PRACTICA N°4: PREPARACION DE UN FROTIS BACTERIANO
COLORACIÓNES: SIMPLE Y DIFERENCIAL
Apaza E.; Chavez R.; Mamani R.; Quispe A.; Sivincha J.
Laboratorio de Microbiología, Escuela Profesional de Ingeniería Química,
Universidad Nacional de San Agustín, Cercado, Arequipa, Perú
1. RESUMEN
Esta práctica consiste en aplicar las
clases y métodos de coloración para la
identificación y caracterización de
bacterias en el laboratorio de
Microbiología. La observación puede
realizarse por diferentes
procedimientos como son la
observación directa de
microorganismos “in vivo” o el
tratamiento mediante tinciones. Estos
procesos van dirigidos a incrementar
el contraste y por consiguiente a
optimizar el resultado. Sé realizó
tinción Simple para identificar
morfológicamente las bacterias y
diferencial para observar los dos tipos
de división en "Gram positivas” y
"Gram negativas” más adelante se
describen los métodos y las técnicas
más mencionados para la observación
de las muestras, así como
procedimientos de observación en el
microscopio.
Palabras claves: Tinción, Gram
Positiva, Gram Negativa, Diferencial,
Simple.
ABSTRACT
This practice consists of applying the
classes and coloring methods for the
identification and characterization of
bacteria in the Microbiology laboratory.
The observation can be made by
different procedures such as direct
observation of microorganisms "in
vivo" or treatment by staining. These
processes are aimed at increasing the
contrast and therefore optimizing the
result. Be done Simple staining to
identify morphologically bacteria and
differential to observe the two types of
division into "Gram positive" and
"Gram negative" below describe the
methods and techniques mentioned
for the observation of samples, as well
as procedures for observation in the
microscope.
Keywords: Staining, Gram Positive,
Gram Negative, Differential, Simple.
2. INTRODUCCION
La tinción de Gram y la tinción simple
son técnicas de laboratorio que
permite identificar distintos tipos de
bacterias según se colore su
superficie. Después de eso puede que
el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el
primer caso permanecería el color
morado, y se trataría de bacterias
Gram positivas y, en el segundo, la
pared tendría un color rosado, y serían
Gram negativas, o podrían colorearse
de una tonalidad azul las estructuras
ya que sería la tinción simple La
utilizada.
3. OBJETIVO
 Observar células muertas en
frotis seco y teñidas con
 diferentes procedimientos de 4.4. METODOLOGIA
coloración.
 Distinguir las características  Coloque una asada de
macroscópicas y las caldo nutritivo que
estructuras microscópicas de contiene una mezcla de
los aspergillus, penicilium y bacterias Gram positivas
rbizopus. y Gram negativas sobre
 Conocer mediante las una lámina portaobjetos
características macroscópicas limpia.
y microscópicas las especies  Deje secar a
de aspergillus, penicilium y temperatura ambiente o
rbizopus. pasando por la llama
 Conocer la aplicación de los suavemente para
generos aspergillus, penicilium obtener la fijación del
y rbizopus en la industria. frotis, con la finalidad de
que el material no sea
4. MATERIALES Y METODOS arrastrado durante el
proceso de tinción.
4.1 MATERIALES  Colocar el preparado
4.1.1. INSUMOS sobre un soporte de
 Muestra Jugo de papaya tinción y cubrir la
 Muestra de Yogurt superficie con solución
 Muestra de Cerveza de cristal violeta por un
 Muestra de kefir minuto. Lavar bien con
agua de caño.
4.1.2. IMPLEMENTOS  Cubrir el preparado con
 Mechero iodo de Gram durante 1
 Lamina porta objetos minuto. Lavar con agua.
 Papel toalla  Sostener la porta objetos
 Piseta entre el pulgar y el índice
y bañar la superficie con
4.2. REACTIVOS unas gotas del
 Solución de cristal decolorante acetona-
violeta alcohol hasta no
arrastrar más colorante
 Solución de lugol
violeta. Se requiere unos
 Decolorante (acetona,
10 segundos más o
etanol)
menos. También puede
 safranina utilizar etanol comercial
como decolorante, en
este caso dar más
4.3. EQUIPOS tiempo
 Microscopio aproximadamente 1
minuto.
RESULTADOS células esféricas denominadas
“Tricomas”.
Citoplasma

Núcleo

Pared celular
Estreptococos
Figura N°1 Célula Epitelial

En la figura N°1 se observa las partes Figura N°3 Muestra jugo de papaya

de una célula epitelial (núcleo,

En la figura N°3 se muestra bacterias
citoplasma y pared celular).
esféricas Gram positivas en parejas
denominadas “Estreptococos”.

TRICOMA

Figura N°2 Nostoc

El Nostoc es un género de Figura N°4 Cerveza

cianobacterias de agua dulce o
terrestre, que forma una secuencia de
 muestra son Gram positivas o Gram
negativas

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Microbiologia(2015), “métodos y
técnicas de tinción” recuperado de:
http://microbiologia3bequipo5.blogspo
t.com.co/2014/10/metodos-y-

Figura N°5 Kefir tecnicas-de-tincion.html.

Las tinciones básicas en el laboratorio

de microbiologia, articulo de revisión,
recuperado de:
http://www.medigraphic.com/pdfs/invd
is/ir-2014/ir141b.pdf.

Bacteriasyvirus`S Blog, Clasificación

Y Estructura De Las Bacterias,
Recuperado de:
https://bacteriasyvirus.wordpress.com
/clasificacion-de-las-bacterias/.

Pírez, M, Morfología Y Estructura

Bacteriana, Recuperado de:
Figura N°6 celula epitelial
http://www.bcelular.fmed.edu.uy/Mate
Eddy
rial/morfyest.pdf

CONCLUSIONES: Webconsultas, Revista De Salud Y

Bienestar, Tinción De Gram,
Se observó células muertas en frotis
teñidas con el respectivo Recuperado De:
procedimiento de coloración. http://www.webconsultas.com/prueba
s-medicas/tincion-de-gram-13399
Se realizo coloraciones diferenciales
para determinar si las bacterias de la