Tabla de contenido

INTRODUCCIÓN. .................................................................................................................................. 4
Agar BHI (Brain-Heart Infusion)........................................................................................................... 6
Agar BHI Con 5% Sangre De Oveja ...................................................................................................... 7
Agar BHI con Antibióticos.................................................................................................................... 9
Agar Bilis Esculina .............................................................................................................................. 10
Agar Butzler Modificado.................................................................................................................... 12
Agar CCF (Fructosa, Cicloserina, Cefoxitina) ..................................................................................... 13
Agar Cin (Cefsulodina, Irgasan, Novobiocina) ................................................................................... 15
Agar Chocolate .................................................................................................................................. 17
Agar Cistina-Telurito.......................................................................................................................... 18
Agar Citrato de Hierro Tres Azucares ................................................................................................ 20
Agar CLED .......................................................................................................................................... 21
Agar Cloranfenicol ............................................................................................................................. 23
Agar CNA (Colistina, ácido nalidixico) ............................................................................................... 24
Agar Columbia ................................................................................................................................... 26
Agar Con Plasma De Conejo Y Fibrinógeno ....................................................................................... 27
Agar cromogénico para aislamiento de cronobacter sakazakii ........................................................ 28
Agar de sangre Columbia. ................................................................................................................. 29
Agar Desoxicolato.............................................................................................................................. 31
Agar Desoxilato Citrato ..................................................................................................................... 33
Agar Entérico de Hektoen ................................................................................................................. 34
Agar Glucosa y Cloranfenicol ............................................................................................................ 36
Agar Glucosado ................................................................................................................................. 38
Agar Entérico Hektoen ...................................................................................................................... 39
Agar Hierro Y Lisina ........................................................................................................................... 40
Agar inclinado de Loeffler ................................................................................................................. 42
Agar KAA Confirmativo ...................................................................................................................... 44
Agar Karmali (AK) .............................................................................................................................. 45
Agar Kligler ........................................................................................................................................ 47
Agar Lowenstein-Jensen.................................................................................................................... 48
Agar MacConkey ............................................................................................................................... 50
Agar Manitol Yema De Huevo Con Polimixina .................................................................................. 51
Agar Martin-Lewis ............................................................................................................................. 54
Agar Movilidad .................................................................................................................................. 56
Agar Método Estándar ...................................................................................................................... 57
Agar Mueller-Hinton ......................................................................................................................... 58
Agar Nutritivo .................................................................................................................................... 59
Agar New York City ............................................................................................................................ 61
Agar Oxford ....................................................................................................................................... 63
Agar Papa .......................................................................................................................................... 64
Agar Palcam....................................................................................................................................... 65
Agar Para Recuentro ......................................................................................................................... 67
Agar PEA (alcohol feniletílico, “phenylethanol”) .............................................................................. 68
Agar Regan Lowe ............................................................................................................................... 70
Agar Rosa Bengala+ Clorafenicol+ Dicloran (Agar Drbc) ................................................................... 71
Agar Sabhi ......................................................................................................................................... 73
Agar Salino Manitol ........................................................................................................................... 74
Agar Sangre (AS o BA, Blood Agar) .................................................................................................... 76
Agar sangre con disco de bacitracina ................................................................................................ 77
Agar Sangre Con Suplementos Para Anaerobios .............................................................................. 79
Agar Sangre De Caballo Con Bacitracina. .......................................................................................... 81
Agar Sangre De Caballo Con Carbón ................................................................................................. 83
Agar Selectivo Para Estreptococos .................................................................................................... 85
Agar Skirrow ...................................................................................................................................... 86
Agar Sulfito De Bismuto .................................................................................................................... 87
Agar TCBS (Tiosulfato, Citrato, Sales Biliares) ................................................................................... 88
Agar Triptona De Soja-Extracto De Levadura .................................................................................... 90
Agar TSYEB ........................................................................................................................................ 91
Agar Verde Brillante .......................................................................................................................... 93
Agua Peptona Tamponada. ............................................................................................................... 95
Base De Agar Para Listeria Palcam .................................................................................................... 96
Base de agar para Pseudomonas ...................................................................................................... 97
Caldo con verde de malaquita y cloruro de magnesio .................................................................... 100

2
Caldo De Brucella ............................................................................................................................ 101
Caldo Triptona Luril ......................................................................................................................... 103
Caldo EC........................................................................................................................................... 104
Caldo Fraser Completo .................................................................................................................... 105
Caldo Infusion Cerebro-Corazon ..................................................................................................... 106
Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante .............................................................................................. 107
Caldo nutritivo................................................................................................................................. 109
Caldo Rothe (Caldo Glucosado Con Ariza.) ..................................................................................... 110
CALDO SELENITO F .......................................................................................................................... 111
Caldo Selenito Verde Brillante Ll ..................................................................................................... 112
Caldo Tioglicolato ............................................................................................................................ 113
Caldo Triptona de Soya/Caldo Tríptico de Soya (TSB) .................................................................... 115
Caldo Fraser..................................................................................................................................... 117
Caldo De Lactosa ............................................................................................................................. 118
Caldo Tetrationato .......................................................................................................................... 119
Medio Agar Baird-Parker................................................................................................................. 121
Medio de Kligler .............................................................................................................................. 122
Medio Nitrato .................................................................................................................................. 124
CONCLUSION ................................................................................................................................... 125
REFERENCIAS ................................................................................................................................... 126

3
 INTRODUCCIÓN.
Uno de los sistemas de proliferación de
microorganismos más usado para su
identificación son los medios de cultivo, su
finalidad es brindar los requerimientos
necesarios para que el microorganismo pueda
desarrollarse y crecer de manera que permita
conocer ciertas características propias de cada
microorganismo.
Un medio de cultivo es un material nutritivo
preparado para el crecimiento de
microorganismos.
Fundamentalmente un medio de cultivo debe
tener los nutrientes adecuados para el
microorganismo a desarrollar, además, debe
contener un pH adecuado y una concentración
específica o ausencia de oxígeno.
Algunos microorganismos pueden crecer en casi
cualquier medio de cultivo, otros requieren
medios especiales y otros no pueden crecer en los
medios existentes hasta ahora.
El material alimenticio o nutrimental en el que
crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en
un medio de cultivo debe presentar condiciones
como temperatura, grado de humedad y
concentración de oxígeno adecuadas, así como
un grado correcto de acidez o alcalinidad (Ph).
Además, un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo microorganismo
contaminante, es decir, debe ser estéril para
realizar la siembra. Posteriormente debe ser
incubado de acuerdo a los requerimientos del
microorganismo en el medio de cultivo.
4
Gran parte de las bacterias patógenas requieren
nutrientes de mayor complejidad que resultan
similares en composición a los líquidos orgánicos
del cuerpo humano de los que se nutren. Debido
a esto, la base de muchos medios de cultivo es
una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes haciéndolo un
medio de cultivo adecuado para el crecimiento de
los microorganismos.
Existen distintos tipos de medios de cultivo los
cuales se distribuyen según su clasificación que
se muestra a continuación:
Según su consistencia:
• Líquidos: Caldos.
• Sólidos: Poseen una sustancia
solidificante que generalmente es Agar-Agar,
una sustancia que solidifica a temperatura
ambiente y sirve de soporte para los nutrientes.
Según su composición:
• Medios sintéticos o simples: Sus
componentes son muy conocidos. Pueden ser
sustancias orgánicas e inorgánicas.
• Medios complejos o enriquecidos:
Poseen una composición variable.
Según su finalidad:
• Medios de aislamiento primario: Medios
sólidos que se usan para obtener bacterias
aisladas a partir de una muestra clínica.
*Para usos generales: no selectivos, para cultivo
de una amplia variedad de organismos difíciles
de hacer crecer. A menudo están enriquecidos
con materiales como: sangre, suero,
Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros
factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc).
*Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta
selectividad) se añaden sustancias que inhiban el
crecimiento de ciertos grupos de bacterias, 4. agar (no deben quedar gránulos de agar en
permitiendo a la vez el crecimiento de otras. las paredes del recipiente).
Variando las sustancias añadidas, se varía el tipo
5. Se distribuyen en frascos apropiados.
y grado de selectividad (Mac Conkey,
Kanamicina-Vancomicina) 6. Esterilización y almacenamiento:
*Enriquecidos: ralentizan/suprimen el En autoclave, el tiempo óptimo es de 15 minutos
crecimiento de la flora competitiva normal a 121ºC (1 Atm. o 15 lbs/pulg). No conviene
potenciando el cultivo y crecimiento deseado prolongar el calentamiento más tiempo del
(Selenito, medio con Vitamina K). necesario, en especial cuando hay medios que
contienen hidratos de carbono. Una vez
*Para aislamientos especializados:
esterilizado se compensa la presión de la
formulaciones nutritivas especiales que
autoclave (se abre la espita) y se destapa para su
satisfacen requerimientos de grupos específicos
rápido enfriamiento. Hay medios y soluciones
de bacterias, ayudando a su identificación.
que no deben ser esterilizados en autoclave
porque contienen compuestos que son afectados
por las altas temperaturas.
• Medios de enriquecimiento: Son medios
líquidos en los cuales se siembra inicialmente la En general es preferible almacenarlos en heladera
muestra para aumentar el número de bacterias a 4ºC, aunque a temperatura ambiente se
antes de ser subcultivado a un medio sólido. conservan bien.
• Medios de identificación: Medios Utilización:
líquidos o sólidos que permiten estudiar alguna
En el caso de que el medio contenga agar debe
característica metabólica de la bacteria.
fundirse a baño María y luego distribuirse en
La correcta preparación de los medios de cultivo forma apropiada.
tiene fundamental importancia en los resultados
Formas de distribución de medios con agar:
que se obtienen en su empleo, especialmente en
los utilizados para cultivar microorganismos de • En placas: se vierte entre 15 y 25 ml de
difícil desarrollo. medio de cultivo en placas de Petri. Se deja
solidificar a temperatura ambiente y luego se
Técnica:
secan en la estufa abiertas e invertidas.
1. Se pesan los nutrientes necesarios para la
• En tubos: columna, pico de flauta, pico y
preparación del medio.
columna.
2. Se disuelven los componentes en agua
destilada o desmineralizada de reacción neutra,
1. agitando para embeber el agar y luego se
completa a volumen.
2. Se controla el pH con un indicador.
3. Se calienta a baño María hirviendo o
sobre tela de amianto hasta disolución completa
del

5
 Agar BHI (Brain-
COMPOSICIÓN

Infusión de cerebro y 8.0 g/L de agua

Heart Infusion)
Digerido péptico de tejido
USO
Es un medio de uso general adecuado para el Digerido pancreático de
cultivo de una amplia variedad de tipos de
organismos, incluidos las bacterias, levaduras y
hongos filamentosos incluyendo los de difícil
desarrollo a partir de muestras clínicas.
METODOLOGÍA
El agar BHI infusión cerebro – corazón obtiene
los nutrientes de la infusión de cerebro y corazón,
la peptona y la glucosa. Las peptonas y la
infusión son fuentes de nitrógeno orgánico,
carbono, azufre, vitaminas y sustancias de traza.
La glucosa es la fuente de carbohidratos que los
microorganismos utilizan mediante
fermentación. Se utiliza fosfato disódico como
tampón en el medio.
La infusión de cerebro y corazón ha resultado ser
efectiva en el cultivo de una amplia variedad de
microorganismos, incluidos muchos tipos de
patógenos.
corazón de (sólidos)
5.0 g/L de agua
animal
16.0 g/L de agua
caseína
Cloruro sódico 5.0 g/L de agua
Glucosa 2.0 g/L de agua
Fosfato disódico de 2.5 g/L de agua
hidrógeno
Agar 13.5 g/L de agua
pH final: 7.4 ± 0.2
PREPARACIÓN
Extender la muestra tan pronto como sea posible
después de recibirla en el laboratorio, mediante
un asa de inoculación estéril para obtener
colonias aisladas.
Para el aislamiento de hongos de muestras
potencialmente contaminadas, se debe inocular
un medio selectivo junto con uno no selectivo.
Incubar las placas a 25 – 30 °C en posición
invertida con humedad aumentada. Para el
aislamiento de hongos que causan micosis
sistémicas y el aislamiento de Actinomycetales
aerobia, deben inocularse dos conjuntos de
medios: uno debe incubarse a 25 – 30 °C y el otro
equivalente, a 35 – 37 °C.
Según el diagnóstico clínico y los agentes
presuntivos causantes de la infección, deben
incluirse otros medios. Todos los cultivos deben
examinarse al menos semanalmente para detectar
crecimiento y deben mantenerse durante varias
semanas antes de notificarlos como negativos

6
 MICROORGANISMO PRECAUCIONES
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
No utilizar las placas si muestran evidencia de
COLONIA
contaminación microbiana, decoloración,
CEPAS RESULTADOS DE deshidratación, grietas o cualquier otro signo de
CRECIMIENTO deterioro.
Streptococcus Crecimiento de bueno
pneumoniae a excelente
Trichophyton Crecimiento de bueno
mentagrophytes a excelente
Candida albicans Crecimiento de bueno
a excelente
Listeria Crecimiento de bueno
monocytogenes a excelente
Shigella flexneri Crecimiento de bueno
a excelente
Sin inocular Ambar claro

Ilustración 1 Agar BHI

ALMACENAMIENTO
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes
de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden
inocularse hasta su fecha de caducidad e
incubarse durante los períodos de incubación
recomendados. Las placas de grupos de 10 placas
ya abiertos pueden usarse durante una semana
siempre que se almacenen en un lugar limpio a
una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar las placas durante 24 – 48 h para
bacterias y Candida, y hasta un máximo de 5 días
para Trichophyton. Las bacterias y Candida
deben incubarse a una temperatura de 35 a 37 °C,
y Trichophyton, a 25 – 30 °C.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Este método puede ser suplementado con sangre,
pero no es recomendado para su visualización e
interpretación de reacciones de hemólisis.
Agar BHI Con 5%
Sangre De Oveja
USO
Este agar se emplea como medio de aislamiento
primario para el crecimiento de hongos, ya que
permite una mejor recuperación de patógenos
que el agar glucosa de Sabouraud.
METODOLOGÍA
BHI Agar está formado por infusiones de tejido
de cerebro y corazón, peptonas y dextrosa con el
fin de proporcionar nutrientes necesarios para
favorecer el crecimiento de hongos. La sangre
desfibrinada de carnero suministra nutrientes
adicionales para favorecer el aislamiento y
cultivo de especies dimórficas. Al suplementar el
BHI Agar con agentes antimicrobianos, se
aumenta la recuperación de hongos patógenos a
partir de muestras clínicas debido a la inhibición

7
de bacterias. La gentamicina inhibe las bacterias MICROORGANISMO DESARROLLO/
gram negativas. El cloranfenicol es un antibiótico ASPECTO DE LA COLONIA
de amplio espectro que inhibe bacterias gram
Resultados de
positivas y gram negativas. La cicloheximida es Cepas
crecimiento
un agente antifúngico activo principalmente
Blastomyces Crecimiento de
contra los hongos saprofitos, sin inhibir las dermatitidis mediano a denso
levaduras ni los dermatofitos. Crecimiento de
*Candida albicans
COMPOSICIÓN mediano a denso
*Trichophyton Crecimiento de
Infusión cerebro mentagrophytes mediano a denso
8.0 g
corazón de (solidos)
Digerido péptico de
5.0 g ALMACENAMIENTO
tejido animal
Digerido Al recibir los tubos, almacenarlos en un lugar
pancreático de 16.0 g oscuro según las instrucciones que figuran en la
caseína
etiqueta. Evitar la congelación y el
Dextrosa 2.0 g
sobrecalentamiento. No abrir hasta que se vayan
Cloruro sódico 5.0 g
a utilizar. Reducir al mínimo la exposición a la
Fosfato disódico 2.5 g
Agar 13.5 g luz.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
PREPARACIÓN Los tubos se inoculan con las tapas flojas a 20 –
Inocular el medio tan pronto como sea posible 27 °C durante un máximo de siete días. Se
después de recibir la muestra en el laboratorio. observa crecimiento de promedio a denso con
Extender la muestra en el medio con un asa de todos los organismos.
inoculación estéril para obtener colonias aisladas. LIMITACIONES DEL MÉTODO
Se recomienda añadir sangre de carnero para No utilizar los tubos si muestran evidencia de
mejorar la recuperación de hongos dimórficos contaminación microbiana, decoloración,
patógenos. Se incorporan agentes precipitado, evaporación o cualquier otro signo
antimicrobianos, incluidos cloranfenicol, de deterioro.
cloranfenicol con cicloheximida (CC) y
gentamicina para mejorar la recuperación de PRECAUCIONES
hongos patógenos a partir de muestras muy En las muestras clínicas puede haber
contaminadas con bacterias y hongos saprofitos. microorganismos patógenos, como los virus de la
hepatitis y el virus de la inmunodeficiencia
humana. Para la manipulación de todos los
elementos contaminados con sangre u otros
líquidos corporales deben seguirse las
“Precauciones estándar” y las directrices del
centro. Antes de desecharlos, esterilizar en
autoclave los recipientes para muestras y
cualquier otro material contaminado.

8
 fermentación. Se utiliza fosfato disódico como
tampón en el medio.
COMPOSICIÓN
Fórmula aproximada por litro de agua purificada,
ajustada y/o complementada para satisfacer los
criterios de rendimiento.
Infusión de cerebro
y corazón de 8.0 g
(solidos)
Digerido péptico de
5.0 g
tejido animal
Digerido
Ilustración 2 Agar BHI Con 5% Sangre De Oveja pancreático de 16.0 g
caseína
Cloruro sódico 5.0 g

Agar BHI con Glucosa

Fosfato disódico de
hidrogeno
2.0 g
2.5 g

Antibióticos Agar 13.5 g

USO PREPARACIÓN
El agar BHI adicionado de cloranfenicol y Suspender 52 g del medio en un litro de agua
cicloheximida se utiliza para el aislamiento purificada.
selectivo de hongos patógenos. La cicloheximida
Extender la muestra tan pronto como sea posible
inhibe el crecimiento de hongos saprófitos
después de recibirla en el laboratorio, mediante
mientras que el cloranfenicol actúa como agente
un asa de inoculación estéril para obtener
antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas
colonias aisladas.
como Gram negativas. La incorporación de
ambos antimicrobianos proporciona una mayor Calentar con agitación frecuente y hierva durante
selectividad frente a hongos saprófitos y un minuto para disolver completamente el medio.
bacterias.
Autoclave a 121°C durante 15 minutos.
METODOLOGÍA
BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar obtiene los
nutrientes de la infusión de cerebro y corazón, la
peptona y la glucosa. Las peptonas y la infusión
son fuentes de nitrógeno orgánico, carbono,
azufre, vitaminas y sustancias de traza.
La glucosa es la fuente de carbohidratos que los
microorganismos utilizan mediante

9
 MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA
ORGANISM CRECIMIENT COLOR
O O
Candia Mediano a De blanco a
albicans denso crema a
marrón claro
Escherichia Inhibido N/A
coli

ALMACENAMIENTO
Evitar la congelación y el calentamiento
excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su
Ilustración 3Agar BHI con antibióticos
fecha de caducidad (marcada en la etiqueta en el
paquete) e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados. Las placas de grupos
de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante
una semana siempre que se almacenen en un
lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C. Agar Bilis Esculina
USO
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Medio utilizado para el aislamiento e
Incubar tubos representativos no inoculados a identificación presuntiva de estreptococos del
33– 37 °C y 20 – 25 °C durante 72 h y examinar grupo D.
para detectar contaminación microbiana.
METODOLOGÍA
LIMITIACIONES DE MÉTODO
Medio de cultivo BILIS ESCULINA por la
Este medio se utiliza para el aislamiento y cultivo presencia de extracto de carne y peptona de carne
de una amplia variedad de hongos, incluidos los que aportan nutrientes para el desarrollo
causantes de micosis sistémicas, Actinomycetales microbiano. Los estreptococos del grupo D
aerobia (por ejemplo, Rhodococcus y crecen rápidamente en el agar bilis esculina e
Tsukamurella), además de determinadas hidrolizan la esculina, que en presencia de iones
bacterias exigentes. No se recomienda utilizarlo hierro forman un compuesto de color verde oliva
como medio de uso general para bacterias y hasta negro.
hongos.
COMPOSICIÓN
PRECAUCIONES
Sales biliares 40.0 g
Solamente para uso profesional. Peptona de carne 5.0 g
No utilizar las placas si muestran evidencia de Extracto de carne 3.0 g
contaminación microbiana, decoloración, Esculina 1.0 g
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de Citrato férrico 0.5 g
Agar 15.0 g
deterioro.

10
PREPARACIÓN LIMITACIONES DEL METODO
Disolver 64 g en 1 L de agua destilada; calentar La prueba de la bilis esculina se utilizó
y agitar hasta ebullición. No sobrecalentar. originalmente para la identificación de
Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. enterococos. Actualmente se emplea además para
la identificación presuntiva de otros
A partir de un cultivo puro del microorganismo
Estreptococos grupo D y también para los
en estudio, con aguja de inoculación inocular el
géneros de Aerococcus y Listeria, ya que
medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo
todos estos microorganismos pueden tolerar la
sobre la superficie del mismo
concentración de bilis presente en el medio de
MICROORGANISMO DESARROLLO/ cultivo e hidrolizar la esculina. -Algunos autores
ASPECTO DE LA COLONIA han demostrado que el medio es útil para
diferenciar el grupo Klebsiella-Enterobacter
Resultado de Serratia de otras enterobacterias.
Cepas
crecimiento
Crecimiento PRECAUCIONES
Enterococcus oscurecimiento
faecalis alrededor de las Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso
colonias profesional exclusivo.
Inhibición (parcial a No utilizar el producto si al recibirlo su envase
Streptococcus
completa), ausencia
pyogenes está abierto o dañado.
de oscurecimiento
Crecimiento, No utilizar el producto si existen signos de
Streptococcus oscurecimiento de la contaminación o deterioro, así como tampoco si
gallolyticus mitad o más del ha expirado su fecha de vencimiento.
medio
Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
manipula el producto.
ALMACENAMIENTO
Considerar las muestras como potencialmente
Los medios de cultivos preparados para su infecciosas y manipularlas apropiadamente
transportación tienen una tolerancia de hasta 24
horas con una siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio.
temperatura de 2 a 35°C, una vez llegado a su
destino final el mismo debe ser almacenado a
una temperatura de 4 a 8°C.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar tubos representativos sin inocular a una
temperatura de 20 – 25 °C y 30 – 35 °C y
examinar después de 7 días si hay indicios de
contaminación microbiana.

11
 COMPOSICIÓN
Mezcla de peptona 16g
Extracto de carne 2.5g
Extracto de 2.5 g
lavadura
Cloruro sódico 5g
Agar 14 g
Suplemento selectivo (cefoperazona,
rifampicina, anfotericina B, colistina) + 5%
de sangre de oveja estéril

PREPARACIÓN
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo
Ilustración 4 Agar Bilis Esculina
de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras
de heces frescas o torundas rectales tomadas a
pacientes en que se sospecha infección con

Agar Butzler especies de Campylobacter, o bien muestras de

carne y otros alimentos. Las muestras fecales,

Modificado
torundas y muestras de alimentos no deben tener
más de 24 a 48 horas.

USO Las torundas deben insertarse en los medios de

El agar Butzler se usa para el aislamiento
selectivo de C. jejuni y C. coli de heces diarreicas
(bacterias que suponen una causa frecuente de
gastroenteritis bacteriana).
METODOLOGÍA
DILUCIÓN EN AGAR: Metodología
estandarizada por a estandarizada por CLSI (ex
NCCLS). Utilizada por laboratorios de
referencia, no práctica para la rutina de los
laboratorios clínicos.
DIFUSIÓN POR DISCOS es comparable a la
técnica de dilución en agar para la n en agar para
la mayoría de las drogas.
transporte apropiados.
La carne y otros alimentos primero deben
triturarse u homogeneizarse para luego
inocularse directamente o después de su
suspensión en una pequeña cantidad de caldo de
peptona en el medio. Si el material se cultiva
directamente empleando una torunda, hacerla
girar en una sección pequeña cercana al borde,
extendiendo luego a partir de esta área inoculada.

12
 MICROORGANISMOS Deben realizarse pruebas complementarias para
DESARROLLO/ASPECTO DE LA identificar la especie de la cepa aislada.
COLONIA
PRECAUCIONES
CEPAS RESULTADO DEL
CULTIVO DESPUÉS Solamente para uso profesional. No utilizar las
DE 48 horas a 35-37 placas si muestran evidencia de contaminación
°C microbiana, decoloración, deshidratación,
Staphylococcus aureus Sin crecimiento rajaduras o cualquier otro signo de deterioro.
Salmonella Sin crecimiento
typhimurium
Candida albicans Sin crecimiento
Campylobacter jejuni Buen crecimiento
Campylobacter coli Buen crecimiento

ALMACENAMIENTO
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su
utilización. Evitar la congelación y el Ilustración 5 Agar Butzler Modificado
sobrecalentamiento. Las placas de pilas abiertas
de 10 unidades pueden utilizarse. durante una

Agar CCF (Fructosa,

semana cuando se almacenan en un área limpia a
una temperatura de 2 – 8 °C.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Después de 42 a 48 h de incubación en una
atmósfera micro-aerobia, se examinan si las
placas presentan colonias características de
Campylobacter. Los aislados recientes, en
especial de C. jejuni, tienden a proliferar en estos
y otros medios para campilobacterias.
Se requieren más pruebas para lograr una
confirmación de la identificación.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Debido a los requisitos nutricionales, algunas
cepas, como las subespecies de Campylobacter
fetus, pueden no crecer en este medio. Algunas
cepas de Enterobacteriaceae pueden no inhibirse
totalmente. El efecto inhibidor disminuye en
presencia de un inóculo excesivamente pesado.
Cicloserina, Cefoxitina)
USO
es un medio enriquecido selectivo y diferencial
recomendado para el aislamiento y cultivo de
Clostridium difficile a partir de muestras fecales.
C. difficile es una causa reconocida de
infecciones intestinales y colitis
seudomembranosa después de la terapia con
antibióticos
Metodología: se reconoce como la causa más
común de colitis relacionada con antibióticos y
colitis seudomembranosa. Se han desarrollado
algunos procedimientos para el aislamiento de C.
difficile.

13
COMPOSICIÓN MICROORGANISMOS
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
Peptona 40.0 g
COLONIA
Fructosa 6.0 g
Fosfato de disodio 5.0 g Cepas Resultados del
Inhibidores de 1.5 g crecimiento
peróxido Clostridium difficile Crecimiento de bueno
Fosfato 1.0 g a excelente; colonias
monopotasio de color gris con
Sulfato de magnesio 0.1 g bordes con forma de
Agar 15.0 g botón, sin hemólisis
Cloruro de sodio 2.0 g Clostridium Inhibición de parcial a
Cicloserina 500.0 g perfringens completa, beta-
Cefoxilina 16.0 g hemólisis
Bacteroides fragilis Inhibición completa.
Escherichia coli Inhibición completa
Proteus mirabilis Inhibición completa
PREPARACIÓN Staphylococcus Inhibición completa.
Tan pronto como se recibe la muestra en el aureus Sin inocular Rojo (de
laboratorio, inocularla en una placa de BD color sangre)
Clostridium Difficile Agar con 7% Sheep Blood
y extender la muestra para aislamiento. Se ALMACENAMIENTO
aconseja incluir un medio no selectivo tal como
BD Schaedler Agar Los medios anaerobios A la recepción de la tienda a 2-8ºC. lejos de la luz
deben reducirse antes de la inoculación directa. No se deben usar medios si hay signos de
colocándolos en condiciones anaerobias durante deterioro (encogimiento, agrietamiento o
6 – 24 h antes de su utilización. Una manera fácil decoloración), contaminación o si la fecha de
y eficaz de obtener las condiciones anaerobias caducidad ha pasado. El producto es sensible a la
adecuadas es mediante el uso de sistemas luz y la temperatura; Proteger de la luz, el calor
anaerobios excesivo, la humedad y la congelación.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Se diferencia por el crecimiento de colonias
grandes (aproximadamente 4 mm de diámetro)
que son circulares con un borde ligeramente
filamentoso, de perfil bajo ondulado a plano, de
vidrio esmerilado y color amarillo con amarillo
que se extiende 2-3 mm más allá de la colonia en
el medio.
Las colonias de C. difficile típicamente
presentan un color amarillo dorado bajo una luz
ultravioleta de onda larga.

14

LIMITACIONES DEL MÉTODO
Las cepas raras de C. difficile se pueden inhibir
en CCFA. Otros organismos que no sean C.
difficile pueden crecer en CCFA, pero pueden
distinguirse por sus diferencias morfológicas. ara
obtener resultados óptimos, las placas no deben
examinarse después de 48 horas de incubación.
La incubación prolongada puede resultar en un
crecimiento significativo de colonias distintas de
C. difficile.
PRECAUCIONES
Este producto puede contener componentes de
origen animal. El conocimiento certificado del
origen y / o estado sanitario de los animales no
garantiza la ausencia de agentes patógenos
transmisibles. Por lo tanto, se recomienda que
estos productos se traten como potencialmente
infecciosos y se manejen observando las
precauciones de sangre universales habituales.
No ingiera, inhale, o permita que entre en
contacto con la piel.
Ilustración 6 Agar CCF
15
Agar Cin (Cefsulodina,
Irgasan, Novobiocina)
USO
Yersinia Selectivo Agar CIN ( Cefsulodina-
Irgasan-Novobiocina) es un medio selectivo y
diferencial para el aislamiento de Yersinia
enterocolítica.
METODOLOGÍA
El Agar Yersinia Selectivo fue descrito
inicialmente por Schiemann como una
alternativa al Agar MacConkey y otros medios
que se utilizaban para aislar la Yersinia
enterocolítica como agente causante de
gastroenteritis. Los nutrientes los aportan las
peptonas, la fermentación del Manitol en
presencia del rojo neutro da como resultado unas
típicas colonias de Y.enterocolítica traslúcidas
con el centro rosado y una característica forma de
“ojo de buey”.La inhibición de las bacterias
Gram positivas y negativas, es conseguida
gracias a la presencia del Cristal Violeta,
Desoxicolato Sódico, y los antimicrobianos:
Cefsulodina, Irgasan y Novobiocina. Este medio
de cultivo puede ser utilizado en el aislamiento
de otras especies de Yersinia como la
pseudotuberculosis.
COMPOSICIÓN
Medio selectivo para Yersinia. Contiene manitol
y rojo neutro como indicador. Las colonias de
Yersinia presentan un borde transparente con un
amplio centro rojo muy intenso. No es totalmente
específico para Yersinia, ya que pueden crecer
otros bacilos Gram negativos, en particular
Citrobacter freundii, que presenta colonias
semejantes a las de Yersinia.
PREPARACIÓN ALMACENAMIENTO
Las muestras deben procesarse con la mayor Una vez recibidas en el laboratorio, almacenar en
prontitud una vez recibidas. La temperatura ideal lugar oscuro y seco a una temperatura de 8º C, en
de incubación es entre 25-32 ºC de 24 a 48 horas su embalaje original hasta el momento de uso.
para la Yersinia. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento, así
como las variaciones bruscas de temperatura. Las
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
placas deben estar a temperatura ambiente antes
COLONIA
de ser inoculadas. No deben utilizarse con
Cepas Yersinia Selectivo posterioridad a la fecha de caducidad. Las bolsas
Agar (CIN ) deben ser abiertas cuando vayan a ser utilizadas,
Aeromonas Inhibición de una vez abiertas las que no se utilicen deberán
hydrophila parcial a completa mantenerse en áreas limpias y refrigeradas.
Yersinia Crecimiento de
enterocolitica bueno a excelente, CONTROL MICROBIOLOGICO
colonias rosa pálido Estas placas han sido inoculadas con la cepa que
o traslúcidas con a continuación se indican, incubadas a 25 +/- 2ºC
centro rojo (ojo de o 35 +/- 2ºC en atmósfera aeróbica y examinadas
buey)*
a las 20-24 horas y a las 42-48 horas.
Escherichia coli Inhibición completa
Enterococcus faecalis Inhibición de PRECAUCIONES
parcial a completa
Proteus mirabilis Inhibición de Este producto es para uso exclusivo de
parcial a completa profesionales. No debe ser utilizado en caso de
Pseudomonas Inhibición de presentar contaminación microbiana,
aeruginosa parcial a completa decoloración, signos de deshidratación, roturas u
Staphylococcus Inhibición de otros signos de deterioro. Utilizar bajo
aureus parcial a completa procedimientos de laboratorio, siempre como
No inoculadas Rosa suave, material biopeligroso.
ligeramente
opalescente

LIMITACIONES DEL MÉTODO

Este medio no está recomendado para
aislamiento selectivo de Yersinia pestis. Las
pruebas complementarias de tipo bioquímico o
serológico son necesarias para la identificación
completa.

Ilustración 7 Agar CIN

16
 Agar Chocolate
PROCEDIMIENTO
Inocular en superficie. Estrías paralelas con el asa
USO o hisopo.

El Agar Chocolate es un medio no selectivo para Incubar en condiciones aeróbicas a 35 ± 2°C

cultivo y aislamiento de microorganismos durante 18-24 horas.
exigentes, especialmente de Neisseria y Lectura e interpretación de los resultados.
Haemophilus spp de muestras clínicas.
El medio Agar Chocolate en placa de Petri viene
METODOLOGÍA listo para ser utilizado.
En el diagnóstico cínico de los cuadros MICROORGANISMOS
infecciosos es importante garantizar la DESARROLLO/ASPECTO DE LA
recuperación de toda clase de microorganismos COLONIA
incluyendo algunos de crecimiento exigentes, en
toda clase de muestras clínicas, el Agar chocolate MICROORGANISMOS CRECIMIENTO
es un medio que contiene hemoglobina bovina lo Haemophilus influenzae De bueno a
excelente
que garantiza el crecimiento de toda clase de Neisseria gonorrhoeae Aceptable a
microorganismos de crecimiento rápido y excelente
microorganismos de crecimiento exigente que Neisseria meningitidis Bueno a excelente
solo requieran para su crecimiento factor X. Streptococcus pneumoniae Bueno a excelente

COMPOSICIÓN
ALMACENAMIENTO
Proteasa peptona 15.0 g
Hidrolizado de 2.5 g Una vez recibidas en el laboratorio, almacenar en
hígado lugar oscuro y seco a una temperatura de 8 ºC, en
Extracto de 5.0 g su embalaje original hasta el momento de uso.
levadura Evitar la congelación y el sobrecalentamiento, así
Cloruro sodico 5.0 g como las variaciones bruscas de temperatura. Las
Sangre de caballo 5.0 g placas deben estar a temperatura ambiente antes
calentada 7% de ser
Agar 12.0 g
Factores de 0.5 g CONTROL MICROBIOLÓGICO
crecimiento
Incubar las placas a una temperatura de 35 ± 2 °C
en una atmósfera aerobia con dióxido de carbono.
Efectuar lectura de las placas después de 18 – 24
h y 42 – 48 h de incubación.

17
 Agar Cistina-Telurito
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Por ser el Agar chocolate un medio enriquecido
permitirá el crecimiento de bacterias tanto
patógenas como saprofitas, por lo que es USO
importante que el bacteriólogo determine de
acuerdo al tipo de muestra que se esté analizando Serum Tellurite Agar (agar suero de telurito) es
que clase de microorganismos es importante un medio selectivo y de diferenciación utilizado
aislar e identificar, para garantizar el diagnóstico principalmente para el aislamiento y la
correcto, así mismo es importante trabajar con las identificación de Corynebacterium diphtheriae.
mayores condiciones de asepsia para garantizar METODOLOGÍA
que no hay crecimiento de microorganismos
contaminantes que puedan ocasionar un BD BBL Serum Tellurite Agar (agar suero de
diagnóstico erróneo. telurito) es un medio selectivo y de
diferenciación utilizado principalmente para el
PRECAUCIONES aislamiento y la identificación de
Este producto es para uso exclusivo de Corynebacterium diphtheriae. Contiene suero de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de cordero y telurito potásico, fue desarrollado para
presentar contaminación microbiana, su uso en el examen de cultivos nasales, faríngeos
decoloración, signos de deshidratación, roturas u y vaginales con el fin de aislar la especie
otros signos de deterioro. Utilizar bajo Corynebacterium1.
procedimientos de laboratorio, siempre como COMPOSICION
material biopeligroso.
Paptona de proteosa 20 g
N° 3
Cloruro sódico 5g
Agar 20 g
Suero de cordero 50 mL
solución de telurito 10 mL
potásico 1%

PREPARACIÓN
La superficie del agar debe estar lisa y húmeda,
pero sin humedad en exceso. Extender las
Ilustración 8 Agar Chocolate
muestras tan pronto como sea posible después de
recibirlas en el laboratorio. La placa de extensión
se utiliza principalmente para aislar los cultivos
puros de las muestras con flora mixta. Si, por el
contrario, el material se cultiva directamente
empleando una torunda, hacerla girar en una
sección pequeña cercana al borde, extendiendo
luego a partir de esta área inoculada.

18
 MICROORGANISMOS detectar en un único medio todos los organismos
DESARROLLO/ASPECTO DE LA de importancia potencial en una muestra. Los
COLONIA cultivos de muestras cultivadas en medios
selectivos por consiguiente deben compararse
AGAR BASE
con muestras cultivadas en medios no selectivos
INCLINADO
para obtener información adicional y favorecer la
Salmonella Alcalino Alcalino recuperación de patógenos potenciales.
choleraesuis (morado) (morado)
PRECAUCIONES
Subsp.
Para uso diagnóstico in vitro. Si se observa
Arizonae
humedad en exceso, invertir la parte inferior
Citrobacter Alcalino Ácido sobre una tapa desplazada y permitir que se seque
freundii (morado) (amarillo) al aire para impedir que se forme una barrera
estanca entre la parte superior y la inferior de la
Proteus Rojo Ácido placa durante la incubación. En las muestras
vulgaris (amarillo) clínicas puede haber microorganismos
patógenos, como los virus de la hepatitis y el
virus de la inmunodeficiencia humana. Para la
ALMACENAMIENTO manipulación de todos los elementos
Incubar las placas a 35 ± 2 °C en una atmósfera contaminados con sangre u otros líquidos
aerobia. c. Incluir placas de agar de soja BD BBL corporales deben seguirse las “Precauciones
Trypticase con sangre de carnero al 5% (TSA II) estándar” 3-6 y las directrices del centro.
como controles no selectivos para todos los Después de su uso, las placas preparadas, los
organismos. 2. Examinar las placas después de recipientes de muestra y otros materiales
18–24 y 42–48 h para comprobar la extensión del contaminados deben esterilizarse en autoclave
crecimiento, el tamaño de las colonias, la antes de ser desechados.
pigmentación y la selectividad.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar las placas durante 24–48 h a 35 ± 2 °C en
una atmósfera aerobia.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Los organismos diferentes de Corynebacterium
diphtheriae; es decir, las especies
Staphylococcus, pueden reducir el telurito y
producir colonias de color negro en BD BBL
Serum Tellurite Agar. Algunas pruebas
diagnósticas pueden realizarse desde la placa de
aislamiento primario. Sin embargo, se
recomienda un cultivo puro para realizar las Ilustración 9 Agar Cistina-Telurito
pruebas bioquímicas y otros procedimientos de
identificación. Sólo en raras ocasiones es posible

19
 Agar Citrato de Hierro
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA

Tres Azucares Especie bacteriana Superficie

inclinada
Fondo
USO
Enterobacter A K
El agar citrato de hierro tres azucares se utiliza
para la diferenciación de microorganismos en E. Coli A A
base a la fermentación de dextrosa, lactosa y
sacarosa y la producción de sulfuro de hidrógeno Shigella K A
en un laboratorio. Este agar no está diseñado para Salmonella typhi K A
usarse en el diagnóstico de enfermedades u otras
afecciones en humanos. S. Paratyphi K A

METODOLOGÍA S. Choleraesuis K A

La fermentación de los azucares contenidos en el Otras salmonellas K A

medio glucosa, sacarosa y lactosa producen una Citrobacter K A
acidificación que hace que este pase de rojo a
amarillo. Las bacterias que fermentan solamente P. Mirabilis K A
a la glucosa se detectan al volver el medio
P. Morganii K A
rápidamente a su coloración inicial en la parte
superior del tubo, aquellas que no fermentan a P. Rettgeri K A
ninguna de las tres azucares no harán cambiar el
color del medio.
COMPOSICIÓN ALMACENAMIENTO

Nutrientes: Peptona Almacenar en lugar seco y fresco. Tienda sobre

Sustratos: Glucosa, Lactosa, Sacarosa, Sulfato
Ferroso, Tiosulfato de Sodio
Indicador de pH: Rojo fenol
PREPARACIÓN
Sembrado: Con un ansa puntiforme, previamente
flameada, tocar el centro de la colonia en estudio.
Introducir el ansa hasta el fondo tubo y luego
estriar en “zig-zag” la superficie en pico de
flauta. Incubación: Colocar en estufa de cultivo
a 35-37 °C durante 18-24 horas, en aerobiosis.
cuarto temperatura. Retener bien cerrado y
protegido desde dirigir luz del sol.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo
rojo): el microorganismo es no fermentador de
azúcares.
Anaranjado/anaranjado (control, sin inocular).
Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo
amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo
amarillo): el microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.

20

La presencia de burbujas, o ruptura del medio de
cultivo, indica que el microorganismo produce
gas
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Los resultados de la prueba deben ser leídos
luego de 18 a 24 horas de incubación. Si la
lectura se efectúa a tiempos menores puede
existir falsos positivos por la presencia de acidez
o la acidez generada no sea suficiente para
producir el viraje del indicador rojo de fenol al
rojo de amarillo. Si se lee luego de 24 horas se
pueden obtener resultados falsos negativos por
consumo de peptonas durante de crecimiento de
los microorganismos.
PRECAUCIONES
Use ropa protectora correspondiente. No respirar
el polvo. Evite el contacto con los ojos, la piel y
la ropa. Desechar de conformidad con todas las
normativas federales, estatales y locales
aplicables
Ilustración 10Agar Citrato de Hierro
21
Agar CLED
USO
El CLED Agar (Agar cistina-lactosa deficiente
en electrolitos) es un medio de cultivo diferencial
para aislar y contar las bacterias presentes en la
orina. Favorece el crecimiento de los patógenos
y contaminantes urinarios, aunque, debido a la
ausencia de electrolitos, impide la indebida
proliferación de especies de Proteus
METODOLOGÍA
La gelatina, las peptonas de caseína y el extracto
de carne bovina constituyen los nutrientes del BD
CLED Agar. Se incluye lactosa en el medio con
el objeto de proporcionar una fuente de energía
para los microorganismos capaces de utilizarla a
través de un mecanismo de fermentación. Como
indicador del pH se utiliza azul de bromotimol,
para diferenciar los microorganismos
fermentantes de lactosa y los no fermentantes.
Los primeros reducen el pH y modifican el color
del medio, pasando éste de verde a amarillo. La
cistina permite el crecimiento de "colonias
enanas" de coliformes. Se reducen las fuentes de
electrolitos con objeto de minimizar la
proliferación de las especies de Proteus. De este
modo, el medio permite la determinación
cuantitativa de los patógenos urinarios, incluido
el Proteus, si se emplean asas calibradas para la
inoculación.
COMPOSICIÓN
Digerido pancreático de gelatina 4,0 g
Digerido pancreático de caseína 4,0 g
Extracto de carne bovina 3,0 g
Lactosa 10,0 g
L-cistina 0,128 g
Azul de bromotimol 0,02 g
Agar 15,0
PREPARACIÓN Staphylococcus Crecimiento;
saprophyticus colonias pequeñas,
Se puede utilizar la orina de la parte media de la color blanco a
micción, de la sonda o recogida mediante amarillento; medio
punción vesical supra púbica, Emplear técnicas de color amarillo
asépticas al recoger las muestras urinarias. Es Sin inocular Color verde a azul
preciso extender la orina directamente en el verdoso
medio no más tarde de las 2 horas siguientes a la
recolección de la muestra o bien refrigerarla
ALMACENAMIENTO
(menos de 24 horas), a fin de evitar el
crecimiento excesivo de los agentes infecciosos Almacenarlas en un lugar oscuro a una
o contaminantes previamente a la inoculación de temperatura entre 2 y 8 °C, envueltas en su
este medio. envase original, hasta justo antes de usarlas.
Evitar la congelación y el PA-254003.06 - 2 -
Extender la orina directamente en el medio no
calentamiento excesivo.
más tarde de las 2 horas siguientes a la
recolección de la muestra. CONTROL MICROBIOLÓGICO
MICROORGANISMOS Incubar las placas en aire ambiente a una
DESARROLLO/ASPECTO DE LA temperatura de 35 ± 2 °C, durante un período de
COLONIA 24 a 48 h.
Cepas Resultados del LIMITACIONES DEL MÉTODO
crecimiento
Escherichia coli Crecimiento; Este medio se utiliza exclusivamente para contar
colonias y medio de y diferenciar las bacterias presentes en la orina.
color amarillo PRECAUCIONES
Proteus vulgaris Crecimiento;
colonias desde No usar placas que presenten señales de
incoloras hasta de contaminación microbiana, decoloración,
color azul; desecación, roturas u otras señales de deterioro.
inhibición de la Consultar en las INSTRUCCIONES
proliferación; ligera GENERALES DE USO los procedimientos de
propagación
manipulación aséptica, peligros biológicos y
aceptable
eliminación del producto después de su uso.
Enterococcus faecalis Crecimiento;
colonias desde
incoloras hasta de
color amarillo;
medio de color
amarillo
Staphylococcus Crecimiento;
aureus colonias pequeñas,
de color amarillo;
medio de color
amarillo

22

Ilustración 11 Agar CLED
Agar Cloranfenicol
USO
Es un medio no selectivo para el cultivo y
mantenimiento de hongos patógenos y no
patógenos, en especial dermatofitos. Se logra
selectividad mediante la adición de cloranfenicol.
METODOLOGÍA
Licuar Sabouraud Dextrose Agar Deeps en tubos,
mediante ebullición en baño María, enfriar a 45 –
50 °C y verter en placas de Petri y dejar
solidificar durante como mínimo 30 min.
Inocular muestras representativas con los
cultivos enumerados a continuación, extender en
la superficie de agar 0,01 mL de asa calibrada
utilizando cultivos de caldo fúngicos (hasta 7
días de antigüedad). Para Escherichia coli,
inocular un asa llena utilizando un cultivo de
caldo de soja Trypticase de 18 a 24 h diluido en
proporción 10-1, incubar los recipientes de
prueba a 25 – 30 °C en una atmósfera aerobia.
23
Las tapas deben estar flojas en los medios en los
tubos y frascos. Incluir agares inclinados de
Sabouraud Dextrose Agar en calidad de controles
no selectivos cuando se analice Sabouraud
Dextrose Agar con medios con cloranfenicol.
NOTA: Trabajar con A. brasiliensis (ATCC
16404) en una cabina de seguridad biológica.
COMPOSICIÓN
Digerido
pancreático de 5,0 g
caseína
Digerido péptico de
5,0 g
tejido animal
Dextrosa 40,0 g
Agar 15,0 g
Cloranfenicol 0,5 g
PREPARACIÓN
Licuar el agar contenido en los tubos A mediante
ebullición en baño María*, dejar enfriar a 45 – 50
°C y verter en placas de Petri. Dejar solidificar
durante el menos 30 min. Con placas y frascos,
extender la muestra tan pronto como sea posible
después de recibirla en el laboratorio, mediante
un asa de inoculación estéril para obtener
colonias aisladas. Consultar las referencias
correspondientes para obtener información
acerca del procesamiento e inoculación de
muestras3,4. Los agares inclinados en tubo
preparados están diseñados para uso con cultivos
puros con fines de mantenimiento y otros
propósitos.
 MICROORGANISMO /ASPECTO Después de su utilización, los tubos preparados,
COLONIA los recipientes de muestras y otros materiales
contaminados deben esterilizarse en autoclave
*Aspergillus brasiliensis Crecimiento
antes de ser desechados.
*Candida albicans Crecimiento
*Trichophyton Crecimiento
mentagrophytes
*Escherichia coli Inhibición
(parcial a
completa)

ALMACENAMIENTO
Almacenarlos en un lugar oscuro a 2 – 8 °C. No
congelar ni sobrecalentar. No abrir hasta que se
vayan a utilizar. Reducir al mínimo la exposición Ilustración 12 Agar Cloramfenicol

a la luz.

Agar CNA
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar tubos o frascos representativos sin
inocular a una temperatura de 20 – 25 °C y 30 –
35 °C y examinar después de 7 días en busca de
contaminación microbiana.
(Colistina, ácido
LIMITACIONES DEL METODO
Para su identificación, los organismos deben
nalidixico)
USO
encontrarse en un cultivo puro. Deben llevarse a
cabo pruebas morfológicas, bioquímicas y/o El Agar Columbia CNA está recomendado para
serológicas para lograr una identificación final. el aislamiento y detección de la actividad
Consultar los textos correspondientes para hemolitica de cocos Gran positivos a partir de
obtener información detallada y procedimientos muestras clínicas.
recomendados.
METODOLOGÍA
PRECAUCIONES
Placas de Agar Columbia CNA + 5% sangre.
En las muestras clínicas puede haber
Agar Columbia CNA + 5% sangre es un medio
microorganismos patógenos, como los virus de la
selectivo rico en nutrientes, lleva agentes
hepatitis y el virus de la inmunodeficiencia
antimicrobianos selectivos (CNA) colistina
humana. Para la manipulación de todos los
sulfato y ácido nalidixico que inhiben el
elementos contaminados con sangre u otros
crecimiento de enterobacterias y pseudomonas.,
líquidos corporales deben seguirse las
mientras que permiten el crecimiento de
“Precauciones estándar”6-9 y las directrices del
Levaduras, Estafilococos, Estreptococos y
centro.
Neumococos.

24
Las mezclas de peptonas aportan nitrógeno, MICROORGANISMO /ASPECTO
vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales COLONIA
para el crecimiento.
Microorganismo Crecimiento
El extracto de levadura es fuente de vitaminas, Staphylococcus Bueno
particularmente del grupo B esenciales para el aureus
desarrollo bacteriano, El almidón actúa como Staphylococcus Bueno
factor de crecimiento, probablemente actúa como epidermidis
un coloide protector y neutraliza los productos Streptococcus Bueno
pneumoniae
tóxicos que se forman durante el desarrollo de los
Streptococcus Bueno
microorganismos. El cloruro sódico aporta
pyogenes
electrolitos esenciales para el transporte y
balance osmótico. La sangre es otra fuente de
factores de crecimiento. El Agar bacteriológico ALMACENAMIENTO
es el agente solidificante. La colistina y el ácido
Frascos con medio base: 6 meses a 2°C-8°C.
nalidixico son antibióticos que inhiben de
enterobacterias y Pseudomonas. Placas con medio completo: 1 semana a 2°C-8°C,
resguardadas de la luz.
COMPOSICIÓN
Mezcla de Peptonas 20,0 g/l
Ácido Nalidixico 0,015 g/l
Cloruro Sódico 5,00 g/l
Sulfato de Colistina. 0,01 g/l
Extracto de Carne 3,0 g/l
Agar bacteriológico 15,0 g/l
Almidón 1,0 g/l
Sangre desfibrinada 5%

PREPARACIÓN
Inocular en superficie. Estrías paralelas con el asa
o hisopo
Incubar en condiciones aeróbicas a 35 ± 2°C Ilustración 13 Agar CNA
durante 18-24 horas. Lectura e interpretación de
los resultados
Tipos de Hemolisis:
1. Alpha-hemolisis: decoloración verdosa
de medio
2. Beta-hemolisis: zona clara alrededor de la
colonia
3. Gamma-hemolisis: sin cambio

25
 Agar Columbia
MICROORGANISMO /ASPECTO
COLONIA

USO MICROORGANISMOS CRECIMIENTO

Escherichia coli ATCC Satisfactorio
Es un medio altamente nutritivo que permite el
25922
aislamiento y cultivo de microorganismos
Staphylococcus aureus Satisfactorio
exigentes, por lo que se usa como una base para
atcc 25923
la preparación de diversos medios de cultivo.
Pseudomonas Satisfactorio
METODOLOGÍA aeruginosa ATCC
27853
Es una excelente base para el crecimiento de
microorganismos exigentes y para la buena Clostridium sporogenes Satisfactorio
ATCC 19404
visualización de hemólisis con el agregado de
sangre. Incluye peptona, tripteína, extracto de
levadura y extracto de corazón que favorecen el ALMACENAMIENTO
desarrollo de microorganismos exigentes. El
almidón incrementa el desarrollo de neiserias y Medio de cultivo deshidratado a 10-35 grados
las reacciones de hemólisis de algunos Centígrados.
estreptococos. Tiene la ventaja de permitir la Medio de cultivo preparado a 2-8 grados
adición de sangre o de antibióticos entre otras Centígrados.
cosas, obteniéndose así un medio más
enriquecido o selectivo de acuerdo con el aditivo. CONTROL MICROBIOLÓGICO

COMPOSICIÓN Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a

35-37 grados centígrados durante 18 a 24 horas.
Digestato pépsico de 5.0 g
carne Bacterias exigentes en sus requerimientos
Digerido 3.0 g nutricionales: en atmosfera con 5% de CO2 a 35-
pancreático de 37 grados centígrados durante 24-48 horas.
corazón
Bacterias anaerobias: en anaerobiosis, a 35-37
Triptona 10.0 g
Extracto de 5.0 g grados centígrados durante 24-48 horas.
Levadura LIMITACIONES DEL MÉTODO
Cloruro sódico 5.0 g
Almidón de maiz 1.0 g - Las reacciones hemolíticas de una amplia
Agar-agar 15.0 g variedad de microorganismos son diferentes al
PREPARACIÓN usar sangre equina respecto al utilizar sangre de
carnero, tal es el caso de algunas cepas de
Suspender 44 g del polvo en 1 litro de agua estreptococos grupo D, que produce beta
purificada. Calentar con agitación frecuente y hemolisis en el agar suplementado con sangre
hervir durante un minuto para disolución total. equina pero no en el agar suplementado con
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar sangre de carnero, y son mal clasificadas como
en autoclave a 121 grados Centígrados durante Estreptococos grupo A al usar sangre equina.
15 minutos.

26
- La atmosfera de incubación puede influenciar
en el tipo de reacción de hemolisis en los
estreptococos beta hemolíticos. Para obtener el
mejor rendimiento, incubar las placas en
atmosfera con CO2 o en anaerobiosis.
PRECAUCIONES
Solamente para un diagnostico in vitro. Uso
profesional exclusivo. No utilizar el producto si
existen signos de contaminación o deterioro, así
como tampoco si ha expirado su fecha de
vencimiento.
Ilustración 14 Agar Columbia
Agar Con Plasma De
Conejo Y Fibrinógeno
USO
Es un medio de cultivo utilizado para el recuento
sin necesidad de confirmación de los CPS en
alimentos.
27
METODOLOGÍA
El suplemento RFP permite observar la acción de
la coagulosa de los estafilococos y contiene un
inhibidor de la tripsina para evitar la fibrinólisis
total o parcial de los halos formados en torno a
las colonias coagulasa positivas.
COMPOSICIÓN
Triptona 10g
extracto de carnes 5g
extracto de levadura 1g
piruvato sódico 10g
glicina 12g
cloruro de litio 5g
agar bacteriológico 12.5g
PREPARACIÓN
Fundir el medio base BP y atemperar en un baño
a 45°c-48°c. Añadir 10ml de agua destilada
estéril a un frasco de suplemento RPF. Mezclar
suavemente hasta la disolución completa. Añadir
el suplemento RPF al medio base BP.
Homogenizar sin incorporar aire. Repartir
asépticamente en placas Petri estériles. Deja
solidificar.
MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
El plasma de conejo está pensado exclusivamente
para uso diagnóstico in vitro.
ALMACENAMIENTO
El plasma reconstituido, si se mantiene sin
contaminar, conservará la actividad durante
cinco días cuando se conserve a 2-8°C o durante
hasta 30 días cuando se formen alícuotas y se
conserva a –20°C, no superando la fecha de
caducidad de la etiqueta.
 Agar cromogénico para
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Cuando se usa el método de aglutinación en
portaobjetos para determinar la actividad de la
coagulasa en los Staphylococci, pueden
aislamiento de
producirse reacciones falsas positivas con
algunas cepas cuando se usan plasmas de animal.
cronobacter sakazakii
Además, puede producirse aglutinación
espontánea cuando se usan cultivos rugosos. USO
Cuando se emplea el método de portaobjetos,
Agar selectivo y cromogénico para el
todas las reacciones negativas deben confirmarse
aislamiento presuntivo de Enterobacter sakazakii
con la prueba en tubo.
(Cronobacter sakazakii) en alimentos infantiles y
PRECAUCIONES lácteos.

Exclusivamente para uso diagnóstico in vitro. METODOLOGÍA

No utilizar el reactivo después de la fecha de
La enzima Beta-D-glucosidasa de este
caducidad mostrada en la etiqueta del producto.
microorganismo reacciona con el sustrato
Se deben tomar medidas de seguridad como si un
cromogénico beta-X-glucopiranósido presente
organismo patógeno estuviera presente, cuando
en el medio, provocando la aparición de colonias
se manipulen, procesen y eliminen todas las
verde-azuladas en tan sólo 24 horas. Otras
muestras clínicas.
enterobacterias no expresan bien la Beta-D-
glucosidasa en este medio, creciendo con
colonias crema o púrpura (por el cristal violeta),
traslúcidas. El desoxicolato, el cristal violeta y la
temperatura de incubación inhiben el crecimiento
de otros microorganismos.

La adición de más agar-agar del tipo

cromogénico a la fórmula inicial termoestabiliza
el cromógeno, aunque puede llegar a flocular. El
tiosulfato sódico inactiva desinfectantes
residuales, como el cloro del agua.
COMPOSICIÓN
Ilustración 15 Agar con plasma de conejo y
fribrinógeno Triptona 7.0 g
Cloruro sodico 5.0 g
Extract de levadura 3.0 g
Desoxilato sodico 0.60 g
Thiosulfato sodico 1.0 g
Mix cromogenico 0.15 g
Cristal violeta 0.002g
Agar - agar 15.0 g

28
PREPARACIÓN
Disolver 31,75 gramos en 1 litro de
agua bidestilada. Agitar calentando hasta
ebullición. Autoclavar a 121°C durante 15
minutos. ¡No sobrecalentar! El color del medio
es púrpura, a veces floculado por el tipo de agar-
agar.
MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Ilustración 16 Agar Cromogénico
• Enterobacter (=Cronobacter) sakazakii ,

Agar de sangre
Excelente, colonias verde-azuladas.
Crece más del 50% del valor inóculo.
• Escherichia coli , Excelente, colonias

•
incoloras con el centro azulado.
Enterobacter aerogenes , Excelente,
colonias incoloras con el centro azulado.
• Enterococcus faecalis, Inhibido.
ALMACENAMIENTO
Almacene el medio deshidratado a 10-30 ° C y
utilícelo antes de la fecha de caducidad que figura
en la etiqueta.
El medio preparado se debe almacenar entre 8 –
15ºC.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar 18-24 h a 37-41°C aproximadamente.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Temperaturas superiores a 45 °C inhibirán el
crecimiento de E. sakazakii. Temperaturas
inferiores a 43 °C reducirá la inhibición de las
bacterias acompañantes.
Columbia.
USO
El Columbia Agar with 5% Sheep Blood (Agar
Columbia con 5% de sangre de carnero) es un
medio con un alto contenido nutricional, para el
aislamiento y cultivo de microorganismos
exigentes y no exigentes provenientes de material
clínico y no clínico.
METODOLOGÍA
Agar Columbia con 5% de sangre de carnero, con
unas propiedades nutricionales que permiten
mejores crecimientos, gracias a la combinación
de peptonas, al extracto de levadura como
suministrador de vitaminas del grupo B, almidón
de maíz como absorbente de productos
biotóxicos y fuente nutricional de organismos
con actividad alfamilasa. La sangre de carnero
permite poner de manifiesto reacciones
hemolíticas y sirve como fuente de hemina
necesaria para el crecimiento de muchas especies
patógenas

29
COMPOSICION ALMACENAMIENTO
Hidrolizado pancreático de caseína 12.0 g almacenar en lugar oscuro y seco a una
Hidrolizado péptico de tejidos animales 5.0 g temperatura de 8 ºC, en su embalaje original
Extracto de Levadura 3.0 g hasta el momento de uso. Evitar la congelación y
Extracto de carne 3.0 g el sobrecalentamiento, así como las variaciones
Almidón de maíz 1.0 g bruscas de temperatura que pueden llegar a
Cloruro sódico 5.0 g provocar hemólisis.
Agar 13.5 g
Sangre de carnero desfibrinada 5 % LIMITACIONES DE METODO
Las condiciones de cultivo para el aislamiento de
PREPARACION muchos patógenos pueden requerir en una
primera fase la utilización de atmósfera que
Se incluye almidón de maíz para absorber los contenga del 3 al 10% de dióxido de carbono, el
derivados tóxicos contenidos en la muestra y tiempo de incubación a 35-37ºC puede llegar a
sirve como fuente de energía para los superar las 24 horas (hasta 72 horas)
microorganismos que poseen alfa-amilasas.
Debido al más bien elevado contenido de
La sangre de carnero permite detectar las carbohidratos (almidón) de Columbia Agar Base,
reacciones hemolíticas y aporta el factor X los estreptococos beta-hemolíticos pueden
(hemo) necesario para el crecimiento de exhibir reacciones hemolíticas alfa en lugar de
numerosas especies patogénicas. beta o reacciones hemolíticas débiles en los
MICROORGANISMO medios basados en esta formulación.
DESARROLLO/ASPECTO DE LA PRECAUCIONES
COLONIA
Este producto es para uso exclusivo de
Cepas Resultado profesionales. No debe ser utilizado en caso de
Streptococcus Crecimiento bueno o
presentar contaminación microbiana,
pyogenes excelente, débil o
decoloración, signos de deshidratación, roturas u
adecuada hemólisis
beta otros signos de deterioro. Utilizar bajo
Streptococcus Crecimiento bueno o procedimientos de laboratorio, siempre como
pneumoniae excelente, hemólisis material biopeligroso.
alfa
Staphylococcus Crecimiento bueno o
aureus excelente; puede ser
o no beta hemolítico
Escherichia coli Crecimiento bueno o
excelente; puede ser
o no beta hemolítico
Sin inocular Rojo (color sangre)

30
 Las bacterias que no fermentan la lactosa forman
colonias incoloras. La mayoría de las bacterias
intestinales normales como la E. coli fermentan
la lactosa (colonias rojas) en tanto que las
especies de Salmonella y Shigella no lo hacen
(colonias incoloras).
COMPOSICIÒN
Xilosa 3.5 g
L-Lisina 5.0 g
Lactosa 7.5 g
Sacarosa 7.5 g
Cloruro sódico 5.0 g
Extracto de levadura 3.0 g
Ilustración 17 Agar de Sangre Columbia Rojo fenol 0.08g
Desoxicolato sódico 2.5 g

Agar Desoxicolato Tiosulfato sódico 6.8 g

Citrato férrico amónico 0.8
g
Agar 13.5 g
USO
El Agar XLD (Agar Xilosa, Lisina y PREPARACIÒN
Desoxicolato) es un medio moderadamente
Una vez recibida la muestra en el laboratorio,
selectivo y diferencial para el aislamiento y
extenderla tan pronto como sea posible. Si el
diferenciación de microorganismos Gram-
material se cultiva directamente empleando una
negativos entéricos patógenos (Salmonella y
torunda, hacerla girar en una sección pequeña
Shigella) de muestras clínicas y no clínicas.
cercana al borde, extendiendo luego para hacer el
Especialmente recomendado para el aislamiento
aislamiento a partir de esta área inoculada.
de especies de Shigella.
Incubar las placas, protegidas de la luz, a una
METODOLOGÍA temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de
18 a 24 h.
Las dos peptonas proporcionan nitrógeno y
carbono para las necesidades generales del
crecimiento. La lactosa es el carbohidrato
fermentable. El cloruro de sodio y el fosfato
dipotásico conservan el equilibrio osmótico del
medio. El desoxicolato y los citratos de sodio
inhiben las bacterias gram-positivas. El rojo
neutro es un indicador del pH. La diferenciación
se basa en la fermentación de la lactosa. Las
bacterias que fermentan la lactosa producen
ácido y, en presencia de rojo neutro, forman
colonias rojas.

31
 MICROORGANISMO Ciertas pruebas de diagnóstico pueden efectuarse
DESARROLLO/ASPECTO DE LA directamente en este medio; no obstante, para
COLONIA lograr la identificación total se necesitan pruebas
bioquímicas, y pruebas inmunológicas usando
Cepas Resultados de
cultivos puros.
crecimiento
Salmonella Crecimiento de PRECAUCIONES
typhimurium bueno a excelente,
colonias rojas con Este producto es para uso exclusivo de
centros negros profesionales. No debe ser utilizado en caso de
Salmonella abony Crecimiento de presentar contaminación microbiana,
bueno a excelente, decoloración, signos de deshidratación, roturas u
colonias rojas con otros signos de deterioro. Utilizar bajo
centro negro procedimientos de laboratorio, tratar siempre
Shigella flexneri Crecimiento de como material biopeligroso.
bueno a excelente,
colonias rojas
Shigella sonnei Crecimiento de
bueno a excelente,
colonias rojas
Enterococcus Inhibición de parcial
faecalis ATCC 29212 a completa
Escherichia coli Inhibición de parcial
a completa, colonias
amarillas a amarillo
rojizo
Proteus mirabilis Crecimiento,
colonias rosas con
centro negros “ Ilustración 18 Agar Desoxilato
swarming” inhibido

ALMACENAMIENTO
almacenar en lugar oscuro y seco a una
temperatura entre 8 ºC, en su embalaje original
hasta el momento de uso. Evitar la congelación y
el sobrecalentamiento.
CONTROL MICROBIOLOGICO
Incubadas de 35 a 37 ºC en condiciones aeróbicas
y examinadas transcurridas de 18 a 24 horas de la
inoculación.
LIMITACIONES DEL METODO

32
 Agar Desoxilato
MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA
Cepas Resultados de

Citrato E. coli
crecimiento
Colonias grandes,
planas, de color rosa o
USO
rojo. Pueden estar
Es un Agar selectivo para el aislamiento de rodeadas de una zona
Salmonella spp. y Shigella spp. en de precipitación biliar
medicamentos, alimentos, ambiente y muestras Salmonella abony Colonias
clínicas, asi como de otras enterobacterias y transparentes,
coliformes. amarillentas, con
centro negro.
METODOLOGÌA Shigella flexneri Colonias
incoloras/rosadas.
El desoxicolato sódico reduce el crecimiento de
Citrobacter freundii Crece con colonias
gram positivos. La degradación de lactosa en
rojas-rosas con centro
ácidos se detecta por el color rosa-rojo del rojo negro y precipitado en
neutro. Los no fermentadores de lactosa crecen el medio.
con colonias incoloras. La formación de sulfuro Proteus mirabilis Crece con colonias
de hidrógeno se detecta por la aparición de óxido amarillas, invasivas,
de hierro negro en el centro de las colonias. con centro gris-negro
y olor a pescado.
COMPOSICIÒN
Enterococcus Inhibición completa:
Extracto de carne 10.0 g. faecalis Ni una sola colonia.
Peptona de carne 5.0 g. Staphylococcus Inhibición completa:
Lactosa 10.0 g. aureus Ni una sola colonia.
Citrato Sódico 20.0 g. Las colecciones
Tiosulfato sódico 5.0 g.
Citrato Férrico 1.0 g. ALMACENAMIENTO
Desoxicolato Sódico 5.0 g.
Rojo neutro 0 0.2 g. Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
Agar-Agar 13.5 g oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes
de usarlas. Evitar la congelación y el PA-
PREPARACION
254010.07 - 2 -calentamiento excesivo.
Disolver 69,5 gramos en 1 litro de agua
CONTROL MICROBIOLOGICO
bidestilada. Agitar calentando hasta ebullición.
No Autoclavar. No sobrecalentar. El color final Incubar las placas, protegidas de la luz, a una
del medio es rosa pálido, traslúcido, con un fino temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de
precipitado de desoxicolato. No refundir. 18 a 24 h.

33
LIMITACIONES DEL METODO La presencia de sacarosa y salicina evita la
selección de patógenos falsamente positivos. Con
El medio no diferencia entre Proteus y otros
el Sodio Tiosulfato y el Amonio Hierro (III)
bacilos gram-negativos negativos para la lactosa
Citrato se detectan los productores de Hidrógeno
como Salmonella o Shigella.
Sulfuro por el precipitado negro de Hierro
Sulfuro que presentan en el centro de las
colonias. La presencia de sales biliares inhibe el
crecimiento de una gran parte de la flora
acompañante.
COMPOSICION
12.0 g/L de
Proteosa de peptona
agua
Extracto de Levadura 3.0 g/L de agua
Sales Biliares 9.0 g/L de agua
12.0 g/L de
Lactosa
agua
12.0 g/L de
Sacarosa
agua
Ilustración 19 Agar Desoxilato Citrato Salicina 2.0 g/L de agua
Cloruro de Sodio 5.0 g/L de agua
Tiosulfato de Sodio 5.0 g/L de agua

Agar Entérico de
Citrato de Hierro y
1.5 g/L de agua
Amonio
0.065 g/L de
Azul de Bromotimol

Hektoen
agua
Fucsina Ácida 0.1 g/L de agua
14.0 g/L de
USO Agar
agua
Se emplea como medio selectivo para el
aislamiento y diferenciación de Enterobacterias PREPARACIÓN
patógenas en gran diversidad de muestras. Está
indicado para la diferenciación de Salmonella y Suspender 76 g en 1 l de agua destilada; calentar
Shigella. y agitar hasta ebullición y disolución total. NO
ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar
METODOLOGÍA enfriar a 55ºC y distribuir en placas de Petri
estériles.
Por la presencia de los dos indicadores se
diferencian las colonias de bacterias lactosa
positivas de las lactosas negativas, las primeras
toman un color amarillo anaranjado y las
segundas un azul verdoso. Los microorganismos
que fermentan la sacarosa y la salicina también
toman un color amarillo anaranjado.

34
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA CONTROL MICROBIOLOGICO
COLONIA
Examinar las placas después de 18 a 24 h para
CEPAS RESULTADOS DEL observar la proporción del crecimiento y el
CRECIMIENTO tamaño de las colonias, la pigmentación y la
selectividad. Si son negativas, incubar
Salmonella Crecimiento bueno o nuevamente durante 18 a 24 horas más.
Typhimurium excelente; colonias de color
verde a azul verdoso con LIMITACIONES DEL METODO
centro negro Para la identificación final de los
Shigella Crecimiento bueno o microorganismos se deben realizar otros
flexneri excelente; colonias verde procedimientos.
claro PREACUCIONES
Shigella sonnei Crecimiento bueno o Manipular asépticamente durante todo el
excelente; colonias verde procedimiento. Durante el almacenamiento
claro mantener los medios con la cobertura plástica.
Escherichia coli Inhibición parcial o No utilizar caducado.
completa; colonias amarillo
anaranjado, puede haber
precipitados biliares
alrededor de las mismas,
halos desde salmón hasta
naranja
Enterococcus Inhibición parcial o
faecalis completa; pequeñas colonias
amarillas, halos desde
salmón hasta naranja
SIN Color verde, casi
INOCULAR transparente

Ilustración 20 Agar Entérico de Hektoen

ALMACENAMIENTO
Conservar en nevera entre 2°C y 8°C. No
congelar.

35
 Agar Glucosa y
PREPARACIÓN
Extender las muestras tan pronto como sea
posible después de recibirlas en el laboratorio. La

Cloranfenicol placa de extensión se utiliza principalmente para

aislar cultivos puros de las muestras que
USO contienen flora mixta. Si, por el contrario, el
material se cultiva directamente empleando una
Medio selectivo para el aislamiento y el cultivo torunda, hacerla girar en una sección pequeña
de hongos (levaduras, mohos y dermatofitos) a cercana al borde, extendiendo luego a partir de
partir de muestras clínicas. esta área inoculada.
METODOLOGÍA
• Si las muestras están formadas por
La glucosa aporta una fuente de energía para el raspados de piel, cabello o uñas, colocar
crecimiento de microorganismos. el material en el centro de la superficie del
medio. Si es posible, las partículas más
La alta concentración de glucosa presenta una
ventaja para el crecimiento de hongos (estables grandes deben presionarse levemente
osmóticamente), mientras que la mayoría de las sobre la superficie mediante pinzas
bacterias no tolera la alta concentración de estériles para proporcionar contacto con
azúcar. Además, el bajo pH es óptimo para los el medio.
hongos, pero no para muchas bacterias.
• Para la detección de dermatofitos, se debe
El cloranfenicol es un antibiótico de amplio incluír detección en Agar dermatofito o
espectro que inhibe una amplia variedad de Agar mycosel.
bacterias gram negativas y gram positivas, pero
puede tener un efecto inhibidor en numerosos • Además, debe inocularse en un medio no
hongos patógenos. selectivo tal como Agar Columbia con
Estos medios se utilizan para el aislamiento de 5% de sangre de oveja para proporcionar
hongos a partir de muestras clínicas o materiales una indicación de los patógenos
en los que se sospeche la presencia de bacterianos presentes en la muestra.
contaminantes bacterianos.
Si se sospecha contaminación bacteriana de las
COMPOSICIÓN muestras, materiales o áreas objeto de
investigación, deben utilizarse medios con una
Digerido pancreático de 5.0 g/L de selectividad mayor.
caseína agua
Digerido péptico de tejido 5.0 g/L de
animal agua
40.0 g/L de
Glucosa
agua
15.0 g/L de
Agar
agua
0.4 g/L de
Cloranfenicol
agua

36
 MICROORGANISMO DESARROLLO/ LIMITACIONES DEL METODO
ASPECTO DE LA COLONIA
Si se utiliza para la detección de levaduras (por
CEPA RESULTADOS DEL ejemplo, la especie Candida) en las muestras
CRECIMIENTO clínicas, incubar durante 48 horas a 30 – 35 °C.
Candida albicans Si se sospechan hongos filamentosos, incluidos
Saccharomyces los dermatofitos, incubar hasta un máximo de una
cerevisiae semana a 25 – 30 °C. Los dermatofitos a veces
Aspergillus necesitan tres semanas o más para producir
brasiliensis crecimiento. Si se utiliza para control de la
Penicillium Crecimiento de bueno higiene, incubar durante un máximo de 7 días a
roquefortii a excelente
20 – 25 °C. Si la incubación es más prolongada
Trichophyton
que 3 días, proporcionar la humedad adecuada.
mentagrophytes
Las placas pueden sellarse con cinta de plástico
Staphylococcus
aureus adhesiva para evitar la deshidratación.
Escherichia coli PRECAUCIONES
SIN INOCULAR Ámbar claro
No utilizar las placas si muestran evidencia de
contaminación microbiana, decoloración,
ALMACENAMIENTO deshidratación, agrietamientos o cualquier otro
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar signo de deterioro.
oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes
de usarlas.
Evitar la congelación y el calentamiento
excesivo.
Las placas pueden inocularse hasta su fecha de
caducidad e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Después de una incubación suficiente, las placas
pueden mostrar colonias aisladas en las áreas
extendidas y crecimiento confluente en áreas de
inoculación densa. Examinar la posible presencia
de colonias fúngicas con color y morfología
habituales en las placas. Realizar pruebas Ilustración 21 Agar Glucosa y Clorafenicol
bioquímicas y procedimientos microscópicos y
serológicos para confirmar los resultados

37
 Agar Glucosado
completa licuación, agitar firmemente para
homogeneizar, abrir sacando el precinto de
aluminio y distribuir en placas estériles y/o tubos
estériles, en pico de flauta.
USO Sembrado Extender las muestras tan pronto,
Medio utilizado para el aislamiento como sea posible después de recibirlas en el
identificación y conservación de hongos laboratorio. El medio en placa se utiliza
patógenos y saprofitos. También es útil para el principalmente para aislar cultivos puros de las
cultivo de levaduras. muestras que contienen flora mixta. Si, por el
contrario, el material se cultiva directamente
METODOLOGÍA empleando un hisopo, hacerla girar en una
Medio de cultivo recomendado para el sección pequeña cercana al borde, estriando
aislamiento y desarrollo de hongos, luego a partir de esta área inoculada.
particularmente los asociados con infecciones MICROORGANISMO DESARROLLO/
cutáneas (piel, pelo). En el medio de cultivo, la ASPECTO DE LA COLONIA.
peptona, la tripteina y la glucosa son los
nutrientes para el desarrollo de microorganismos. MICROORGANISMO CRECIMIENTO:
El alto contenido de glucosa, la presencia de Candida albicans BUENO
cloranfenicol y el PH acido, inhibe el desarrollo Aspergillus brasiliensis BUENO
bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos Penicillium roquefortii BUENO
y levaduras. El agar es el agente solidificante Escherichia coli NULO A
ESCASO
puede ser suplementario con otros agentes
Staphilacoccus aureus NULO A
selectivos de crecimiento.
ESCASO
COMPOSICIÓN
Glucosa 40 g/l ALMACENAMIENTO
Puripeptona 10 g/l Medio de cultivo deshidratado a 10-35 Cº.
Agar 15 g/l
Clorafenicol 0.05 g/l Medio de cultivo preparado a 2,8 Cº
pH 5.6

PREPARACIÓN CONTROL MICROBIANO

Medio Deshidratado Suspender 69 gramos del En aerobiosis a 20-25 Cº, el tiempo dependerá del
polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar 5 a 10 hongo, y levaduras, que se quieran recuperar.
minutos a temperatura ambiente. Llevar a Como regla general, incubar en las condiciones
ebullición durante unos minutos agitando de vez descriptivas durante 2 a 7 días y examinar el
en cuando. Esterilizar 15 minutos a 121ºC. cultivo de 4 a 6 días.
Dispensar en Placas estériles y/o tubos estériles,
en pico de flauta. Medio Preparado Colocar los
frascos que se van a usar en un recipiente con
agua que los cubra, calentar a ebullición hasta la

38

LIMITACIONES DEL METODO
El cloranfenicol, además de inhibir el desarrollo
bacteriano, puede inhibir el desarrollo de cientos
hongos patógenos.
- Evitar el sobrecalentamiento del medio
de cultivo por riesgo de oscurecimiento,
acidificación y disminución de las
propiedades gelificantes del agar.
- - Realizar ensayos de identificación
adicionales de los microorganismos que
se han desarrollado.
PRECAUCIONES
Solamente para uso diagnostico in vitro. Uso
profesional exclusivo, No utilizar el producto si
al recibirlos su envase está abierto o dañado, No
utilizar el producto si existen signos de
contaminación o deterioro, así como tampoco si
ha expirado su fecha de vencimiento. Utilizar
guantes y ropa protectora cuando se manipula el
producto, Considerar las muestras como
potencialmente infecciosas y manipularlas
apropiadamente siguiendo las normas de
bioseguridad establecidas por el laboratorio.
Ilustración 22 Agar Glucosado
39
Agar Entérico
Hektoen
USO
Se emplea como medio selectivo para el
aislamiento y diferenciación de Enterobacterias
patógenas en gran diversidad de muestras. Está
indicado para la diferenciación de Salmonella y
Shigella.
METODOLOGIA
Por la presencia de los dos indicadores se
diferencian las colonias de bacterias lactosa
positivas de las lactosas negativas, las primeras
toman un color amarillo anaranjado y las
segundas un azul verdoso. Los microorganismos
que fermentan la sacarosa y la salicina también
toman un color amarillo anaranjado. La presencia
de sacarosa y salicina evita la selección de
patógenos falsamente positivos. Con el Sodio
Tiosulfato y el Amonio Hierro(III) Citrato se
detectan los productores de Hidrógeno Sulfuro
por el precipitado negro de Hierro Sulfuro que
presentan en el centro de las colonias. La
presencia de sales biliares inhibe el crecimiento
de una gran parte de la flora acompañante.
PREPARACIÓN
Suspender 76 g en 1 l de agua destilada; calentar
y agitar hasta ebullición y disolución total. NO
ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar
enfriar a 55ºC y distribuir en placas de Petri
estériles.
 Agar Hierro Y
CONTROL MICROBIOLÓGICO

Los siguientes resultados fueron obtenidos a

Lisina
partir de cepas patrón, después de incubación a
temperatura de 35±2ºC y observados a las 24
horas.
USO
COLOR
MICROORGANISMOS DESARROLLO DE LA El agar lisina hierro se utiliza para la
COLONIA
diferenciación de organismos entéricos basada en
Enterobacter
Naranja su capacidad de descarboxilación o
aerogenes Aceptable
Escherichia coli Aceptable Naranja desaminación de lisina y la formación de ácido
Salmonella Azul- sulfhídrico.
Bueno
enteritidis verdoso
METODOLOGÍA
Salmonella Azul-
Bueno
typhimurium verdoso Edwards y Fife diseñaron el agar lisina hierro
Azul-
Shigella flexneri Bueno para la detección de los cultivos de Arizona, en
verdoso
especial los que fermentan lactosa rápidamente.
Enterococcus
------- ------- Este avance era consecuencia de un esquema
faecalis
taxonómico para la especie Enterobacteriaceae
en el que se definían la división principal y los
grupos dentro de estas familias, además se
describan los procedimientos de diferenciación,
así como los diversos criterios para la
identificación de cultivos. Lysine Iron Agar
favorece la diferenciación de bacilos entéricos
según su capacidad de descarboxilación y
desanimación y desanimación de lisina y de
producción de ácido sulfhídrico. Está diseñado
para uso con otros medios como agar triple
azúcar hierro en esquemas de identificación
adecuados.

Ilustración 23 Agar HE

40
COMPOSICIÓN ALMACENAMIENTO
Digerido 5.0 g Incubar las placas a 35 ± 2 °C en una atmósfera
pancreatico de aerobia. c. Incluir placas de agar de soja BD BBL
gelatina Trypticase con sangre de carnero al 5% (TSA II)
Extracto de 3.0 g como controles no selectivos para todos los
levadura organismos. 2. Examinar las placas después de
Dextrosa 1.0 g 18–24 y 42–48 h para comprobar la extensión del
Lisina 10.0 g crecimiento, el tamaño de las colonias, la
Citrato ferrico de 0.5 g pigmentación y la selectividad.
amonio
Tisulfato sodico 0.04 g CONTROL MICROBIOLÓGICO
Purpura de 0.02 g
bromocresol La descarboxilación de lisina se detecta en la
Agar 13.5 g base mediante una reacción alcalina (color
morado). La desaminación de lisina se detecta
por un agar inclinado de color rojo. La
PREPARACIÓN producción de ácido sulfhídrico se detecta
Extender las muestras en las placas para mediante la formación de precipitado de color
aislamiento. Utilizar un cultivo de caldo de 18– negro. Una reacción negativa (agar inclinado de
24 h de Escherichia coli y Staphylococcus aureus color morado y base amarilla) indica
diluidas para obtener de 104–105 UFC/placa. fermentación de dextrosa exclusivamente.
Para el organismo restante, utilizar cultivos de LIMITACIONES DEL MÉTODO
caldo de 18–24 h diluidos para lograr una
concentración de 103–104 UFC/placa. Los organismos diferentes de Corynebacterium
diphtheriae; es decir, las especies
MICROORGANISMO/ ASPECTO DE LA Staphylococcus, pueden reducir el telurito y
COLONIA producir colonias de color negro en BD BBL
AGAR Serum Tellurite Agar. Algunas pruebas
BASE diagnósticas pueden realizarse desde la placa de
INCLINADO
Salmonella aislamiento primario. Sin embargo, se
choleraesuis Alcalino Alcalino recomienda un cultivo puro para realizar las
Subsp. (morado) (morado) pruebas bioquímicas y otros procedimientos de
Arizonae identificación. Sólo en raras ocasiones es posible
Citrobacter Alcalino Ácido detectar en un único medio todos los organismos
freundii (morado) (amarillo) de importancia potencial en una muestra. Los
Proteus Ácido cultivos de muestras cultivadas en medios
Rojo
vulgaris (amarillo) selectivos por consiguiente deben compararse
con muestras cultivadas en medios no selectivos
para obtener información adicional y favorecer la
recuperación de patógenos potenciales.

41
PRECAUCIONES
Para uso exclusivo en el laboratorio. Los tubos
con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado
para evitar lesiones por la rotura del vidrio. Agar inclinado de
Loeffler
Emplear una técnica aséptica y seguir las
precauciones habituales contra riesgos
microbiológicos durante todo el proceso. Antes
de desecharlos, esterilizar en autoclave los tubos USO
preparados, los recipientes para muestras y Medio de cultivo que contiene glucosa y suero,
cualquier otro material contaminado. utilizado para el aislamiento de Corynebacterium
diphtheriae
METODOLOGÍA
Es una modificación del medio desarrollado por
Neill para el aislamiento de Corynebacterium
diphtheriae que permite el crecimiento de todos
los biovares de C. diphtheriae. El extracto de
carne y la peptona suministran nitrógeno y
factores de crecimiento. El cloruro sódico
mantiene el equilibrio osmótico. El telurito
potásico a la concentración seleccionada inhibe
las bacterias gram negativas y diversas gram
positivas y permite detectar la reducción de
telurito, que se encuentra por lo general (pero no
Ilustración 24 Agar Hierro y Lisina
exclusivamente) en las corinebacterias. La sangre
de caballo lisada proporciona nutrientes
adicionales.
COMPOSICIÓN
Extracto de carne 10.0 g
Peptona 10.0 g
Cloruro sodico 5.0 g
Telurito potasico 0.35 g
Sangre de caballo, 7%
desfibrinada y
lisada
Agar 15.0 g

42
PREPARACIÓN en el crecimiento característico en este medio.
Deben realizarse procedimientos inmunológicos
Extender la muestra directamente después de
para la detección de las toxinas de la difteria con
recibirla en el laboratorio. Asimismo, incluir un
el fin de confirmar el diagnóstico.
agar sangre no selectivo.
MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA PRECAUCIONES
CEPAS RESULTADOS DE Solamente para uso profesional. No utilizar las
CRECIMENTO placas si muestran evidencia de contaminación
Corynebacterium Bueno-excelente microbiana, decoloración, deshidratación, grietas
diphtheariae (colonias pequeñas o o cualquier otro signo de deterioro.
medianas), color gris
oscuro a negro
Escherichia coli Inhibición de parcial
a completa
Staphylococcus Inhibición parcial a
aureus completa
Sin inocular Rojas, ligeramente
opacas

ALMACENAMIENTO
Almacenarlas en un lugar oscuro a una
temperatura de 2 – 8 °C, en su envase original Ilustración 25 Agar inclinado de Loeffler
hasta momentos antes de su utilización. Evitar la
congelación y el sobrecalentamiento. Las placas
pueden inocularse hasta la fecha de caducidad
(véase la etiqueta del paquete) e incubarse
durante los períodos de incubación
recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10
unidades pueden utilizarse durante una semana
cuando se almacenan en un área limpia a una
temperatura de 2 – 8 °C.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar durante 24 – 48 h en atmósfera aerobia a
35 – 37 °C.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
El diagnóstico de la difteria requiere pruebas y
medios múltiples, dado que otros organismos
pueden tener aspecto similar a C. diphtheriae y
sus biovares. El diagnóstico no debe basarse sólo

43
 Agar KAA
PREPARACIÓN
Dos peptonas proporcionan los nutrientes. Los
estreptococos del grupo D (incluidos los

Confirmativo enterococos) hidrolizan la esculina para formar

esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con
una sal férrica para formar un complejo marrón
oscuro o negro. Se incluye el citrato férrico como
USO indicador, que reacciona con la esculetina para
medio selectivo para el aislamiento y el recuento producir un complejo de marrón a negro. Se
de estreptococos fecales (grupo D) a partir de utiliza bilis de buey para inhibir las bacterias
muestras clínicas. gram positivas diferentes de los enterococos. La
azida sódica inhibe los microorganismos gram
METODOLOGÍA negativos.
Se basa en la fórmula de agar bilis esculina de
Rochaix, modificada más tarde por Isenberg et al.
al reducir la concentración de bilis y añadir azida MICROORGANISMO/ ASPECTO DE LA
sódica1,2. Esta modificación se suministra como COLONIA
BD Enterococcosel Agar. El medio es una
Cepas Resultados de
fórmula estándar para el aislamiento de Crecimiento
enterococos3-5. Escherichia coli Inhibición de parcial
COMPOSICIÓN a completa; colonias
incoloras
Digerido Enterococcus Crecimiento de bueno
pancreático de 17. 0 g faecalis a excelente; colonias
caseína de color beige, halos
Digerido péptico de de color negro
3.0 g
tejido animal intenso
Extracto de Enterococcus Crecimiento de bueno
5.0 g
levadura faecium a excelente; colonias
Bilis de buey 10.0 g de color beige, halos
Cloruro sódico 5.0 g de color negro
Esculina 1.0 g intenso
Citrato férrico de Streptococcus Inhibición de parcial
0.5 g pyogenes a completa; colonias
amonio
Azida sódico 0.25 g incoloras, sin halos
Citrato sódico 1.0 g negros Sin inocular
Agar 13.5 g Ámbar claro, tono
marrón verdoso muy
claro

44
ALMACENAMIENTO
un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes
de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden
inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
períodos de incubación recomendados. Las
placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden
usarse durante una semana siempre que se
almacenen en un lugar limpio a una temperatura
entre 2 y 8 °C.
Limitaciones del método Ilustración 26 Agar KAA confirmativo

Aunque otras bacterias gram positivas pueden

crecer en el medio, este medio no se recomienda
para su aislamiento. Los organismos diferentes
de los enterococos y de los mencionados en la
sección Resultados pueden dar resultado positivo
a la esculina y crecer en este medio (por ejemplo,
las especies Pediococcus y Lactococcus). Por
consiguiente, son necesarias pruebas
bioquímicas y serológicas para confirmar la
identificación presuntiva obtenida con este
medio.
PRECAUCIONES
No utilizar las placas si muestran evidencia de
contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamiento o cualquier otro
signo de deterioro. Consultar los procedimientos
de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y
desecho del producto.
Agar Karmali (AK)
USO
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de
Campylobacter en alimentos, después de un
enriquecimiento previo.
METODOLOGÍA
El medio contiene polipeptoma, que favorece el
crecimiento de de colonias de Campylobacter,
extracto de levadura que es una fuente de
vitamina D y almidón, que es una fuente de
energía para el desarrollo microbiano.
La concentración de cloruro sódico del medio
mantiene su equilibrio osmótico, mientras que la
cicloheximida previene el desarrollo de
levaduras.
El carbón activo, piruvato sódico y hematina
favorecen el crecimiento y aerotolerancia de
Campylobacter.

45
COMPOSICION MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
CLONIA
Extracto de 20.0 g
levadura Microorganismo Crecimiento
Polipeptona 3.0 g Campylobacter Bueno/Muy
Almidon 1.0 g jejuni bueno
Cloruro sodico 5.0 g Campylobacter Bueno
Piruvato sodico 0.1 g col
Carbon activo 4.0 g Staphylococcus Nulo
Hematina 0.032 g aureus
Cicloheximida 0.1 g
Agar 13.5 g
ALMACENAMIENTO
Frascos con medio base 6 meses a 2°C-8°C.
PREPARACION
Placas con medio completo 1 semana a 2°C-8°C,
• Disolver 46.1 g de medio deshidratado en
resguardadas de la luz.
1 L de agua
• Llevar a ebullición durante 1-2 min hasta PRECAUCIONES
conseguir una competa disolución
El suplemento selectivo de Campylobacter
• Repartir 100mL del medio en frascos de
(Karmali) SR0167 contiene cicloheximida que es
150 mL
tóxica.
• Esterilizar en autoclave durante 15 min
Tenga en cuenta las precauciones que deben
• Atemperar en un baño a 45°C-48°C tomarse.
• En el momento de preparar las placas,
añadir asépticamente a cada frasco 1 mL
de SUPLEMENTO SELECTIVO PARA
EL AGAR DE KARMALI (PNT-RE-
020)
• Homogenizar sin incorporar aire.
• Repartir asépticamente en Placas Petri
estériles
• Dejar solidificar

Ilustración 27 Agar Karmali

46
 Agar Kligler
PREPARACIÓN
Suspender 54.8 g de polvo en 1 litro de agua
USO purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta
Medio de cultivo frecuentemente utilizado en disolución total.
microbiología de alientos para la diferenciación
de enterobacterias, en base a la fermentación de Distribuir en tubos, en volumen que ocupe hasta
hidratos de carbono y a la producción de acido la tercera parte de los mismos. Esterilizar en
sulfhídrico. autoclave a 121ºC por 15 minutos. Enfriar y dejar
solidificar en posición inclinada (pico de flauta
METODOLOGÍA profundo)
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la MICROORGANISMO
tripteìna, aportan los nutrientes adecuados para el DESARROLLO/ASPECTO DE LA
desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son COLONIA
los hidratos de carbono fermentables. El
tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la Microorganismos Superficie/Profundidad
producción de ácido sulfhídrico; el citrato de Escherichia coli A/A
hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los
cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y Klebsiella A/A
producen sulfuro de hierro de color negro. El rojo pneumoniae
fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico. El agra es el Proteus mirabilis K/A
agente solidificante.
Salmonella K/A
COMPOSICION typhimurium
peptona de carne 13 g
Shigela flexneri K/A
cloruro de sodio 5g,
lactosa 10 g,
Pseudonomas K/K
tripteìna 10 g,
aeruginosa
glucosa 1 g,
citrato de hierro y amonio 0.5 g, A: reacción acida (color amarillo)
tiosulfato de sodio 0.3 g,
rojo de fenol 0.025 g, K: reacción alcalina (color rojo)
agar 15 g.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35ºC
Medio de cultivo preparado a 2.8ºC
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubación en aerobiosis, a 35-37ºC durante 18-
24 horas.

47

LIMITACIONES DEL METODO
Los resultados de la prueba deben ser leídos
luego de 18 a 24 horas de incubación. Si la lectura
se efectúa en tiempos menores pueden existir
falsos positivos por la presencia de acidez o la
acidez generada no sea la suficiente para producir
el viraje del indicador rojo de fenol del color rojo
al amarillo.
Si se lee luego de 24 horas se pueden obtener
resultados falsos negativos por consumo de
peptonas durante el crecimiento de
microorganismos con la consecuente alcalinidad
del medio de cultivo.
PRECAUCIONES
• Solamente para uso diagnóstico in vitro.
Uso profesional exclusivo.
• No utilizar el producto si al recibirlo su
envase está abierto o dañado.
• No utilizar el producto si existen riegos
de contaminación o deterioro, así como
tampoco si ha expirado su fecha de
vencimiento
• Utilizar guantes y ropa protectora cuando
se manipula el producto
Ilustración 28 Agar Kligler
48
Agar Lowenstein-
Jensen
USO
Medio utilizado para el cultivo y aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis y otras especies de
Micobacterias.
METODOLOGÍA
Los nutrientes de este medio basal, más los
aportados por el agregado de la mezcla de
huevos, constituyen un rico soporte para el
crecimiento de una gran variedad de
micobacterias. El verde de malaquita inhibe a
gran parte de la flora acompañante. Con el
agregado de glicerina se estimula el crecimiento
de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran
parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5%
de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias
tolerantes a la sal, como es el caso de M.
smegmatis. Por ello debe contar con un medio de
diagnóstico aceptado internacionalmente y
especialmente de un medio de cultivo de alta
calidad, que no esté sometido a las variaciones de
preparación en los laboratorios si no que sea
suministrado por una entidad que certifique la
calidad microbiológica de cada uno de los
medios utilizados en la siembra de las muestras e
identificación del bacilo de la tuberculosis.
COMPOSICION
Solución de sales 600 mL
Homogenizado de 100 mL
huevo
Verde de malaquita 20 mL
2%
PREPARACION
• Paciente sintomático respiratorio en el cual las
tres muestras de esputo son baciloscopia
negativa. Hacer el cultivo con la tercera muestra.
• Toda muestra procedente de paciente VIH
positivo.
• Tuberculosis extrapulmonar
• Tuberculosis infantil.
• Paciente sintomático respiratorio contacto de
un paciente con cepa multirresistente. Técnica de
Siembra:
El medio de cultivo preparado debe retirarse de
su empaque plástico, y debe ser atemperado unos
30 minutos a temperatura ambiente antes de su
uso, nunca flamearlo. Antes de usarlo, siempre
debe ser marcado o identificado apropiadamente
en su parte posterior, con los detalles de la
muestra de manera que no tape la parte del fondo
del medio de cultivo para visualizar si se presenta
contaminación.
MICROORGANISMOS/ ASPECTO DE LA
COLONIA
• Mycobacterium tuberculosis H37Ra
Satisfactorio
ALMACENAMIENTO
Los medios de cultivo preparados marca MDM
científica deben ser almacenados con las
siguientes pautas:
• No exponer a la luz directa (artificial o
natural), principalmente los medios de cultivo
cromogénicos. En caso de que se suministren en
caja de cartón, mantenerlos almacenados al
interior de esta.
• Una vez recibido el producto, almacenar entre
4°C y 12°C hasta su fecha de vencimiento.
49
• No almacenar cerca del congelador en caso de
existir este compartimiento en la nevera de
almacenamiento
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Medio preparado: verde claro, blando, opaco.
Examine la fecha de vencimiento y signos de
deterioro de los tubos antes de su uso. Observe
cualquier evidencia de contaminación, mal
llenado, cambios de color y signos de
deshidratación y pérdida de volumen. Después de
abierto el Rack, debe usarse durante la semana
siguiente para evitar posible contaminación.
PRECAUCIONES
La inoculación de un medio de cultivo con
bacterias, deliberadamente o accidentalmente,
lleva al crecimiento rápido de estos en el medio,
y altas concentraciones de cualquier
microorganismo son potencialmente peligrosos,
y deben ser descartados de manera segura y por
métodos aprobados, como la inactivación con
amonio cuaternario, descartando luego los agares
en sus cajas contenedoras en doble bolsa roja
para luego descartarlo como material de riesgo
biológico; o por autoclavado, sin remover
previamente el agar. Todos los medios de cultivo
deben ser manipulados por personal calificado y
que hayan sido entrenados en procedimientos y
técnicas microbiológicas.
Ilustración 29 Agar Lowenstein-Jensen
 Agar MacConkey
PREPARACIÓN
En superficie: Inocular directamente la muestra
USO por estría

Es un medio selectivo y diferencial utilizado para En profundidad: Inocular una alícuota de la

la recuperación de enterobacterias y bacilos muestra directa o de su dilución. Verter un
Gram negativos entéricos relacionados. Contiene volumen del medio de cultivo fundido y enfriado
sales biliares y cristal violeta que inhiben el a 40-45°c. Homogeneizar mediante movimientos
desarrollo de bacterias Gram positivas y de de vaivén y rotación. Dejar solidificar
algunas Gram negativas exigentes. Incubación: En aerobiosis, a 35-37°c
METODOLOGÍA MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
En el medio de cultivo, las peptonas aportan los COLONIA
nutrientes necesarios para el desarrollo Cepas Resultados del crecimiento
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y el Escherichia coli colonias de color
cristal violeta son los agentes selectivos que Crecimiento rosa
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Proteus mirabilis Crecimiento;
Gram positiva. El agar es el agente solidificante. colonias de
incoloras a color
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH
beige,
alrededor de la colonia. Esto produce un viaje del
agrupamiento
color del indicador de pH (rojo neutro), la dinámico
absorción en las colonias y la precipitación de las inhibido
sales biliares. Salmonella Typhimurium Crecimiento;
Los microorganismos no fermentadores de colonias de
incoloras a color
lactosa producen colonias incoloras.
beige
COMPOSICION Salmonella Abony Crecimiento;
colonias de
Digerido 17.0 g
incoloras a color
pancreático de
beige
gelatina
Shigella flexneri Crecimiento;
Digerido 1.5 g
colonias
pancreático de
incoloras
caseína
Enterococcus faecalis Inhibición de
Digerido péptico de 1.5 g
parcial a
tejido animal
completa
Lactosa 10.0 g
Staphylococcus aureus Inhibición de
Sales biliares 1.5 g parcial a
Cloruro sódico 5. 0 g completa
Rojo neutro 0.03 g Sin inocular Rosa claro,
Cristal violeta 0.001 g ligeramente
Agar 13.5 g opalescente

50
ALMACENAMIENTO
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes
de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden
inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los Ilustración 30 Agar MacConkey
períodos de incubación recomendados. Las

Agar Manitol Yema De

placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden
usarse durante una semana siempre que se
almacenen en un lugar limpio a una temperatura
entre 2 y 8 °C. Huevo Con Polimixina
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar las placas a 35+- 2°c en una atmósfera USO
aerobia. Examinar las placas después de 18 -24
Agar selectivo y diferencial recomendado para el
horas o más si es necesario para comprobar la
aislamiento y recuento de Bacillus cereus en
extensión del crecimiento, el tamaño de las
muestras de alimentos y ambientales.
colonias, la pigmentación y la selectividad.
METODOLOGÍA
LIMITACIONES DEL MÉTODO
El agar MYP es un medio selectivo y diferencial,
En este medio crecerán todos los organismos de
específico para el aislamiento de B. cereus en
la familia Enterobacteriaceae y varios bacilos
alimentos. En el medio B. cereus no utiliza el
gram negativos, Los organismos no
manitol y la mayoría de las cepas producen
fermentadores y otros bacilos gram negativos
fosfolipasa C (lecitinasa). El manitol es el
sensibles a los componentes selectivos no crecen
carbohidrato y su fermentación es detectada por
en este medio. Para lograr la identificación
el indicador de pH rojo fenol. La yema de huevo
completa se necesitan pruebas bioquímicas, y (si
permite la detección de actividad de lecitinasa
así se indica) pruebas inmunológicas usando
(precipitación). Polimixina B inhibe a
cultivos puros.
microorganismos Gram (-) y el NaCl mantiene el
PRECAUCIONES ambiente osmótico.
Solamente para uso diagnostico in vitro. Uso La peptona aporta la fuente de nitrógeno,
profesional exclusivo vitaminas y carbono. El agar es adicionado como
agente solidificante.
No utilizar el producto si al recibirlo su envase
está abierto o dañado
No utilizar el producto si existen signos de
contaminación o deterioro

51
COMPOSICIÓN MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA
(en gramos por litro)
Bacillus cereus Crecimiento;
Peptona 10 g colonias rosas con
Manitol 10 g lecitinasa
Cloruro de Sodio 10 g aureola
Extracto de carne 1g
Rojo de fenol 0.025 g Bacillus subtilis Crecimiento;colonias
Agar bacteriológico 15 g translúcidas color de
agar
PREPARACIÓN
Escherichia coli Marcadamente
Disolver 46 g de medio en 900 ml de agua suprimido para
bidestilada.Calentar hasta ebullición, agitando, completar
para su total homogeneización. Autoclavar a 121 inhibición; Si se
ºC durante 15 minutos. El color final del medio recuperan colonias
es salmón. Enfriar a 50 ºC y añadir 10 ml de amarillas
Polimixina B 106UI (SMS009) (reconstituidas Proteus mirabilis Colonias rosas;
enjambre
en 100 ml de agua estéril) y 50 ml de emulsión
de Yema de Huevo (SBH010) o bien 50 ml de
Pseudomonas inhibida
Yema de Huevo con Polimixina B (SAJ001), aeruginosa
asépticamente. Mezclar y repartir en placas, sin
recalentar. Staphylococcus Crecimiento;
Siembra aureus colonias amarillas

− Directa, estirando la superficie del medio

de cultivo.
− Si se trabaja con muestras de alimentos y
se debe hacer recuento microbiano,
proceder de la siguiente manera:
Homogeneizar 10 g de la muestra en 90
ml de agua peptonada 0.1 %. Si es
necesario efectuar diluciones. Inocular
una alícuota determinada (ejemplo 0.1
ml) sobre la superficie del medio de
cultivo y esparcirla en toda su superficie.
Incubación
− En aerobiosis, a 35-37 °C durante 24-28
horas.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 °C
Medio de cultivo preparado a 2-8 °C
CONTROL MICRIOBIOLÓGICO
Las colonias de B. cereus son características de
un color rosado (manitol negativa), rugosa, seca,
de aprox 5 mm de diámetro y presentan una zona
de precipitación alrededor de la colonia
(lecitinasa positiva). Estas características
distinguen a Bacillus cereus de otras especies de
Bacillus, pero debe confirmarse siempre
mediante pruebas bioquímicas Para recuento
contar el número de colonias caracterís8cas y
confirmar posteriormente con pruebas
bioquímicas.

52
LIMITACIONES DEL MÉTODO PRECAUCIONES
− No calentar el medio de cultivo luego que − Solamente para uso diagnóstico in vitro.
se agregó la yema de huevo ya que es Uso profesional exclusivo.
termolábil. − No utilizar el producto si al recibirlo su
− Las características de las colonias de envase está abierto o dañado.
Bacillus cerus permiten diferenciar este − No utilizar el producto si existen signos
microorganismo de Bacillus subtilis y de de contaminación o deterioro, así como
Bacillus lincheniformis, pero pueden no tampoco si ha expirado su fecha de
diferenciar Bacillus cerus de otras vencimiento.
especies de Bacillus, tales como Bacillus − Utilizar guantes y ropa protectora cuando
thuringiensis, Bacillus anthracis y se manipula el producto.
Bacillus mycoides. En estos casos, será − Considerar las muestras como
necesario realizar pruebas bioquímicas potencialmente infecciosas y
adicionales para su identificación. manipularlas apropiadamente siguiendo
− Staphylococcus aureus, Serratia las normas de bioseguridad establecidas
marcescens y Proteus vulgaris se pueden por el laboratorio.
desarrollar en el medio de cultivo, pero se − Las características del producto pueden
diferencian de Bacillus cereus por la alterarse si no se conserva
forma y el color de la colonia, y porque apropiadamente.
producen una reacción de aclaramiento − Descartar el producto que no ha sido
sobre la yema de huevo, a diferencia del utilizado y los desechos de este según
precipitado que produce Bacillus cereus. reglamentaciones vigentes.
− Bacillus megaterium y Bacillus
coagulans son completamente inhibidos
en este medio de cultivo.
− Se recomienda la realización de un
examen microscópico para evaluar la
presencia de globulos de lípidos en las
células vegetativas, debido a que es una
prueba rápida y confirmatoria de Bacillus
cereus.

Ilustración 31 Agar Manitol Yema De Huevo Con

Polimixina

53
Agar Martin-Lewis COMPOSICION
Composición Gramos
USO Hidrolizado 7.5 g
pancreático de
El Agar Martín Lewis modificado es un medio caseína
enriquecido para el aislamiento selectivo de Peptonas 7.5 g
Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis seleccionadas de
para muestras clínicas que contengan flora mixta carne
bacteriana y fúngica. Almidón de 1.0 g
maíz
METODOLOGÍA Fosfato 4.0 g
dipotásico
Carpenter y Morton fueron los primeros en
Fosfato 1.0 g
describir un medio para aislamiento de
monopotásico
gonococcus in 24 horas. Martín Lewis
Cloruro sódico 5.0 g
modificado es una formulación para aislamiento Agar 14.0 g
selectivo de Neisserias patógenas, donde se Hemoglobina 10.0 g
consigue una mayor inhibición de las bacterias Enriquecimiento 10.0 ml
Gram positivas y hongos que el agar Thayer polivitamínico
Martín. En el Agar Martín Lewis modificado, la Trimetoprim 0.005 g
base contiene caseína y peptonas cárnicas como lactato
fuentes de nitrógeno, fosfatos para mantener el Amphotericina 0.005 g
pH y almidón de maíz con el objeto de neutralizar colistina 0.0075 g
los ácidos grasos tóxicos que puedan presentarse Vancomicina 0.004 g
en el agar. La Hemoglobina aporta el factor X
(Hemina), el poli enriquecimiento vitamínico PREPARACIÓN
aporta el factor V (NAD), vitaminas,
Suspender 36 g de medios deshidratados en 500
aminoácidos, coenzimas, glucosa, hierro y otros
ml de agua filtrada purificada. Calentar con
factores necesarios para conseguir el crecimiento
agitación frecuente y hervir durante un
de las Neisserias patógenas. La presencia de
minuto. Esterilizar a 121º C durante 15
varios agentes antimicrobianos suprime la
minutos. Enfriar a 45-50º C. Agregar 500 ml de
presencia de la flora mixta de las muestras. La
hemoglobina estéril al 2% (8662), 10 ml de
Vancomicina inhibe a las bacterias
enriquecimiento Bio-X (8601) y 10 ml de VCAT
Grampositivas, la Colistina inhibe los bacilos
(8620). Mezclar suavemente y dispensar en
Gram negativos incluyendo Pseudomonas y
placas de Petri estériles.
Neisserias saprofitas, el Trimetoprim inhibe el
Proteus spp. sobre el que no actúa la Colistina y ALMACENAMIENTO
finalmente la Amphotericina inhibe los hongos.
Una vez recibidas en el laboratorio, almacenar en
lugar oscuro y seco a una temperatura de 8 ºC, en
su embalaje original hasta el momento de uso.
Evitar la congelación y el sobrecalentamiento, así
como las variaciones bruscas de temperatura. Las

54
placas deben estar a temperatura ambiente antes
de ser inoculadas. No deben utilizarse con
posterioridad a la fecha de caducidad.
Las bolsas deben ser abiertas cuando vayan a ser
utilizadas, una vez abiertas las que no se utilicen
deberán mantenerse en áreas limpias y
refrigeradas
Antes de inocular, los medios preparados deben
llevarse a temperatura ambiente.
1. Directamente, inocule la placa tan pronto
como sea posible con la muestra y la veta
para el aislamiento.
2. Incubar a 35º C con 5% de CO 2 durante
48 horas.
La humedad es esencial para el crecimiento de la
N. gonorrhoeae, por lo que deben usarse placas
bien hidratadas, y por tanto deben incubarse es
atmósfera saturadas de humedad
PRECAUCIONES
Este producto es para uso exclusivo de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de
presentar contaminación microbiana,
decoloración, signos de deshidratación, roturas u
otros signos de deterioro. Utilizar bajo
procedimientos de laboratorio, siempre como
material biopeligroso.

MICROORGANISMO/ ASPECTO DE LA
COLONIA
Los organismos ATCC Crecimiento
Neisseria 43069 +
gonorrea
Neisseria clínico +
gonorrea
Neisseria 13090 + Ilustración 32 Agar Martin-Lewis
meningitidis
Neisseria sicca 9913 -
Staphylococcus 12228 -o parcial
epidermis
Escherichia coli 25922 -o parcial
Candida abicans 60193 -o parcial
Proteus mirabilis 43071 -o parcial

LIMITACIONES DEL MÉTODO

Las placas New York City agar, han sido
controladas microbiológicamente, pueden
requerir el uso de otros medios de cultivo
auxiliares, reactivos y equipos de laboratorio de
forma complementaria. El transporte de las
muestras no debe sobrepasar las 24 horas, con
una temperatura de transporte entre 20-25ºC y
sobre todo no refrigerarlas.

55
 Agar Movilidad
USO
Medio utilizado en la identificación de miembros
de la familia Enterobacteriaceae en base a la
movilidad, producción de indol y actividad
enzimática ornitina decarboxilasa.
METODOLOGÍA
Medio de cultivo altamente nutritivo por la
presencia de extracto de levadura, peptona y
tripteína. La tripteína aporta gran cantidad de
triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa a
partir del cual se forma indol que puede ser revelado
con el reactivo de Ehrlich o de Kovac´s por la
formación de un compuesto de color rojo. La
glucosa es el hidrato de carbono fermentable, la
ornitina es el sustrato para la detección de la
enzima ornitina decarboxilasa, el púrpura de
bromocresol es el indicador de pH, que en
medio alcalino es de color púrpura y en medio
ácido es amarillo. El agar es el agente
solidificante y a esta concentración le otorga al
medio la propiedad de ser semisólido, condición
necesaria para detectar movilidad, que se
evidencia por el enturbiamiento del medio o por
crecimiento que difunde más allá de la línea de
inoculación del microorganismo en estudio.
Los microorganismos fermentadores de glucosa
acidifican el medio de cultivo y producen viraje
del color púrpura al amarillo. Las condiciones de
acidez son favorables para la actividad enzimática
ornitina decarboxilasa, que actua sobre la ornitina
generando putrescina, con la consecuente
alcalinización del medio de cultivo y viraje al
color púrpura.
56
COMPOSICION
Extracto de carne bovina3.0 g
Digerido pancreático de gelatina 10.0 g
Cloruro sódico 5.0 g
Agar 4.0g
PREPARACIÓN
Suspender 31 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Calentar, agitando frecuentemente y
llevar a ebullición hasta completa disolución.
Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a
121 ºC duran- te 15 minutos.
Enfriar y dejar solidificar en posición vertical.
• Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en
estudio, sembrar por punción profunda
utilizando profunda utilizando aguja de
inoculación.
• Incubación
En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas
MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Después de la incubación, observar los
tubos para determinar el crecimiento con
respecto a la liínea de inoculación. Los
organismos no móviles crecen sólo a lo
largo de la línea de inoculación, mientras
que los organismos móviles se propagan
hacia fuera de la línea de incubación e
incluso pueden crecer por todo el medio
ALMACENAMIENTO
Al recibir los tubos, almacenarlos en un
lugar oscuro a 2–25 °C. No congelar ni
sobrecalentar. No abrir hasta que vayan a
utilizarse. Reducir al mínimo la exposición
a la luz.
 Agar Método
CONTROL MICROBIOLÓGICO
En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas

LIMITACIONES DE MÉTODO
Para su identificación, los organismos Estándar
deben encontrarse en un cultivo puro.
Deben llevarse a cabo pruebas
USO
morfológicas, bioquímicas y/o serológicas
para lograr una identificación final. Medio utilizado para el recuento de bacterias
Consultar los textos correspondientes para aeróbicas a partir de agua, aguas residuales,
obtener información detallada y alimentos y productos lácteos. Este medio
procedimientos recomendados también es conocido como Agar Cuenta Estándar
PRECAUCIONES METODOLOGÍA
Para uso diagnóstico in vitro. Los tubos se formula con los ingredientes originales. El
con tapas ajustadas deben abrirse con extracto de levadura y la peptona de caseína han
cuidado para evitar lesiones por la rotura sido utilizados en medios diseñados para estudiar
del vidrio. la presencia de microorganismos termo fílicos en
Emplear una técnica aséptica y seguir las productos lácteos desde 1928.La peptona de
precauciones habituales contra riesgos gelatina y el extracto de levadura proporcionan la
microbiológicos durante todo el proceso. fuente de carbono y nitrógeno. La dextrosa es el
carbohidrato fermentable y el agar es adicionado
como agente solidificante.
COMPOSICIÓN
Peptona de caseina 5.0 g
Dextrosa 1.0
Extracto de levadura 2.5 g
Agar bacteriologcio 15.0
pH 7.0 ± 0.2

PREPARACIÓN
Ilustración 33 Agar Movilidad
Suspender 23.5 g del medio en un litro de agua
purificada. Calentar con agitación suave hasta su
completa disolución y hervir durante un minuto.
Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de
presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una
temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de
Petri estériles.

57
ALMACENAMIENTO La concentración del inóculo, la concentración y
conservación de los discos de antibióticos, la
2-30°C
colocación del número adecuado de discos sobre
Incubar las placas a 35 ± 2°C durante 18-24 horas el agar, la distancia entre un disco y otro, la
colocación estratégica de ciertos antibióticos, la
CONTROL MICROBIOLÓGICO atmósfera, la temperatura y el tiempo de
Frasco con 450g Caja con 20 sobres para un litro incubación.
Medio preparado en paquete con 10 placas COMPOSICIÓN
Extracto de carne 2.0 g
bovina
Hidrolizado acido de 17.5 g
caseina
Almidon 1.5 g

PREPARACIÓN
Pesar 37 gr del medio Müeller Hinton
deshidratado y disolver en 1 litro de agua
destilada. Calentar el medio mientras se agita
para ayudar a su disolución. Dejar hervir por 1
minuto. Llevar al autoclave para esterilizar a
Ilustración 34 Agar Método Estandar 121°C por 15 minutos. Al sacar del autoclave, se
debe colocar la fiola en un baño de maría a 50°C
para enfriar. Verter 25 a 30 ml en placas de Petri
Agar Mueller-Hinton estériles de 10 cm de diámetro.
Las placas deben quedar con un grosor promedio
USO de 4 mm (ideal), siendo permitido un rango de 3-
Es un medio de cultivo microbiológico utilizado 5 mm. El pH final del medio debe quedar entre
comúnmente para realizar la prueba de 7,2 a 7,4.
susceptibilidad a antibióticos. También es usado
para aislar y mantener especies de Neisseria y
Moraxella.
METODOLOGÍA
El ajuste del pH, la profundidad del agar y la
concentración adecuada de timina, timidina,
Ca++, Mg++ y Zn++. También hay que saber que
la metodología está estandarizada y por tanto
deben cumplirse todos los parámetros, tales
como:

58
 MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Cepas Resultados de
crecimiento
Staphylococcus Correcto
aureus crecimiento
Streptococcus Correcto
pyogenes crecimiento.
Proteus mirabilis. Correcto
crecimiento.
Pseudomonas Buen crecimiento. Ilustración 36 Agar Mueller-Hinton
aeruginosa

Agar Nutritivo
Enterococcus faecalis Correcto
crecimiento.

ALMACENAMIENTO
Mantener el bote bien cerrado en un lugar seco,
fresco y oscuro. Invertir y guardar en nevera,
hasta su uso. Dejar que la placa tome temperatura
ambiente antes de usar.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar a 37°C aproximadamente. De 24 a 48
horas.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
La sensibilidad de un antibiótico demostrada en
el antibiograma frente a un microorganismo (in
vitro) no es garantía de que funcionará in vivo.
PRECAUCIONES
Esterilizar el laboratorio en el que se realizó el
cultivo y dejar de usar por lo menos 3 meses.
USO
Utilizado para propósitos generales, para el
aislamiento y recuento de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales.
Su uso esta descrito en procedimientos para el
análisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria.
METODOLOGÍA
Agar nutritivo está formado por peptona, extracto
de carne bovina y agar. Esta fórmula
relativamente sencilla proporciona los nutrientes
necesarios para la multiplicación de un amplio
número de microorganismos que no son
necesariamente exigentes.
El extracto de carne bovina contiene sustancias
solubles en agua incluidos los carbohidratos,
vitaminas, compuestos de nitrógeno orgánicos y
sales. Las peptonas son la fuente principal de
nitrógeno orgánico, en particular aminoácidos y
péptidos de cadena larga. El agar es el agente
solidificante.

59
COMPOSICIÓN • Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis,
a 35-37º C durante 18 a 24 horas.
Pluripeptona 5.0 g
Bacterias exigentes en sus requerimientos
Extracto de
3.0 g nutricionales: en atmósfera con 5-10 % de CO2,
carne
a 35-37 ºC durante 24-48 hora
Cloruro de sodio 8.0 g MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
Agar 15.0 g
COLONIA
Agua purificada 1000 mL MICROORGANISMOS CRECIMIENTO

pH final: 7.3 ± 0.2 Shigella flexneri Crecimiento de

moderado a denso
PREPARACIÓN Staphylococcus aureus Crecimiento de
Suspender 31 g del polvo en 1 litro de agua moderado a denso,
colonias de color
purificada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.
beige a dorado
Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 o 2
Pseudomonas Crecimiento entre
minutos hasta su disolución total. Distribuir en aeruginosa moderado y
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave denso,
a 121°C durante 15 minutos. pigmentación de
Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10 % de color verde
sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) al
medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ALMACENAMIENTO
ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri
estériles. • Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
• Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
Siembra
En superficie: inocular directamente la muestra
por estría. CONTROL MICROBIOLÓGICO:
En profundidad: inocular una alícuota de la Incubar tubos representativos sin inocular a una
muestra directa o de su dilución. Verter un temperatura de 20 – 25 °C y 30 – 35 °C y
volumen del medio de cultivo fundido y enfriado examinar después de 7 días en busca de
a 40 - 45°C. Homogeneizar mediante contaminación microbiana.
movimientos de vaivén y rotación. Dejar
solidificar.
Incubación
El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de
incubación, dependerán del microorganismo que
se quiera recuperar.
En general se recomienda:

60
 Agar New York City
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Para su identificación, los organismos deben
encontrarse en un cultivo puro. Deben llevarse a USO
cabo pruebas morfológicas, bioquímicas y/o Se utiliza para el aislamiento de genococos. Es
serológicas para lograr una identificación final. un medio enriquecido selectivo utilizado para el
Consultar los textos correspondientes para aislamiento y cultivo de patógenos de Neisseria.
obtener información detallada y procedimientos METODOLOGIA
recomendados. La peptona proteosa, el plasma de caballo y
PRECAUCIONES la hemoglobina proporcionan nutrientes para el
crecimiento. El fosfato amortigua el medio. El
Para uso diagnóstico in vitro. suplemento selectivo agregado contiene los
Los tubos con tapas ajustadas deben abrirse con antibióticos vancomicina , colistina , nistatina y
cuidado para evitar lesiones por la rotura del trimetoprim , para suprimir la flora
vidrio. Emplear una técnica aséptica y seguir las acompañante. La vancomicina es inhibidora de
precauciones habituales contra riesgos las bacterias grampositivas . La colistina inhibe
microbiológicos durante todos los las bacterias gramnegativas mientras
procedimientos. Después de su utilización, los que Proteus se inhibe con trimetoprim.
tubos preparados, los recipientes de muestras y La combinación
otros materiales contaminados deben de trimetoprima y colistina actúa sinérgicamente
esterilizarse en autoclave antes de ser contra los bacilos gramnegativos . El
desechados. almidón neutraliza los metabolitos tóxicos
producidos por Neisseria . El suplemento de
autolisado de levadura cumple con los requisitos
de CO2 necesarios para mejorar el crecimiento
de Neisseria . La levadura contiene ácido
oxaloacético que es metabolizado por
los gonococos para producir suficiente CO2 para
el crecimiento de los gonococos
capnófilos. Además, la presencia de autolisado
de levadura reduce la fase de retraso del
crecimiento de Neisseria, mejorando así el
tamaño y el número de colonias.

Ilustración 37 Agar nutritivo

61
COMPOSICIÓN
MICROORGANISMO
Caseína peptona 7,5 gr. DESARROLLO/ASPECTO DE LA
Peptona de carne 7,5 gr. COLONIA
Maicena 1,0 gr.
Fosfato de potasio, dibásico 4,0 gr. Neisseria Crecimiento
Fosfato de potasio, monobásico 1,0 gr. gonorrhoeae aceptable a bueno
Cloruro de sodio 5,0 gr. Neisseria Crecimiento bueno a
Agar 10,0 gr. meningitidis aceptable
Candida albicans Inhibición parcial a
Enriquecimientos: Dextrosa 50% 10 mL. completa
Dializado de levadura 25 mL. Escherichia coli Inhibición parcial a
Suero de caballo 50 mL. completa
Lysed Horse blood 20 mL. Staphylococcus Inhibición parcial a
epidermis completa
Antibioticos: CLAT 10 mL.
Sin inocular Chocolate marrón
opaco
PREPARACIÓN
Suspender 36 g de medios deshidratados en 885
ALMACENAMIENTO
ml de agua filtrada purificada. Calentar con
Almacene los medios preparados a 2-8 ° C
agitación frecuente y hervir durante un
protegidos de la luz directa y polvo deshidratado,
minuto. Esterilizar a 121 ° C durante 15
en un lugar seco, en recipientes herméticamente
minutos. Enfriar a 45-50 ° C. Añadir 10 ml de
cerrados a 2-25 ° C.
Dextrose 50% (8580), 25 ml de dialisato de
levadura (8643), 50 ml de suero de caballo CONTROL MICROBIOLÓGICO
(4173), 20 ml de sangre de caballo lisada (4501)
y 10 ml de CLAT (8689). Mezclar suavemente y
Incubar a 35 ± 2 ° C y examinar después
dispensar en placas de Petri estériles.
de la incubación durante la noche y otra vez
Coloque el cultivo tan pronto como sea posible
después de aproximadamente 48 horas.
en un ambiente aeróbico enriquecido
con dióxido de carbono .
El subcultivo para la identificación de N. LIMITACIONES DEL MÉTODO
gonorrhoeae debe realizarse dentro de las 18 a 24
horas. Si se envían después de la incubación, las
colonias deben subcultivarse antes de realizar Este medio es solo una parte de la
pruebas de identificación bioquímica para identificación. Se pueden requerir otras pruebas.
garantizar la viabilidad adecuada. Algunas cepas de N. gonorrhoeae están inhibidas
por la concentración de vancomicina en los
medios selectivos, por lo que se recomienda la
adición de agar chocolate no selectivo,
especialmente en casos sospechosos de cultivo
negativo o para muestras estériles (p. Ej., Líquido
de la articulación)

62
PRECAUCIONES Se logra un crecimiento apropiado y una clara
Este medio es solo para uso diagnóstico IN visualización de las colonias de Listeria, mientras
VITRO. que se inhibe total o parcialmente el desarrollo de
la flora acompañante en la muestra de estudio.
COMPOSICION
Polipeptona: 20 g
Extracto de levadura: 3 g
Almidon: 1g
Cloruro sódico: 5g
Esculina: 1g
Citrato férrico amonical: 0.5g
Cloruro de litio: 12 – 15 g
Agar bacteriológico: 13g

PREPARACION
Disolver 58.5 g de medio deshidratado en 1 L de
Ilustración 38 Agar NYC agua destilada. Se hierve por 1-2 min para su
completa disolución. Repartir 100 ml en frascos

Agar Oxford de 150 ml. Esterilizar en autoclave a 120° por 15

min. Atemperar en un baño a 45°- 48° C. Para
preparar las placas se añade a cada frasco 1 ml de
USO
suplemento selectivo para el agar Oxford.
Medio de cultivo selectivo usado para el Homogeneizar sin incorporar aire. Repartir
aislamiento de Listeria spp. O Listeria asépticamente en placas de Petri estériles. Dejar
monocytogenes en alimentos con el agregado de solidificar.
antimicrobianos.
MICROORGANISMO/ DESARROLLO DE
METODOLOGIA LA COLONIA
Medio de cultivo base que contiene peptona para Listeria
Satisfactoria
el desarrollo de Listeria spp., levadura que es monocytogenes
fuente de vitamina B y almidón para el correcto Escherichia coli Inhibido
desarrollo bacteriano. Es diferencial para el Enterococcus faecalis Inhibido
desarrollo de Listeria spp, debido a que el
producto de hidrólisis de la esculina en presencia
CONTROL MICROBIOLOGICO
de iones Fe3+ forma un compuesto fenólico de
color negro (con los iones férricos) Medio solido de color amarillo verdoso, con
reflejos azulados, ligeramente opalescente. pH a
La concentración de cloruro sódico del medio
25°C.
mantiene u equilibrio osmótico. Listeria es capaz
de hidrolizar a esculina en glucosa y esculetina,
que forma el color negro.

63
 LIMITACIONES DEL METODO
Las características del cultivo o producto pueden
alterarse si no se conserva apropiadamente.
Ilustración 39 Agar Oxford
METODOLOGÍA
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar,
PDA, por sus siglas en inglés) es un medio de
propósito general para levaduras y mohos que
puede ser suplementado con ácidos o antibióticos
para inhibir el crecimiento bacteriano.
El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado
para el cultivo de levaduras y mohos
clínicamente significativos. La base (infusión de
papa) nutricionalmente rica, estimula la
esporulación de los mohos y la producción de
pigmentos en algunos dermatofitos.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Debido a variaciones nutricionales algunas cepas
pueden tener un pobre crecimiento o ausencia de
crecimiento en este medio.
PREPARACIÓN
• Suspenda 39 g del medio de cultivo en un

Agar Papa
litro de agua purificada.
• Caliente agitando frecuentemente y
permita que hierva por un minuto para
USO disolver completamente el medio.
El Agar Papa Dextrosa es utilizado para el cultivo • Autoclave a 121°C durante 15 minutos.
de hongos. Este producto está conforme a los El agar es adicionado como agente solidificante.
Requerimientos Armonizados de las Muchos procedimientos estándares usan una
Farmacopeas USP/EP/JP. cantidad específica de ácido tartárico estéril
COMPOSICIÓN (10%) para reducir el pH de este medio a 3,5 
0.1, y así inhibir el crecimiento bacteriano. No
Infusión de Papa a partir de 200 g 4g recalentar el medio acidificado, el calentamiento
Dextrosa, 20 g en estado ácido hidrolizará el agar.
Agar 15 g
*4,0 g de extracto de papa es equivalente a
200 g de infusión de papas.

64

MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA
Aspergillus niger Buen crecimiento
Candida albicans Buen crecimiento
Penicillium Buen crecimiento
ALMACENAMIENTO
Almacene el envase conteniendo el medio de
cultivo deshidratado sellado firmemente y a una
temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y
cerrado nuevamente, coloque el envase en un
ambiente con baja humedad a la misma
temperatura de almacenamiento. Proteja el
producto de los efectos de la humedad y de la luz
manteniendo el envase firmemente cerrado.
CONTROL MICROBIANO
Incube a 22–25°C o 30–32°C (dependiendo del
método seguido) durante 2–7 días o por más
tiempo
Agar Palcam
USO
es un medio selectivo de diferenciación para el
aislamiento y la detección de Listeria
monocytogenes y otras especies de Listeria a
partir de alimentos y muestras clínicas
METODOLGIA
El agar PALCAM se basa en la fórmula de van
Netten et al, quienes desarrollaron este medio
selectivo y diferencial para su uso en el
aislamiento y recuento de las especies de Listeria
a partir de muestras alimentarias
Health Canada también recomienda el medio
PALCAM para la detección de L.
monocytogenes en alimentos y muestras
ambientales, así como lo recomienda OADC para
la detección del organismo en los alimentos.

PRECAUCIONES: COMPOSICION

• Únicamente de uso profesional Fórmula* por litro de agua purificada

• Uso en el laboratorio Bacto Columbia Blood Agar Base 39.0 g
• Utilizar equipo de seguridad y utilizar Manitol 10.0
medios estériles para el cultivo Glucosa 0.5
Esculina 1.0
Citrato férrico de amonio 0.5
Cloruro de litio 15.0
Rojo fenol 0.08
Clorhidrato de acriflavina 0.005
Sulfato de polimixina B 0.01
Ceftazidima 0.008
Bacto Agar 2.0

PREPARACION
Extender la muestra directamente o a partir de un
Ilustración 40 Agar papa
caldo de enriquecimiento en la superficie del
medio. PALCAM Listeria Agar debe inocularse
con muestras clínicas si se sospecha un alto nivel
de contaminación. Las muestras clínicas de zonas

65
corporales principalmente estériles, por ejemplo, LIMITACIONES DEL METODO
líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico,
En este medio, todas las especies de Listeria
placenta o muestras fetales, deben extenderse
crecen y presentan colonias del mismo aspecto.
principalmente en medios no selectivos
Por tanto, todos los aislados deben identificarse
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA con los procedimientos bioquímicos y/o
COLONIA serológicos a nivel especie. La incubación de este
medio en una atmósfera aerobia enriquecida con
Listeria monocytogenes Crecimiento de
dióxido de carbono o en una atmósfera
aceptable a excelente; colonias de grises a
microaerobia puede causar un cambio de color de
verdes rodeadas de halos de color marrón
oscuro a negro en el medio rojo a amarillo o naranja en el indicador de pH
Listeria monocytogenes Crecimiento de rojo fenol, lo que se asemeja a una fermentación
bueno a excelente; colonias de grises a de manitol falsa positiva. Por tanto, se prefiere
verdes rodeadas de halos de color marrón una atmósfera aerobia. Determinadas cepas de
oscuro a negro en el medio Listeria pueden crecer lentamente en este medio.
Escherichia coli Inhibición (parcial a) Por tanto, las placas inoculadas deben incubarse
completa nuevamente si se produce resultado negativo
Enterococcus faecalis Inhibición completa después de 18 – 24 h. La Listeria puede estar
Pseudomonas aeruginosa presente en cantidades muy pequeñas en ciertas
Inhibición (parcial a) completa muestras que se encuentran por debajo del nivel
de detección de este medio. En estos casos, tal
Staphylococcus aureus vez sea necesario el enriquecimiento previo
Inhibición parcial; colonias amarillentas
rodeadas de halos amarillos Sin inocular PRECAUCIONES
Rojo, transparente o trazas lechosas
No utilizar las placas si muestran evidencia de
contaminación microbiana, decoloración,
ALMACENAMIENTO deshidratación, grietas o cualquier otro signo de
deterioro. Consultar los procedimientos de
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
manipulación aséptica, riesgos biológicos y
oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
desecho del producto
envase original hasta momentos antes de su
utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden
inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los
períodos de incubación recomendados. Las
placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden
utilizarse durante una semana cuando se
almacenan en un área limpia a una temperatura
de 2 – 8 °C.

Ilustración 41 Agar Palcam

66
 Agar Para
MICROOGANISMO/ ASPECTO COLONIA

Resultado de
Cepas

Recuentro
Crecimiento
Aspergillus niger bueno a excelente
Bacillus subtilis bueno a excelente
USO
Candida albican bueno a excelente
El Plate Count Agar (Agar para Standard Escherichia coli bueno a excelente
Methods), es un medio utilizado para la Shigella flexneri bueno a excelente
enumeración de bacterias aeróbicas en aguas, Staphylococcus
aguas residuales y alimentos. bueno a excelente
epidermidis
METODOLOGÍA Staphylococcus aureus bueno a excelente
Streptococcus pyogenes bueno a excelente
En el PCA (Plate Count Agar), la Triptona y el
Extracto de Levadura suministran las fuentes de
nitrógeno y de vitaminas, que requieren para el ALMACENAMIENTO
crecimiento una vasta variedad de Almacenar en lugar oscuro y seco a una
microorganismos, la glucosa actúa como fuente temperatura de 8 ºC, en su embalaje original
de energía. Se prepara según la fórmula de la hasta el momento de uso. Evitar la congelación y
USP y recomendaciones de la APHA (American el sobrecalentamiento.
Public Health Association) La transparencia del
medio y el buen tamaño de las colonias al crecer CONTROL MICROBIOLÓGICO
facilitan los recuentos bacterianos. Han sido inoculadas, incubadas de 32 a 36 ºC en
COMPOSICIÓN condiciones aeróbicas y examinadas
transcurridas de 18 a 48 horas de la inoculación,
Hidrolizado pancreático de caseína (Triptona) para bacterias y Candida, y en el caso del
5.0 g Aspegillus Níger 3 o 4 días de 25 a 28ºC
Extracto de levadura 2.5 g obteniéndose los siguientes crecimientos.
Glucosa 1.0 g Agar 15.0 g
LIMITACIONES DE USO

PREPARACIÓN Este medio, PCA, no es adecuado para aerobios

Disolver 23,5 gramos de medio en 1 litro de agua
bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición,
para la total homogeneización. Repartir en tubos
o en frascos. Autoclavar durante 15 minutos a
121 ºC. El color final del medio es blanco-crema.
exigentes y por supuesto para anaeróbicos.
PRECAUCIONES
Este producto es para uso exclusivo de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de
presentar contaminación microbiana,
decoloración, signos de deshidratación, roturas u
otros signos de deterioro. Utilizar bajo
procedimientos de laboratorio, tratar siempre
como material biopeligroso.

67
 hace selectivo con la adición de alcohol
feniletílico que inhibe los bacilos gramnegativos
anaeróbicos facultativos. La PEA anaeróbica es
compatible con el crecimiento de la mayoría de
las bacterias anaerobias y grampositivas y
gramnegativas.
COMPOSICIÓN
Ingredientes por litro de agua desionizada:

Digestivo pancreático 15.0gm

Ilustración 42 Agar Para Recuento de la caseína
Compendio Papaico 5.0gm
Agar PEA (alcohol De Harina De Soja

feniletílico, Cloruro de sodio 5.0gm

Extracto de levadura 5.0gm
“phenylethanol”) Feniletanol 2.5gm
USO
Vitamina K 10.0 mg
Se recomienda para usar como medio
enriquecido para el cultivo y aislamiento Hemin 5.0 mg
selectivo de bacterias anaerobias obligadas
grampositivas y negativas. L-cistina 0.4gm

METODOLOGÍA Sangre de oveja 50.0ml

El medio basal de la PEA anaeróbica consiste en El agar 15.0gm

digestión pancreática de caseína y digestión
enzimática de harina de soja. Ambos proveen
aminoácidos, carbohidratos y vitaminas. El
medio se complementa con extracto de levadura,
sangre de oveja, vitamina K, hemina y L-
cistina. El extracto de levadura potencia el
crecimiento de microorganismos
fastidiosos; sangre de oveja mejora la
hemólisis; la vitamina K promueve el aumento
del crecimiento
de Prevotella spppigmentada ; La hemina y la L-
cistina mejoran el crecimiento de Clostridium
haemolyticum , Fusobacterium necrophorum ,
ciertas cepas de Actinomyces
israelii , Bacteroides thetaiotaomicron y
estreptococos dependientes de tiol. El medio se
PREPARACIÓN
Deje que las placas se calienten a temperatura
ambiente y que la superficie de agar se seque
antes de inocular. Inocule y raye la muestra tan
pronto como sea posible después de la
recolección. Se debe utilizar un inóculo grande
para minimizar los efectos tóxicos del oxígeno.
Deje que las placas se calienten a temperatura
ambiente y que la superficie de agar se seque
antes de inocular. Inocule y raye la muestra tan
pronto como sea posible después de la
recolección. Se debe utilizar un inóculo grande
para minimizar los efectos tóxicos del
oxígeno. Racha de aislamiento con un bucle

68
estéril. Incubar las placas a 35-37ºC. Durante 18- inoculados durante 48 horas completas antes del
48 horas en un ambiente anaeróbico. Examinar examen y la exposición del cultivo al aire
para morfología y características coloniales ambiente.
típicas.
Algunos organismos para los cuales el medio está
Un medio no selectivo debe inocularse en diseñado para aislar pueden ser inhibidos por la
paralelo al medio selectivo para mejorar la naturaleza selectiva del alcohol feniletílico.
recuperación de microorganismos anaeróbicos.
PRECAUCIONES
Control microbiológico: Incubar las placas a 35-
Este producto puede contener componentes de
37ºC. Durante 18-48 horas en un ambiente
origen animal. El conocimiento certificado del
anaeróbico.
origen y / o estado sanitario de los animales no
MICROORGANISMO/DESARROLLO DE garantiza la ausencia de agentes patógenos
LA COLONIA transmisibles. Por lo tanto, se recomienda que
estos productos se traten como potencialmente
Organismos de prueba Resultados infecciosos y se manejen observando las
precauciones de sangre universales
habituales. No ingiera, inhale, o permita que
Bacteroides fragilis Crecimiento
entre en contacto con la piel.
Prevotella Crecimiento Este producto es solo para uso diagnóstico in
melanogenica vitro . Solo debe ser utilizado por personal de
Inhibición laboratorio debidamente capacitado y calificado.
Proteus mirabilis parcial;Crecimiento
Esterilizar todos los residuos de riesgo biológico
leve sin enjambre.
antes de su eliminación.

ALMACENAMIENTO
Almacenar a 2-8ºC. lejos de la luz directa. No se
deben usar medios si hay signos de deterioro
(encogimiento, agrietamiento o decoloración),
hemólisis, contaminación. El producto es
sensible a la luz y la temperatura; Proteger de la
luz, el calor excesivo y la congelación.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
La recuperación de algunos microorganismos
Ilustración 43 Agar PEA
anaeróbicos puede requerir la reducción del
medio al colocarlo en un frasco sin oxígeno justo
antes de la inoculación.
Muchos anaerobios son más sensibles al oxígeno
durante la fase logarítmica de crecimiento; por lo
tanto, puede ser necesario incubar los medios

69
 Agar Regan Lowe
USO
El medio Regan-Lowe Agar es un medio
selectivo utilizado para el aislamiento de
Bordetella pertussis de muestras clínicas.
METODOLOGÍA
En este medio, el extracto de carne y la peptona
de gelatina proporcionan nutrientes. El almidón y
el carbón adsorben los ácidos grasos tóxicos, los
radicales y peróxidos, reemplazando la infusión
de patata por el agar del Bordet-Gengou. La
Niacina es una vitamina que favorece el
crecimiento. La sangre de caballo proporciona
factores de crecimiento complejos y reduce aun
más el efecto tóxico de los peróxidos. Se añade
Cefalexina como agente selectivo para suprimir
parcialmente la flora normal de las vías
respiratorias.
COMPOSICIÓN
Extracto de carne, Hidrolizado pancreático de
caseína, Almidón soluble, Cloruro sódico,
Carbón (activado), Niacina ( ácido nicotínico),
Sangre desfibrinada de caballo, Cefalexina,
Agar.
PREPARACIÓN
La muestra se debe sembrar de inmediato en agar
Regan Lowe, se incuba en atmósfera húmeda a
35-36º C hasta 7 días.
1. Recoja la muestra de la nasofaringe posterior
con un hisopo o aspirado.
2. Coloque el hisopo o la muestra en el medio de
transporte Regan-Lowe y llévelo al laboratorio
para su cultivo.
3. Una vez en el laboratorio, inocular en una
placa de agar Regan-Lowe selectiva de
enriquecimiento.
70
4. Incubar aeróbicamente a 35 ° -36 ° C al menos
durante 7 días.
3, 4 Para evitar el secado, las placas de agar se
deben colocar en una cámara húmeda con un
papel de filtro húmedo.
5. Revise las placas diariamente para ver si hay
crecimiento. Las colonias de Bordetella aparecen
pequeñas, lisas, transparentes y brillantes en las
placas de agar Regan-Lowe.
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA
Bordetella pertussis (Crecimiento de
regular a excelente),
Bordetella parapertussis (Crecimiento de
regular a excelente)
Streptococcus pneumoniae (Inhibición de
parcial a completa),
Streptococcus pyogenes (Inhibición de
parcial a completa).
ALMACENAMIENTO
Almacenar en lugar oscuro y seco a una
temperatura de 8 º C, en su embalaje original
hasta el momento de uso. Evitar la congelación y
el sobrecalentamiento, así como las variaciones
bruscas de temperatura. Las placas deben estar a
temperatura ambiente antes de ser inoculadas. No
deben utilizarse con posterioridad a la fecha de
caducidad.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
La temperatura óptima de incubación es de 34 –
36 °C. Una temperatura más elevada puede
reducir el crecimiento de Bordetella.
Las muestras recolectadas después de la
administración de antibióticos pueden tener una
tasa menor de recuperación de bacterias
CONTROL MICROBIOLÓGICO
 Agar Rosa Bengala+
Después de la siembra, las placas se incuban a
35°C, hasta por 5 días.

PRECAUCIONES
Este producto es para uso exclusivo de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de
presentar contaminación microbiana,
decoloración, signos de deshidratación, roturas u
otros signos de deterioro. Utilizar bajo
procedimientos de laboratorio, siempre como
material biopeligroso.
Clorafenicol+ Dicloran
(Agar Drbc)
USO
El agar DRBC se utiliza para el aislamiento
selectivo y enumeración de levaduras y mohos de
alimentos en un entorno de laboratorio. El agar
DRBC no está destinado a ser utilizado en el
diagnóstico de enfermedades u otras condiciones
en humano.
METODOLOGÍA
El DRBC es una modificación del
Medio Cloranfenicol de Rosa de Bengala y se
diferencia de la siguiente manera: el pH se reduce
a 5,6, el contenido de Rosa de Bengala se reduce
en un 50% y se agrega Dichloran.

El efecto acumulativo de estas modificaciones es

Ilustración 44 Agar Regan Lowe
inhibir aún más el crecimiento bacteriano, inhibir
la propagación de mohos
como Rhizopus y Mucor y hacer que el medio
sea capaz de soportar el crecimiento de aquellas
especies que no se pueden aislar en Rose-Bengal
Chloramphenicol Agar o acidified Dextrose
Agar. La inhibición de la propagación de mohos
y la restricción general del tamaño de la colonia
dan como resultado una mejor enumeración y
detección de mohos micotoxigénicos y otras
especies de importancia en el deterioro de los
alimentos

COMPOSICIÓN
Digerido enzimático de tejido animal animal
5g
Glucosa 10g
Fosfato monopotásico 1g
Rosa de Bengala 0.025g,
Sulfato de magnesio 0.5g,
Dicloran 0.002g,

71
 Cloranfenicol 0.1g, PRECAUCIONES
Agar 15g
Foto-oxidos de rose-bengal para formar
compuestos tóxicos. Guardar placas de medio
PREPARACIÓN en la oscuridad y evitar la exposición a la luz,
algunas cepas de hongos pueden inhibirse en este
Disolver 31,6 g del medio en 1 litro de agua
medio
destilada. Calentar agitando hasta ebullición para
su disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15
minutos.
MICROORGANISMO DESARROLLO
/ASPECTO DE LA COLONIA
Aspergillus niger Micelio
blanco/amarillo,
esporas negras
Saccharomyces Buen crecimiento,
cerevisiae colonias color rosa
Escherichia coli Sin crecimiento
Bacilius subtilis Sin crecimiento

ALMACENAMIENTO
Almacene el medio deshidratado a 10-30 ° C y
utilícelo antes de la fecha de caducidad que figura
en la etiqueta.
Almacenar los platos preparados de medio a 2-8
°C
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubar a las placas de agar a 22-25 ºC durante 5
días. Las placas se incuban en posición normal
(no invertida) porque las colonias de levaduras y
hongos filamentosos crecen mejor de esta
manera.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
El pH reducido del Agar DRBC aumenta la
inhibición de las levaduras por Rose-Bengal 1 y
el uso de Agar Cloranfenicol de Rosa-Bengala
(pH de 7.2) en paralelo debe considerarse cuando
es necesario enumerar las levaduras en presencia
de mohos.

72
 Agar Sabhi
USO
Para el uso en el cultivo de hongos, SabHI agar
con sangre, cloranfenicol y ciclohexmida se
recomienda para el aislamiento selectivo de
hongos patógenos.
METODOLOGIA
Inocule un medio no selectivo y selectivo en
paralelo para asegurar la recuperación de hongos
patógenos de muestras potencialmente
contaminadas. Incubar aeróbicamente a 25-30ºC
con humedad aumentada durante 30 días o
más. Inocule dos conjuntos de medios para el
aislamiento de hongos que causan micosis
sistémicas; incubar un conjunto a 25-30ºC y el
otro a 35 +/- 2ºC. Examine los cultivos
semanalmente durante un período de cuatro
semanas antes de que se informe negativo.
COMPOSICIÓN
Destroxa 21.0 gm
infusión del corazón del cerebro 10.0 gm
peptona de carne 7.25 gm,
cloruro de socio 2.5 gm,
caseina peptona 2.25gm,
fosfato de disodio 1.25gm
agar 15.0gm.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Para la correcta identificación de los hongos, se
requiere un examen microscópico y una
evaluación de las estructuras morfológicas.
Se recomienda realizar pruebas bioquímicas,
inmunológicas, moleculares o de espectrometría
de masas en colonias de cultivo puro para una
identificación completa.
73
Para los medios selectivos, las cepas específicas
de hongos para las cuales el medio está diseñado
para aislarse a menudo se pueden inhibir. Los
hongos para los cuales el medio está diseñado
para inhibir pueden crecer.
Se debe inocular un medio no selectivo y
selectivo para el aislamiento de hongos a partir
de muestras potencialmente contaminadas.
ALMACENAMIENTO
Almacenamiento: A la recepción de la tienda del
gato nos W75 y X73 a 2-8ºC de la luz
directa. Tienda cat. no. X75 a 2-30ºC de la luz
directa. No se deben usar medios si hay signos de
deterioro (encogimiento, agrietamiento o
decoloración), hemólisis, contaminación o si la
fecha de caducidad ha pasado.
La fecha de caducidad en la etiqueta del producto
se aplica al producto en su embalaje intacto
cuando se almacena como se indica. El producto
se puede usar y probar hasta la fecha de
caducidad que figura en la etiqueta del producto
e incubarse para los tiempos de incubación de
control de calidad recomendados.
PROCEDIMIENTO
el material infeccioso debe enviarse directamente
al laboratorio sin demora y debe protegerse del
calor y frío excesivos. Si va a haber un retraso en
el procesamiento, la muestra debe inocularse en
un medio de transporte apropiado y refrigerarse
hasta la inoculación. Consulte las referencias
enumeradas para obtener información sobre el
procesamiento y la inoculación de muestras.
CONTROL MICROBIANO

Trichophyton
Crecimiento
mentagrophytes
Candida
Crecimiento
albicans
Candida
Crecimiento
albicans
Trichophyton
Crecimiento
mentagrophytes

Aspergillus Parcial para completar la Ilustración 45 Agar Sabhi

brasiliensis inhibición.

Escherichia Parcial para completar la

coli inhibición.
Agar Salino
Manitol
PRECAUCIONES

Este producto puede contener componentes de

origen animal. El conocimiento certificado del
origen y / o estado sanitario de los animales no
garantiza la ausencia de agentes patógenos
transmisibles. Por lo tanto, se recomienda que
estos productos se traten como potencialmente
infecciosos y se manejen observando las
precauciones de sangre universales
habituales. No ingiera, inhale, o permita que
entre en contacto con la piel.
Este producto es solo para uso diagnóstico in
vitro . Solo debe ser utilizado por personal de
laboratorio debidamente capacitado y
calificado. Observe las precauciones aprobadas
de riesgo biológico y las técnicas
asépticas. Todas las muestras de laboratorio
deben considerarse infecciosas y manipularse de
acuerdo con las "precauciones estándar".
USO
Medio de cultivo selectivo y diferencial,
utilizado para el aislamiento y diferenciación de
estafilococos a partir de diversas muestras.
El agar de sal Chapman-Manitol es un medio
selectivo para el aislamiento y la enumeración de
estafilococos. Se usa también para diferenciar las
especies que fermentan manitol de las que no lo
fermentan.
METODOLOGÍA
La selectividad de este medio se basa en la
presencia de cloruro sódico que inhibe el
crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram
(+) y Gram (-). La diferenciación de los
estafilococos se basa en su capacidad para
fermentar el manitol. La fermentación del
manitol induce acidificación, que vuelve amarillo
el medio en presencia de rojo fenol (indicador de
pH).

74
COMPOSICIÓN colonias son pequeñas y pueden distinguirse
fácilmente de los estafilococos mediante tinción
Extracto de Carne 1.0 g
de Gram o por la prueba de la catalasa.
Peptona de Carne 5.0 g
Tripteína 5.0 g CONTROL MICROBIOLÓGICO
Manitol 10.0 g
Cloruro de Sodio 75.0 g Incube durante 24 a 48 horas a 37°C.
Rojo de Fenol 0.025 g LIMITACIONES DEL MÉTODO
Agar 15.0 g
Agua Purificada 1000 ml -Algunas cepas de enterococos pueden crecer en
PH Final: 7.4 ± 0.2 el medio de cultivo y fermentar el manitol, por
eso se debe realizar la prueba de la catalasa y la
observación microscópica del extendido
PREPARACIÓN coloreado por la técnica de Gram para diferenciar
Suspender 111 g de medio deshidratado en un estos géneros bacterianos.
litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente. Algunas pocas cepas de Staphylococcus aureus
Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir pueden fermentar lentamente el manitol. En este
durante 1 minuto para disolver completamente caso, incubar las placas 48 horas.
los ingredientes. Esterilizar a 121°C durante 15
minutos. Dejar enfriar hasta una temperatura PRECAUCIONES
entre 40-45ºC y verte en placas estériles. Dejar
Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso
solidificar a temperatura ambiente antes de su profesional exclusivo.
utilización No utilizar el producto si al recibirlo su envase
MICROORGANISMO está abierto o dañado.
DESARROLLO/ASPECTO DE LA No utilizar el producto si existen signos de
contaminación o deterioro, así como tampoco
COLONIA
si ha expirado su fecha de vencimiento.
Cepas Resultados de Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
crecimiento manipula el producto.
Staphylococcus Colonias
aureus ATCC amarillas
25923
Staphylococcus Colonias
saprophyticus amarillas
ATCC 15305
Staphylococcus Colonias rosas
epidermidis
ATCC 12228

ALMACENAMIENTO
Los enterococos y los estreptococos del grupo D
pueden crecer en este medio y presentan una leve
fermentación del manitol. Sin embargo, estas
Ilustración 46 Agar Salino Manitol

75
 Agar Sangre (AS o
Almidón de maíz 1.0
Cloruro sódico 5.0
Agar 13.5

BA, Blood Agar)

Sangre de carnero, desfibrinada 5%
pH 7.3 ± 0.2

USO PREPARACIÓN
Es un medio muy nutritivo de uso general para el Agregar 5-10% de sangre ovina desfibrinada
aislamiento y el cultivo de microorganismos esteril al medipo esterilixzado, fundido y
exigentes y no exigentes a partir de muestras enfriado a 45-50°C
clínicas.
Homogeneizar y distribuir en cajas Petri
METODOLOGÍA esteriles.
Las propiedades superiores del BD Columbia MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
Agar with 5% Sheep Blood para propiciar el COLONIA
crecimiento se derivan de la combinación de dos
peptonas y del extracto de levadura como fuente Streptococcus Crecimiento bueno o
de vitaminas del complejo B. Se incluye almidón pyogenes excelente, débil o
de maíz para absorber los derivados tóxicos adecuada hemolisis
beta
contenidos en la muestra y sirve como fuente de
Streptococcus Crecimiento excelente,
energía para los microorganismos que poseen
pheumoniae hemolisis beta
alfa-amilasas. La sangre de carnero permite
Sthapylococcus Crecimiento excelente,
detectar las reacciones hemolíticas y aporta el aureus puede ser beta o no
factor X (hemo) necesario para el crecimiento de hemolítico
numerosas especies patogénicas. En este medio, Escherichia coli Crecimiento excelente,
las colonias suelen ser más grandes y el puede ser beta o no
crecimiento más profuso que en otros que hemolítico
contienen diferentes bases de agar sangre. En los Sin inocular Rojo
estándares de MiQ y en otros manuales de (color sangre)
diagnóstico se recomienda el agar sangre ALMACENAMIENTO
Columbia como un medio de aislamiento
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
primario2,3. En muchos países europeos, éste se
oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
ha convertido en el medio de aislamiento
envueltas en su envase original, hasta justo antes
primario más frecuentemente utilizado para las
de usarlas. Evitar la congelación y el
muestras clínicas.
calentamiento excesivo. Las placas pueden
COMPOSICIÓN inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
Fórmula* por litro de agua destilada períodos de incubación recomendados. Las
Digerido pancreático de caseína 12.0 g
placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden
Digerido péptico de tejido animal 5.0
usarse durante una semana siempre que se
Extracto de levadura 3.0
almacenen en un lugar limpio a una temperatura
Extracto de carne bovina (musculo de
corazón) 3.0 entre 2 y 8 °C.

76
CONTROL MICROBIOLÓGICO PRECAUCIONES
Inocular muestras representativas con las Para uso exclusivo por parte de profesionales. No
siguientes cepas. Incubar las placas inoculadas a usar placas que presenten señales de
una temperatura de 35 ± 2 °C en una atmósfera contaminación microbiana, decoloración,
aeróbica suplementada con dióxido de carbono. desecación, roturas u otras señales de deterioro.
Examinar las placas después de un período entre
18 y 24 h para comprobar la extensión del
crecimiento, el tamaño de la colonia y las
reacciones hemolíticas.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Dado que la sangre de carnero contiene NADasa
que destruye el NAD, el medio carece de factor
V (dinucleótido de nicotinamida adenina, NAD).
Por esta razón, el Haemophilus influenzae que
requiere los factores X y V no crece en él. Ilustración 47 Agar Sangre
Neisseria gonorrhoeae no crece bien en este
medio. En su lugar, para la recuperación se debe

Agar sangre con disco

utilizar BD Chocolate Agar (GC II Agar with
IsoVitaleX). El medio tampoco es apropiado para
el aislamiento y el crecimiento de
Mycobacterium, Legionella, Bordetella y otros
microorganismos con necesidades nutricionales
de bacitracina
altamente específicas. USO

Las reacciones hemolíticas de una amplia La prueba de sensibilidad a la bacitracina se

variedad de microorganismos son diferentes al
usar sangre equina, tal es el caso de algunas cepas
de estreptococos grupo D , que producen beta
hemolisis en el agar suplementado con sangre
equina pero no en el agar suplementado con
sangre de carnero y son mal clasificadas como
estreptococos grupo A al de la sangre equina.
La atmosfera de incubación puede influenciar en
el tipo de reacción de hemolisis en los
estreptococos betas hemolíticos. Para obtener el
mejor rendimiento, incubar las placas en
atmósfera con CO2 o en anaerobiosis
utiliza para la identificación presuntiva de los
estreptococos β- hemolíticos del grupo A.
COMPOSICIÓN
Digerido pancreático de caseína 14,5 g
Digerido papaico de harina de soja 5,0
Cloruro sódico 5,0
Agar 14,0
Factores de crecimiento 1,5
Agentes selectivos 40,2 mg
Sangre de carnero desfibrinada 5%

77
METODOLOGÍA medio de un hisopo estéril. Colocar 2 ó 3 discos
de Bacitracina, por medio de una pinza
La bacitracina es un antibiótico que inhibe la
previamente flameada, y ejercer cierta presión
síntesis de pared celular bacteriana, y a la
sobre el disco. Incubar 18-24 horas a 37ºC. Medir
concentración que se encuentra en los discos
el diámetro de las zonas de inhibición.
(0,04 U) inhibe el crecimiento de los
estreptococos beta hemolíticos del grupo A de CONTROL MICROBIOLÓGICO
Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros
En atmósfera 5-10% de CO2, a 35-37 ºC durante
estreptococos beta hemolíticos. Los micrococcus
24 horas.
y los estomatococcus también son inhibidos por
la bacitracina, mientras que los estafilococos PRECAUCIONES
coagulasa negativa son resistentes. Un resultado
sensible a la bacitracina 0,04 U es presuntivo de - Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso
la presencia de estreptococo grupo A, y se puede profesional exclusivo.
incrementar además el valor diagnóstico y - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
facilitar la identificación de la cepa bacteriana en manipula el producto.
cuestión mediante la utilización de los discos de
PYR-AEnterococos. - Considerar las muestras como potencialmente
infecciosas y manipularlas apropiadamente
LIMITACIONES DEL MÉTODO siguiendo las normas de bioseguridad
Aunque es una prueba simple, económica y establecidas por el laboratorio.
bastante precisa para ka identificación presuntiva - Las características del producto pueden
de estreptococos del grupo A, no es altamente alterarse si no se conserva apropiadamente
específica. Más del 10% de las cepas de
estreptococos de los grupos C y G también son
sensibles a la bacitracina, como los son alrededor
del 5% de las cepas del grupo B
ALMACENAMIENTO
Entre -20 y 0°C. Alternativamente a 2-8 °C
durante 7 días.
PROCEDIMIENTO
Dejar que los discos tomen temperatura
ambiente. Realizar una suspensión de colonias
puras en agua destilada estéril, hasta lograr Ilustración 48 Agar Sangre con Disco
aproximadamente una concentración equivalente
a 10 UFC/ml, correspondiente a la mitad del tubo
Nº 1 de la serie de MacFarland. El cual se prepara
mezclando 0.5 ml de Cl2Ba (48 mmol/L) con
99.5 ml de SO4H2 (180 mmol/L). Inocular, en 3
direcciones, una placa de Agar Tripto Soya con
el agregado de 5% de sangre desfibrinada, por

78
 Agar Sangre Con
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Medio preparado: ámbar, con adición de sangre
Suplementos Para es rojo cereza, opaco. Las reacciones hemolíticas
de algunos microorganismos se observan

Anaerobios diferentes al usar sangre de caballo vs sangre de

cordero. Por ejemplo, algunas cepas de
USO Estreptococos del grupo D que normalmente
producen beta hemólisis en Agar suplementado
Para el aislamiento y cultivo de numerosos
con sangre de caballo, no producen la hemólisis
microorganismos. Con la adición de sangre, es
en Agar suplementado con sangre de cordero, por
útil para microorganismos anaerobios
lo tanto, son mal clasificados como
nutricionalmente exigentes a partir de una gran
Estreptococos del grupo A. Examine la fecha de
variedad de muestras, así como para la
vencimiento y signos de deterioro de las placas
observación de reacciones de hemólisis.
antes de su uso.
COMPOSICION
Observe cualquier evidencia de contaminación,
Peptona especial 23.0 gr mal llenado, cambios de color y signos de
Almidón 1.0 gr deshidratación y pérdida de volumen.  Después
Cloruro de sodio 5.0 gr de abierto el Rack de 10 unidades, debe usarse
Agar 10.0 gr durante la semana siguiente para evitar posible
Suplemento: contaminación. Conservar siempre las placas en
Sangre de cordero 5% - 10% su empaque origina.
pH final 7.3 +/- 0.2
Observe cualquier evidencia de contaminación,
mal llenado, cambios de color y signos de
METODOLOGÍA
deshidratación y pérdida de volumen.  Después
La peptona y el almidón otorgan al medio un alto de abierto el Rack de 10 unidades, debe usarse
valor nutritivo que permite el crecimiento de una durante la semana siguiente para evitar posible
gran variedad de microorganismos incluso contaminación. Conservar siempre las placas en
aquellos que son muy exigentes. El cloruro de su empaque original.
sodio mantiene el equilibrio osmótico. La adición
ALMACENAMIENTO
de sangre de cordero, en una concentración de
5% a 10 %, aporta nutrientes esenciales para el Los medios de cultivo preparados marca MDM
crecimiento bacteriano; además, permite la científica deben ser almacenados con las
observación de hemólisis. siguientes pautas: • No exponer a la luz directa
(artificial o natural), principalmente los medios
de cultivo cromogénicos.

79
En caso de que se suministren en caja de cartón,
mantenerlos almacenados al interior de esta. •
Una vez recibido el producto, almacenar entre
4°C y 12°C hasta su fecha de vencimiento. • No
almacenar cerca del congelador en caso de existir
este compartimiento en la nevera de
almacenamiento, y así evitar cristalización del
medio de cultivo (agar congelado).
PROCEDIMIENTO
El medio de cultivo preparado debe retirarse de
su empaque plástico, y debe ser atemperado unos
30 minutos a temperatura ambiente antes de su
uso, nunca flamearlo. Antes de usarlo, siempre
debe ser marcado o identificado apropiadamente
en su parte posterior, con los detalles de la
muestra de manera que no tape la parte del fondo
del medio de cultivo para visualizar si se presenta
contaminación. A partir del material en estudio,
Inocule el medio usando une técnica aséptica y
apropiada de acuerdo a lo requerido, e incube
bajo condiciones apropiadas de temperatura y
humedad, ambiente de aerobiosis, durante 24-48
horas, entre 35 y 37 °C. Algunos patógenos
necesitan condiciones especiales de incubación
para lo cual necesitan dióxido de carbono para su
aislamiento primario; esto se logra incubando la
placa en una atmósfera que contenga 3-10% de
CO 2. Incubar a 35ºC +/- 2ºC durante 18 24
horas. Examine el medio de cultivo después de
la incubación para observar evidencia de
crecimiento y realice las técnicas apropiadas de
identificación, de acuerdo a los protocolos
establecidos.
Los medios de cultivo MDM Científica son
probados en su pH final recomendado por tipo de
agar. Cada lote se almacena en cuarentena hasta
que una muestra de cada uno es incubada por 3
días y al hacer lectura el resultado, debe ser
negativo para todo tipo de microorganismos,
asegurando en casi la totalidad de los lotes su
esterilidad.
80
Se realizan pruebas de “Desempeño de
crecimiento, productividad y Selectividad”, con
cepas ATCC, de acuerdo con las
recomendaciones de la CLSI (Clinical
Laboratory Standard Institute) para cada tipo de
medio, asegurando de esta manera la calidad
nutritiva y estabilidad de todos los lotes
producidos.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
La inoculación de un medio de cultivo con
bacterias, deliberadamente o accidentalmente,
lleva al crecimiento rápido de estos en el medio,
y altas concentraciones de cualquier
microorganismo son potencialmente peligrosos,
y deben ser descartados de manera segura y por
métodos aprobados, como la inactivación con
amonio cuaternario, descartando luego los agares
en sus cajas contenedoras en doble bolsa roja
para luego descartarlo como material de riesgo
biológico; o por autoclavado, sin remover
previamente el agar.  Todos los medios de
cultivo deben ser manipulados por personal
calificado y que hayan sido entrenados en
procedimientos y técnicas microbiológicas.
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA
• Bacteroides fragilis Crecimiento de
bueno a excelente
• Clostridium perfringens Crecimiento de
bueno a excelente
• Fusobacterium nucleatum Crecimiento
de bueno a excelente
• Peptostreptococcus anaerobius
Crecimiento de bueno a excelente
• Porphyromonas levii Crecimiento de
regular a bueno
• Sin inocular Entre rojo y rojo oscuro
(color sangre)

Ilustración 49 Agar Sangre con suplementos
Agar Sangre De Caballo
Con Bacitracina.
USO
Sangre de caballo con Bacitracina, es un medio
moderadamente selectivo para el aislamiento y
cultivo de Haemophilus influenzae originario de
muestras clínicas.
METODOLOGÍA
Existen varios medios selectivos que utilizan
fórmulas con agar sangre como base para el
aislamiento de Haemophilus influenzae a partir
de muestras clínicas, como el agar infusión de
cerebro y corazón con sangre de caballo al 5% y
bacitracina. En éste, la infusión de cerebro y
corazón proporciona los nutrientes generales y la
sangre de caballo los factores V y X para
favorecer el crecimiento de H. influenzae. Se
añade bacitracina para inhibir la mayor parte del
microbiota, mientras que H. influenzae es
resistente a este agente antimicrobiano.
81
COMPOSICIÓN
Hidrolizado pancreático de caseína 7.5 g
Peptonas de carne seleccionadas 7.5 g
Almidón de maíz 1.0 g
Fosfato dipotásico 4.0 g
Fosfato monopotásico 1.0 g
Cloruro sódico 5.0 g
Agar 14.0 g
Bacitracina 50,000 IU
Hemoglobina 10.0 g
Polivitaminico 10.0 ml
pH 7,2+/-0.2
PROCEDIMIENTO
El medio de cultivo preparado debe retirarse de
su empaque plástico, y debe ser atemperado unos
30 minutos a temperatura ambiente antes de su
uso, nunca flamearlo. Antes de usarlo, siempre
debe ser marcado o identificado apropiadamente
en su parte posterior, con los detalles de la
muestra de manera que no tape la parte del fondo
del medio de cultivo para visualizar si se presenta
contaminación.
A partir del material en estudio, Inocule el medio
usando une técnica aséptica y apropiada de
acuerdo a lo requerido, e incube bajo condiciones
apropiadas de temperatura y humedad, ambiente
de aerobiosis, durante 24-48 horas, entre 35 y 37
°C.
Algunos patógenos necesitan condiciones
especiales de incubación para lo cual necesitan
dióxido de carbono para su aislamiento primario;
esto se logra incubando la placa en una atmósfera
que contenga 3-10% de CO 2. Incubar a 35ºC +/-
2ºC durante 18 24 horas.
Examine el medio de cultivo después de la
incubación para observar evidencia de
crecimiento y realice las técnicas apropiadas de
identificación, de acuerdo a los protocolos
establecidos.
 Después de abierto el Rack de 10 unidades, debe
usarse durante la semana siguiente para evitar
ASPECTO DE LA COLONIA
posible contaminación. Conservar siempre las
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO placas en su empaque original.
Aeptable, buen
Haemophilus influenzae PRECAUCIONES
crecimiento.
Inhibicion parcial La inoculación de un medio de cultivo con
Staphylococcus aureus
o completa. bacterias, deliberadamente o accidentalmente,
Streptococcus Inhibicion parcial lleva al crecimiento rápido de estos en el medio,
pneumoniae o completa. y altas concentraciones de cualquier
Inhibicion parcial
Streptococcus pyogenes microorganismo son potencialmente peligrosos,
o completa.
y deben ser descartados de manera segura y por
ALMACENAMIENTO
métodos aprobados, como la inactivación con
Una vez recibidas en el laboratorio, almacenar en amonio cuaternario, descartando luego los agares
lugar oscuro y seco a una temperatura de 8 ºC, en en sus cajas contenedoras en doble bolsa roja
su embalaje original hasta el momento de uso. para luego descartarlo como material de riesgo
Evitar la congelación y el sobrecalentamiento, así biológico; o por autoclavado, sin remover
como las variaciones bruscas de temperatura. Las previamente el agar.
placas deben estar a temperatura ambiente antes
Todos los medios de cultivo deben ser
de ser inoculadas.
manipulados por personal calificado y que hayan
No deben utilizarse con posterioridad a la fecha sido entrenados en procedimientos y técnicas
de caducidad. Las bolsas deben ser abiertas microbiológicas.
cuando vayan a ser utilizadas, una vez abiertas las
que no se utilicen deberán mantenerse en áreas
limpias y refrigeradas.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubadas a 35 +/- 2 ºC en atmósfera aeróbica
enriquecida con dióxido de carbono y
examinadas transcurridas de 24 a 48 horas de la
inoculación.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Medio preparado: ámbar, con adición de sangre
es rojo cereza, opaco.
Examine la fecha de vencimiento y signos de Ilustración 50 Agar Sangre de Caballo

deterioro de las placas antes de su uso.

Observe cualquier evidencia de contaminación,
mal llenado, cambios de color y signos de
deshidratación y pérdida de volumen.

82
Agar Sangre De Caballo
Con Carbón
USO
Es un medio selectivo para el aislamiento de
Bordetella pertussis y B. parapertussis. Incluye
sangre de caballo al 7% y cefalexina que suprime
parcialmente la microbiota normal de las vías
respiratorias. El desarrollo posterior de este
medio dio lugar al agar Regan-Lowe.
Este medio fue desarrollado por Regan y Lowe
como un medio de transporte de muestras,
utilizado posteriormente como un medio
enriquecido para aislamiento selectivo de B.
pertussis y parapertussis.
En este medio, el extracto de carne y la peptona
de gelatina proporcionan nutrientes. El almidón y
el carbón adsorben los ácidos grasos tóxicos, los
radicales y peróxidos, reemplazando la infusión
de patata por el agar del Bordet-Gengou.
La Niacina es una vitamina que favorece el
crecimiento. La sangre de caballo proporciona
factores de crecimiento complejos y reduce aún
más el efecto tóxico de los peróxidos.

COMPOSICIÓN Se añade Cefalexina como agente selectivo para

suprimir parcialmente la flora normal de las vías
Extracto de carne 10 .0g respiratorias
Hidrolizado pancreático de caseína 10.0 g
Almidón soluble 10.0 g PREPARACIÓN
Cloruro sódico 5.0 g
1. Suspenda 42 g del medio en un litro de
Carbón (activado) 4.0 g
agua purificada.
Niacina (ácido nicotínico) 0.01 g
2. Caliente con agitación frecuente e hierva
Sangre desfibrinada de caballo 10 %
Cefalexina 0.04 g durante un minuto para disolver
Agar 12.0 g completamente el medio.
METODOLOGÍA 3. Autoclave a 121°C durante 15 minutos.
4. Prepare 5 – 10% de agar sangre,
Todas las especies Bordetella son patógenos de añadiendo asépticamente el volumen
las vías respiratorias y residen en las células apropiado de sangre desfibrinada estéril
epiteliales ciliadas del sistema respiratorio. B. al medio de agar estéril, enfriado a 45 –
pertussis y B. parapertussis son patógenos 50°C.
exclusivamente humanos.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
B. pertussis es la causa principal de la tos
convulsa (o tos ferina). B. parapertussis se asocia Ya no se recomienda el método de la “placa de
con la forma más leve de esta enfermedad. B. tos” para el diagnóstico de la tos convulsa o
bronchiseptica es principalmente un patógeno de tosferina. Se deben recoger secreciones de la
animales, pero puede producir bronquitis, nasofaringe posterior, lavado nasofaríngeo o una
neumonía e infecciones de las vías respiratorias torunda nasofaríngea (de Alginato de Calcio en
externas en los seres humanos. un soporte de alambre) dentro de la primera
semana de la tos paroxística. ¡No usar torundas
de algodón! Se recomienda la recogida de
secreciones mediante succión en vacío. No deben

83
utilizarse muestras faríngeas. Las muestras deben Las placas deben estar a temperatura ambiente
ser transportadas al laboratorio tan pronto como antes de ser inoculadas.
sea posible, incluso si se utilizan medios de
No deben utilizarse con posterioridad a la fecha
transporte.
de caducidad.
Los tiempos de transporte superiores a 24 horas
Las bolsas deben ser abiertas cuando vayan a ser
reducirán significativamente la viabilidad de
utilizadas, una vez abiertas las que no se utilicen
Bordetella.
deberán mantenerse en áreas limpias y
La temperatura óptima de incubación es de 34 – refrigeradas.
36 °C. Una temperatura más elevada puede
CONTROL MICRIOBIOLÓGICO
reducir el crecimiento de Bordetella.
Después de una incubación suficiente, las
Después de una incubación suficiente, las
colonias de BD Bordetella Agar with Charcoal
colonias de B. pertussis serán pequeñas, de color
and 7% Horse Blood serán pequeñas, de color
blanco y con forma de cúpula, brillantes y
blanco y con forma de cúpula, brillantes y
similares a perlas divididas en dos.
similares a perlas divididas en dos.
Se incluye Cefalexina en este medio como agente
PRECAUCIONES PARA REALIZARLO
inhibidor de muchas bacterias Gram positivas y
algunas Gram negativas presentes en la flora Este producto es para uso exclusivo de
faríngea normal, pero no produce una inhibición profesionales.
completa de todos los organismos
No debe ser utilizado en caso de presentar
Es posible que Bordetella bronchiseptica crezca contaminación microbiana, decoloración, signos
en estos medios. Representa un patógeno de deshidratación, roturas u otros signos de
oportunista que también puede producir deterioro.
infecciones respiratorias.
Utilizar bajo procedimientos de laboratorio,
Se requieren más pruebas para lograr una siempre como material biopeligroso.
identificación completa de Bordetella pertussis y
de B. parapertussis. La prueba directa de
anticuerpos fluorescentes, que también se puede
utilizar junto con el cultivo para la detección
directa de los agentes a partir de las muestras,
también puede utilizarse para la confirmación de
los aislados obtenidos en estos medios.
ALMACENAMIENTO
Una vez recibidas en el laboratorio, almacenar en
lugar oscuro y seco a una temperatura de 8 º C, Ilustración 51 Agar Sangre de caballo con carbon
en su embalaje original hasta el momento de uso.
Evitar la congelación y el sobrecalentamiento, así
como las variaciones bruscas de temperatura.

84
 Agar Selectivo Para
PREPARACIÓN
Suspender 76.4 gramos del medio en un litro de

Estreptococos agua destilada. Mezclar bien y disolver por

calentamiento con agitación frecuente. Hervir
USO durante un minuto hasta su completa disolución.
Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 10
Se utiliza con cloruro de trifeniltetrazolio para el minutos. Enfriar a 45-50ºC y agregar
aislamiento selectivo y la enumeración de asépticamente dos viales de suplemento de TTC
estreptococos fecales en un laboratorio. KF al 1% (Cat. 6030), previamente reconstituido en
Streptococcus Agar no está diseñado para usarse 5 ml de agua destilada estéril. Homogeneizar
en el diagnóstico de enfermedad u otras suavemente y dispensar en placas de Petri.
condiciones en los humano

COMPOSICIÓN
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Es una modificación del agar sangre de oveja,
Debido a los diferentes requisitos nutricionales,
que contiene cristal violeta,
se pueden encontrar algunas cepas que crecen
trimetoprim~sulfametoxasol y colistina en
mal o no crecen en este medio
concentraciones adecuadas para inhibir a la
mayoría de los estreptococos excepto Muchas cepas de S. bovis y S. equinus son
Streptococcus pyogenes y S. agalactiae. La beta inhibidas por la azida.
hemólisis se observa fácilmente. El medio es
efectivo para la siembra primaria de hisopos de
garganta para la detección de estreptococos del ALMACENAMIENTO
grupo A.
Almacene la botella sellada que contiene el
METODOLOGÍA medio deshidratado a 2 - 30 ° C. Una vez abierto
KF Streptococcus Agar fue desarrollado por y recapitulado, colocar
Kenner, Clark y Kabler1 para la detección de
estreptococos fecales en aguas superficiales. KF Envase en un ambiente de baja humedad a la
Streptococcus Agar se usa actualmente para misma temperatura de almacenamiento. Proteger
detectar estreptococos fecales en agua, alimentos de la humedad y la luz mediante
y Otros materiales a través de la técnica de Mantener el recipiente bien cerrado.
filtración por membrana o método de vertido.
Estreptococos fecales son habitantes normales en
los intestinos, y la presencia de estreptococos
fecales puede utilizarse como una indicación de
Contaminación fecal. La presencia de
estreptococos fecales es valiosa para determinar
las fuentes de contaminación porque Ciertos
estreptococos fecales son específicos del
huésped. KF Streptococcus Agar se recomienda
en métodos estándar para pruebas de alimentos y
agua.

85

PROCEDIMIENTO
El extracto aporta vitaminas y oligoelementos en
el medio. El cloruro de sodio se utiliza para
mantener el equilibrio osmótico, y glicerofosfato
de sodio es un agente de tamponamiento. Maltosa
y lactosa son los Carbohidratos fermentables y
metabolizados por la mayoría de los
estreptococos fecales. La azida sódica es el
agente selectivo, Supresión de organismos
gramnegativos. La formación de ácido es
detectada por Bromcresol Purple, e indicada por
un Cambio de color de morado a amarillo.
El suplemento, cloruro de trifeniltetrazolio al 1%
(TTC), es una mancha que se absorbe mediante
metabolización activa.
Células bacterianas, resultando en el desarrollo
de colonias rosadas a rojas
CONTROL MICROBIOLOGICO
El polvo es homogéneo, fluye libremente y de
color gris claro a beige claro a tostado.
Ilustración 52 Agar Selectivo Para
Streptococcus
86
Agar Skirrow
USO
BD Campylobacter Agar (Skirrow) son medios
selectivos para el aislamiento de especies de
Campylobacter a partir de muestras clínicas.
COMPOSICIÓN
Músculo cardíaco, infusión de (Sólidos) 2,0 g
Digerido pancreático de caseína 13,0 g
Extracto de levadura 5,0 g
Cloruro sódico 5,0 g
Vancomicina 0,01 g
Trimetoprima 0,005
Polimixina 2500 UI
Agar 15,0 g
Sangre de caballo
METODOLOGÍA
En BD Campylobacter Agar (Skirrow), la
infusión de corazón, peptona de caseína y
extracto de levadura proporcionan nutrientes,
mientras que el cloruro sódico mantiene el
equilibrio osmótico. La vancomicina inhibe los
organismos gram positivos, mientras que la
trimetoprima y la polimixina B inhiben
numerosos organismos gram negativos. La
sangre lisada de caballo proporciona nutrientes y
hemo para catalasa bacteriana
PREPARACIÓN
La carne y otros alimentos primero deben triturar
se u homogeneizarse para luego inocularse
directamente o después de su suspensión en una
pequeña cantidad de caldo de peptona en el
medio
LIMITACIONES DEL MÉTODO PRECAUCIONES
Las muestras fecales, torundas y muestras de Solamente para uso profesional. No utilizar las
alimentos no deben tener más de 24 a 48 horas. placas si muestran evidencia de contaminación
Las torundas deben insertarse en los medios de microbiana, decoloración, deshidratación,
transporte apropiados Si no se han de procesar de rajaduras o cualquier otro signo de deterioro.
inmediato, almacenar las muestras en los medios Consultar los procedimientos de manipulación
de transporte a 4 – 8 °C. Evitar la deshidratación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
y la exposición al oxígeno. producto usado en el documento
ALMACENAMIENTO
Almacenarlas en un lugar oscuro a una
temperatura de 2 – 8 °C, en su envase original
hasta momentos antes de su utilización. Evitar la
congelación y el sobrecalentamiento. Las placas
pueden inocularse hasta la fecha de caducidad
almacenan en un área limpia a una temperatura
de 2 – 8 °C.
CONTROL BIOLÓGICO
Inocular muestras representativas con las cepas Ilustración 53 Agar Skirrow
siguientes
Incubar las placas en una atmósfera microaerobia
a 35 – 37 °C durante 42 – 48 h

MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
Agar Sulfito De
Cepas
COLONIA
BD campylobacter Bismuto
Agar (skirrow)
Campylobacter Crecimiento de bueno USO
jejuni subesp. Jejuni a excelente
Medio selectivo para el aislamiento y
diferenciación de Salmonella typhi y otras
Crecimiento de bueno
Campylobacter fetus Salmonellas a partir de diversas muestras.
a excelente
COMPOSICIÓN
Escherichia coli Agar 20
Inhibición completa
Dextrosa 5
Inhibición de parcial Extracto de carne 5
Proteus mirabilis a completa Fosfato di sódico 4
Indicador de sulfito de bismuto 8
Enterococcus Peptona especial 10
faecalis Inhibición completa Sulfato ferroso 0.3
Verde brillante 0.025.

87
PREPARACIÓN
Rehidratar 52 g del medio en un litro de agua
destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar
agitando frecuentemente hasta
el punto de ebullición durante 1 minuto para dis
olverlo por completo. NO calentarse
por tiempo prolongado y evitar así que pierda su
selectividad.
NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE
. Enfriar aproximadamente a 45ºC. El precipitado
característico del medio se debe dispersar
uniformemente durante el vaciado en las cajas de
Petri estériles.

Una vez solidificado presenta un aspecto crema Ilustración 54 Agar sulfito bismuto
uniforme y gradualmente un color verde pálido.
ES IMPORTANTE PROTEGERLO DE LA
LUZ Agar TCBS (Tiosulfato,
y conservarlo en refrigeración de 2 a 8ºC. Delo
contrario, el medio de cultivo que está en forma
reducida se va oxidando hasta adquirir un color
Citrato, Sales Biliares)
francamente verde, cuando esto ocurre se USO
descarta el medio. El Agar TCBS es utilizado para el aislamiento
MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
selectivo de Vibrio cholerae y otros vibrios
COLONIA
entero patogénicos.
Salmonella typhi Colonias con centro negr
COMPOSICIÓN
o, bordes claros, a las 48
h con halo negro grisáceo Extracto de Levadura 5 g
y brillo metálico
Salmonella Colonias negras a verdes Digerido Enzimático de Caseína 5 g
typhimurium
Escherichia coli Crecimiento inhibido o c Digerido Enzimático de Tejido Animal 5 g
olonias verdes
Proteus mirabilis Colonias pequeñas verde Citrato de Sodio 10 g
pálido a veces mucoides
Staphylococcus Crecimiento inhibido Tiosulfato de Sodio 10 g
aureus
Bilis de Buey (Oxbile) 5 g

ALMACENAMIENTO Colato de Sodio 3 g

Incubar 24 - 48 h a 35ºC Sacarosa (Sucrosa) 20 g

Cloruro de Sodio 10 g

88
 Citrato Férrico 1 g producto de los efectos de la humedad y de la luz,
manteniendo el envase firmemente cerrado.
Azul de Bromotimol 0,04 g
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Azul de Timol 0,04 g
Con el fin de proporcionar detección de otros
Agar *14 g patógenos posiblemente involucrados en la
infección, incubar las placas en condiciones
aerobias a una temperatura entre 35 y 37 °C, por
un período de 18 a 24 horas. Si el resultado es
METODOLOGÍA
negativo, incubar durante 24 horas más.
Medio selectivo para especies del género Vibrio
MICROORGANISMO
debido a las altas concentraciones de tiosulfato
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
sódico, citrato férrico y cloruro sódico que
COLONIA
inhiben a la mayoría de las enterobacterias. Por
la presencia de sacarosa y el azul de timol y Escherichia coli Crecimiento inhibido
bromotimol como indicadores, permite Enterococcuss Colonias pequeñas
diferenciar los microorganismos que fermentan faecalis traslucidas
este azúcar, como V. cholerae (colonias Vibrio cholerae Crecimiento, amarillo
amarillas), de otros que no lo fermentan, como V. Vibrio Crecimiento, verde
parahaemolyticus (colonias verdes), y, entre parahaemolyticus
éstos, los productores de sulfhídrico
(generalmente Proteus). PRECAUCIONES
PREPARACIÓN • Para uso en el laboratorio.
• Suspender 88 g del medio en un litro de agua • IRRITANTE. Irritante para los ojos, piel y el
purificada. sistema respiratorio.
• Calentar la solución agitando frecuentemente
LIMITACIONES DEL MÉTODO
y permitiendo que hierva por un minuto para
disolver completamente el medio. • Debido a las variaciones nutricionales,
• NO AUTOCLAVAR. algunas cepas pueden tener un pobre
• Mediante una técnica de extensión aprobada, crecimiento o presentar ausencia de
extender la muestra directamente después de crecimiento en este medio. Se requieren
recibirla en el laboratorio. pruebas adicionales para la confirmación de la
presencia de Vibrio spp.
ALMACENAMIENTO • En el aislamiento inicial, se pueden confundir
Almacenar el envase conteniendo el medio de los V. parahaemolyticus con Aeromonas
cultivo deshidratado sellado firmemente y a una hydrophila, Plesiomonas shigelloides y
temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y Pseudomonas spp.
cerrado nuevamente, colocar el envase en un • Los Proteus spp., fermentadores de sacarosa
ambiente con baja humedad a la misma (sucrose), producen colonias amarillas las
temperatura de almacenamiento. Proteger el cuales pueden asemejarse a las colonias de
Vibrio.

89
 • TCBS no es un medio recomendable para
realizar pruebas de oxidasa de los Vibrio spp.
• Algunas cuantas cepas de V. cholerae pueden
aparecer de colores verdes o incoloros en el
Agar TCBS Agar debido a una fermentación
retrasada de sucrosa (sacarosa).
Ilustración 55 Agar TCBS
Agar Triptona De Soja-
Extracto De Levadura
USO
Medio rico de uso general para el crecimiento de
una amplia variedad de microorganismos. Se
produce por digestión enzimática de la soja y de
la caseína. Con frecuencia se utiliza como agar
base para otros tipos de medios, como agar
sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer
algunos microorganismos exigentes como ciertas
especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria,
Neisseria y Vibrio.
90
COMPOSICIÓN
Tripteína 15.0g
Peptona de soya 5.0g
Cloruro de sodio 5.0g
Agar 15.0g
Agua purificada 1000 ml.
METODOLOGÍA
En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona
de soya aportan nutrientes ricos en péptidos,
aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas,
minerales y vitaminas. La peptona de soya
además es fuente de hidratos de carbono que
estimulan el crecimiento de diversos
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene
el balance osmótico y el agar es el agente
solidificante. Puede ser utilizado como base a la
cual se suplementa con nutrientes o con
antimicrobianos, lográndose un medio
enriquecido o selectivo de acuerdo con el aditivo.
El agregado de extracto de levadura en
concentración 0.6% favorece el crecimiento de
especies de listeria. Es un medio adecuado para
cultivar y mantener cepas Aeromonas y
aumentando el porcentaje de cloruro de sodio,
para mantener cepas de algunos vibrios.
PREPARACIÓN
Suspender 40 gramos de medio en un litro de
agua destilada. Mezclar bien y disolver por
calentamiento con agitación frecuente. Hervir
Durante un minuto hasta su completa
disolución. Esterilizar en autoclave a 121ºC
durante 15 minutos. Enfriar a 45-50ºC, mezclar
bien y
Dispensar en platos. El medio preparado debe
almacenarse a 8-15 ° C. El color es ámbar,
ligeramente opalescente.
El medio deshidratado debe ser homogéneo, de CONTROL MICROBIOLOGICO
flujo libre y de color beige. Si hay algún cambio
Medio de cultivo color ámbar claro.
físico,
En caso de ser suplementado con sangre ovina:
Deseche el medio.
color rojo cereza.
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
PRECAUCIONES
COLONIA
No utilizar los frascos si muestran evidencia de
Crecimiento bueno a
Escherichia coli contaminación microbiana, decoloración,
excelente
Staphylococcus Crecimiento bueno a deshidratación, grietas o cualquier otro signo de
aureus excelente deterioro.
Streptococcus Crecimiento regular a
pneumoniae excelente
Streptococcus Crecimiento regular a
pyogenes excelente

LIMITACIONES DEL MÉTODO

El medio no es adecuado para el aislamiento y
cultivo de bacterias muy exigentes, tales como
las especies Neisseria o Haemophilus, ni de otros
organismos con requisitos de nutrición
Ilustración 56 Agar Triptona de Soja
especiales. Tampoco en un medio óptimo para el
aislamiento de organismos anaerobios exigentes

Agar TSYEB
estrictos. Por consiguiente, el uso en
microbiología clínica se limita a pruebas
especiales, por ej., la diferenciación de
Haemophilus con tiras de factor X, V y XV. USO

ALMACENAMIENTO Triptona soja levadura Extracto de caldo

Al recibir los frascos, almacenarlos en un lugar
oscuro a 5 – 25 ºC. No congelar ni sobrecalentar.
El medio puede utilizarse hasta la fecha de
caducidad e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados. Los frascos de
envases abiertos pueden ser utilizados hasta la
fecha de caducidad. Los frascos abiertos deben
ser utilizados de inmediato.
(TSYEB) es un medio líquido utilizado para el
aislamiento y cultivo de Listeria monocytogenes
en los alimentos y los productos alimenticios.
METODOLOGÍA
La composición nutricional del Trypticaseina
Soy Agar (TSA) es una base perfecta para
suplementar con sangre. El TSA suplementado
con 5% de sangre es un medio de elección para
poner de manifiesto crecimientos bacterianos y
evidenciar reacciones betahemolíticas de
Streptococcus como de otros microorganismos.

91
COMPOSICIÓN LIMITACIONES DEL MÉTODO
Triptona 17.0 Este medio no es adecuado tampoco para el
Peptona de soja 3.0 aislamiento y crecimiento de Mycobacterias,
Extracto de levadura 6.0 Legionella, Bordetella y otros microorganismos
Cloruro de sodio 5.0 con requerimientos nutritivos muy específicos.
Fosfato dipotásico 2.5 Este medio no es apropiado para el aislamiento
D-glucosa 2.5 primario de anaerobios exigentes.
PH final 7.3 ± 0.2 a 25° C
PREPARACIÓN PRECAUCIONES

Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua El producto no contiene sustancias peligrosas en

destilada. Mezcla bien y se disuelven por concentraciones que superen los límites
calentamiento con agitación frecuente. Dispensar establecido por la legislación vigente y por lo
en adecuados contenedores a 121° C durante 15 tanto no es clasificados como peligrosos. El
minutos. producto está diseñado para uso profesional y
debe ser utilizado por operadores debidamente
MICROORGANISMO /ASPECTO capacitados.
COLONIA
Microoganismo Crecimiento
Listeria
Buen crecimento
monocytogenes
Listeria
Buen crecimiento
monocytogenes

ALMACENAMIENTO
El polvo es muy higroscópico, almacenar el
polvo en 10-30° C, en un ambiente seco en su
envase original bien cerrado y utilizarlo antes de
la fecha de caducidad en la etiqueta o hasta canta Ilustración 57 Agar TSYBE
de deterioro o contaminación son evidentes.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Han sido inoculadas, incubadas a 35 +/- 2 ºC en
atmósfera enriquecida con dióxido de carbono y
examinadas transcurridas de 18 a 24 horas de la
inoculación, observándose los siguientes
crecimientos, tamaños de colonias y reacciones
hemolíticas.

92
 Agar Verde Brillante
En BD Brilliant Green Agar los nutrientes los
aportan el extracto de levadura y dos peptonas; la
lactosa y sacarosa con rojo fenol forman un
sistema de diferenciación para excluir los
USO fermentadores de lactosa o sacarosa (p. ej. E.
Medio de enriquecimiento altamente selectivo coli), mientras que las salmonellas no producen
para el aislamiento de Salmonella spp., excepto ácidos a partir de estos azúcares. El verde
Salmonella typhi y Salmonella paratyphi a partir brillante es el agente selectivo para inhibir la
de muestras clínicas, alimentos, y otros flora acompañante. La presencia del binomio
materiales de importancia sanitaria. El agar verde Lactosa-Sacarosa permite que las bacterias
brillante no está destinado a ser utilizado en el fermentadoras, como E.coli, aparezcan como
diagnóstico de enfermedades u otras condiciones colonias amarillas verdosas, debido a la
en humanos. formación de ácidos que se ponen de manifiesto
por la presencia del colorante rojo fenol.
COMPOSICIÓN
PREPARACIÓN
Extracto de levadura 3.0 g
Digerido péptico de tejido animal 5.0 g Suspender los ingredientes en el agua destilada.
Digerido pancreático de caseína 5.0 g Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir
Lactosa 10.0 g hasta disolver completamente. Esterilizar en
Cloruro de sodio 5.0 g autoclave a 121ºC (15 lb de presión) durante 15
Sacarosa 10.0 g minutos. Se debe evitar el sobrecalentamiento.
Rojo fenol 80.0 mg Enfriar entre 45ºC y 50ºC, colocar 20 mL de
Agar 20.0 g medio por cada placa y dejar solidificar.
Verde brillante 12.5 mg
Este medio se debe preparar poco tiempo antes
Agua destilada 1.000 mL
de su uso.
pH final 6.9 ± 0.2
Siembra: Sembrar en superficie por estriado un
inóculo denso de la muestra directa o de una
METODOLOGÍA
dilución.
Se ha demostrado que el medio permite la
Incubación: En aerobiosis, a 35-37°C hasta 48
inoculación de inóculos densos en marcos
horas.
clínicos y no clínicos. El medio se menciona en
la Farmacopea de los Estados Unidos (United
States Pharmacopoeia, USP) en relación con los
procedimientos microbiológicos para comprobar
la ausencia de microorganismos específicos—
suplementos nutricionales y dietéticos
(Microbiological procedures for absence of
specified microorganisms—nutritional and
dietary supplements), y se emplea para el examen
de productos lácteos y en manuales de
microbiología clínica.3-8.

93
 MICROORGANISMOS DESARROLLO/ PRECAUCIONES
ASPECTO DE LA COLONIA.
Para uso exclusivo por parte de profesionales.
MICROORGANISMO: RESULTADOS No usar placas que presenten señales de
Colonias entre contaminación microbiana, decoloración,
Salmonella (distinta de blancas y rojas, desecación, roturas u otras señales de deterioro.
S. Typhi y S Paratyphi) rodeadas de zonas
Consultar en las INSTRUCCIONES
rojas.
GENERALES DE USO los procedimientos de
Crecimiento nulo, o
S. Typhi S. Paratyphi solo trazas de este. manipulación aséptica, peligros biológicos y
Crecimiento nulo, o eliminación del producto después de su uso.
Especies de Shigella trazas de este.
Escherichia coli, Colonias entre
amarillo y verdoso
Klebsiella y rodeadas por zonas
Enterobacteria amarillas verdosas.
Crecimiento nulo, o
Pseudomonas. solo trazas de este.
Bacterias gram- Crecimiento nulo, o
positivas. solo trazas de este.

LIMITACIONES DEL MÉTODO

− Por ser un medio altamente selectivo no
se recomienda para el aislamiento de Ilustración 58 Agar Verde Brillante
Salmonella typhi y Salmonella paratyphi
y Shigella spp.,ya que generalmente no
desarrollan o lo hacen en forma muy
escasa en este medio de cultivo.
− Para el procesamiento de materia fecal se
recomienda hacer cultivo primario en
medios menos selectivos.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35°C.
Medio de cultivo preparado a 2-8°C.
CONTROL MICRIOBIOLÓGICO
Las colonias típicas del género Salmonella son
pequeñas, incoloras,
rosadas o fucsias, transparentes u opacas, sobre
el medio coloreado
de rosado a rojo.

94
 Agua Peptona
PREPARACION
Vierta 25,5 g de polvo en 1,0 L de agua
purificada. Mezcle bien. En caso de ser

Tamponada. necesario, caliente la solución para disolver

completamente el polvo. Dispense. Esterilice en
USO autoclave a 121°C por 15 minutos.
Medio usado como diluyente y para MICROORGANISMO
enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos DESARROLLADO/ASPECTO DE LA
y otros materiales de interés sanitario. COLONIA.
METODOLOGIA
MICROORGANISMO: CRECIMIENTO
Medio enriquecido no selectivo, recomendado Staphylococcus aureus Bueno
para ser utilizado en lugar de solución fisiológica Escherichia c Oli bueno
para recuperar células de entero bacterias Bacillus subtilis Bueno.
dañadas por procesos fisicoquímicos, a los que ha Aspergillus siliensis Bueno
sido sometido el alimento. Se debe adicionar el Salmonella
Bueno.
indicador de Andrade y el hidrato de carbono. typhimurium
Cándida albicans Bueno
La digestión pancreática de la caseína
proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y
aminoácidos esenciales para el crecimiento. Los ALMACENAMIENTO
fosfatos de potasio actúan como un sistema -Conservar a 2-25 Cº
tampón y el cloruro sódico suministra electrólitos
esenciales para el transporte y el equilibrio CONTROL MICROBIANO.
osmótico.
el rendimiento del medio a partir de cultivos
COMPOSICION tiempo después de la incubación a una
Hidrolizado temperatura de 30-35 º C y observados después
10.0 g de 18-24 horas.
enzimático de caseína
Cloruro de sodio 5.0 g
Fosfato LIMITACIONES DEL METODO
dihidrogenado de 1.5 g Disponga bolsas vacías con otro desecho del
potasio laboratorio, no deben eliminarse las etiquetas de
Hidrogenofosfato de
9.0 g los recipientes hasta que éstos hayan sido
sodio dodecahidrato
limpiados. Los recipientes contaminados no
0.2 a
El pH final es de 7.0 deben tratarse como desechos caseros.
25°C.

95
PRECAUCIONES
-Use ropa protectora correspondiente.
-limpiar las pequeñas salpicaduras con un trapo
húmedo. Finalmente, lavar el área con abundante
agua, evite el contacto con los ojos y piel.
Ilustración 59 agua peptonada tamponada
Base De Agar Para
Listeria Palcam
USO
Medio selectivo de diferenciación para el
aislamiento y la detección de Listeria
monocytogenes y otras especies de Listeria a
partir de alimentos y muestras clínicas
METODOLOGÍA
En PALCAM Listeria Agar, la base de agar
sangre Columbia suministra los nutrientes y
cofactores necesarios para el crecimiento de
Listeria. Se logra selectividad en el medio
mediante la presencia de cloruro de litio, sulfato
de polimixina B, acriflavina-HCI y ceftazidima,
que suprime el crecimiento de la mayoría de los
organismos diferentes de las especies de Listeria
presentes en alimentos y muestras clínicas. La
concentración de ceftazidima se reduce de 20
96
mg/L a 8 mg/L para mejorar el crecimiento y la
recuperación de Listeria. La diferenciación en el
medio PALCAM se basa en la hidrólisis de
esculina y la fermentación del manitol. Todas las
especies de Listeria hidrolizan la esculina, como
lo demuestra el oscurecimiento del medio. El
producto de la hidrólisis, la esculetina (=6,7-
dihidroxicumarina), reacciona con iones férricos
hasta producir un complejo de marrón a negro.
Composición Bacto
Columbia Blood Agar Base 39,0 g Manitol 10,0
Glucosa 0,5 Esculina 1,0 Citrato férrico de
amonio 0,5 Cloruro de litio 15,0 Rojo fenol 0,08
Clorhidrato de acriflavina 0,005 Sulfato de
polimixina B 0,01 Ceftazidima 0,008 Bacto Agar
2,0
PREPARACIÓN
Las placas pueden inocularse hasta la fecha de
caducidad (véase la etiqueta del paquete) e
incubarse durante los períodos de incubación
recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10
unidades pueden utilizarse durante una semana
cuando se almacenan en un área limpia a una
temperatura de 2 – 8 °C. Inocular muestras
representativas con cepas. Incubar en atmósfera
aerobia durante 42 – 48 h a 35 – 37 °C y efectuar
la lectura después de 18 – 24 h y 42 – 48 h.
MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA
Cepas Resultados de
crecimiento
Listeria Crecimiento de
monocytogenes aceptable a
excelente; colonias
de grises a verdes
rodeadas de halos de
color marrón oscuro
a negro en el medio
 Listeria Crecimiento de PRECAUCIONES
monocytogenes bueno a excelente;
colonias de grises a Solamente para uso profesional. No utilizar las
verdes rodeadas de placas si muestran evidencia de contaminación
halos de color microbiana, decoloración, deshidratación, grietas
marrón oscuro a o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los
negro en el medio procedimientos de manipulación aséptica,
Escherichia coli Inhibición (parcial a) riesgos biológicos y desecho del producto usado
completa en el documento instrucciones generales de uso.
Enterococcus faecalis Inhibición completa
Pseudomonas Inhibición (parcial a)
aeruginosa completa
Staphylococcus Inhibición parcial;
aureus colonias
amarillentas
rodeadas de halos
amarillos
Sin inocular Rojo, transparente o
trazas lechosas

ALMACENAMIENTO
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar
oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su Ilustración 60 Base de Agar para Listeria Palcam
utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento.

Base de agar para

CONTROL MICROBIOLÓGICO
Inocular muestras representativas con las cepas.
Incubar en atmósfera aerobia durante 42 – 48 h a
35 – 37 °C y efectuar la lectura después de 18 –
24 h y 42 – 48 h.
Pseudomonas
USO
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la
Este producto es para uso exclusivo de detección y la diferenciación de especies de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de Pseudomonas en base a la producción de
presentar contaminación microbiana, piocianina. Conocido también como medio King
decoloración, signos de deshidratación, roturas u A y Tech Agar.
otros signos de deterioro.

97
COMPOSICIÓN MICROORGANISMO/ ASPECTO DE LA
COLONIA
Peptona en gelatina 20.0
Sulfato de potasio 10.0
Crecimiento
Cloruro de magnesio 1.4
Microorganismos Producción
Agar 15.0 De Pigmento
pH final: 72 + 0.2 Pseudomonas
Satisfactorio
aeruginosa
METODOLOGÍA Verde o verde azulado

Suspenden 46.4 g del polvo en 1 litro de agua Pseudomonas

Satisfactorio
purificada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar aeruginosa
Verde o verde azulado
con agitación constante para homogeneizar el
Burkholderia
producto. Llevar a ebullición para que se disuelva Satisfactorio
cepacia
por completo. No pigmenta

Distribuir en tubos u otros recipientes apropiados Echerichia coli Satisfactorio

y esterilizar en autoclave a 121° C durante 15
minutos.
Colocar los tubos en posición inclinada para
solidificar el medio de cultivo (pico de flauta).
También puede distribuirse en placas de Petri
estériles.
PREPARACIÓN
Suspenden 46.4 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar
con agitación constante para homogeneizar el
producto. Llevar a ebullición para que se disuelva
por completo.
Distribuir en tubos u otros recipientes apropiados
y esterilizar en autoclave a 121° C durante 15
minutos.
Colocar los tubos en posición inclinada para
solidificar el medio de cultivo (pico de flauta).
También puede distribuirse en placas de Petri
estériles.
No pigmenta
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 °C
Medio de cultivo preparado a 2-8°C
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Suspenden 46.4 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar
con agitación constante para homogeneizar el
producto. Llevar a ebullición para que se disuelva
por completo.
Distribuir en tubos u otros recipientes apropiados
y esterilizar en autoclave a 121° C durante 15
minutos.
Colocar los tubos en posición inclinada para
solidificar el medio de cultivo (pico de flauta).
También puede distribuirse en placas de Petri
estériles.

98
PRECAUCIONES
• Solamente para uso diagnóstico in vitro.
Uso profesional exclusivo.
• No utilizar el producto si existen signos
de contaminación o deterioro, así como
tampoco si ha expirado su fecha de
vencimiento.
• Utilizar guantes y ropa protectora cuando
se manipula el producto.
• Considerar las muestras como
potencialmente infeccionas y
manipularlas apropiadamente siguiendo
las normas de bioseguridad establecidas.

Ilustración 61 Base de agar para pseudomonas

99
Caldo con verde de malaquita
y cloruro de magnesio
USO
es un medio líquido para el enriquecimiento
selectivo de Salmonella a partir de carne vacuna
y productos lácteos, heces y agua contaminada.
COMPOSICIÓN
Fórmula* por litro de agua purificada
Bacto Tryptone 4.54 g
Cloruro sódico 7.2
Fosfato monopotásico 1.45
Cloruro de magnesio, anhidro 13.4
Oxalato de verde malaquita 0.036
pH 5.1 ± 0.2
METODOLOGÍA
El caldo Rappaport-Vassiliadis R10 es un medio
de enriquecimiento selectivo utilizado después
de un enriquecimiento preliminar de la muestra
en un medio de enriquecimiento previo
adecuado. Su uso se ha aprobado para el análisis
de leche y productos lácteos4 , productos con
carne vacuna cruda, alimentos con alto nivel de
contaminación y alimentos para animales5,6. El
medio también se recomienda como
enriquecimiento selectivo de Salmonella
diferente de Salmonella Typhi a partir de
muestras fecales humanas7,8. El cloruro de
magnesio eleva la presión osmótica en el medio.
El verde malaquita inhibe los organismos
diferentes de Salmonella. El pH bajo del medio
(5,1 ± 0,2), combinado con la presencia de verde
malaquita y la alta concentración de cloruro de
magnesio, que incrementa la presión osmótica,
tiene carácter selectivo para Salmonella spp. La
incubación a 41-42°C favorece la selectividad
hacia las salmonellas.
100
PREPARACIÓN
Heces: Inocular 10 mL de caldo Rappaport-
Vassiliadis con un asa con muestra fecal densa o
50 – 100 µL de heces líquidas.
Alimentos: Inocular 10 mL de caldo Rappaport-
Vassiliadis con 0,1 mL del cultivo previamente
enriquecido (por ej., agua de peptona
tamponada).
Leche y productos lácteos, carne vacuna cruda,
alimentos con alto nivel de contaminación y
alimentos para animale. Los materiales con alto
nivel de contaminación, tales como las aguas
residuales o el lodo de alcantarillado, deben
filtrarse por medio de algodón hidrófilo para
quitar el material no disuelto antes de la
inoculación del caldo Rappaport-Vassiliadis.
Suspender 42.5 g del polvo en un litro de agua
purificada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformar . Calentar agitando frecuentemente
hasta disolución total . Distribuir en recipientes
apropiados y esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 115°C
MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Salmonella Crecimiento de bueno
typhimurium a excelente
Samonella enteritidis Excelente
Escherichia coli Inhibion parcial
Sin inocular Azul transparente
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Se utiliza como medio de enriquecimiento
selectivo para Salmonella a partir de muestras
fecales y diversos materiales no clínicos tales
como alimentos y aguas residuales4-8. Los
factores de inhibición combinados de este medio
(verde malaquita, cloruro de magnesio, pH bajo)
pueden inhibir determinadas cepas de
Salmonella, tal como S. Typhi.
Las técnicas de aislamiento para Salmonella
siempre deben incluir diversos medios de
enriquecimiento y de aislamiento. Los medios
para subcultivo a partir de BD Rappaport
Vassiliadis Broth deben incluir un medio menos
selectivo, por ej., BD MacConkey II Agar. Se
requiere realizar la identificación bioquímica y
serológica de los aislados obtenidos después del
subcultivo.
ALMACENAMIENTO
Al recibir los frascos, almacenarlos en un lugar
oscuro a 2 – 8 °C hasta momentos antes de su
utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Los frascos pueden
inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del envase) e incubarse durante los Ilustración 62 Caldo con Verde
malaquita
períodos de incubación recomendados. Los
frascos de envases abiertos pueden utilizarse
hasta la fecha de caducidad. Los frascos abiertos
deben utilizarse de inmediato. Caldo De Brucella
CONTROL MICROBIOLÓGICO USO

Inocular muestras representativas con las cepas
siguientes. Incubar durante 18 – 48 h a 41,5 ± 0,5
°C. Subcultivar en medio selectivos sólidos
apropiados, por ej., BD Brilliant Green
Agar.Incubar las placas durante 18 – 48 h a 35 –
37 °C
PRECAUCIONES
Solamente para uso profesional. No utilizar los
frascos si muestran evidencia de contaminación
microbiana, decoloración, deshidratación, grietas
o cualquier otro signo de deterioro.
Medio recomendado para el aislamiento y cultivo
de Brucella spp. Al ser adicionado con sangre se
utiliza para el aislamiento y cultivo de Brucella
spp. Y de microorganismos aerobios y
anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de
una gran variedad de muestras clínicas. Permite
la observación de las reacciones de hemólisis.
METODOLOGÍA
La Brucelosis es una zoonosis que puede ser
transmitida por con- tacto directo con animales
infectados, o a través de carnes y productos
lácteos. En el medio de cultivo, la tripteína, la
peptona de carne y el extracto de levadura,
constituyen la fuente de nitrógeno, carbono,
aminoácidos, vitaminas, minerales y cofactores
necesarios para el crecimiento de
microorganismos.

101
COMPOSICIÓN LIMITACIONES DEL MÉTODO
Tripteína 10.0 Puede ser utilizado como media base para ser
Peptona de carne 10.0 suplementado con sangre o con antimicrobianos,
glucosa 1.0 lográndose así un medio más enriquecido o
Extracto de levadura 2.0 selectivo de acuerdo con el aditivo.
Cloruro de sodio 5.0
Isulfito de sodio 0.1 PRECAUCIONES
Agar 15.0 Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso
ph final: 7.0 ± 0.2 profesional exclusivo.
PREPARACIÓN No utilizar el producto si al recibirlo su envase
Suspender 43 g del polvo en 1 litro de agua está abierto o dañado.
No utilizar el producto si existen signos de
purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con
contaminación o deterioro, así como tampoco
agitación frecuente y hervir durante 1 minuto si ha expirado su fecha de vencimiento.
para disolución total. Distribuir en recipientes Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
apropiados y esterilizar por autoclave a 121 °C manipula el producto.
durante 15 minutos
MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Resultados de
Cepas
crecimiento
Brucella abortus Satisfactorio
Escherichia coli
Satisfactorio
Staphylococcus
aureus Satisfactorio

ALMACENAMIENTO
Ilustración 63 Caldo de Brucella
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 °C. Medio
de cultivo preparado a 2-8 °C.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis,
a 35-37 º C durante 18 a 24 horas. Bacterias
exigentes en sus requerimientos nutricionales:
en atmósfera con 5 % de CO2, a 35-37 °C
durante 24-48 horas.

102
 Caldo Triptona
PREPARACIÓN
Suspender 35,6 g en 1 l de agua destilada y agitar
hasta disolución total. Distribuir en tubos de

Luril
ensayo con campana
Durham y esterilizar a 121 ºC durante 15
minutos. Cuando el medio se almacena en el
USO frigorífico puede enturbiarse,
Se emplea para el recuento y detección de pero se aclara notablemente en la incubación. La
microorganismos Coliformes en aguas, leches y transparencia no es fundamental y sólo la
productos alimenticios. formación de gas es crítica.
También se emplea en estudios del proceso de ALMACENAMIENTO
fermentación de la lactosa. Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas

METODOLOGIA CONTROL MICROBIOLOGICO

Por la presencia de Sodio Laurilsulfato queda Aspecto: polvo fino
inhibida la práctica totalidad de la flora Solubilidad: ligeramente opalina
secundaria. El resto de los Color: tostado claro
componentes constituyen los soportes nutritivo, pH: 6,8±0,2
energético, salino y regulador del pH necesarios ASPECTO DE LA COLONIA
para el buen desarrollo Los siguientes resultados fueron obtenidos a
de los Coliformes. La detección de gas se hace partir de cepas patrón, después de incubación a
con campanas de Durham. temperatura de 35±2 ºC y
El medio no lleva ningún indicador de observados a las 24-48 horas.
producción de ácido, pero puede incorporarse. MICROORGANISMOS DESARROLLO
Un buen indicador de pH puede ser el Púrpura de Enterobacter aerogenes Satisfactorio
Bromocresol a una concentración de 0,02 g/l de Escherichia coli Satisfactorio
medio o el Rojo de Fenol a una concentración de Salmonella typhimurium Satisfactorio
0,2 g/l. Este caldo es idóneo para ser
suplementado con MUG, a razón de 50 mg por Staphylococcus aureus Fuertemente
litro de medio; MUG es un fluorocromo que Inhibido
permite la detección de E. coli.

COMPOSICION
Composición (g/l):
Sodio Laurilsulfato 0,10 g
Triptosa 20,0 g
Lactosa 5,0 g
Potasio di-Hidrógeno Fosfato 2,75 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato 2,75 g Sodio
Cloruro 5,0 g
pH final: 6,8±0,2

Ilustración 64 Caldo de triptona

103
 Caldo EC
MICROORGANISMOS/ASPECTO DE LA
COLONIA

USO Microorganismos Crecimiento

Es utilizado para la detección de bacterias Escherichia coli Satisfactorio
coliformes a 37°C y Escherichia coli a elevadas Escherichia coli Satisfactorio
temperaturas (44,5°C y 45,5°C). Salmonella typhimurium Satisfactorio
Staphylococcus auerus Inhibido
METODOLOGÍA
Enterococcus faecalis Inhibido
El Medio EC fue desarrollado por Hajna y Perry
en un esfuerzo por mejorar los métodos para la
ALMACENAMIENTO
detección de bacterias del grupo de coliformes y
de E. coli. Este medio consiste de un caldo Almacene el envase conteniendo el medio de
tamponado de lactosa con la adición de un 0,15% cultivo deshidratado sellado firmemente y a una
de una Mezcla de Sales Biliares. El crecimiento temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y
de las bacterias formadoras de esporas y cerrado nuevamente, coloque el envase en un
estreptococos fecales es inhibido por las sales ambiente con baja humedad a la misma
biliares, mientras que el crecimiento de E. coli es temperatura de almacenamiento. Proteja el
intensificado por su presencia producto de los efectos de la humedad y de la luz
manteniendo el envase firmemente cerrado.
COMPOSICIÓN
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Mezcla de Sales Biliares 1,5 g
Triptosa 20 g Debido a las variaciones en los requerimientos
Lactosa 5 g nutricionales, algunas cepas podrían tener un
Fosfato Di potásico 4 g pobre crecimiento o ausencia de crecimiento en
Cloruro de Sodio 5 g este medio de cultivo
Fosfato Monopotásico1,5 g
PRECAUCIONES

PREPARACION Para uso en el laboratorio. IRRITANTE. Irritante

para los ojos, piel y sistema respiratorio
Disuelva 37 g del medio en un litro de agua
purificada.
Mezcle completamente.
Distribuya dentro de los tubos Durham que
contienen fermentación invertida.
Autoclave a 121°C durante 15 minutos

104
 Caldo Fraser
El ácido nalixidico bloquea la replicación del
ADN de las bacterias sensibles a este agente
antibacteriano.

Completo PREPARACIÓN
− Disolver 55 g de medio deshidratado en 1
L de agua destilada.
USO
− Remover suavemente hasta conseguir una
Es un medio de cultivo utilizado para el completa disolución.
enriquecimiento selectivo de Listeria
monocytogenes en alimentos. − Repartir 10 ml de medio en tubos de 16 x
160 mm.
COMPOSICIÓN
− Esterilizar en autoclave a 120°C durante
Polipeptona 10 g/l 15 min.
Extracto de
5 g/l − En el momento de utilizar, enfriar el
carne
Extracto de medio a 25°C ± 2°C y añadir a cada tubo
5 g/l
levadura 0.1 ml de suplemento selectivo para el
Cloruro de caldo Fraser Completo.
20 g/l
sodio
Fosfato − Repartir 10 ml de medio en tubos de 16 x
disódico 9.6 g/l 160 ml.
anhidrido
− Homogeneizar sin incorporar aire.
Fosfato
1.35 g/l
monopotásico
Esculina 1 g/l
Cloruro de LIMITACIONES DEL MÉTODO
3 g/l
litio Debido a variaciones nutricionales algunas cepas
pueden tener un pobre crecimiento o ausencia de
METODOLOGÍA crecimiento en este medio de cultivo.

Listeria hidroliza la esculina del medio en

glucosa y esculetina, que forma un complejo de
color negro con los iones férricos provenientes
del citrato férrico.
La elevada concentración de cloruro sódico del
medio incrementa su selectividad, mientras que
el cloruro de litio inhibe el crecimiento de la
mayoría de cocos entéricos que también pueden
hidrolizar la esculina. Así mismo, la acriflavina
inhibe el crecimiento de otros microorganismos
gram positivos.
ALMACENAMIENTO
Almacene el envase conteniendo el medio de
cultivo deshidratado sellado firmemente y a una
temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y
cerrado nuevamente, coloque el envase en un
ambiente con baja humedad a la misma
temperatura de almacenamiento. Proteja el
producto de los efectos de la humedad y de la luz
manteniendo el envase firmemente cerrado.

105
CONTROL MICRIOBIOLÓGICO
Pueden desarrollarse pruebas rápidas en lámina y
en tubos macroscópicos para lograr una
identificación serológica definitiva.
PRECAUCIONES PARA REALIZARLO
− Para uso en el laboratorio.
− DAÑINO. Dañino si es ingerido,
inhalado, o absorbido a través de la piel.
Irritante para los ojos, piel y sistema
respiratorio. Puede causar efectos en el
sistema nervioso central.
Ilustración 65 Caldo Fraser Completo
Caldo Infusion
Cerebro-Corazon
USO
Medio líquido altamente nutritivo que permite el
desarrollo de mi- croorganismos con escasos
requerimientos nutricionales y nutri- cionalmente
exigentes, aerobios y anaerobios.
106
METODOLOGIA
Su alto valor nutritivo está dado por la infusión
de cerebro de ter- nera, la infusión de corazón
vacuno y la peptona que constituyen la fuente de
carbono, nitrógeno, aminoácidos, péptidos y
vitaminas necesarias para el desarrollo de
microorganismos. En el medio de cultivo, la
glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y
el fosfato disódico otorga capacidad buffer.
Esta infusión es apropiada para ser utilizada
como base en la pre- paración de hemocultivos
debido a que pueden desarrollar todas las
especies de estreptococos excepto los tiol y
piridoxal depen- dientes.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100
µg/ml de amicacina se logra un medio selectivo
para el cultivo de hongos patógenos porque estos
antimicrobianos inhiben el desarrollo de la flora
bac- teriana que pudiera estar presente en la
muestra
COMPOSICIÓN
FÓRMULA (en gramos por litro)
Infusión de cerebro de ternera 200.0 g
Infusión corazón vacuno 250.0 g
Peptona10.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Glucosa 2.0 g
Fosfato disódico 2.5 g
Ph final: 7.4 ± 0.2
PREPARACION
Suspender 37 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente y llevar a ebullición hasta
disolver completamente. Distribuir en tubos o en
otros recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 121°C durante 15 minutos.
LIMITACIONES DEL METODO
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro,
homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color ámbar claro,
sin precipitado.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio
de cultivo preparado a 2-8 ºC.
MICROORGANISMO DESARROLLO
Ilustración 66 Caldo Infusion Cerebro-
Corazón
Enterococcus faecalis Satisfactorio
Staphylococcus aureus Satisfactorio
Streptococcus pyogenes Satisfactorio Caldo Lactosado
Bilis Verde
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio
Candida albicans Satisfactorio

Medio sin inocular Sin cambios Brillante

USO
PRECAUCIONES Se utiliza para la detección de bacterias
coliformes en agua, alimentos y productos
Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso
lácteos en un entorno de laboratorio. El caldo de
profesional exclusivo. bilis verde brillante no está destinado a ser
No utilizar el producto si al recibirlo su envase utilizado en el diagnóstico de enfermedades u
está abierto o dañado. otras condiciones en humanos.

No utilizar el producto si existen signos de METODOLOGIA

contaminación o deterioro, así como tampoco si
ha expirado su fecha de vencimiento.
Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
manipula el produto.
Considerar las muestras como potencialmente
infecciosas y manipularlas apropiadamente
siguiendo las normas de bioseguridad.
El grupo de bacterias coliformes incluye bacilos
aeróbicos y anaeróbicos facultativos, Gram-
negativos, no esporíferos que fermentan lactosa y
forman ácido y gas a 35°C dentro de 48 horas.
Los miembros de Enterobacteriacae abarcan la
mayoría de este grupo, pero organismos tales
como Aeromonas spp. También pueden ser
incluidos. Los procedimientos para detectar y
confirmar coliformes se utilizan en las pruebas de
agua, alimentos, productos lácteos y otros
materiales.

107
El caldo de bilis verde brillante se utiliza para respecto a la esterilidad en autoclave a 121°C
confirmar un resultado de prueba presuntivo durante 15 minutos.
positivo.
PRECAUCIONES
COMPOSICION
• Solamente para uso in vitro. Uso profesional
Bilis de buey 20.0 g/l exclusivo.
deshidratada • No utilizar el producto si al recibirlo su envase
Lactosa 10.0 g/l está abierto o dañado
Peptona 10.0 g/l • No utilizar el producto si existen signos de
Verde Brillante 0,0133 g/l contaminación o deterioro, asi como tampoco
pH final: 7.2 ± 0.2 si ha expirado su fecha de vencimiento
• Utilizar guante y ropa protectora cuando se
manipula el producto
PREPARACIÓN
• Considerar las muestras como potencialmente
Suspender 40g del polvo en 1 litro de agua infecciosas y manipularlas apropiadamente
purificada. Disolver y distribuir 10mL por un siguiendo las normas de bioseguridad
tubo con campanita de Durham. Calentar a 100°C establecidas en laboratorio.
durante 30minutos.
MICROORGANISMO DESARROLLE/
ASPECTO DE LA COLONIA
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO
Escherichia coli Satisfactorio
Escherichia coli Satisfactorio
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio
Proteus mirabilis Satisfactorio
Salmonella Satisfactorio
typhimurium
Staphylococcus aureus Inhibición parcial
Ilustración 67Caldo Glucosado Bilis Verde Brillante

ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35°C
Medio de cultivo preparado 2_8°C
CONTROL MICROBIOLOGICO
Fermentan lactosa y forman ácido y gas a 35°C
dentro de 48 horas
LIMITACIONES DE USO
El desempeño del medio de cultivo respecto a la
productividad y selectividad es mucho más
consistente cuando se descontamina por
calentamiento a 100°C durante 30 minutos

108
 Caldo nutritivo
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºc. medio
USO de cultivo preparado a 2-8 ºc.

Medio de cultivo utilizado para propósitos En aerobiosis, a 35-37 ºc durante 18 a 24 horas.

generales, para el desarrollo de microorganismos
con escasos requerimientos nutricionales.
Está descripto en muchos procedimientos para el
análisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria.
CONTROL MICROBIOLOGICO
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro,
homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color ámbar.

METODOLOGIA MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Medio no selectivo, contiene pluripeptona (una
mezcla de partes iguales de peptona de carne y de Staphylococcus Crecimiento
caseína) y extracto de carne que constituyen la aureus satisfactorio
fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el Pseudomonas Crecimiento
adecuado desarrollo bacteriano. aeruginosas satisfactorio
Escherichia coli Crecimiento
Puede ser utilizado, además como satisfactorio
preenriquecimiento en la búsqueda de salmonella Medios sin inocular Sin cambios
spp. a partir de alimentos, ya que permite
recuperar células dañadas, diluir metabolitos
PRECAUCIONES
tóxicos y sustancias inhibitorias.
- solamente para uso diagnóstico in vitro. uso
COMPOSICIÓN
profesional exclusivo.
Fórmula (en gramos por litro)
- no utilizar el producto si al recibirlo su envase
Pluripeptona 5.0
está abierto o dañado.
Extracto de carne 3.0
Ph final: 6.9 ± 0.2 - no utilizar el producto si existen signos de
contaminación o deterioro, así como tampoco si
ha expirado su fecha de vencimiento.
PREPARACION
- utilizar guantes y ropa protectora cuando se
Suspender 8 g del polvo en 1 litro de agua
manipula el producto.
purificada. Reposar 5 minutos y calentar con
agitación frecuente, llevando a ebullición para - considerar las muestras como potencialmente
disolución total. Distribuir en tubos u otros infecciosas y manipularlas apropiadamente
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave siguiendo las normas de bioseguridad
a 118-121°C durante 15 minutos. establecidas por el laboratorio.
- las características del producto pueden alterarse
si no se conserva apropiadamente.

109
- descartar el producto que no ha sido utilizado y
los desechos de este según reglamentaciones
vigentes.
osmótico. El uso de azida sódica para inhibir
selectivamente las bacterias Gram negativas
apareció por primera vez en los estudios de
EDWARDS (1938) sobre el aislamiento de
Estreptococos agalactia más tarde se demostró
que el azida sódico también se puede utilizar para
el aislamiento de enterococos del agua.

COMPOSCION
Polipeptona 20.0 g
Glucosa 5.0 g
Cloruro sódico 5.0 g
Ilustración 68 Caldo Nutritivo
Tampón fosfatos 5.4 g
Azida sódica 0.2 g
Caldo Rothe (Caldo PREPARACIÓN

Glucosado Con Ariza.) Suspenda 34,7 gramos del medio en un litro de

agua destilada (69,4 gramos si se desea una
USOS concentración doble). Mezclar bien y disolver
calentando con agitación frecuente hasta el punto
Caldo ROTHE (caldo de glucosa con azida) es un de ebullición. NO SE SOBRECALIENTE.
medio selectivo recomendado por Malmann y Disperse en recipientes apropiados y esterilice en
Seligmann para la cuantificación de enterococos autoclave a 121 ° c durante 15 minutos. El medio
en agua, alimentos y otros materiales preparado debe almacenarse a 2-8 ° c. El color es
sospechosos de ser contaminados por aguas marrón amarillento, el medio deshidratado debe
residuales. Los enterococos son los mejores ser homogéneo, de flujo libre y de color beige. Si
indicadores de contaminación fecal en el agua, ya hay algún cambio físico, deseche el medio.
que la Escherichia coli es muy resistente al
cloruro. MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA.
METODOLOGIA
MICROORGANISMO CRECIMIENTO.
La presencia de enterococos es un indicador para
Escherichia coli Inhibido.
la contaminación fecal, especialmente cuando
Staphylococcus Aures Inhibido.
ocurrió hace mucho tiempo y las bacterias
Enterococcus faecalis Bueno
coliformes menos resistentes, incluyendo
Enterococcus faecalis Bueno.
Escherichia coli, pueden ya estar muertas cuando
se realiza el análisis. La mezcla de peptona y ALMACENAMIENTO
peptona de caseína proporcionan nitrógeno,
vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales Medio de cultivo deshidratado a 10-35°C
para el crecimiento. La glucosa es el carbohidrato
fermentable que proporciona carbono y energía. Medio de cultivo preparado a 2-8°C
El cloruro sódico suministra electrólitos
esenciales para el transporte y el equilibrio

110
LIMITACIONES DEL METODO: COMPOSICIÓN

Este medio es tóxico si se ingiere, inhala o entra Peptona 5.0 g

en contacto con la piel lactosa 4.0 g
fosfato de sodio 10 g
PRECAUCIONES selenito de sodio 4.0 g

- Evitar el contacto con los ojos y piel. METODOLOGÍA

- no oler ya que es toxico si lo inhalas.
- No ingerir.
- La Azida Sódica es tóxica (y explosiva
en contacto con plomo). Evitar el
contacto con la piel y las mucosas (y no
desechar por las cañerías)
Ilustración 69 Caldo ROTHE
La peptona aporta los nutrientes necesarios para
el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable, el selenito de
sodio inhibe la flora gram positiva y la mayoría
de la flora entérica excepto salmonela spp.
Durante las primeras 8-12 horas de incubación.
PREPARACIÓN
Suspender 23gr. Del polvo en un litro de agua
purificada. Mezclar bien y calentar ligeramente
hasta su disolución completa. Evite el
calentamiento excesivo. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE.
Material fecal: a un tubo con 10-15ml de caldo
selenito, agregar 1 gramo o un mililitro de una
suspensión de material fecal o descargar el
contenido del hisopo.
Muestras solidas: aprox. 1 gr.

CALDO SELENITO F
Orina: centrifugar y cultivar el sedimento.
Muestras liquidas: mezclar partes iguales (1:1) de
la muestra con el caldo doble concentración.

USO MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Se utiliza para el enriquecimiento selectivo
de Salmonella spp. en un entorno de laboratorio. Cepas Crecimiento
Salmonella Bueno colonias
No está destinado a ser utilizado en el diagnóstico entenditidis incoloras
de enfermedades u otras condiciones en Salmonella Bueno colonias
humanos. typhimurium incoloras
Escherichia coli Regular – escaso
colonias rosadas con
precipitados

111
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Descartar el medio de cultivo preparado si se
observa una gran cantidad de precipitado rojizo.
Esto es debido a la oxidación del selenito.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado 10-35°C
Medio de cultivo preparado 2-8°C
PRECAUCIONES
Solamente para uso diagnostico in vitro.
No utilizar el producto si al recibirlo está abierto
el embace o dañado.
Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
manipula.
Ilustración 70 Caldo Selenito F
Caldo Selenito
Verde Brillante Ll
USO
El Brilliant Green Agar es un medio selectivo
recomendado para el aislamiento primario, o bien
después del enriquecimiento en caldo Selenito o
similares, de Salmonella spp., diferentes a la S.
typhi y parathyphi.
112
COMPOSICIÓN
Extracto de Levadura 3.0 g
Peptona 10.0 g,
Extracto de carne 5.0 g
Fosfato disódico 1.0 g
Fosfato monosódico 0.6 g
Lactosa 10.0 g
Sacarosa 10.0 g
Rojo Fenol 0.09 g
Verde brillante 4.7 mg
Agar 12.0 g
METODOLOGÍA
El uso de Brilliant Green Agar para islamiento de
Salmonellas fue descrito por Kristensen y cols,
posteriormente ligeramente modificado,
denominándose también Brilliant Green agar
modificado. Puede utilizarse para muestras
clínicas y otras muestras que puedan contener
estos micoorganismos como bebidas La
presencia del colorante verde brillante
proporciona selectividad al medio, de forma que
la Salmonellas spp. Forman colonias rosadas
sobre fondo rojo brillante, además de actuar
como inhibidor de la flora acompañante. La
presencia del binomio Lactosa-Sacarosa, permite
que las bacterias fermentadoras, como E.coli,
aparezcan como colonias amarillas verdosas,
debido a la formación de ácidos que se ponen de
manifiesto por la presencia del colorante rojo
fenol.
PREPARACION
Suspender 23gr. Del polvo en un litro de agua
purificada. Mezclar bien y calentar ligeramente
hasta su disolución completa. Evite el
calentamiento excesivo. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE.
 MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA procedimientos de laboratorio, tratar siempre
COLONIA como material biopeligroso.
Cepas Resultados de .
crecimiento
Escherichia coli Inhibida o con
crecimiento, colonias
amarillas a verdosas,
con halos amarillos
Enterococcus Inhibida o con
faecalis crecimiento, colonias
amarillas a verdosas,
con halos amarillos
Proteus mirabilis Inhibición parcial
Salmonella abony Crecimiento bueno,
colonias blanquecinas
con halos rojos
Salmonella Crecimiento de
typhimurium bueno a excelente,
colonias blanquecinas

Caldo Tioglicolato
Con halos rojos
Sin inocular Amarronado a verde
oliva

USO
ALMACENAMIENTO
Es un medio indicado para el cultivo de gran
Incubadas de 35 a 37 ºC en condiciones aeróbicas variedad de micoorganismos, tanto aerobios
y examinadas transcurridas de 18 a 48 horas de la como anaerobios, utilizado para la realización de
inoculación pruebas de esterilidad de productos
LIMITACIONES DEL MÉTODO biotecnológicos. Comúnmente usado en
microbiología clínica
Este producto es para uso exclusivo de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de COMPOSICION
presentar contaminación microbiana, Hidrolizado pancreático de caseína
decoloración, signos de deshidratación, roturas u 15.0 g
otros signos de deterioro. Extracto de Levadura 5.0 g
Dextrosa 5.0g
PRECAUCIONES
Cloruro sódico 2.5 g
Este producto es para uso exclusivo de Tioglicolato sódico 0.5 g
profesionales. No debe ser utilizado en caso de Agar 0.75 g
presentar contaminación microbiana, L-cistina 0.5 g
decoloración, signos de deshidratación, roturas u Resazurina 0.001g
otros signos de deterioro. Utilizar bajo

113
METODOLOGÍA
El medio de tioglicolato fue descrito inicialmente
por Brewer como un medio que favorecía el
crecimiento de organismos aerobios y anaerobios
obligados. La cantidad de inóculo necesario es
pequeña dado que el medio favorece el
crecimiento, la presencia de caseína y peptonas
de soja permite el crecimiento de ciertos aerobios
como especies del género Brucella. El
Thiglicollate Broth with Resazurin puede
utilizarse, aunque presente signos de oxidación,
como lo indica el color rosa de la resazurina en la
superficie, el caldo puede recalentarse con vapor
o agua hirviendo, enfriarse y vuelve a estar en
condiciones de uso.
PREPARACIÓN
Suspender 29,75 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente y llevar a ebullición hasta
disolución total. Distribuir en recipientes
adecuados y esterilizar en autoclave a 121°C
durante 15 minutos. Enfriar y guardar a
temperatura ambiente protegido de la luz.
Nota: Si el medio preparado presenta más de un
30% de oxidación volver a calentar para eliminar
el oxígeno absorbido.
MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Sthapylococcus
Crecimiento bueno
aureus
Bacteroides fragilis Crecimiento bueno
Clostridium
Crecimiento bueno
perfringes
Streptococcus
Crecimiento bueno
pyogenes
Bacillus subtilis Crecimiento bueno
114
LIMITACIONES DEL MÉTODO
El color del medio es ámbar claro y transparente,
con o sin visualización de la banda de resazurina.
El crecimiento en el tubo se detecta por la
aparición de turbidez frente a un control sin
inocular. Antes de inocular los tubos deben ser
calentados con los tapones aflojados para
eliminar el oxígeno disuelto en el medio. Si se
producen crecimientos, los cultivos se deben
examinar mediante tinción de Gram y subcultivar
en medios adecuados.
ALMACENAMIENTO
Una vez recibidos en el laboratorio, almacenar en
lugar oscuro y seco a una temperatura de 8 ºC, en
su embalaje original hasta el momento de uso, se
pueden mantener a temperatura ambiente durante
periodos de tiempo cortos, antes de inocular si
deben estar los tubos a temperatura ambiente.
Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. La
fecha de caducidad marca la fecha de inoculación
máxima.
PRECAUCIONES
Este producto es para uso exclusivo de
profesionales. No debe ser utilizado en caso de
presentar contaminación microbiana, roturas u
otros signos de deterioro. Las muestras clínicas
para procesar pueden presentar otros patógenos
importantes, por lo que la esterilización de los
materiales antes de desechar es obligatoria.
 2.5 g/L de
Fosfato dipotásico de hidrógeno
agua

METODOLOGÍA
Debido a su capacidad para favorecer el
crecimiento, esta fórmula fue adoptada por la
Farmacopea de Estados Unidos (USP) y la
Farmacopea Europea (EP) como medio de
prueba de esterilidad
Es un medio nutritivo que favorece el
crecimiento de una amplia variedad de
Ilustración 71 Caldo Tioglicolato
microorganismos, en especial las bacterias
anaerobias facultativas y aerobias comunes.

Caldo Triptona de Los digeridos enzimáticos de caseína y harina de

soja proporcionan aminoácidos y otras sustancias

Soya/Caldo Tríptico de
nitrogenadas complejas. La glucosa (dextrosa) es
una fuente de energía. El cloruro sódico mantiene
el equilibrio osmótico. El fosfato potásico
Soya (TSB) dibásico actúa como tampón para controlar el pH.
USO PREPARACIÓN
Es un medio líquido de digerido de soja y Para aplicación en microbiología industrial,
caseína, para enriquecimiento de uso general inocular el medio con la cepa e incubar según se
utilizado en procedimientos cualitativos para la requiera. Además, las muestras se deben inocular
prueba de esterilidad y para el enriquecimiento y en medios sólidos como Agar Columbia con 5%
cultivo de microorganismos aerobios no de sangre de oveja o Agar soya tripticasa II con
exigentes en exceso. 5% de sangre de oveja y, finalmente, en medios
selectivos y no selectivos adicionales.
En la microbiología clínica, puede utilizarse para
la suspensión, el enriquecimiento y el cultivo de Por lo general, una temperatura de incubación de
cepas aisladas en otros medios. 35 ± 2 °C es adecuada. Incubar durante 18 a 24 h
o más si es necesario.
Composición:
Para uso como medio se suspensión, inocular el
Bacto Tryptone (digerido 17.0 g/L de tubo con una pequeña cantidad de crecimiento de
pancreático de caseína) agua
un cultivo del día anterior en un medio sólido.
Bacto Soytone (digerido péptico 3.0 g/L de
Para uso en microbiología industrial, inocular la
de harina de soja) agua
2.5 g/L de muestra o el material a analizar en el medio.
Glucosa (dextrosa)
agua
5.0 g/L de
Cloruro sódico
agua

115
 MICROORGANISMO/ASPECTO DE LA ALMACENAMIENTO
COLONIA
Al recibir los frascos, almacenarlos en un lugar
CEPA DE PRUEBA RESULTADOS DE oscuro a 5 – 25 °C hasta momento antes de su
CRECIMIENTO utilización. Evitar la congelación y el
ESPERADOS sobrecalentamiento.
(TURBIDEZ)
Staphylococcus +++ o más Los frascos pueden inocularse hasta la fecha de
aureus caducidad e incubarse durante los períodos de
Bacillus subtilis +++ o más incubación recomendados. Los frascos de
Pseudomonas +++ o más envases abiertos pueden utilizarse hasta la fecha
aeruginosa de caducidad. Los frascos abiertos deben
Candida albicans +++ o más utilizarse de inmediato.
Aspergillus niger +++** o más
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Sin inocular Ambar claro a
mediano, transparente, Según la Farmacopea Europea, incubar los
sin precipitación recipientes inoculados con cepas bacterianas a
30-35 °C durante un máximo de 3 días y a 22.5 ±
LIMITACIONES DEL MÉTODO 2.5 °C en el caso de los hongos, durante un
máximo de 5 días, en aire normal.
Es un medio de aislamiento y enriquecimiento
para numerosos procedimientos no clínicos. PRECAUCIONES

En microbiología clínica, se utiliza No utilizar los recipientes si muestran evidencia

principalmente para suspender cultivos para de contaminación microbiana, decoloración,
pruebas de sensibilidad y para la preparación de deshidratación, grietas o cualquier otro signo de
inóculos en procedimientos de pruebas de control deterioro.
de calidad. Aplicar procedimientos de manipulación
El crecimiento obtenido en este medio debe aséptica.
subcultivarse en medios sólidos apropiados para
obtener cultivos puros que posteriormente se
puedan identificar con métodos apropiados para
los aislados.
El caldo de soja tríptica no es el medio apropiado
para el cultivo de microorganismos exigentes
(por ej., especies de Haemophilus o Neisseria ) ni
para la detección y recuperación de anaerobios
estrictos. Los medios líquidos de tioglicolato
deben utilizarse para el cultivo de anaerobios
estrictos.
Ilustración 72 Caldo TSB

116
 Caldo Fraser
USO
La Base de Caldo Fraser es utilizada con citrato
férrico de amonio para el enriquecimiento
selectivo de especies de Listeria.
COMPOSICION
Digerido Enzimático de Caseína 5g
Digerido Enzimático de Tejido Animal 5g
Base de Caldo Fraser Extracto de Carne 5g
Citrato Férrico de Amonio al 5%
Extracto de Levadura 5g
10 mL solución acuosa filtrada esterilizada/L,
Cloruro de SodiO 20g
Fosfato Disódico 9,6g,
Fosfato Monopotásico 1,35g
Esculina 1g
Acriflavina 0,024g
Ácido Nalidíxico 0,020g
Cloruro de Litio 3g.
METODOLOGÍA
El Digerido Enzimático de Caseína, Digerido
Enzimático de Tejido Animal, Extracto de Carne
y el Extracto de Levadura suministran nitrógeno,
vitaminas y minerales en la Base
de Caldo Fraser. Los fosfatos son los agentes de
tamponado. El Cloruro de Sodio mantiene el
balance osmótico. La diferenciación es asistida al
incluir Citrato Férrico de Amonio en el medio de
cultivo final. Debido a que todas las especies de
Listeria
hidrolizan la esculina, la adición de iones férricos
en el medio detectarán la reacción. Ocurrirá un
ennegrecimiento del medio en los cultivos que
contengan bacterias de esculina hidrolizantes,
esto es elresultado de la formación de 6,7–
dihidroxicumarina la cual reacciona con los iones
férricos. La selectividad del medio es lograda por
la presencia de Cloruro de Litio, Ácido
Nalidíxico y Acriflavina en la fórmula. La alta
117
tolerancia de Listeria a la sal se utiliza para
inhibir el crecimiento de enterococos.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
Debido a variaciones nutricionales algunas cepas
pueden tener un pobre crecimiento o ausencia de
crecimiento en este medio de cultivo.
PREPARACIÓN
1. Disuelva 55 g del medio en un litro de agua
purificada.
2. Mezcle completamente.
3. Autoclave a 121C durante 15 minutos. 4.
Adicione asépticamente 10 mL de Suplemento
Base para Caldo Fraser (7984).
ALMACENAMIENTO
Almacene el envase conteniendo el medio de
cultivo deshidratado sellado firmemente y a una
temperatura
entre 2–30°C. Una vez abierto y cerrado
nuevamente, coloque el envase en un ambiente
con baja humedad
a la misma temperatura de almacenamiento.
Proteja el producto de los efectos de la humedad
y de la luz
manteniendo el envase firmemente cerrado.
CONTROL MICROBIOLÓGICO:
Apariencia del Deshidratado: Polvo suelto
homogéneo, color beige claro a mediano.
Apariencia del Preparado: El medio preparado es
de color amarillo dorado con la parte superior de
color ámbar opalescente, el medio preparado
presentará un color transparente a ligeramente
nublado en ausencia de precipitado o con un
precipitado mínimo.
Respuesta Esperada del Cultivo: Respuesta
esperada del cultivo en Base de Caldo Fraser
incubado aeróbicamente a 35 ± 2C y examinado
para determinar crecimiento después de 18–48
horas de incubación.
 Caldo De Lactosa
MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA

Resultados
Microorganismo USO
Esperados
Escherichia coli Inhibido El caldo de lactosa se utiliza para el cultivo
Listeria Crecimiento con de Salmonella y bacterias coliformes de
monocytogenes ennegrecimiento alimentos, lácteos y productos de agua en un
Listeria Crecimiento con entorno de laboratorio. El caldo de lactosa no está
monocytogenes ennegrecimiento
destinado a ser utilizado en el diagnóstico de
Staphylococcus Inhibido (a 18–
enfermedades u otras condiciones en humanos.
aureus 24 horas)
COMPOSICION
PRECAUCIONES
1. Para uso en el laboratorio. Extracto de carne 3.0g
2. DAÑINO. Dañino si es ingerido, inhalado, o Peptona 5g,
absorbido a través de la piel. Irritante para los Lactosa 5g
ojos, piel y sistema respiratorio. Puede causar
efectos en el sistema nervioso central
METODOLOGÍA
Es un medio rico en nutrientes y no contiene
inhibidores del crecimiento bacteriano. Permite
recuperar células injuriadas, diluye sustancias
toxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de
Salmonella con respecto a otras bacterias. El
extracto de carne y la peptona son la fuente de
carbono y nitrógeno mientras que la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable. Por la
fermentación de la lactosa se produce acido y gas
(el cual se evidencia al utilizar las campanas
Durham)
PREPARACIÓN
Suspender 13 g del polvo en 1 litro de agua
purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con
Ilustración 73 Caldo Fraser
agitación frecuente y llevar a ebullición para
disolución total.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35°C
Medio de cultivo preparado a 2-8°C

118
Incubación en aerobiosis a 35-37°C durante 18-
48 horas.
En el caso de utilizarse para el
preenriquecimiento de especies de Salmonella,
incubar durante 18-24 horas y luego subcultivar
en Selenito Cistina Caldo o en Tetratinato Caldo.
MICROORGANISMO
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Microorganismo Crecimiento
Escherichia coli
Satisfactorio
Escherichia coli
Satisfactorio Ilustración 74 Caldo de Lactosa

Klebsiella
Satisfactorio
Salmonella
typhimurium

Enterococcus
Satisfactorio
Caldo
faecalis Satisfactorio
Tetrationato
USO
LIMITACIONES DEL METODO
Medio de cultivo utilizado para el
Las características del producto pueden alterarse enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a
si no se conserva apropiadamente. partir de heces, alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria.
PRECAUCIONES
COMPOSICION
• Solamente para uso diagnóstico in vitro.
Uso profesional exclusivo. Peptona 5.0 g
• No utilizar el producto si al recibirlo su sales biliares 1.0 g
envase está abierto o dañado. carbonato de calcio 10 g
• No utilizar el producto si existen riegos tiosulfato de sodio 30 g.
de contaminación o deterioro, así como
tampoco si ha expirado su fecha de METODOLOGÍA
vencimiento
• Utilizar guantes y ropa protectora cuando La selectividad está dada por la presencia de
se manipula el producto sales biliares y tetrationato (compuesto generado
en el medio de cultivo al reaccionar el tiosulfato
de sodio con la solución iodo-iodurada) que
inhiben el desarrollo de microorganismos Gram

119
positivos y algunas enterobacterias. Salmonella PRECAUCIONES
spp. contiene la enzima tetrationato reductasa y
puede crecer satisfactoriamente en el medio de • Solamente para uso diagnóstico in vitro.
Uso profesional exclusivo.
cultivo debido a que no le afecta la toxicidad del
tetrationato. • No utilizar el producto si al recibirlo su
envase está abierto o dañado.
PREPARACIÓN • No utilizar el producto si existen riegos
Suspender 46 g de polvo en un litro de agua de contaminación o deterioro, así como
purificada. Mezclar vigorosamente. Calentar con tampoco si ha expirado su fecha de
agitación frecuente y llevar a ebullición para vencimiento
disolución total. Enfriar a 45ºC. Agregar 20 ml • Utilizar guantes y ropa protectora cuando
de solución iodurada. Mezclar y distribuir en se manipula el producto
tubos estériles 10ml. No esterilizar por autoclave.
ALMACENAMIENTO
Medio del cultico deshidratado a 0-35ºC
Medio de cultivo preparado a 2-8ºC
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Incubación en aerobiosis a 35-37ºC durante 12-
24 horas. Luego subcultivar en medios selectivos
para el crecimiento de Salmonella Shigella Agar,
Hektoen Enterico Agar, Verde Brillante Agar,
Mac Conkey Agar.
MICROORGANISMO Ilustración 75 Caldo Tetrationato
DESARROLLO/ASPECTO DE LA
COLONIA
Características
de las colonias
Microorganismo Crecimiento
en Salnonela
Shigella Agar
Salmonella Incoloras con
typhimurium Satisfactorio producción de
SH2
Incoloras con
Salmonella
Satisfactorio producción de
enteritidis
SH2
Escherichia
Inhibición
coli Rosada roja
parcial

120
 Medio Agar Baird-
Otras bacterias que pueden crecer en este medio
se distinguen fácilmente de S. aureus , ya que no
forman colonias negras

Parker PREPARACIÓN
• Suspender 60 g del medio en un litro de
USO agua purificada.
Baird-Parker Agar es un medio selectivo para la • Calentar con agitación frecuente y hervir
detección y enumeración de estafilococos durante un minuto para disolver
coagulasa positivos de muestras de alimentos completamente el medio.
• Autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.
COMPOSICIÓN
• Después de enfriar a 45 - 50 ° C, agregue
Ingredientes por 940ml de agua desionizada: * 50 ml de suplemento de telurito de yema
de huevo. Alternativamente, agregue 50
Glicina 12.0gm ml de Emulsión de yema de huevo y 10
ml de suplemento de telurito (1%).
Digestivo pancreático de la caseína
• Mezclar bien antes de dispensar.
10.0gm
ALMACENAMIENTO
Piruvato de sodio 10.0gm
A la recepción de la tienda a 2-8ºC. Lejos de la
Extracto de carne 5.0gm luz directa. No se debe usar el medios si hay
Cloruro de litio 5.0gm signos de deterioro (encogimiento, agrietamiento
o decoloración), hemólisis, contaminación o si la
Extracto de levadura 1.0gm fecha de caducidad ha pasado. El producto es
sensible a la luz y la temperatura; Proteger de la
Enriquecimiento De Tellurita De Yema luz, el calor excesivo y la congelación.
De Huevo 60.0ml
Incubar las placas aeróbicamente a 35-37ºC. De
El agar 20.0gm 24 a 48 horas

PH final 7.0 +/- 0.2 a 25ºC..

METODOLOGIA
Después de 24 a 48 horas de incubación a 35-
37ºC, las colonias de S. aureus aparecerán
negras, convexas, brillantes y de 1-1.5 mm de
diámetro. Las colonias negras muy distintas
formadas por S. aureus son el resultado de la
reducción de telurita en el medio. Estas colonias
normalmente estarán rodeadas por zonas claras,
resultado de la proteólisis o lipólisis.
Ocasionalmente, se formarán zonas opacas
dentro de esta zona clara, como resultado de la
actividad de la lipasa o la lecitinasa.

121
 MICROORGANISMO DESARROLLO/
ASPECTO DE LA COLONIA

Organismos de
Resultados
prueba

Crecimiento; colonias
Staphylococcus
brillantes negras con halo
aureus
claro
Proteus Crecimiento; colonias
mirabilis marrones
Ilustración 76 Medio Agar Baird
Escherichia Parcial para completar la
coli inhibición.

LIMITACION DE METODO
Los estafilococos coagulasa negativos
generalmente no crecen bien en el agar Baird-
Parker; Si se produce algún crecimiento, las
zonas claras típicas están ausentes. Las especies
de Proteus o Bacillus también pueden crecer,
pero aparecen como colonias marrones.
PRECAUCIONES
Este producto puede contener componentes de
origen animal. El conocimiento certificado del
origen y / o estado sanitario de los animales no
garantiza la ausencia de agentes patógenos
transmisibles. Por lo tanto, se recomienda que
estos productos se traten como potencialmente
infecciosos y se manejen observando las
precauciones de sangre universales habituales.
No ingiera, inhale, o permita que entre en
contacto con la piel.
Este producto es solo para uso diagnóstico in
vitro. Solo debe ser utilizado por personal de
laboratorio debidamente capacitado y calificado.
Observe las precauciones aprobadas de riesgo
biológico y las técnicas asépticas. Todas las
muestras de laboratorio deben considerarse
infecciosas y manipularse de acuerdo con las
"precauciones estándar"
Medio de Kligler
USO
Kligler Iron Agar se utiliza para la diferenciación
de los miembros de la especie Enterobacteriaceae
sobre la base de su capacidad de fermentar
dextrosa y lactosa y para producir sulfuro
METODOLOGIA
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la
tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son
los hidratos de carbono fermentables. El
tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
producción de ácido sulfhídrico, el citrato de
hierro y amonio, es la fuente de iones Fe, los
cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El
color rojo es el indicador de pH, y el cloruro de
sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el
agente solidificante.

122

PREPARACIÓN
Suspender 54.8 g de polvo en 1 litro de agua
purificada, dejar reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta
disolución total.
Distribuir en tubos, en volumen que ocupe hasta
la tercera parte de estos. Esterilizar en autoclave
a 121°C por 15 minutos. Enfriar y dejar
solidificar en posición inclinada.
Los resultados de la prueba deben ser leídos
luego de 18 a 24 horas de incubación. Si la lectura
se efectua a tiempos menores pueden existir
falsos positivos por la presencia de acidez o la
acidez generada no sea suficiente para producir
el viraje del indicador rojo al amarillo. Si se lee
luego de 24 horas se pueden obtener resultados
falsos negativos por consumo de peptonas
durante el crecimiento de los microorganismos
con la consecuente alcalinidad del medio de
cultivo.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35°C. Medio
de cultivo preparado a 2-8°C
LIMITACIONES DEL METODO
Para la siembra utilizar aguja de inoculación. No
utilizar ansas de inoculación ya que pueden llevar
a resultados falsos positivos de producción de gas
por alteraciones mecánicas del medio de cultivo.
PRECAUCIONES
Solamente para uso in vitro. Un profesional
exclusivo.
-No utilizar el producto si al recibirlo su envase
está abierto o dañado
-No utilizar el producto si existen signos de
contaminación o deterioro, así como tampoco si
ha expirado su fecha de vencimiento.
-Utilizar guantes y ropa protectora cuando se
manipula el producto.
-Considerar las muestras como potencialmente
infecciosas y manipularlas apropiadamente
siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas para el laboratorio.

ASPECTO DE LA COLONIA
Microorganismos Superficie/profundidad
Estrechis colis A/A
Klebisella
A/A
pneumoniae
Proteous
K/A Ilustración 77 Medio Kliger
mirabillis
Salmonella
K/A
typhimurium
Shigella flexneri K/A
Pseudomonas
K/A
aeruginosa
A: Reaccion acida (color amarillo)
K: Reacción alcalina (color rojo)

123
 Medio Nitrato
Los siguientes resultados fueron obtenidos a
partir de cepas patrón, después de incubación en
anaerobiosis a 35± 2ºC
durante 24 horas.
USO
MICROORGANISMOS MOVILIDAD NITRATOS
Clostridium
Medio de cultivo para la confirmación de - +
perfringens
Clostridium perfringens basado en su capacidad
Clostridium
de reducir el nitrato + -
bifermentans
METODOLOGIA
Este medio permite determinar reducción de
nitrato y motilidad de diversidad de
microorganismos. Se utiliza
habitualmente para confirmar Clostridium
perfringens después de aislarlo sobre medios
selectivos como TSC, Agar.

COMPOSICION
Composición (g/l):
Peptona de Caseína 5,0
Extracto de Carne. 3,0
D(+)-Galactosa 5,0
Potasio Nitrato 1,0
di-Sodio Hidrógeno Fosfato. 2,5
Agar 3,5
pH: 7,3±0,2

PREPARACION
Suspender 20,0 g en 1 l de agua destilada. Agitar
y añadir 4 ml de glicerina. Calentar hasta
disolución total. Esterilizar a
121°C durante 15 minutos. Homogeneizar y
distribuir en tubos estériles.
CONTROL MICROBIOLÓGICO
Aspecto: polvo fino
Solubilidad: total
Color: beige
pH: 7,3 ± 0,2

124

CONCLUSION
La microbiología tiene como principal objetivo el
estudio de los diferentes tipos de
microorganismos, agentes patógenos como las
bacterias, virus y parásitos, la importancia que
tiene la microbiología en relación con respecto a
la nutrición se debe principalmente a los
microorganismos; estos alteran los alimentos
debido a que producen una serie de cambios
químicos en ellos. Desde el punto de vista
nutricional la microbiología y parasitología
identifica y analiza los factores de contaminación
en los diferentes tipos de alimentos, distingue y
juzga la importancia de los microorganismos,
conociendo sus características principales además
de su relación con los alimentos, así como sus
cambios químicos y estructurales, y su repercusión
en el consumo alimentario. Además de valorar
las medidas de conservación y las alteraciones
que se pueden presentar dentro de los productos
alimentarios, las repercusiones que tienen sobre
la salud mediante la investigación de brotes de
origen alimentario. Los alimentos son productos
de origen ya sea animal o vegetal. El punto
principal es que los alimentos de origen vegetal
poseen una flora natural superficial cuya
composición depende de las condiciones del
entorno, en particular del contenido microbiano
del aire, agua y del suelo. Aunque todos sabemos
que el interior de estos generalmente no está
contaminado por gérmenes. Los productos de
origen animal también poseen microorganismos
en la superficie de la piel y en el tracto
gastrointestinal, dentro de él se aloja una flora
específica que se elimina principalmente a través
de las heces. Sin embargo, con cierta frecuencia
los microorganismos patógenos pueden invadir
los tejidos animales y vegetales que normalmente
están libres de gérmenes causándonos grandes
complicaciones si consumimos algún alimento
contaminado ya que los microorganismos más
importantes pueden ocasionar enfermedades
125
debidas a la ingestión de alimentos en mal
estado, como puede ser contaminación
bacteriana cuyas manifestaciones pueden ser
leves o graves, para poder determinarlo, se
utilizan los medios de cultivo para comprender y
analizar las funciones y afectaciones de cada una
de éstos casos.
Un cultivo es un método para la multiplicación de
microorganismos, tales como lo son bacterias en
el que se prepara un medio óptimo para
favorecer el proceso deseado. Un cultivo es
empleado como un método fundamental para el
estudio de las bacterias y otros microorganismos
que causan enfermedades en medicina humana y
veterinaria.
Un microorganismo se puede sembrar en un
medio líquido o en la superficie de un medio
sólido de agar. Los medios de cultivo contienen
distintos nutrientes que van, desde azúcares
simples hasta sustancias complejas como la sangre
o el extracto de caldo de carne. Para aislar o
purificar una especie bacteriana a partir de una
muestra formada por muchos tipos de bacterias,
se siembra en un medio de cultivo sólido donde
las células que se multiplican no cambian de
localización; tras muchos ciclos reproductivos,
cada bacteria individual genera por escisión
binaria una colonia macroscópica compuesta por
decenas de millones de células similares a la
original. Si esta colonia individual se siembra a su
vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro
de un solo tipo de bacteria.
 •
REFERENCIAS
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