.
La terminal presináptica posee vesículas sinápticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y
presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje.
La generación del potencial de acción da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la
concentración citosólica de calcio. Este incremento promueve la fusión de las vesículas sinápticas con la
membrana citoplasmática del rafe sináptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina actúa sobre receptores
nicotínico presentes en el miocito y produce despolarización de la membrana celular muscular. Este
fenómeno es denominado potencial de la placa terminal.
Este potencial de acción excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad
muscular existe además una vía inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentación
negativa que mejora la resolución espacial de la acción neural. Esta vía inhibitoria provee un mecanismo
para evitar la contracción muscular persistente.
El axón de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una
rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer nódulo de Ranvier,
permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Está rama forma sinapsis
con interneuronas que se encuentran en la región ventromedial del asta anterior y son denominadas células
de Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas α, tanto hacia aquella en la cual se originó la
primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas,
representadas como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisión de este sistema
inhibitorio está a cargo de la glicina.
Material
Sapos grandes Succinilcolina
Miógrafo Estricnina
Estimulador eléctrico Vecuronio
Equipo de disección Neostigmina
Tabla de fijación para batracios Atropina
Método
Experimento N° 1
Se l anestesia a un sapo por destrucción del encéfalo. Se diseca y se expone el nervio ciático en la cara
posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio.
En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del músculo y
de la arteria, dejando libre al nervio.
Se aplica estímulos de baja intensidad a los nervios ciáticos y se va incrementando su intensidad hasta
obtener la contracción muscular.
Luego se estimula directamente al músculo gastrocnemio a través de una incisión hecha en la piel.
Experimento N° 2
Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de unos minutos se
procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.
Experimento N° 3
Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a
estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.
Experimento N° 4
Se administra 1 mL de solución de atropina y neostigmina en el saco linfático dorsal del sapo. Luego de
unos minutos se procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos.
Discusión
La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la
acetilcolina, produciendo apertura de los canales iónicos y despolarización persistente. Inicialmente puede
producir excitación, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el
bloqueo de la transmisión neuromuscular y parálisis flácida.
La estricnina actúa a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las células de
Renshaw sobre las motoneuronas α, en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que
bloquea los efectos inhibitorios de la glicina.
La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las
tetánicas. Origina una contracción muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular
persistente.
PRÁCTICA DE SHOCK ESPINAL PARA ESTUDIAR LOS
REFLEJOS EN EL SAPO
Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablación medular.-
Material
Sapo
Beakers, estilete de acero,
Carrete de Runckford
Acido sulfúrico diluído 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
Suero fisiológico
Equipo de disección, guantes látex descartables
Sol.Ringer para batracio.
Método
Experimento N° 1: PREPARACIÓN DEL SAPO ESPINAL
Observar la postura, los movimientos espontáneos y respuesta a los diversos estímulos, movimientos
respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotación y posición de espalda del sapo normal.
Se fija al animal con la mono izquierda y se determina lasa siguientes líneas: una línea transversal a nivel
del límite posterior de la membrana timpánica ( A-B), Una segunda línea entre el ojo y la membrana
timpánica (X-Z). Se toma una tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo
decapita con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia
abajo, a lo largo de la línea X-Z Realizar hemostasia por compresión y realizar las mismas observaciones
que en el sapo normal. Este es el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la posición normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulación eléctrica y luego realice el
corte a lo largo de la línea A-B.Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se
efectúa el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivará la depresión motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efectúa el
pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivará las respuestas motoras.
Experimento N° 6
Se repite las experiencias anteriores empleando el carrete de Runckford y administrando estímulos
eléctricos de intensidad creciente.
Experimento N° 7
Se empapa un papel de filtro en ácido acético puro y se lo coloca en el dorso del animal
Se observa y se registra las características de la respuesta.
Experimento N° 8
Se hace una incisión en el abdomen y se expone con mucho cuidado una parte del intestino. Se estimula
cuidadosamente con el carrete de inducción.
Se observa y se registra las características de la respuesta. Al principio se observará una ligera contracción
de la musculatura abdominal que aumentará al incrementar la intensidad del estímulo hasta llegar a
desarrollar una respuesta flexora amplia.
Experimento N° 9
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la médula. Después se repite las mismas
estimulaciones hechas previamente.-
REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE
Introducción
Los mecanismos reflejos están constituidos por un órgano receptor, un órgano efector y una red de
comunicaciones entre ambos. La acción refleja se inicia por un estímulo de entrada y tiene como resultado
una respuesta de salida. La acción refleja abarca el reflejo axónico sencillo hasta los reflejos complejos en
los que existe intervención cerebral.
El sistema nervioso comprende un gran número de arcos reflejos. Cualquier estímulo produce una
respuesta. El estímulo puede originarse en los órganos internos y afectar la parte visceral del sistema
nervioso. El sistema puede originarse en el exterior y afectar la parte somática del sistema nervioso. Un
mismo arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somáticas.
Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos somáticos pueden ser
percibidos concientemente. Muchos reflejos pueden considerarse como parte de un programa, puesto que
la respuesta adecuada parece estar prevista dentro del sistema nervioso.
Los reflejos espinales, que requieren transmisión del estímulo desde la periferia hasta la médula y de allí
regresar al órgano efector, son de este tipo. Los reflejos espinales no requieren de intervención del sistema
nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya médula se ha seccionado por encima de la
localización de las neuronas de los nervios correspondientes.
Las inserciones tendinosas de los músculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala
distensión y envían la información al sistema nervioso central sobre la posición de un músculo o de un
miembro. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensión rápida y brusca, mandan
impulsos a la médula espinal y, a través de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el músculo.
Esta neurona manda impulsos al músculo y produce una sacudida rápida.
La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitación de la médula
espinal. Esta facilitación puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.
Material
Sujeto de prueba Martillo de reflejos
Método
Experimento N° 1: reflejo rotuliano
Se sienta al sujeto en una posición cómoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por
palpación, se localiza el tendón rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta
adecuada es la contracción del cuádriceps, lo que produce extensión de la pierna.
Discusión.
EVALUACIÓN DE LA PERCEPCIÓN SENSORIAL Y SENSACIONES
NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR.
Introducción
La estimulación de un receptor táctil de la piel es transmitida por la vía del asta posterior (sensitiva) hasta
la corteza somestésica. En esta la excitación del receptor activa un determinado número de neuronas que
constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma máxima y las de la
periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulación.
Las capacidades táctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos
de estimulación sobre la piel.
Las diferencias en las capacidades de discriminación en las diferentes zonas del cuerpo se deben al
número de receptores que exista en esa zona y a la representación cortical que éstos poseen. Los dedos
están profusamente poblados de receptores y el área de corteza a que llega la información proveniente de
ellos es amplia, de ahí su mayor posibilidad de discriminación. Otras zonas del cuerpo tienen menor
densidad de receptores siendo éste uno de los factores que conlleva a que la información que llega al área
de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminación.
Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitará de forma máxima al centro de su
campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante será una excitación
mayor, aunque se mantienen los máximos de excitación separados.
El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y frío, que pasan del frío glacial, al frío, al fresco,
a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante.
Objetivos
1. Discriminar procesos y modalidades de percepción sensorial en el ser humano de tal manera que
pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribución anatómica de los receptores cutáneos y la importancia fisiológica de
dicha distribución.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas observaciones deberán ser
correlacionadas con sus conocimientos neuroanatómicos y neurofisiológicos.
Materiales
- Sello especial
- Hoja de papel
- Pelo de cerda (pelo de Von Frey)
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento
1. Por medio de un sello especial marcar un área en la piel de un compañero: cara, dorso del cuello,
antebrazo, dorso de la mano.
3. Luego el sujeto experimental deberá cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento
sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presión en cada uno de los cuadrantes del
área delimitada por el sello.
4. El sujeto experimental deberá reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de
cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).
6. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.
Resultados
Materiales
- Compás de doble punto.
- Regla.
- Sujeto experimental (alumno 1).
- Sujeto experimentador (alumno 2).
Procedimientos
Para la realización de estos experimentos los estudiantes se dividirán por parejas, actuando cada uno como
sujeto experimental y como experimentador.
1. Indique a su compañero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del compás de forma tal que lleguen simultáneamente al área de piel
estimulada. Se deberá estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separación de las puntas del compás se aplicarán de forma tal que la diferencia
entre ellas sea diferente y, alternante, manteniéndose constante para cada zona corporal esto es
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicación de las agujas, pregunte al compañero cuantos puntos discrimina y anote su
respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.
Resultados
Area de la Piel Distancia de separación de las puntas del compás ( cm )
Estimulada 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Yema de los dedos
Antebrazo
Cara
Dorso del Cuello
Dorso de mano
SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIÓN
DEL UMBRAL DEL DOLOR
Introducción
El dolor es un mecanismo de protección y por tanto puede definirse como una respuesta de defensa
corporal, el cual aparece siempre que un tejido está siendo lesionado y obliga al individuo a reaccionar
para suprimir el estímulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e inmediatamente
retiramos el brazo para evitar un mayor daño tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en términos conductuales, tales como el retiro de la fuente del
estímulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como el quejido y la expresión del dolor; y puede
haber una respuesta fisiológica como cambios en la presión sanguínea, sudoración y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud varía con la intensidad del estímulo. Todo ser
viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel, denominado umbral, en que el dolor es
insoportable. El dolor puede también ser socialmente determinado, se dice que hay grupos étnicos más
sensibles al dolor que otro, y el sexo femenino es más resistente al dolor que el sexo masculino.
El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rápido, que aparece en menos de una
décima de segundo, no se percibe en los tejidos más profundos del cuerpo, se transmite a través de fibras
de tipo A y la señal dolorosa llega al sistema nervioso central vía el haz neoespinotalámico. 2) Dolor
Lento, aparece después de un segundo o más y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o
minutos, suele ir acompañado de destrucción tisular, se percibe en la piel como en cualquier órgano o
tejido profundo, se transmite a través de fibras tipo C y las señales dolorosas llegan al sistema nervioso
central vía el haz palioespinotalámico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vías neurales específicas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de estímulo al cual
responden y básicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estímulos mecánicos muy intensos de la piel como apretar,
pellizcar, pinchar, etc. También pueden responder a estímulos térmicos repetitivos, entre 45° y
55°C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10°C, y altas temperaturas, por
encima de 42-45°C, y asimismo responden a estímulos mecánicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estímulos dolorosos mecánicos, térmicos y químicos.
El estímulo doloroso (E) actúa sobre un terminal nervioso que lleva su axón hacia la neurona sensorial
primaria (1) en las astas posteriores de la médula espinal. El mediador excitatorio de esta información
dolorosa es la sustancia P, aunque también pueden participar otras sustancias como el ácido glutámico, la
somatostatina y el polipéptido intestinal vasoactivo (VIP).
Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisión del dolor (2) ascienden en dos tractos
diferenciables tanto anatómica como funcionalmente; el tracto Páleo-espino-talámico con proyecciones
amplias y difusas; y el tracto Neo-espino-talámico con proyecciones menores y circunscritas. La vía
neuronal del neo-espino-talámico es responsable de la localización certera en la superficie corporal de los
dolores agudos, siendo pequeño el número de las fibras que la componen. Los axones del Páleo-espino-
talámico se enlazan sinápticamente con neuronas del tronco encefálico en especial con la información
reticular tegmental y los cuadrigéminos (Tracto espino-tectal), mientras que otras de sus fibras alcanzan
directamente a los núcleos talámicos intramamilares. Hasta este nivel no hay participación de la corteza
cerebral en las sensaciones del dolor.
En el tálamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los núcleos
intramamilares del tálamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza
cerebral. Igualmente existen neuronas de tercer orden en el núcleo ventro-basal y grupo posterior del
tálamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Es aquí, donde ocurre la
modulación del dolor, y donde socioculturalmente puede variar la expresión del dolor
EXPERIMENTO N° 1: SENSACIONES TÉRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR
Materiales: Hervidor eléctrico con agua ,termómetro y gotero.
Procedimiento
1. Introducir el termómetro en el hervidor eléctrico y registrar la temperatura del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro eléctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas
en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentación perciba un cambio en la
temperatura del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano
sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs. Temperatura y determine el umbral del dolor.
Resultados
TIEMPO (MIN) TEMPERATURA °C DOLOR
Materiales
- Tensiómetro.
- Cronómetro.
- Sujeto Experimental (alumno 1).
- Sujeto Experimentador (alumno 2).
Procedimiento
1. El sujeto de experimentación deberá sentarse cómodamente, colocando el brazo sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazón.
2. Coloque el manguito del esfigmomanómetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de
manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presión de 200 mm
Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentación que abra y cierre rítmicamente ambas manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el
dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema, abriendo la válvula de la pera insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.
Resultados
BRAZO
Derecho Izquierdo
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor
Marco Teórico.
Anatomía.
Rol Fisiológico.
Vestibulocerebelo
Espinocerebelo.
Cerebrocerebelo.
La Prueba del talón rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocará
con el talón de un pié la rodilla del la otra pierna, lo debe hacer en forma precisa, exacta,
enseguida se le pide que descienda el talón bordeando la tibia de la pierna opuesta y no
debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pié. Si tiembla, duda ó zigzaguea el
talón , es anormal.
Con los dedos de la mano contraídos se le pide que con el índice extendido se toque la
punta de la nariz y luego el lóbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados.
Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la
distancia.
La investigaremos con un voluntario de pié, con los pies juntos y las palmas de las
manos adosadas al cuerpo(en actitud de “firme”).
Evaluar Disimetría
Evaluar Disdiadococinesia
Introducción
El sistema nervioso autónomo comprende dos grandes divisiones antagónicas: sistema simpático y
parasimpático, relacionados a respuesta de stress y antiestrés.
Se emplea el sapo para observar los efectos simpáticos y parasimpáticos en la actividad cardiaca.
Material
Sapos grandes Algodón
Conejos Jeringas descartables
Adrenalina Suero fisiológico
Acetilcolina Electrocardiógrafo con juego de agujas de metal
Atropina Atenolol
Tabla de fijación para batracios
Pilocarpina Solución de Ringer para batracios
Equipo de disección
Método
Experimento N° 1
Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y la medula espinal. Colocar al animal en la tabla de
fijación. Abrir el peto esternal y exponer el corazón. Humedecer periódicamente con la solución de Ringer
para batracios. Conectar el electrocardiógrafo por medio de las agujas de metal y obtener un trazado
electrocardiográfico basal. Instilar una gota de solución de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un nuevo
trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.
Experimento N° 2
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar dos gotas de solución de Adrenalina al
1/2000 y obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N° 3
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solución de Atenolol y
obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuación instilar dos gotas de solución de Adrenalina al 1/2000 y obtener
un nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos.
Experimento N° 4
Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solución de Atropina al
0.1% y obtener un trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos. A continuación instilar dos gotas de solución de Acetilcolina 1/5000 y
obtener un nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N° 5
Instilar 1 gota de Pilocarpina en el ojo derecho de un conejo y una gota de solución de Adrenalina en el
ojo izquierdo.
Discusión
FISIOLOGÍA
CARDIOVASCULAR
1.- Fundamento
El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad
que le permite al corazón trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo.
Tiene inervación autónoma y sistema de conducción eléctrica organizada.
La actividad eléctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y
graficarse en ondas por medio del Electrocardiógrafo. Existe una correlación entre la actividad eléctrica y
el ciclo cardiaco.
2.-Objetivos
a. Reconocer la anatomía del corazón y vasos
b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-características del músculo cardiaco
c. Detectar la actividad eléctrica del corazón (Electrocardiograma)
d. Relacionar la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estímulos físicos y químicos (adrenérgicos y colinérgicos) sobre el
corazón
f. Conocer el efecto vagal
3.-Materiales
- Animal para experimentar- sapo - Tablilla de fijación
- Electrocardiógrafo - Tubos de ensayo (03)
- Quimógrafo - Agua caliente (40°), fría (80°)
- Miógrafo para cardiografía por suspensión - Sol. Ringer.
- Carrete de estimulación eléctrica - Adrenalina 1/2000
- Equipo de disección y 2 pares de guantes) - Acetilcolina 1/5000
- Sol. CIK 1% - Sol. C12Ca 1%
- Propranolol 1/1000 - Atenolol 1/1000
4.-Experimentos
4.1 N° 1: Exposición del corazón-anatomía- ciclo cardiaco
- Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal
- Colocar al sapo en la tablilla en decúbito dorsal-fijarlo con alfileres
- Cortar la piel del tórax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porción media
del abdomen
- Humedecer permanentemente las vísceras y tejidos con Sol. Ringer
- Reconocer la punta del esternón y cortar por su lado izquierdo
- Con tijera cortar el esternón en su línea media
- Exponer al corazón e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazón y vasos-
reconocer las fases del ciclo cardiaco
- Colocar el Electrocardiógrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco
4.2 N° 2. Experimento de Gaskel- Estímulo físico (temperatura) al corazón
- Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared
posterior del corazón.
- Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurículas y Ventrículo)
- Con tubo de ensayo (agua fría) tocar el Seno venoso y observar los latidos
- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente;
observar latidos
- Interpretar los eventos que acontecen
4.3 N° 3. Cardiografía directa por suspensión- Efecto Vagal y Farmacológico
Fase A: Disecar el nervio vago derecho:
- Cortar piel y subcutáneo hasta llegar al ángulo externo del maxilar
- Identificar y cortar y transversalmente al músculo cutáneo pectoral derecho
- Colocar el brazo derecho a 45° con respecto al eje del cuerpo
- Observar debajo de la mandíbula a dos nervios :glosofaríngeo(lateral) y el hipogloso (medial),
individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la línea media , en donde cambian de dirección y
se dirigen al piso de la boca
- Entre los dos nervios, reconocer la arteria carótida primitiva (en el ángulo externo de la
mandíbula). Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho.
- Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer
Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:
4.3.A: Cardiografía directa- Efectos del vago en el corazón
- Colocar el clamp del Cardiógrafo en al punta del ventrículo ; Aproximar el Quimógrafo a la
palanca y obtener un trazado
- Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con el ciclo cardiaco
- Dibujar un gráfico, señalando sus características
- Desconectar Electrocardiógrafo.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de
inducción ), observar los cambios en el latido (Durante/estimulación desconectar /
Electrocardiógrafo)
- Estimular con una aguja a las aurículas y al ventrículo y reconocer la contracción prematura –
morfología y la pausa compensadora.
4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina
- Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer
- Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar
4.3.C Ligadura de Stannius- Conducción eléctrica – automatismo
- En el surco en el Seno venoso y las aurículas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar.
Observar efectos en el ECG. Analizar
- Una segunda ligadura entre las aurículas y el ventrículo ; ligar y observar ECG
- Observar la frecuencia de contracción de aurícula y el ventrículo (Bloqueo aurículo- ventricular)
1. Fundamento
Los potenciales de membrana de la célula cardiaca tienen relación directa con la concentración de los
iones dentro y fuera de la célula. El potencial de acción es consecuencia de la entrada y salida de los iones,
de la célula. Algunos iones INTERVIENEN en la despolarización y otros en la repolarización celular.
La perfusión del corazón con soluciones que tienen mayor concentración de iones van a
alterar los potenciales de la célula y se expresaran en la contracción del miocardio.
2. Objetivos
a. Reconocer y analizar los cambios de la actividad cardíaca cuando se le expone a soluciones con
Potasio, Calcio y Magnesio
b. Esquematizar los lugares de acción de dichos cationes en el potencial de Acción
c. El alumno será competente para entender los conceptos :
- Relaciones espaciales de las Cavidades cardiacas: (aplicación en el ECG, auscultación cardiaca)
- Diferenciar entre el músculo auricular y ventricular: relación con presiones que manejan.
- Sistema de conducción: automatismo, conducción, velocidad de conducción, excitabilidad
- Diferencias del potencial de acción entre N. Sinusal y fibra ventricular: Canales iónicos en la
despolarización y repolarización, efectos y su fundamento de administración de Potasio, calcio-
cambios en el ECG. ¿Por que el N. sinusal comanda el inicio de la despolarización cardiaca?
- Periodo refractario absoluto y relativo: consecuencias ante estímulos
- Innervación cardiaca: efectos en las propiedades del músculo cardiaco
- Irrigación cardiaca: a. coronarias y venas cardiacas- relación de la sístole y diástole con la
irrigación coronaria.
3. MATERIAL
- Animal de experimento: sapo - Sol. Ringer (Sol A)
- Tablilla de fijación y alfileres - Sol. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol.B)
- Catéteres EV - Sol. Ringer con CIK (0.3 g/lt)(Sol.C)
- Frascos de perfusión de 125 ml - Sol. Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D)
- Anzuelos - Quimógrafo
- Cera - equipo de disección
4. EXPERIMENTOS:
2. Material
Sujetos de prueba varones y mujeres, Electrocardiógrafo, leptosómicos y pícnicos
3. Método
3.1. Experimento N°. 1
Colocar al sujeto en decúbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convención internacional.
Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud; la
velocidad de registro del aparato deberá ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros
y 6 trazados de de derivaciones precordiales.
Informar de acuerdo al siguiente protocolo:
Nombre: Fecha:
Edad: Talla:
Peso: Tipo constitucional:
Informe electrocardiográfico:
Ritmo: Frecuencia cardiaca:
Intervalo PR: Complejo QRS: Intervalo Q-T: Q-Tc:
Eje QRS
Morfología de P
Morfología de QRS:
Morfología de T:
Conclusiones:
Comentario:
4. Discusión
PRESIÓN SANGUÍNEA EN EL HOMBRE ADULTO
1.-FUNDAMENTO
El volumen sistólico produce en la circulación periférica cambios en el flujo y presiones intravasculares;
presión arterial, presión venosa. Estas presiones están relacionadas con la longitud y radio del vaso y con
la viscosidad de la sangre; factores que producen resistencia al flujo. La presión arterial tiene un pico
mayor denominado presión sistólica y un nivel inferior denominado presión diastólica. La presión
promedio se denomina presión arterial media. La presión arterial puede determinarse en forma indirecta
por medios de un aparato Esfigmomanómetro de mercurio o aneroide.
1. OBJETIVOS
a. Determinar la presión arterial sistólica, diastólica, en forma indirecta
b. Determinar los cambios de la presión arterial cuando se expone factores, físicos (temperatura),
cambios de posición y de actividad física
c. Calcular la presión arterial media-El alumno tendrá competencia para saber:
- ¿Cuales son los factores mecánicos y humorales que determinan la presión arterial?
- Relacionar presión hidrostática y oncótica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean vasodilatoras –
¿cómo actúan? ¿Cómo se regulan?
- Relacione los cambios de PA y FC en relación con el ejercicio y la postura corporal
- ¿Qué importancia tiene la PAM? ¿Cómo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistólico, frecuencia cardiaca,
Inotropismo, precarga, volumen sanguíneo, capacidad venosa, presión venosa central,
regulación de agua y sodio por el riñón
2. MATERIAL
- Sujeto de prueba: alumnos
- Tensiómetro de mercurio o anaeroide
- Estetoscopio
- Beakers
- Agua fría (5° C)
3. EXPERIMENTO
Experimento 1: Determinar la presión arterial
- Sujeto de prueba en posición sentada, brazo descubierto a la altura del corazón
- Esperar 5 minutos
- Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
- Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
- Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
- Desinflar el manguito lentamente y
- Registrar la presión sistólica con el primer ruido de Korotkoff
- Registrar la presión diastólica con el quinto ruido de Korotkoff
- Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O
- Bibliografía
1. Introducción
La medición de los volúmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometría. Este procedimiento
permite determinar todos lo volúmenes pulmonares, excepto el volumen residual, cuya medición se realiza
por métodos indirectos. Emplearemos el Espirómetro Pneumotacómetro Fleich Datospir 120
En esta práctica el alumno adquirirá competencia para entender:
2. Equipo
Pinza Nasal
Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
EQUIPO ESPIRÓMETRO NEUMOTACÓMETRO FLEICH DATOSPIR
3. Método
Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacómetro. Constatar
que no haya fugas de aire por la boca, borde de los labios, ni nariz.
Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para que se acostumbre a ella. Una
vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto constante y la profundidad de la respiración uniforme,
conectar al espirómetro para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A continuación
solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras según instrucciones del profesor de Practicas.:
a) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima y luego respirar
normalmente. .
b) Al final de una espiración normal (FEN) realizar una inspiración máxima y luego respirar
normalmente.
c) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima seguida de una
inspiración máxima, luego respirar normalmente.
En los seres humanos como en todos los mamíferos, la hemoglobina, constituye el principal componente
del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del 99.2% de oxigeno presente en la sangre.
También juega un papel importante en el transporte de dióxido de carbono (C02) y del ion hidr6geno
(H+).
La globina constituye el 96% de la molécula de hemoglobina y está compuesta por cuatro cadenas
polipeptídicas que aparecen como dos pares no idénticos. La hemoglobina A, la principal hemoglobina en
los adultos, consta de dos cadenas α y dos cadenas β siendo su estructuraα2y β2, y representa el 90% del
total de la hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5% del total,
y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (α2 y δ2) Además de estas dos hemoglobinas, otras seis
formas adicionales se encuentran en pequeñas cantidades y cuyo significado fisiológico aun falta precisar.
1)Cada átomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno molecular
(Oz) y logra fijar una molécula de oxigeno por cada átomo de hierro, de lo que podemos deducir que una
molécula de hemoglobina puede transportar cuatro moléculas de oxigeno.
Para que esta reacción ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe2+o ferroso).
Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenación y no
oxidación de la hemoglobina. Cuando el átomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (férrico), como
ocurre en la metahemoglobina, no reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de
transportarlo. En condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molécula en estado ferroso.
Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de monóxido de carbono, compuesto producido
por la combustión incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosión). El
monóxido de carbono se combina más fácilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el
oxigeno. El peligro de la intoxicación con monóxido de carbono radica en el hecho de que la
carboxihemoglobina no transporta oxígeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta
ocupada con monóxido de carbono aparecen las cefaleas y vómitos; si lo esta un 50 %, la vida peligra; si
lo está un 60-70 %,se produce la muerte por asfixia.
Entre los factores que ocasionan una acumulación excesiva de metahemoglobina se encuentra: a)
La metahemoglobinemia hereditaria, por disminución de la actividad de la diaforasa o bien por síntesis
de hemoglobinas anormales, y b) La metahemoglobinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai
ingesta de fármacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende
la administración de las drogas.
Los oxímetros de pulso (figura 1) básicamente están constituidos por dos diodos que emiten luz
en forma intermitente, y una célula foto sensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la
luz transmitida a través de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que
emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en
ambas longitudes de onda, son cuantificadas y comparadas por la célula foto sensitiva para determinar el
porcentaje de la saturación arterial de oxígeno.
La saturación arterial de oxígeno normalmente varía entre 95a 100% en sujetos de nivel del mar
y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recién nacidos varía entre
85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio físico y la altitud de residencia.
Experimento N° 1:
MEDIDA DE LA SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO
Materiales:
- Oxímetros de pulso
- Sensores de Oxígeno (Fig. 2)
- Algodón
- Alcohol
Procedimiento:
1. Encender el oxímetro de pulso.
2. Limpiar y secar el dedo índice, con algodón y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxígeno en el dedo índice.
4. Leer y registrar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca, tres veces.
Resultados:
Saturación (%) Fr. Cardiaca
1ra. Medición
2da. Medición
3ra. Medición
Promedio
5. Determinar si la saturación arterial de oxígeno varía en los diferentes dedos de la mano derecha e
izquierda
Saturación (%) Fr. Cardiaca
Derecha Izquierda Derecha Izquierda
Dedo Pulgar
Dedo Índice
Dedo Cardinal
Dedo Anular
Dedo Meñique
Materiales:
- Oxímetro de pulso
- Sensor de oxígeno
- Algodón
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento:
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
1ra. Medición
2da. Medición
3ra. Medición
4ta. Medición
5ta. Medición
6ta. Medición
7ma. Medición
8va. Medición
9na. Medición
10ma. Medición
Materiales:
- Tensiómetro
- Cronómetro.
- Oxímetro de pulso.
- Sensor de oxígeno.
Procedimiento:
1. El sujeto experimental deberá sentarse cómodamente, colocando los brazos sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazón, medir la saturación arterial de oxigeno en el dedo índice de
ambas manos (1ra. Medición).
2. Coloque el manguito del tensiómetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de
manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presión de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente la mano derecha hasta que el
sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturación arterial en el dedo índice de
la mano derecha y luego en el dedo índice de la mano izquierda (2da. Medición).
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rítmicamente la mano derecha hasta
el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturación arterial en ambas
manos (3ra. Medición).
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema abriendo la válvula de la pera insuflora y retirar el
tensiómetro.
7. Medir y registrar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min.
hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medición).
Resultados:
Saturación (%) Frecuencia Cardiaca
Índice Derecho Índice Izquierdo Índice Derecho Índice Izquierdo
1ra. Medición
2da. Medición
3ra. Medición
4ta. Medición
5ta. Medición
6ta. Medición
SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO
INFORME DE PRACTICA
Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../......
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
ANTECEDENTES PERSONALES:
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............años
Peso:............Kg Talla:.............. mts Peso Ideal:...............Kg
Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:.......................
Actividad Física: 1) Sedentaria: ..........
2) Ocasional: ..........
3) Frecuente: ..........
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
BRAZO DERECHO:
Basal
Iniciar Dolor
Dolor Soportable
BRAZO IZQUIERDO:
Basal
Inicia Dolor
Dolor Soportable
------------------------------
Procedimiento: Método MICROHEMATOCRITO.
Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con plastilina.
Centrifugar a 12,000 rpm en la centrífuga para microhematocrito, durante 10 min. Lectura en la tabla Ad-
hoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.
------------------------------
HEMOGLOBINA
Es una molécula de estructura cuaternaria, tetramérica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxígeno
de los hematíes. Está formada por un núcleo Hem y una proteína llamada Globina.
MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Materiales:
Jeringa y agujas descartables.
Desinfectante.
Algodón.
Ligadura.
Alcohol.
Anticoagulante de Wintrobe.
Pipeta de Sahlí de 0.02 ml
Tubos de prueba.
Solución de HCl 0.1 N
Espectrofotómetro.
Procedimiento
Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahlí (0.02 ml).
Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta.
Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
Mezclar, por inversión, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotómetro, en Long.
Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotómetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la
lectura de Absorbancia.
CALCULOS:
Absorbancia del Problema X Factor de Calibración = gm Hb %
Valores Referenciales:
Hemoglobina Valores
Referenciales
gm%
Recien Nacidos 17 a 25
Infantes 10 a 15
Hombre Adulto l4a17
Mujer Adulto 12 a 16
Hombre de Altura 16.4 a 18.8
Los índices hematológicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las anemias, en
relación a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor porcentual de la concentración de
hemoglobina en cada uno de los glóbulos en promedio.
VOLUMEN GLOBULAR MEDIO
Referencias Bibliográficas:
Clinical Hematology Wintrobe ",. Lea Febiger. Phila USA 9ª Edition. 1993
Medical Laboratory Technology. Lynch.Raphael Saunders USA 1989.
Manual of Clinical Hematology. Joseph Mazza. Little Brown 1998.
VÍA INTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la exposición de la sangre al
propio tejido colágeno expuesto por el traumatismo del vaso sanguíneo lesionado, hay contacto de la
sangre con epitelios distintos del vascular normal: Se Activa el Factor XII ---XIIa y se liberan fosfolípidos
plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa en presencia de
Cininógeno. Se activa luego el IX…..IXa, y el IXa junto con el VIII…..VIIIa activan al X ----- Xa.
El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE LA
PROTROMBINA. Y sigue luego la vía final común de conversión de la Protrombina en Trombina y
Fibrinógeno en Fibrina y el coágulo es consolidado por el factor XIII.
Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulación excepto en los primeros
pasos de la vía intrínseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se
coagulará por ninguna de las dos vías.
EVALUACION DE LA HEMOSTASIA
Y LA COAGULACION DE LA SANGRE
TIEMPO DE COAGULACIÓN
Se denomina así al tiempo que transcurre desde que la sangre es extraída hasta que pasa al estado de gel.
Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los
tejidos (factor tisular). El trauma que significa la obtención de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo
de tiempo entre la obtención de la muestra y su coagulación es lo que se denomina Tiempo de
Coagulación. Esta es en términos generales una prueba grosera de la coagulación. Sirve para detectar
groseramente alteraciones de la coagulación que puedan alargarla. La prolongación del Tiempo de
Coagulación puede deberse a varias causas;:
1.- Disminución de la Tromboplastina,
2.- Disminución de la Protrombina,
3.- Disminución del Fibrinógeno ó
4.- A la presencia en la sangre de algún anticoagulante.
Tiempo de Sangría
El tiempo de sangría depende de la elasticidad de la pared vasos sanguíneos y de la cantidad y capacidad
funcional de las plaquetas.
El tiempo de sangría es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una punción standard
profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aquél en que la sangre deja de brotar de la herida.
METODO DE DUKE
Reactivos y Aparatos:
Cronómetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.
Procedimiento:
Desinfectar la yema de un dedo (anular) ó el lóbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable
standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el
tiempo de aparición de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30
segundos sin tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.
Valores Referenciales:
1 a 3 MINUTOS.
TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE
TROMBOPLASTINA PARCIAL
Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y
colocar en BM a 37°C por 3 min.(No pre incubar mas de 10 min.).
Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y añadir rápidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de
Soluplastin, disparando simultáneamente el cronómetro.
Valores Referenciales:
11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal
El control Normal estará entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS.
Con estos valores en segundos a través de una curva de calibración podemos expresarlos en porcentaje de
actividad protrombinica en relación a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra
los valores porcentuales:
11 -12.5 100 %
13.5 60 %
15 50 %
17 40
19.5 30
22 25
24 – 36 20
37 – 40 10
55 – 65 5
En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines:
1.- Para la evaluación de los desórdenes de la Coagulación: para investigar la anormalidad de los
factores involucrados en la vía Extrínseca V, VII, X, Protrombina y Fibrinógeno. Y debe ser
usada junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados
indanedionas.
3.- Evaluación de la función hepática: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas útiles para
evaluar la capacidad del hígado en la síntesis de los factores del complejo Protrombínico: II, VII,
yX .
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL
ACTIVADO.
(TTPA Ó APTT Ó PTT).
El TTPA es un método de investigación de la VÍA INTRÍNSECAde forma global XII, XI, IX, X, VIII, V,
II y I.En esta prueba APPT se usa un activador específico de la Vía Intrínseca (del Factor XII) y es un
Fosfolípido CEFALINA activado con caolín ó sílice micronizado. El test de TTPA consiste en la
recalcificación del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolípido, (que es un sustituto de las
plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaolín
tamponado. Esta prueba usa este activador específico de la vía intrínseca que es el Factor plaquetario -3
sustituido por la cefalina fosfolípido de cerebro de conejo y que tiene además un activador kaolín en
finísimas partículas ó sílice micronizado (activador para el Factor XII)de la vía intrínseca solamente y un
tampón de piperazida estanolsulfónico. Además este reactivo tiene una especial reactividad con la
presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la terapéutica con heparina.
Emplearemos en esta practica el método de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolípido y que se
llama reactivo APTTEST
A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado, añadir el volumen de agua indicado en el rasco
que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversión, queda así listo el
homogenizado.
C. Obtención de la muestra de sangre:
A 4.5 cc de sangre venosa añadirle 0.5 cc del anticoagulante oxalato de sodio. Centrifugar para
separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la siguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de
diámetro o 13 x 100 ml:
TUBO 1 TUBO 2
Los valores referenciales varían de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relación a un control normal
Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial está prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos
indica un a alteración de alguno de los factores de la vía intrínseca de tipo congénito: VIII, IX
(Hemofilias), XI, XII. Si todos estos factores están normales, puede haber una deficiencia de HMWK
kininógeno (Factor Fritgerald).También se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas ó
condiciones anormales como: Enfermedades hepáticas, Coagulopatía por consumo, anticoagulantes
circulantes, en la terapia anticoagulante oral, o en la heparización. Ó en el tratamiento con inhibidores de
la trombina como hirudina, argatroban., etc
Vía Intrínseca Vía Extrínseca
XII FACTOR
Pre K TISULAR
Tiempo
HMWK
Protrombina
Tiempo Tromboplastinas
Tromboplastina VII
XI Tisulares:
Parcial Simplastin
Activada Soluplastin
Celafina y kaolín
(activador del XII) IX
APPT
VIII
VÍA FINAL
COMUN
X
V
PF -3
Protrombina Trombina
Fibrionógeno Fibrina
XIII
Referencias Bibliográficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical HematologySimmons. Lippincott. 1999.
Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999.
The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993
Fisiología Médica W Ganong El Manual Moderno 2002
An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997
FUNCIÓN GLOMERULAR
DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA.
El riñón trata, dentro de ciertos límites, de mantener una presión de filtración eficiente mediante
mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.
En 24 horas se filtran 180 litros de líquido por los glomérulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de
orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.
No solamente hay reabsorción de agua a nivel tubular sino también de muchas otras sustancias del filtrado
glomerular y que son útiles al organismo como glucosa, aminoácidos, sodio, potasio, cloro, etc.
El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporción que en el plasma sanguíneo
exceptuando las proteínas.
La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.
Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la acción tubular el organismo perdería grandes cantidades
de agua, sales, elementos útiles como glucosa, aminoácidos, etc. Junto con los productos finales del
metabolismo de las proteínas como la urea, creatinina, ácido úrico, y otros.
Concepto de Clearance:
El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuración o
limpieza y se entiende por Clearance o Depuración renal de una sustancia al número de centímetros
cúbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el riñón. Si
una sustancia es únicamente filtrada por el glomérulo, y no reabsorbida, ni secretada por el túbuli, su
depuración medirá el número de ml que los glomérulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el
manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomérulo, pero no se reabsorben ni secretan por los
túbulis renales.
La depuración de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina
en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en un ml de plasma.
Llamemos V’ el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recolección en minutos (cc/min.))
U a la concertación de una sustancia “x” en orina mg/ml y
P a la concentración de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml
SI MULTIPLICAMOS U x V´ , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1
min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIÓN SERÁ: C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.
Se escoge la CREATININA para medir la filtración glomerular porque el manejo renal de este metabolito
es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuración es una medida muy aproximada de la
filtración glomerular, y se usa como índice de función glomerular.
Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomérulo han sido liberados de toda su creatinina en 1
minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA: 1.65 m. le corresponde una ASC.
de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma según la formula de Du Bois.
Procedimiento
Recolectar muestra de orina de 12 ó 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si se recolecta en frasco
estéril, la muestra guardada en refrigeración puede durar 4 días. Medir exacto el volumen y tiempo de
recolección. Anotar
El mismo día de la recolección de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina sérica.
4.- Cálculos.
Crs = Conc StX Abs suero = 2 X Abs suero – Abs Blank = mg/dl
Abs St – Abs blank Abs St – Abs Blank
Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica
ademas por 100 (factor de dilución de la orina).
Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los cálculos
Por ejemplo:
U = CrO en mg/ml
V = Vol. Min ml/min
P = Crs mg/ml
Valores Referenciales
Depuración de Creatinina endógena:
Fundamento
El riñón tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario concentrado y diluyendo
la orina. Esta característica fisiológica es una de las más importantes del riñón normal, y se conoce desde
hace más de 50 años. Se realiza según un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador.
Adaptando el principio fisicoquímico del flujo térmico a contracorriente, a la presión osmótica diremos
que en el asa de Henle ocurre un fenómeno similar, lo mismo que a nivel de la Vasa Recta, pero con
electrolitos y que estudiamos con detalle en nuestras clases teóricas. Este mecanismo impide que se disipe
la gradiente de Osmolaridad llegando a tener así el intersticio medular y papila hasta 1200 mOsm/Kg.
agua. (El Plasma tiene 280 a 290 mOsm/Kg. agua). El trasporte activo de Cloro en el Asa de Henle es
también responsable del sostenimiento de esta alta osmolaridad en el interticio medular renal.
Esta práctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentración y dilución de la orina
por el riñón a través de los parámetros fisiológicos siguientes:
Densidad Urinaria, relación Uosm/Posm, Cosm, TcH2O sometiendo a una persona sana a una dieta
hidropónica primero y luego a una sobrecarga acuosa.
Definiciones previas.-
Posm: Es la concentración osmolar plasmática, normalmente puede variar desde 280 a 290 mOsm/Kg
agua, es la concentración de solutos en el plasma.
Uosm: Es la concentración Osmolar urinaria ó concentración de solutos en la Orina u osmolaridad
Urinaria. Generalmente la orina es tres veces más concentrada que el plasma. El riñón reabsorbe agua
hasta concentrar el filtrado glomerular unas tres veces más que osmolaridad plasmática. Los valores
normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
Uosm x V: Es la excreción de solutos por minuto, es la cantidad de solutos osmóticos activos excretados
por minuto.
Cosm: Depuración Osmolar: Uosm x V / Posm
Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.
Representa la tasa a la cual las sustancias osmóticas activas son aclaradas ó depuradas del plasma. La
depuración basal ó endógena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 % del filtrado glomerular.
CH2O: Es depuración de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.
Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:
CH2O = V – Cosm
La depuración de agua libre es ese núcleo de agua en la orina en exceso de su depuración osmolar.
Durante la diuresis de agua caracterizada por la excreción de gran volumen de orina diluida debido a la
gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la inhibición de la hormona antidiurética de la neurohipófisis.
Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duración ó magnitud, la orina consiste de una mezcla de
agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuración osmolar,
mas un vol. de agua osmóticamente libre, es agua libre de solutos, literalmente es agua químicamente
pura, representada por CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos términos:
V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V – Cosm
6
5
4 V´ > Cosm
HIPO
3 C H2 O = V - Cosm
2
1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
V´
Procedimiento
Para esta práctica se seleccionó a una persona a quien el día anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad
Plasmática y luego al día siguiente se le sometió a una prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresión
total de líquidos pero con una dieta normal en proteínas, hasta conseguir en lo posible una disminución del
3% del peso corporal.
A las 6 de la tarde miccionó (vejiga vacía), y se descartó esta orina y se anotó la hora exacta. Luego
empezó a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco hasta las 6 am del día siguiente.
Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. En este
momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmática. Aquí termina el test de
Concentración.
Inmediatamente se inició la Prueba de Dilución, para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. de
peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. Se recolectaron las muestras
emitidas, cada una en frascos separados, cada 20 ó 30 minutos, según el protocolo del cuadro adjunto,
numerándose todas las muestras emitidas durante casi tres horas.
Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las
Osmolaridades plasmáticas, en el osmómetro. Para la práctica, a partir de estas muestras calcularemos las
Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volúmenes urinarios,
tiempos de recolección, Uosm, y Posm se determinarán, para cada muestra, los valores de U/P, Cosm,
TcH2O, y CH2O.
Tabla-Protocolo de trabajo para las PRUEBAS de CONCENTRACIÓN
Y DILUCIÓN Urinaria
Tiempos Tiempo N° Vol. Vol. Posm Densi Uosm U/P Cosm Tc CH2O
de Acumulat de Orina Minut mOsm Dad mOsm/ H2O ml/
Recolecc. min Mues ml ml/ Kg Kg ml/ min
(minutos) tra min H2O Urina H2O min
ria
CONCEN
Prueba TRACIÓN
Supres
líquidos
De
12 Hs 720 1a 432 298 ------
2 Hs 840 2a 60 ------
De Inges Y se
Prueba ta de Conti
Inmedia 20 Nuó
to ml Reco
De
se hizo: agua/ lec-
DILU Kg cion
Peso
CION
30 30 3a 18 295 ------
25 55 4a 200 ----
20 75 5a 190 ----
22 97 6a 209 294 ----
20 117 7a 140 ----
18 135 8a 126 ----
15 150 9a 38 290 ----
EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el riñón es la EXCRECION DEL H+ EN LA
FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGÉNESIS, a partir del NH3 de la glutamina o los
aminoácidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lotanto proviene de las
células del túbuli renal. Sin embargo su excreción no es rápida sino tardía y solo empieza a funcionar
después de un lapso prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por
medio de la excreción del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual con el NH3
proveniente de la desaminación de aminoácidos ode la glutamina, se excreta como NH4+.
AMONIOGÉNESIS:
El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias ácidas: NH3 + H+ NH4
Se conserva sodio por medio de la excreción de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4)
TEST DE SOBRE CARGA ÁCIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres días)
Un día antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulación Basal. Luego se le prescribe
una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres días consecutivos y se va
recolectando la orina de 24 horas cada día, durante tres días. En cada una de las muestras de orina se
medirá el volumen y el pH, Acidez de titulación fosfática y acidez amoniacal. Se determinará el pH
sanguíneo basal y al final del test.
Na2HPO4 + H+ NaH2PO4
Sal más ácida y baja el pH hasta
menos de pH 5.4 en la orina.
En nuestra práctica solamente haremos una prueba de corta duración (2 horas) del siguiente modo:
Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior
sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fría por kilo de peso corporal
así:
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por micción espontánea (con deseos de
orinar) y será la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguíneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.
Iniciar la recolección de orina cada 20 min., por micción espontánea, en muestras separadas durante 2
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosfática y Amoniacal
urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulación de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los cálculos también se harán
exactamente iguales al caso anterior.
CÁLCULOS:
En la práctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuración de una sustancia, entonces si
hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen
minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y además se conocemos el pH
sanguíneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuración
del ión Hidrógeno.
CONCLUSIONES:
En la condición Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min
En la Acidosis como la concentración de H+ urinaria es mucho mayor que la sanguínea
tendremos: Dep H+ será > Vol. min.
en la Alcalosis será la inversa: Vol. min. > Dep H+
Para estos cálculos recordar que: D=UxV/P
y pH = -log (H+)
(H+) = antilog pH
-pH
(H+) = 10
ROL FISIOLÓGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIÓN DEL ALMIDÓN)
Fundamento Fisiológico
El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticación que fragmenta las
partículas grandes de alimentos y mezcla a éste con las secreciones de las glándulas salivales. En las
glándulas salivales los gránulos secretorios (cimógeno) que contienen las enzimas salivales se descargan
en los conductos a partir de las células acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de saliva y el pH es
ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la secreción activa. La saliva contiene dos
enzimas digestivas: la lipasa lingual, secretada por la glándula de la lengua, y la alfa amilasa salival
(ptialina) secretada por las glándulas salivales. La saliva también contiene mucinas, que son
glucoproteínas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Además contiene IgA,
inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria contra bacterias y virus. La alfa amilasa
salival ataca al almidón. Sin embargo, el pH óptimo para esta enzima es de 6,7 y su acción es inhibida por
el jugo gástrico ácido en el momento del ingreso del alimento al estómago. El activador de la amilasa
salival es el cloro; siendo su substrato el almidón hidroliza los enlaces alfa 1 - 4 para producir dextrinas,
alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta función hidrolítica la acción catalítica que
estudiaremos en la presente práctica. El almidón, polímero de la glucosa da color azul con la solución de
yodo. El almidón está constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.
Objetivo
Estudiar la acción de la amilasa sobre el almidón y determinar los substratos y productos de la actividad
alfa-amilásica salival y el efecto del pH y activador enzimático sobre esta reacción enzimática ó digestión
hidrolítica.
Procedimiento
Digestión del substrato por la alfa-milasa salival:
Tubo No. 1 2 3 4
Sol. almidón 1 % ml. 2,0 2,0 2,0 2,0
Tampón fosfato pH 6,8 ml. 1,0 1,0 1,0 ----
HCI 0,3 N ml. ---- ---- ---- 3,4
CIN a 0,9% ml. 3,0 2,4 ---- ----
Agua destil. ml. ---- ---- 2,4 ---
Baño María 37 °C x 5'(Pre-
incubación,no añadir saliva si si si si
todavía
Después de los 5 minutos,recién añadir: ----
Sol. amilasa salival ( diluída 1/20) ml. 0,6 0,6 0,6
Baño María 37°C x 20' si si si si
Luego se determinarán los substratos remanentes y los productos de degradación intermedia del almidón
en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.
A. DETERMINACION DEL SUSTRATO
TUBOS N° 5 6 7 8
DIGERIDO DEL TUBO 1:ml 0.5 - - -
DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - -
DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 -
DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5
HCl 0.05 N : mI 5 5 5 5
Sol. De Lugol: mI 0.5 0.5 0.5 0.5
TUBOS N° 9 10 11 12 13
Procedimiento
Identificación de las Muestras I II III IV V
Descripción de los tiempos Primera Inyectar 0 a 15 15 a 30 30 a 45 45 a 60
Muestra Antihistamínico y min. min. min. min.
(Basal) luego Histamina ó
Pentagastrina
CALCULOS:
Ejemplo: Se gastó 2.40 ml en la titulación de una de las muestras
Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulación indica ----0.1 mEq. H+
2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarán ---------------------- X mEq. H+
En este caso hemos calculado la concentración ácida expresada en mEq.H+/cada litro de jugo gástrico,
estas son unidades de expresión química en rigor. Pero en fisiología expresamos la acidez en débito acido
Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado, por ejemplo cada 24 horas.
En el ejemplo anterior encontramos 0.24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gástrico usado, si en los
primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gástrico tendremos:
Esto se llama debito acido. Y es el débito acido de los primeros 15 minutos, asi continuaremos en la
misma forma calculando el débito acido para los 30, 45 y 60 minutos. La sumatoria de estos 4 valores será
por consiguiente el débito acido/ hora o gasto acido de la célula parietal.
Valores Referenciales
1. Introducción
El esófago, el estómago y los intestinos tienen inervación parasimpática predominante. La acetilcolina es
el neurotransmisor de este sistema y actúa como un agonista de la motilidad intestinal.
2. Material
Equipo para órganos aislados
Conejo Algodón embebido en aceite
Quimógrafo Acetilcolina
Equipo de disección Pilocarpina
Solución de Ringer para mamíferos Adrenalina
Suero fisiológico Atropina
Baño maría a 40 °C Termostato
Balón de oxígeno
3. Método
3.1. Experimento No. 1
Se sacrifica al animal y se realiza una laparotomía para resecar una segmento de intestino delgado de unos
20 centímetros. Se marca el extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiológico, se le
sumerge en un baño de solución de Ringer a 40 °C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimógrafo. Se
mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante.
Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1.
.
3.2. Experimento No. 2
Se añade unas gotas de acetilcolina en el baño maría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo.
4.Discusión
MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL
Objetivo
El objeto de esta práctica es estudiar los movimientos peristálticos rítmicos del aparato gastrointestinal y el
control que el Sistema Nervioso Autonómico tanto Simpático como Parasimpático ejercen sobre la
motilidad gástrica e intestinal; además demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contracción y relajación de la musculatura lisa gastrointestinal.
Introducción
La actividad motora del estómago está gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervación ó redes
de fibras nerviosas: una intrínseca a la vía gastrointestinal y otra extrínseca.
a.-La inervación intrínseca del estómago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientérico de
Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a través de toda
la vía intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como
este sistema es continuo entre el estómago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del
bulbo duodenal.
b.- La inervación extrínseca es autonómica dual y proviene del Sistema Nervioso Autónomo: la Simpática
de actividad noradrenérgica inhibidora, vía plexo celíaco; y la Parasimpática de actividad colinérgica
excitatoria, vía del Nervio Vago.
La inervación simpática inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfínteres; y la parasimpática estimula la
contracción de la fibra m. lisa pero relaja los esfínteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad
motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrínseco.
Existe además un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estómago dentro de la capa
muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gástricas
y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo eléctrico basal (REB)de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estómago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando
pasa por el antro.
El sistema nervioso entérico se conecta con el SNC mediante fibras simpáticas y parasimpáticas, pero es
capaz de funcionar de manera autónoma sin estas conexiones. El plexo mientérico inerva las capas de
músculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las células intestinales endocrinas y los vasos sanguíneos de la
submucosa y además está involucrado sobre todo en el control de la secreción intestinal. Los
neurotransmisores en el sistema nervioso entérico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina,
Gaba, ATP, Oxido nítrico, CO y numerosos péptidos, CCK, endotelina 2, Sustancia P, Neuropéptido Y,
VIP, etc.
El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el
contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la vía gastrointestinal desde el esófago hasta el
recto. Esta elongación inicia una onda de contracción circular detrás del estímulo y una de relajación en el
frente de éste. Esta onda de contracción se mueve en dirección oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.
Aunque la actividad peristáltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autónoma del
intestino, su presencia es independiente de la inervación extrínseca.
El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo
mientérico. Las neuronas colinérgicas que pasan en dirección retrógrada en este plexo mientérico activan a
las neuronas liberadoras de la sustancia P, así como de acetilcolina y dan lugar a la contracción del
músculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en dirección anterógrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajación que precede al estímulo.
El REB del músculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este
REB se inicia en las células intersticiales de Cajal, que son células mesenquimatosas estrelladas similares
al músculo liso y actúan como marcapasos, estas células de Cajal envían múltiples prolongaciones hacia el
músculo liso intestinal. .El REB por sí solo rara vez produce contracción muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la
tensión (contracción) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las
repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipéptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo
eléctrico basal por ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensión (contracción de la
F m lisa) en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensión. En el estómago la
frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol
fisiológico del REB es coordinar la actividad peristáltica y otras actividades motoras gastrointestinales.
Las contracciones se producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una
vagotomía el peristaltismo estomacal de hace irregular ó a veces caótico. La motilidad gastrointestinal y la
secreción es regulada también por polipéptidos biológicamente activos que son segregados por las células
nerviosas y las células glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama
hormonas gastrointestinales, aunque sus efectos fisiológicos son discretos, sin embargo sus alteraciones
pueden producir enfermedades del tránsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras).
Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:
Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK (ó CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina)
Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.
Procedimiento
l.- El alumno realizará la preparación de sapo espinal según lo aprendido para producir el shock espinal en
el sapo (Ver práctica de reflejos en animal espinal) y realizará la hemostasia con algodón por compresión.
2.- Disección: Sujetar luego el animal en posición decúbito dorsal en la tabla de fijación con los alfileres y
realizar un corte en toda la línea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.
3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estómago cardias, estómago, píloro e
intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristálticos espontáneos del
estómago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos
mecánicamente.
4.- Con un algodón mojado en Ringer-Batracio a 30° mantener en todo momento la preparación bien
húmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer.
5.- Aplicar sobre el estómago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en
el orden: a, b, c, d, e siguiente:
a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer.
Graduar las observaciones visuales de relajación o contracción con cruces, comparando con los
movimientos peristálticos espontáneos del inicio del experimento.
Conclusiones y Comentario.
TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Introducción
La glicemia en condiciones basales, varía entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes
mellitus se presenta elevación de la glicemia en ayunas
En la práctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de
Tolerancia a la glucosa..
Material
Sujeto de prueba en ayunas.
Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua más zumo de tres limones.
Glucómetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
Balanza.
Tallímetro.
Tubos de prueba.
Pipetas.
1 fiola de 100 ml.
Matraz de 1000 ml.
Reactivos para análisis de glucosa en orina:
Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g
Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato
de sodio (cristalizado) 200.0 g
Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml
Peso previo:
Colocar el chip del glucómetro.
Encender y ver el número de cinta reactiva que reconoce para su uso.
Colocar la tira reactiva en el glucómetro para su reconocimiento.
Método
Experimento N° 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinación de glicemia en ayunas y después administrar una solución de 75 gr de glucosa.
Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultánea buscar
presencia de glucosa en orina.Construir el gráfico correspondiente.