UNIVERSIDAD INTERAMERICANA

PARA EL DESARROLLO

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUIMICA
CURSO : ANÁLISIS INSTRUMENTAL

DOCENTE : Mg. Q.F. RAMIREZ ROCA EMILIO

TEMA : “ESPECTROFOTOMETRIA”

PRÁCTICA : N° 03

CICLO : “V”

ALUMNOS :
 TOLEDO MEDINA, FRANKLIN
 RAMIREZ ZURITA, DELFIN
 PEREYRA MELGAREJO, JACKY
 CORDOVA CHAVEZ , EDMUNDO
 RÍOS CONTRERAS, SERGIO
 QUISPE HILARIO, MIZRAIM
 OSCO JUICA, LUIS
 PATRICIO CASTILLEJO, WILMER

LIMA – 2013
 PRACTICA N° 03 DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometría se refiere a métodos cuantitativos de análisis químico que
utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen
como Espectrofotometría de adsorción visible (colorimetría), ultravioleta,
infrarroja.
La espectrofotometría se basa en principios colorimétricos, en este proceso los
colorantes y productos químicos se combinan con una solución que contienen una
analito, el color de la solución da lugar a diferentes cantidades de luz absorbida; La
cantidad de luz absorbida, medida con un espectrofotómetro, indica la cantidad de
este analito.
I. OBJETIVOS:

 Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la

determinación de concentraciones en soluciones.

 Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables

involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.

 Seleccionar la longitud de onda apropiada para poder medir la

absorbancia.

 Construir una curva patrón de soluciones de permanganato de potasio.

II. FUNDAMENTO:

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la

detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas,
etc.) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos
de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
La espectroscopia UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-
Visible de moléculas orgánicas e inorgánicas.

La región visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y 780
nm.

U.V lejano → U.V cercano → Visible

0.6 – 190 190 – 380 nm 380 – 780 nm

La absorción de la radiación ultravioleta o visible por moléculas orgánicas e

inorgánicas, generalmente se produce por la excitación de los electrones de enlace,
por lo tanto, la longitud de onda de los máximos de absorción se puede relacionar
con los enlaces de las especies absorbentes. Los métodos espectroscópicos se
basan en la capacidad de las sustancias de absorber (o emitir) radiación
electromagnética. Éstos se pueden emplear para determinar la concentración de un
reactivo o producto durante una reacción.
El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la
solución en la celda y la compara con la que se transmite o absorbe a través de una
solución de referencia denominada “blanco”. La lectura en la escala ya está
convertida en absorbancia.
La transmitancia de la muestra se define como la relación de la radiación
transmitida y la incidente (T= I/ I 0). La disminución de la intensidad de la
radiación depende de la concentración del absorbente y de la longitud del camino
recorrido por el haz.
Estas relaciones se recogen en la Ley de Lambert-Beer-Bourger:

A = -log T
A = log ( I / I 0 ) = (ε × b) × c
ABSORBANCIA = (ε × b) × c

Que establece una relación lineal entre la absorbancia y la concentración, donde:

 (ε) es la constante de proporcionalidad llamada coeficiente de absorción
molar, absortividad molar o coeficiente de extinción (M -1 cm -1). Es la
característica de una sustancia que nos dice cuánta luz absorbe a una
longitud de onda determinada.
 (b) es el paso óptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm).
 (c) es la concentración de la especie de la cual estamos midiendo la
absorbancia (M).
La ecuación mencionada es el fundamento de la espectrofotometría. La ley de
Lambert-(≤0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que
dependa de su concentración. Beer Bourger se cumple para una radiación
monocromática que atraviesa una disolución diluida.
III. MATERIALES:

 KMno4

 Espectrofotómetro.

 Fiolas.

 Pipetas.

 Balanza.

 Agua destilada.

 Tubos de ensayo.

IV. PROCEDIMIENTO:
1. Preparar una solución de KMnO4 10 mg %

 Pesar 100mg de permanganato de potasio, disolver en 100 ml de agua de esta

solución tomo 10 ml y agrego agua destilada C.S.P 100 ml, para obtener
KMnO4 10mg %
 Tabla de las concentraciones.

DETERMINACION DE CONCENTRACION
N° 01 N° 02 N° 03 N° 04 N° 05
KMnO4 - 2.0 4.0 - -
K2CrO7 - - - 2.0 4.0
H2O 10 8 6 8 6
Concentración mg% 2mg % 5mg %

 Proceso de preparación de las soluciones a utilizar en el Espectrofotómetro.

 Luego cargamos en una celda del Espectrofotómetro la solución obtenida de
KMnO4 2mg %, y luego procedemos a la medición de la longitud de onda con
respecto a la absorbancia.

V. RESULTADOS:

LONGITUD DE ONDA CON RESPECTO A LA ABSORBANCIA

EVENTO λ (nm) ABSORBANCIA EVENTO λ (nm) ABSORBANCIA

1 400 0.06 10 445 0.33

2 405 -0.02 11 450 0.28
3 410 -0.09 12 455 0.23
4 415 -0.15 13 460 0.19
5 420 -0.22 14 465 0.16
6 425 0.57 15 470 0.13
7 430 0.51 16 475 0.78
8 435 0.45 17 480 0.04
9 440 0.39 18 485 0.00
19 490 -0.27
 Luego determinaos el Lambda óptimo con un gráfico.

1.00
LAMBDA OPTIMO
0.80
ABSORBANCIA

0.60

0.40

0.20

0.00
400405410415420425430435440445450455460465470475480485490
-0.20

-0.40

LONGITUD DE ONDA
VI. CONCLUSIONES

 La correcta preparación de la solución de KMnO4 2mg % nos ayudó a

obtener datos confiables de la medición de la longitud de onda con respecto
a la absorbancia.

 Se aprendió el uso correcto del Espectrofotómetro, sus funciones, el tiempo

de espera que se debe tener antes de hacer una medición, la correcta
posición que debe adoptar una determinada celda y la importancia del
cuidado del instrumento de medición.

 Los datos obtenidos en el Espectrofotómetro nos sirvió para determinar el

Lambda Óptimo en el gráfico.

 La Espectrofotometría es un método analítico indirecto porque se basa en la

medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones.

 La Espectrofotometría es el método más usado, debido a que es sencillo,

específico y sensible y que nos ayuda a determinar la transmitancia de un
determinado analito.

 Esta práctica nos ayudó a conocer y aprender el uso y manejo correcto del
espectrofotómetro de absorción de UV visible a través de una solución que
presenta color.

 Aprendimos a medir la longitud de onda y que varía de acuerdo al aumento

o disminución de esta, también se puede utilizar esta técnica para la
cuantificación de una sustancia.
VII. RECOMENDACIONES

 Se debe seguir las indicaciones del docente a cargo de la práctica, para que
no haya errores en los procedimientos y resultados.

 Realizar con precisión los cálculos y tomar el peso adecuado, al momento de

la preparación de las soluciones para obtener unos resultados óptimos.

 Encender el Espectrofotómetro con un tiempo de 15 a 20 minutos de

anticipación para calentar el equipo.

 Calibrar el Espectrofotómetro con la solución a trabajar que en este caso es

el agua destilada y llevarlo a 0 de absorbancia o 100 de tramitancia.

 Limpiar sumamente con cuidado la celda donde se pondrá la solución y

poner el lado transparente virando hacia en el foco de luz que se encargara
de darnos las medidas óptimas.

 Solicitar con una semana de anticipación los materiales, reactivos, equipos

que se van a utilizar en la práctica para no tener ningún inconveniente
durante el desarrollo de esta.
VIII. BIBLIOGRAFIA

 Conceptos de física, Hewitt P. G., Limusa, 1997

 Fisicoquímica, Castellan G. W., Addison Wesley Longman, 2ª Edición, 1987.

 Fisicoquímica, Keith J. Laidler, John H. Meiser, CECSA, 1a. Edición, 1997.

 Fisicoquímica, Ira N. Levine, Mc Graw Hill, 4ª edición, 1996.

 http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractic
a4.pdf

 http://www.mexicoforense.org/biblioteca/balistica/fundamentos_espectrof
otometria.pdf

 http://www.uam.es/docencia/qmapcon/QUIMICA_GENERAL/Practica_4
_Colorimetria_Ley_de_Lambert_Beer.pdf

 http://www.uv.es/qflab/2012_13/descargas/cuadernillos/qf1_innovacion/c
astellano/3-pKindicador.pdf