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lNG" Cl\{L
lli:lIlART Ah4EN'IO LIE i ji DRAULI CÁ I
1-
I-¡\3OL"'TOFJO DE AMBIENTAL
¡,AEORATGRIO Dg APIEIENE,AL
SE PA¡ITAMENTO SS ÉIIDRAÚ- T,ICA
DETSR'IIINACXGF{ DA LA COIr.-DIjCTIVXDAS
CONSUCTIVTI}A!}:
Se utiliza el conciuctimetro mcdelo DF-04 ( Fig- I )
Prccedimiento:
a) Lavar bien la probeta con agua destilada
b) Llenar la copa del condt¡ctimetro con la rnuestra a examinar, que cr:bra la probeta
(miás de la mitad de su capacidad)
3. Presione el botón TEST y manténgalo presionado mientras reaiaa la lectura de la
conductividad. Esta lectura se obtiene en ia parte inferior de la pantalla en micromlros. La
parte superior de la pantalla rnuestra la cantidad de sólidos disueltos en part per millions
(partes por rnillón)
Nota: Si al presionar el botón TEST la aguja se muevs completarnente a la derecha,
entonces proceda a diluir la rnuestra de la siguiente for¡na: tome un volumen de rnuestra y
complete hasta l0{} ml con agua destilada. Mezcle bien y determine la conductividad a esta
dilución repitiendo los pasos 1,2 y 3 " El volumen de muestra a tomar depende del tipo de
aguq se recomienda para aguas salinas hacer una dilución del l?ó o menos, para aguas
dulces del50 oá o menos.
Cálculos:
a) Si no se diluye la muestra entonces la conductividad específica en micromho#cm será
igual a: la conductividad medida en el equipo multiplicada por 0-9398.
Cond. esp. (¡rmhoVcm): Ccnd.(¡rmhos) x 0.9398
b) Si se diluye !a musstra entonces la conductividad especifica en micrcmhos/cm. será
igual a: la conductividad medida en cl equipo muitipiicada por 0.9398 y por el factcr Ce
dilución {fd), entonces: Cond" csp. (¡rmhos,tm) : Con<}.(pmhur) x 0.9398 r ftl
El fbctor de dilucicln se obtiene a-sí: volumen de mr-¡estra * volumen de agua destilada
Volumen de muesl.ra
PROI}IJ'I'A
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{]OI'A i
1
P¡\N]-Al.l.A
tiüToN 'r'rs.1'
.2
I,ABGRATORIO DE APItsITNTAL
DilPAR.TAMENTO DT FIIDR.A ULTCA
DE.TER,}{INACION DE LA TUR.]BIEDA,D
TÜRBIEDAb:
Se utiliza el turbidimetro Orbeco serie 965
Frocedimiento: comprende las fres etapas que se describen a continuación:
I. Encerado del equipo:
a) Colocar el rango deseado con el botón selector de rango. EI turbidimetro Orbeco posee
tres rangos de medid4 por lo cual se recomienda comenzaÍ la medición en el rango miás
alto, cuando se desco4oce la turbiedad de la muestra.
b) Colocar el frasco con el líquido de color negro (cero turbiedad) en el cornpartimiento
Sample Cell .rz cubrirlo con la tapa
c) Llevar con el botón zero a la lectura 000 en la pantalla del equipo. Retire el frasco de
cero turbiedad def compartimiento Sample Cell.
II. Caiibración dei equipo:
a) Coloque el frasco que contiene la solución estándar adecuada al rango seleccionado en
el compartimiento Sample Cell y cubrálo con la tapa.
Las soluciones estándares a utilizar se_eún el rango serán:
Para el rango 0C0-999 será la solución de 400 NTU
Para el rango 000-99.9 será la solución de 40 NTU
Para el rango 000-9.99 serír la .soh¡ción de 4 o de 6 NTLI
b) Lleve con el trotón standardize hasta que en la pantalla del equipo aparezca el valor dc
turbiedad que ticrrc el cstánclar utiiizado. Por ejenrp!o: si el est¿intlar utilrzaóo es elde 4ü0
NTU, mueva el botón hasta que en la pantallaaoare,¿ca el número 400 .
c) R.etire el fiasco de la solución estándar del compartimiento Sample cell.
HI.lVledición de la turbiedad:
a) Coloque en el cttmpartinriento Sarnpie Cell el fiasco que contiene ia muestra a la cual se
le determinará l¿¡ tr¡rbiedad y cubrálo con la tapa.
b) llealice la lecturr de turbieciacl en la pantalla dcl equipo. El .¡alor será expresado en
NTU ( unidMes de tr-¡rbietla*!, neltlornétricas )
c) Retire rl I fii¡sco a.ue conticns í¿r rnuestra de! compnrtirniento-
Not¿r: Cada vez cluc cambic cle rango, es decir. que mucva el bofón de selector de rango dei
ec¡r-lipc. deLre repctir tr:dos !c.s pasos o'e las eta¡:as I, ll ll!.
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Si con ci rengi.' {)0S-(.}99 ia icclurl e:; XXX entcn.Jes ei raagc aCecuaCo para una rnevcr
preciskirr dc la lectura ser/r e! rnisl¡r-r-
Si cl¡n ci' l'ang"> 000-999 llr lcctur:l cs OXX entonecs c! ri:ngc etiec,;¿Cc pÍira una rnav,Jr-
precisitin de la lcctura serír ci 000-!hl.-o.
Si ccn cl |"lugc (X]{}-999 la lect¿lrt es {X}X ento¡rcr:..; e! rilngc adeci:adc Dere una ma:,,cr
prccisión de !a leciur'¿r será c! {Xi0-g-gg
Si *; rcquic!:ri usri: lccl:.:l':r :':r'-r..,pl-cci:;r pr:cce utiii:¡er el vl;!t;¡- leíi.l; e:-: ei ra::gc altc
il{'ili}hi ?lil{tii
triil't.;t';
S-i'A rr'" i i;\ li lii¡1i:
3
En esta pracdca se detet*minarán los soiidos: totales {ST), ios totales fijos {STF), los
i'oíeles .'''c!ái:les (STY}, !';s d:sueltc's tcÍales (SDT). lcs dis'rieltcs Íiic.s iSDFi, lc.s Cisuelics
vclátiies(SDV), los suspendidos totales (SST) y los sedimenrables (SSed).
Á c+-!i-iia¡iin c= +r'nlic¡,l+
¡vr¡ rL !¿iiJ¡¡! fhtn¡ ¡la c::;le4=-o:-^^::-.
ev _B uuig; í;¡¡!:C--i'.J¡¡.
Sétid*s Éoiales:
a) Pesar la cápsula de e".'apcració'n suministrada (P¡). Tome !a !ecf',¡ra coli t-¡dcs los
J-^:--^-!^-.--^-:.-_ j^- :_ ¡-_!
u5i r! r réi c5 rt lu5¿! ¡¡/."t.J5 i^,-t I rd rJd ti3! La.
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di S;:car ia muestra evaporada dei baño de lvlaría ilevaria al horno para sB secado durante
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! h.^,r= fl- .^q.-. .-l= .-"+ rg
!= ¡¡v¡- ,4ic*.¡ih!e !¡¡
h.^.r: ü¡.-,uu¡i¡u'iL cn !¡¡l ¡éUU¡éLU¡:U-
!:h¡i¡.*niln ..lacr.:¡Éc ,4e !¡ !íGUU:é!iL':i lz
A= ¡e
L:g:y-ULi uL i¿ =i¡=r.¡.;-i.á- .JL
muestra sea menor o iguel a I hora. se puede toinar como tiempo de secado /.hora-
e) Cumpiidc' cl tiempc 'ie secaCc.- cclc.cai la cápsula en el .iesec:Ccr heÍa que se enl:íe
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=:r-i !a cáf,.srla cc.:: la i¡u':*ra l!'.;}.
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L"ABGRATORIO DE AMETENTAL
DEPARTAMB,¡{TO DE HIDRAULICA
!}ITERPTINACION DE LA DUREZA
Parala detenninación tanto de la dureza toia,t como de la cálcica es necesario tener ei valor
de la conductividad para conocer si se debe diluir la muestra. Se dan los siguientes valores
aproxiinaCcs como refererrcia:
Si la conductividad es menor de 600 lrmhos no dilu-va la muestra
aa
se encu€ntra entre 600 pmhos y 1000 pmhos diluya la rnuestra al50Yo,
aa
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llRl.liNñt¡;Yl:ii
PIPII'l¡\ []t IRlii:;\ CO].i Fli.
CÍI.TNDR()
(iRADLJAD()
'I ll'til,i\N lli
lrig. ti
I
. Dareza cálciea@""2"):
Procedimiento:
; '. a) I\"iidá 50 mi de ia muestra Ciiui<ia o no (V-z) depenCiendo del valor cbtenido de
conductividad. En caso de que diluya, utilice ia misrna dilución realirada en la dureza total.
b) Lleve ese volurr¡en a un erlerrme"ver y agréguele 2 ml de hidró;x.ido de sodio (-hiaoF! 1
N.
c) Agrege 0.2 gr. dei indicador murexida No es necesario pesario se puede tomar con la
punta de una espátula un poco del mismo, si al agregarlo la intensidad del color es mu¡l
clara entonces agregr¡e mas.
c) Titule con EDTA 0.02N (N) hasta que el color cambie de rosado a violeta (color uva).
Anote el valor de EDTA gastado ( A"u )
Cálculo: D"^2* (mg/L) : Ass* N * 50 eg.gr * l0C0 , coloque A"" y V*z en mililitros
Y"a
Nota: Si la muestra fue diluida, determine el factor Ce dilución tal como se muestra en la
letra b) dcl cálculo de concftrctividad (ver procedimiento de conductividad) y multiplique
por este factor el valor de dureza cálcica obtenido con la formula anterior
Cálcalo de la concentración de calcio ( Cu'* )
C';* * D"u2- (mgrl) * 0.4
Procedimlento:
El pH será detssninarJo con el Fhmetro Digisense rnodelo N" 5gg4, a ta! efecto
hay que
calibra¡lo previamente.
CaBlbraeión del phxeletr*:
a) L'ave bien el eleetrodo son agua desiilada y sur*érjalo en tra sclución buffer
suinrnisfiada. Con un tefinómEtro mida Ia temp€f,afura de lJ buffsr y fijeta en el equipa
utiliza¡rdo el boión TEMPER{TLRE.
b) Espvre que estabilice la lec,tura y mueva el botón STANDARDIZE hasta que la panraltra
rnuestre el valor del pH de la buffer sumir¡istrada.
SOLUCIOI{ BUFFER
BOI-ON
.!'üMPI]R"A.TURF]
uo1'oN
S'I"ANDAIIDiZE
fiig. I
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E,AEGR,{TGR.EG SE AF/¡BTEFÍ T,dL
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DEPA¡TTAMENT'O Dg Í{¡DRALII,XC,{
SE?SR&ÍTNACSCIN S& T,A ALCALXF{¡D.{S
fefg1Tnine ét
pH e" la rnuesáa. si esie vaior esta pcr encima de g.-a
entonces deterr¡rine Ia
alcalinidad fenoltaleinicay la total. Fuede ocurrirque
au&que ei pH sea mayor a g.3 ,no
tenga aicailnidad a Ia fenoltalein4 lo cual r" pu*d" prur"ni*
cuando el pFtr esÉa rnuy
cercano al vaiar de 8'3 y se produce una absarción
de CG> , en tales caso se descar[a la
presei:cia de aicalinidae! ferrotrgaleinica. Si e! pH
es ínencr ¿"'g: <ietermine únican¡ente Ia
alcalinidad totai. Ncta: si la muestra tiene alcaiinidad
fenoitaleinica entsnces no tiene
acióez fe¡¡cltalein ica ¡i viceversa
Si-ei valar dei pFi de la muestr4 esta por debqc de 8.3 y por encim a de 4.5 determine la
acidez fenoltaleinica. Si el pH es menor a 4.5 determine la acidez al anaranjado de metilo-
Si el pil es mayor a 8.3 no debe tener acidez de ningún tipo, sin errrbargo, puede ocurrir
que posea acfrez fenoltaleinica cuando el pH e$a muy cercano al valoiS.f y exista una
absorción de COz , en tal caso se recomienda realizar ei ensayo pma des6,mtat c no s{r
presencia.
Tenga prss€nte que si la rnuestra tiene alcalinidad fenoltaleinica entonces no tiene acidez
fenoltaleinica y viceversa
'-qe '¿:iiiizaia
el rnétodo nomográfico; en caso de que no se pueda utiiizar porque las
pariímetros invoiucrados no entren en las escalas del norrrograma (Fig. l0 ) se aplicará e1
método volurnétrico.
i!{éÉed+ *orn+gráfiico :
Froced i,-¡ientc y cálculo :
a) Determinarle a la muestra : el pH, la alcalinidad total (mgll), Ios solidos disueltos
totales (rngl-r)y la ternperatura ( "C ).
b) En la Fig. 10 trace una línea desde el valor de temperatura hasta el valor de solidos
disueitos totaies para interceptar ala línea pivote I y conseguir el punto P1 .
c) En la Fig. l0 trace una línea desde el valor de pH hasta el valor de alcalinidad total par:a
interceptar a la línea pivote 2 v consegu-ir el punto P2 .
d) 'frazar una línea desde Pr hasta Pz y leer el valor dei CQ en rng/l-,cn cl punto tlc
intersección de esta línea con la escala del CO" -
l.-ibit¡ue la zona de cunosié¡l qilc preseñt¿r la n¡uesir¿r. utilizantio la fig. ll. con lcs valcres
:::'r:l':i::lY:::'1":I1gj jv:l_
I,ABOR¡I IOR*O DE r.;;;-;;
Dll pA !t't'¡{ MEN't'o DB }It t}RA U t,¡C..{
Df, TSRMINACION DEL INNICE DO L.INGS LTER.
Procedimiento y cálculo:
a) fletenlinarle a l¿ muestra: la tenrperatura ( "F)- et pFl- los sólidos disueltos totales
(mVL). la dureza cirlcica (rng/l-) 1' la :rlcalinittad total (m.g/L)
l--; Pioceder a ubicm los valores dc A, [3, C y D en las tat¡las c]e la l. ig. l2
c) übtener el pH de saluración: pFl. . medirurle lir siguien{e expresión.
¡:l-l* : ( 9.3{)+ A l- B) - (C t n¡
di {ibtener el indice de Lurgelier Lrtilizando la sigui*nte e..rg;resiirt:
lr 'pll - pFl,
lin c:¡so de r¡ue no se ¡:uedrr* ot¡ter¡er los valr>res tie A. F]. {' i¡ f}, rlcbiclo a que : la
lem¡rerair-tra { "K ), los sólidos di:ir¡eltos lc¡tales {rngil,}. ln durez* cálcica (mgiL} v la
alcalinlda¡l total {mgil.), presenful v¡rlorcs muv ¿rllt¡s v sobrcpas*n el limite rnáximo cte los
rcporlarics en liw tatrlns r1e la ilig- 12. pr<.-ceela I determil:arlos nt,:diantc las siguientes
c:<pr*siiines A -, I l-og SD"[{fng,lU. I .l
l{}
ll,- -l_i.l? * kr.g,(',{' t 2731 I .t4..5.s
{t lot ¡{'ir''l I
l) ' krr: lalc¿rlinirlarl tolrl I
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LABORATOR-IO DE AMBIENTAL
DEPARTAMENTO DE FIIDR,A.ULIC¡\
DETERMINACION DE CLORIJRO
50 nrl dc irgua dc dcsfilaciq ctlt{}¡¡ccir tcmc 3C nrl dc lnucstra y 70 nrl clc agua
i'lesiii¡i'i¿¡.
d) Al vclumen de 100 ml dc rnucstra I dituida cr no según l:s lctras b) y ci ], agréguele I ml
rie crcrnat<-r Ce pcti:sio.
c) 'f!tule con nitrato de plata AgNOr 0,0141 N ( N )hasta aparición de un color arnarillo-
ru',iiz+ i ci;!*r l¿:¿,!rili+)- A::i';tc elr¡ai*r ce rigi\jii-; g:isi:-rdr--, e:-: !a tililieción A
i i"
f) Es ::ecesariE-. ccl':c''ceí la eartida.J <!e Agl{{}3 ga;tai,rr: para titillar e! c!+r*ic presente en e!
ag:-iii destila<la i b'l*"lcli ). A tai efbclc" to¡*e I{i0 rn! Ce agr:a destiie,iia, o*e*= : sil ile
c!'ilrrilti) <!c potasio i' t!{ij!r c+il A::51{}: hasti aparicii;* rle ui color am¿:ri!!c-r<-.iizc cclcr
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laiii-ii!*i- ¡tr::,ote ':l .,'a!r..r cle ngli{}; gasiad* cr !: iii,.ii-,cii1,:: i g ).
Figura i3 Espectr.onic 20
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20
L,{BORATGRiO DE A},GENTAL
DSPARTA.I\.ffi N?Ü DE !fi DR.{LTI-IC A
DEIER¡.,0{AC¡C}.I DEL Ol{IGE}i+ DiSUE¡-T{i
Fracedimien¿*:
l¡edieacieeles previas: leer el prccediraientc a:rtes de iniciario. En las ietras e) ü o:isten
dos ca-qos. Realice 1e acti.,'idad c+*'es¡-c::dier€e, según el casc en dar:d* se encuentre su
rnuestra.
a) Tornar u¡a botella de Winkler (Fig.15) r'il*naria ccrnpierarnenie ccp la inuest¡.a-
b) Agregar p*r daba,¡o de ia superlicie itel liquido (intrcducieirdo 1a iuipeiai: i *¡t de sulfata
manganoso seguidc' de i n,l de yoduro-nitru¡o.
c) Tapar ia boieiia,v botar ei líquido que sobresalga una vez colocada la tapa. L.{ezc}ar por
inversión vírias veces. Si el precipitado fbr¡nado es blanco es indicetive de aus*:cia ¡le
oxigeno, si es rna".n¡n es indicatil'o rfe presencia de cxigeno
dl De-iar ei lii:scc iapado en reposc- hs-qta que ei preci.pitedc desienda- mas o menos la
*rila¿l de l¡¿ bs.teiii:.
e) Destapar la b+ielia v agregar I ¡nl ele ácido sr¡liúrico rcncentrailo. folezciar pc,r inversión
o La sclr¡c!ó¡i perr;tanecerá de! mrsmc cclor de ia muesi¡a si no existe axige;rc
disuelto e¡': ie misma No coniim:e¡ el ens.avc v repoítar ausencia de oxigeno
disuello.
ct L¿¡ srnlucii¡n lomaiá una tanelidad ama¡iila si tlene o>ligeno dis¡.¡citc. Ir¿fientras
m¿wr)r sea la ca¡rtidad de oxigeno disueiio e:r la muestra malci será la tonalidad
del calc'r, For ejernpio- podría ditr un tono anara,rj¿rdo si tiene ¡nuc&o oxigeno o un
tonr; berge si trieae poco oxiganc. Continuar ccn el en*sa\c.
l] T:-aspase l¡;ila el canie¡¡ida de la bcteila eur{erior a una ii¡--:la -v tilrJe rle la siguiente
lorma.
ti Si la li:calrda¿l dei calcr de ia s+l*cié* c*nlcniria en la b¡-.lelia es lirerte. agreearle
poüil a ¡ncri {de la btireta} lii'si¡li:.¡tr_: dr. s+dio {)_{)2_5 N t'}i.r hasia que ei ccie,ice,rnbi*
a uni tr¡¡i¿:.lidecl *us débli. As¡i:ic ese rr)li:rnen {vri ?engx cxidaeñs cle es
dffc)*$car 6*áalr¡¡t¡¿te l:e tn*es{¡"i¡. g{rrqüé perderéir is}¡i$ e? eás*-v*. Desplés r¡ue
ha h¿¡i:¡rj¡; !:¿ t<.,n;llid::rj ds! c*k"-;'. i¡Sieg:.J{: r,arian gol¡x de *imidón
{i;rdi,:ad*r de la
reaecii':i":J h¡?-qra {¡** d¿ l¡r: r:+i*¡' *;:ui iiscürü o üs}íi. ton¡licad negruzca
A¡:rc:iii.lt#:tm<:i:1. :jil ag{e}:e,*! -t' ¡,:l;l;:s rie ai¡":'¡¡,Jri¡¡ Crr*linua¡ agr*g:r'idi: tios¡llat,o
ds si¡tii¡¡ it:isla i¡** *:l er:!*r {.:*ti¡par*;ci.r Ar¡oie esi: ,",olun¡e* {V:,1. Sr¡m¿¡r e!
lillr-¡l¡-¡i:;.¡ V¡ : ei r*lr:n¡¡lr¡ V,, r, r;;l:r;ri¿llle¡ C¿-:¡l-¡Lr crl 1'*lunler: eJe ti<¡Sulli¿t* ginhdO *n
la iituiac:óri {V"i
', si i;¡ is:¡;r¡!¡i;¡¡ii ri'; l¿: sr:iuci¿¡¡: c<t¡:re¡¡i{.1;q *i¡ l¡ í:r¡ir:!i;: es ¡jáhlr- agregu{ \iirra:l grlrrs
ds ;.11:;¡:di:¡¡ {¡r¡riic¡:¡.1i-¡¡'du; iit r'.:l',eii{in,.' i":¿L-ciii r;u* i}é.i.:¡¡ ct:lcr ¡¿¡ui t>sci¡r& o ur}a
lO¡l;li¡r.i;,lli llij.i-:!'Ii./ii! A¡;r.i..};í:*;lil;t{ri{:ltlrj ;{q:: itiltr,]t-iiiti '} g,-:ii:s tle All¡¡¡i!<i*. AgfegAr
2l
' fi*s*i&lc ds scdic s"*25 ¡"i {Ni hasla que ei colo¡ desapareaea. Affis
ese roliunE¡¡ -
el c-¿¿*i repr*senta el roruinen rle ticsuifato gasiado *" l*lit,r**r,,ig:
{!i}.
Calcul¡,-s.
O:tigeno disa:etrto & {t¡:g/A) : }' {<
N+g* trCrlü
¡rl de muestra
El v*lsr -t reprmeata el ¡:eso equivale*ie rietr oNigeno, los
mi de;.¡ruesira es de 3ü0rnl q*e
reFreserita el volumen aprcdmado de las boteilm
de trünkter enepieada_s.
Fig 16 Incubadora
Cur.rplido ese ti,er¡po se le deterrninsrá er oxigeno disr¡elto final, 4Éicando
procedirniento de oxigeno disueka apa.tir el
de.la lefra t)
Ciálcr¡los:
Para ei c¿ifunlo del o*t y üIlF se utilizará la misn¡a fcr¡nula dei oxigeno disuelto
iv{étcdo de Nessler
Ficcedimiento y calcui*:
{" preparación del ble¡ico del nitrógeno a¡rroniacal: es necesa¡io para caiibra el
equlpo spectrcnic prepaar previamenta ucl hlat:co. rie la siguienle furma: tomer 5O
*t ¿" agua destiiada y' añadir 2 rnl del reactivo Nessler. Este blanco puede ser
realizado por',in 56!ar grupo cie tr-abajo. para ser uiilizado por tcCos los grupos,
'!" Ensayo de la mlrestra:
a) Tornar 1CI0 rnl de la muestray agregarie 2 ó 3 gotas de tios*lfuio de scdio 0,1 N
b) Añadir 1 rr{ de sultrbÍo de zinc -v agitar-
ci Añadir 0-5 mt de NaOH 6N" mezciar y dejar precipitar
d) Filtre v descarte los primeros 25 ml del fiitlado.
r¿olumen de 5O ml ccn agua
e) Recolecte los 25 rnl siguientes de flitradc v cornplete a un
desliiada.
f) Agregar I gota rtel reactivo es.tabili:aadcr de EDTA
g) Mezciar bien y' añadir 2 nrl dal reactivo Nessler
h) Calibr¿r el equipo spectrcnic -v leer la abscrbancia de la nruestra.
.1. Pa¡a calibrar el spectrodc se s.igue el siguiente procedinúento.
Ver ligura 13 mientras lee. Colacm !* lcngitud de onda de 425 run con el botén A. Gire
ei botón izquierdo. B en la ligura 13, basia que la ag.rja en la pantalla indique 0
trmmitancia (-fransmítanse], Tame una celdi¡a o'ei equipo" liénela con el bianco del
nitrégeno amoniacal 1" ccióq*ela e* el cc:mparlimiento -y fepe. Gire el botón derech*. C
en 6 hgura 13. hasta que la aguja en la pantalla indique 0 absorbancia ( Absorbance) .
Saque !i, celdila clel c,-rntpartirnientc y tape. Sl !a agu-ia lle-ea a 0 en la escala de
tri¡-qmiia¡rcia enlsnc*s ¡-a es'ia celibrad¡ el equip*. Sino l1aga a 0 trasn*tanci4
e¡:tonces repita l* calibración, nuevsi:]€ilte .
t' Pa¡a leer la absorbancia de ia mu*s{ra: Llene u¡":a ceidit¿r con la muestra -Y calóo,ueia
en e[ compariimientc. tape Reaiice la lectura de la alxarbancia en !a pantalla del
equipo, indicando e! valcr que nrÍrca la agrrja.
¡i Peu'a obiencr los mg/¡ de nitrégeno a¡rionia¡al N-l\,it'l:. utilice !a grafica de caJibración
de! N-Nl{: {ñg. l? } r:ntrando con ei valcr de abs*rbancia {eje Y ) anteriormente obtenido,
ccrter?do la ¡ecta -v luego bej¿urdo h¡sta el eje X {l*¡r:i¡ la muestra fue diluida er: 50o'{,.
rm:itiplique e! valcr obienid* en ta grá{ica por el fbctoi C* tjriució¡- que en este ceso es 2.
P¡,ra obtener los n'r¡y'L de alr¡cniac* i\iil¡ mu?tiplicar eÍ vaicr det nitrógeno amo¡dacai
Nl-Nl lr ¡:ar l.2l
ai Aiiadir A 1{} m! ds J:t ¡:?i:eslri: . gcta Ce sui*¡l+ n-{$igt¡ncsrr , ü.-5 :nl de ácidc'
:-::;a
hiprr:g!a;¡.r*,, e ir,.mediate¡lle¡]i+ ,galr :r gciii ,l-) {i ¡tll del ri¡:¡ciivc¡ de fencl. Lgite
r,iggrgsiu*er¡te riurante ls ariiclc¡i de le:s fe¿i*tiv+s. La l'***ación qiel colar se c*rnpleta a
ios lii n',:rl-r,.rtcs y s{ e$tabrie p:r 24 h.
b) l1-*¡rarar ei i:ia,:eo e<rr l{.; r:} c{e ;Eu;i <i*lii¿::.1¿r y i:1:r'4:riie }¡:s ¡rlismcs reactir'os c¡ue a la
fl!¡¡{a?ra. {'¡irlrrar *l'qur¡* {:r;}'r i¡n l¡Lsx¡:
crr í.err li¡ *b:ir:rirancia ele l;r nr1¡e;tfs cr. r:l {Yi1¡tFc :} rtii;¡ i{:¡:il;tt!ri *c **{ja de UtO
T:ni .
,ji í]eternlin*se ¡Jir*et;¿n"¡*r¡1¡: iic iil ür.:,ir';¡ ¿i¿ ¡..alilrreei<;r: !*s nflt de i{H: -N i / r" .l '. .,
j:i
Niárég*** :aíÉa:reo:
Se utiiiza el métcdo delsaliciiat* sédico
Prpeedinuento y calculc:
* Preparación dat bi*nco d*i nitrégenc nii¡ic+: es ¡rceesari*, pare
spectrcnic prepartu- preür.:nente * b!arro*., *aiibrar e! equipc
c* l*,iá***L firrma:
."J Tl*g l0i n:l¡nt de agua dexiiaria cotccarto* *n .* ;#;;;ipitado.
b) Asadir
1,,
de salicilaic sódicr-iy lle-..'ar at !-.eiic de M*d{as-á
evapcración coin*leta.
Anadir 2 nri rle l{zsoq concentrado y diso!:,.er
9] ei residuo. Espe.rar 10 rnin.
d) Añadir €n este mis¡-¡ro o¡den v .*auo¡o,-i;;i;;;d
"or enfrirl-
tartrato doble de sodio v potasio. De-iu
íJ*i*au -v* i5 mt de sotución
artss de usa¡.
Este bianco puede se: realizadc p"i* scl{-: grupo
iJe t"abajc, Fara ss¡ ¡¡tilizacc por
las grupos. tcdos
1". Ensal.o de la muesüa:
a) llomar 5 mi de la muestr¿l r, 5 ml de agua Cestiia,la colcci:rlos
precipitado. 1. efi rin l.aso cle
b_;,Añadir 5 g,,rtas de NaGH ü-G? N v I rnl de saliciiaJ* só<iico, rnezclar.
Lievar ai baño de
il{aría
ha-qla evaporeci ón compleÍa.
c) Luego de !a evapcracióq *ñadir 2 r,-:i ie H:SO+ ccnceritrado
Esperer l0 rnin.
y disolr.er el ¡esiduo.
d) Añadir en este
Tl*o o¡den -r con cuidadr:. l-í ml de agua destilada .v l5 ml de solucién
tartrato coble de sodic pct:sio Dejaf enltiar.
-.- iniies d* i;;i;scrbaficia.
e) calibrar el equipo speclronic r' reer Ja
absorb¡¡.'cia de ra muestra.
{' P¿ra caiibrar el specircruc -.e sigue e! si3urenir pr.-rcerJiÁenro:
ver la figura 13 it
I
izquierdo' B .{lol¡¡car langirird de,-rr¡}a c*r i:c¡ t* ;;n el totó, A. Gire el botóa
j3 Íig*ra l*1. láta que la agura efi la pantaila
indir¡ue 0 tr¡-smi*urcía
(Triuxnrít¿nse,t."n -lc¡me una
cei¡jita áei e.¡,,ii,i. U¿**¡i *._" blanc* del nitróeeno
nitrico v colóqueia en ei conrpartinrientri d,
l¿;ia. Cire el botón"fCerecho. C en
li. i-rasla qire ia agu-fa en l:r pluilalia indie¡uei, r#sorb¡r1"ia. q h lñ;i]
celdita del campar¡imier¡{o ,: tr.,¡.,* Si la Abscrbanc*¡ . Saque ia
agr.ja llu.gr, ,i-ii ** la escala rie tr¿sn¡riancia
::,i'J:::.::J,X#:l,Tro
*! ec¡uipc sin., ilese i.
r,1a,,,,¡r-,n*¡,. **to,,"*i,"*_-pi,o i"
Fii{rirr¡:
,1e utiii¿l r_.1 ¡n,:¡,¡di¡ ,,lc ?¡¡l*heli;
l"ri¡c+d in ¡l*cliii I c¡!i¡;1¡l¡;
'i flrcil:iraci¡i¡': d¡:i i":lu¡cl: r{el ,!ii¡-ii,.; {r:= i!.:ir-:,ii:;i:;::lrlr calii-.rrlf
el e¡¡i::;.¡¿;..;trii]cli{:¡i:i{
lltci):¡¡'il.r'tr:1"*:.;t:l**;;ic i¡r.: lil¡¡¡r,;t¡- de i¡ sr,:¡¡,,r!r,. ílrr:¡:,¡.
it;i 'i'*r!t:tr 5r! ¡;! ¡* irq::i:l1r:slii:xi;: r ;fi;:dirj,* : ,r_;
lr¡ ,{tlitr¡r .' ili:rrr t'r¡ rr.rr,,s.;,i,,;,,;;,,, ;,;';;.; ',, . ,i.,: ,rr,r,,'',_.:"¡_la¡1:i¡*!li
r j,,\¡);:i.iir .l l¡:i ri,", :iÍili,i\!,!r.t.
i:r;,i, r,i:l:¡t i;il.
Iiiedc r*i r'"r;rii"':iri¡: 1t*i u,;a si,ki 1:.*:¡i'.* ,.ii: rr*l¡:iii¡.
;ii:jl;::" i-rii{.i¡ ;c..-ri ul!ii¡ar-i* gk)r r(,ii{i:!
.l' *.:¡t:;;t."rr r.iir 1: ¡];t;l:ri:¡;i.
25
a)'Tornm 5ü retr de la r¡ruestre y ei1*dirie 2 mi del reactivo
de zambelii
b) Agitar y dejar en repüso dwaate i0 arin¡¡¿*s.
c) Añadir 2 rrrl cie arnoniacr: purc
d) crlltrar el equipo spec?r*aic y reer ra ab-r*rb*e!*
d* ra muestra.
'i' Para caiibrar e}spectronic se sigue ei sigeiente pro**áir.r*rrto'
ver figura 13. colo_car la lcngitr¡d de cndá cfe a35 nm con el botón
A. Gi¡e el boton
izquierdo' B en figura 13, irasta qce la aguja en ra pÁt*llu iadique o t.**¡t*.1*
!
(Tran-srnítanse). Tome una celdita del eq"ipo,
lténeü blanco del nitrito y
coiéquela en el ccr,epa:t_imientc ,v tap€. ciie el ¡*t¿" aÁ*t
o, "l
"o" c sn la figura l:, a*r*
que Ia aguja en ia pantalla ir:dique 0 abscrbancia (
Absorbance) . seue'ra cel¿ita *el
compartimiento :s tap.e. Si la aguja llega a 0 en la escala
de trasmitancia entances J.a
esta calibrado el equipo. sino fu'e-ea a i) 'nasmitancia
entonces repita la calibración.
nuevamente
t" Fara leer la absarba::cia de la rnuestra: Llene rma ceidita con la muestra y cclóguela
en el ccmpartiruento- tape Realice ia lecrura de la absorb*6¡f;ilp*ljü
¿"1
_ equipc, indicandc, el ,¿alc¡ que inffice la aguja.
f) Fiua $tr¿e¡rcr ios mg;'L de nitdto N&-, uülice to g.oli"a tte calibracion del Nüz- (iig-
entrando son el valor, de absorbancia {e-¡e Y anteriarmente
lg¡,
) vv¡lsisv rs
obtenido-r ccrtmdo la recta v
¡se!
luego bajando hasta el eje x"
F-ara obtener los mgrl; de nitrógeno nitrcso N-N&-,
m*ltiplicw el valor obteni¡la del nitrito
N&-, por 0,305
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LAS+RATGRI* DE .T&8IENT",SL
CsEPARTA$8N'ÍO DE }{IDí¿A.LTLICA
DE5]}{FECCiCN
ccmo rxie valor es agregac+ a i triac de !e rnuestya eniLli:ees la cr¡ncer:t¡e ión q-*e!asá *e
rfig,G-. La dosis Ce elar* será de S,4 mg,L
Para ics otros Én\'&ses el c#ei¡io se reaiisa ¿ie wa n:.anera s.il:dler.
eejenr¿eaq¡énJJái{iÉoúslcl*r't-¡resid**3:
1) Calocar en uíla fi*la de i litrr:, -c ríi de ácido acétr*c Fl:rü 1' añadirie tr gr esdmadc de
Kf { debepasaric }. Mezclar.
2i Tornar 5i)0 ml del litra de agua que contiene el agrra de cl*r¡:. (Esis a$ra vrene del
prccedimiento de la elabcracié¡r de !a Curva de *em*¡¡da de Cloroi ¡' agseg*rla en la
mezcia anterior { punto 1 }
3) Si se tcnra amariiia la rnezcla es ilidiq*3ir,:o de presencia de cio o resir.l*ai. í.a tcneliriad
tiei sin?ariilo depmde de la cantiCa.d de clcro resid::al. A i,.eses el a¡r:aril!* es mc*l' débil que
casi no es perc€ptillie a la visia Se pueden prsssntar d¡rs eascs: que ia i+nalidad sea débil
o que sea fuerte. Segirn el cas.*, siga el proce.dirnientc resp*cii...o.
+)
{' Prime¡ casc': la tonaiidad del ame¡ilio es iiébii. Siga e} siguiente procedimiento:
Agregue I ¡nl cle CmiCón (indicaJor de la reaccióc) que dará urr colar az¡¡l oscutü o
una tonalided negrüEca Tiruiir: con dasulfal+ de s':dio $-ü?5 N ilii h*sta que el
color desaparezca. Anote ese voiumen . el c*crl representa el voiumen de tiosdlfato
gastado en la titulación (Vg].
'!* Segundo caso: la icnali<lad dei ar¡arjllc es fluerie: Siga el sig:-de*te prac*diitrie*€c:
Agregarle p+c{} a pccr: {<lc la brirul"ai lii;sr¡llirlc; Cr, seciia ii.{i:-{ N ii*ii hasta qi:e el
calcr ca¡nbie a una tcln€¡idad *l'as débil. é'nole cse ',,oh¡rnen iVr) . Ter¡ga caEidads
r*c *o *lem!¡rr"a¡' {*{¡¡t¡rse!a*e ful $:$esfi'a, ps¡q$e perd*r{* te¡}o cl cnseryo.
*espués que ha ba-iada la tanaii'.la¡f del coior, sgregue t rrri de almidón (indicador
de ia reacciÓn) lo cur-ii C¡a¡á un colsir azul. csc¿:ro o una tonaii<iad negruzca
Continuer *grega*do ti*s::lfatr¡ de sodio harta qu+ el coior desapare.zca Anote ese
'¡olumen {Y:¡t. Sumar el v':l*¡::en V¡ ,.,.'el vi:lu¡r¡en 1g': r repqirlei-lü cú11}e ei r,*lu*?eñ
de ticsutrfat* gasladc en la ti¿r:la':iún { Vs}.
5) Cáieuio del claro residual ,
Cir:r* residual {mglt t} - t_}l+j- VLJ r*j:ij:,3:r:i5ti
¡*i de la rnuestre
V¡ - ss el t*ir:¡'*e* cle ti*sulf,a1* gastadc en ei biancu l pueCe siimarse * ¡estarse ai
gaslado a la i-¡:ueslra Ii lal*¡ ie será prlrp*rci.r:nati*" ¡si ccmtr si debe restailo o
sun-¡arlc¡. l,cs rcl de m,:esira s*¡: i¿;s 5{,?{} rr# iriliizad*s en i¡¿ tltuiaci*¡¡.
(tt
\J
Carla grupa trabajará c*n ulr dpo de *g::a, selece!**e el pr*c*dixd*r,ü+, segú* correspcnda
atr tipo de muest¡a.
I AGUA FSTASL,E:
1.2.1i Deterr*ini¡cióg¡ det número más prcb;¡hle de bacteriÍ¡s colifbrmes tlJlMPl'lt){j nd.t.
Se r,rtilizará la Técnica de t-er"arentacién en tr¡bc-r rnúltiple para miembros del grupo de los
cc¡li{b¡:nes. La mis¡¡ra compre*iie tres pnreb*"c: !a presuntiva l¿ cslihnaetiva y la final.
Sci;: se reaiizarixi en la práeiiea dr:s pruai:ar. ia presuntiva y la cc'*firmativa, esfa i¡ltima si
ia muestra io an;erii,a.
Prr¡eba presalnfiva.
a,¡ tr-e serán prr;pcrciona*ios 5 lubcs de c*lÉív*s co¡¡ e! media cie cultivc' l**rit triptosa. En
cada uno de los rubos {igregue l* 6! 4* l¡¡ mr¡cslra uiiliza*do !a-s pipeies esteriiizadas qr:e
le s*r: sui-¡ri¡rist:'adas. T'rye ir¡¡r'ediata¡*eaie !i-.s iub+s *e cultiv* después de agregar la
¡xües¡r¿.
b) Coloque los iubcs en la incubadora :¡ 3-i o{l
c) A {a-q 2-i hara: r:bs*rve ln ¡:resencia o e*scs';cia tie burbuias de air-e dentr* de los ¿r¡t¡¡:s
llurharn Aqueli*s tui:*s c¡,ue preseriten burb*as se ies consi.dera posiiivos {rer r'rg. 20 ) f.'
pas:rrán. inmedialamenfe. a ia prueba c+nfirra¿rtiva. Aquel!*s tubr¡s c*e no presenten
burbuj:s sr: les cc¡rsirlera riegirüivtr -y ss {$sd;m en l¡l i:¡cubadür$ p{}r 24 haras min- que
gr¡¡r¡s¡,r6s¡$s a u* tel*J rle 'i8 ii¡:r:is err i¿: inet:t ¡irJ*r¿:.
d] ir l;*; 4S hcr*s v**i'oa * oi:sei';a; la p:'*.t*:ici* ¡-¡ il¡-issl':cie de barlu¡'1-i;¡,c de air* ¿1e¡r{r* c*
ics t*i:as l3**¡:¡¡r¡, i.lc !<¡r; lub*s r:cg*ii.,l;r plli*cilc¡¡tilr de ia ieira ci . rlquelirs iubcs qrie
ilr*:lüi'i:*:] i:*rbt¡l;:: srr l,:s ce¡:sitir'¡a i..<¡siill¡-¡s ., p*seráei- in:ned.iai¡¿¡t:*rrte- a la prueba
c¡:¿¡fir¡'¡l¡{ilit. A4:,1*!1.:s iuhr:r* r.¡r-:e ¡ti} i,¡r*sr::li:1: hurbi-liar se ies c*¡rsldera negairr,r: en ia
p ruiri:;l i; rcsti fil i f,ii r qrl;{,iaá*,":er'd *scariaij r r s
F:::* ?::¡ ¡,*¡:¡: li r¡r¡* *iv:r :
ai "f+¡¡¡* t¡r¡ i¡.!¿j ,,i{ ¡r:¡.r¿:i¡};}*ili¡i .; *ri*¡i!:¡*l:¡ c¿:¡: la iia*¡:: <}cli ¡"'iccheí*.
bj tiiili;arrii<,: i:l ii..:r. lriir¡s!ir:ril r!llii rl{¡i;?:L:l liclr¡id¡:} ¿i*l tr.¡{:¡¡ $-:1:}s!íi','i} dc la prueiia
pr*$rJi¡lt!:r. ;r ri{¡t, ii¡i:i: tic er¡ili ir¡ {i** c{i¡¡1¿**n rai<!c} ii:ilc's:¡,iit de L,ills r,i:rde b.riilante.
r:i'l';r¡;c in¡:r*dlt¡!;,¡::¡¡::ric tl i;r¡irr¡ ¡ie: q:*.iar',<,¡ {iui'c{.}rliid::* lft i-lluc*lf:t r' ei a¡.1¿3i¡ Iaci*sedo de
t¡ii;r l*ril* i:rili;¡¡:11 Ll*.",*k.' ;¡ i¿ lficr¡!;asi,.;r;¡ *.]5 r'i' f.i:-rlf i¡cirr,rlá rrl lucitr ilei i*ircr
ji{,\¡l: " r tir: l:i ¡rt 1;¡i::: ;' r r'..r¡: !it', il
o
I
33
d) '{ ias ?4 i¡c'¡as *b-ss¡1's la pr*se;ieia
o ausencia de burbr¿iee de ai¡e d***-c de ios
Du¡ham' Aquelios tubas qué presenter? brii'bu.|as n:b.cs
eo:ifii:nati'a -v* pcdr&r s*. d*tiuttodos. Aquellos
,* l*. positivcs en la prueba
"o-r*ridera
tubos que lJ presenren burbujas se ies
ccnsidera negativo 1' se queda* en re lneubad*rs
pür z+ hárm *aq
tctal de 48 hora-q e* ia incubadcra para esta pn:eba e.r€ corr€s-ponde a ue
di ¡{ la-s 48 lc*r'm vuelva.a obsel-'*'ar la preseneia
o ausencia d,e bwbujas de ai¡e ds:tro de
las tubos Durham. Aquellgs tub+s qne
iresenten burbuja-s se tes c*ns;Cer* pcsitivo_s elr la
prueba ccnfimratir'¿ v podran ser descanl<ics..
Aquellos
les.ccnsidera negativo-en la prr.r*eba .o#rr**uuu !d; Ñ no presente$ burbujas se
y p*<irát ser descr*tados.
f, Anotacic¡,res.
Realice una tabla con seis-coiu$lnas que cor*sponde
aI cornporfamiEnto cie ca-cla r¡no de
lc¡s tubos de cuitivo en la*q difuyentes p:-tieb,as-
Elen:plo:
PRUEBAS * r---- - u B-o s
P-BgrLrNTrvA
24 horas --*--t- "*x
4S horas _L
+
COI{FIRMAl-rV %
?4hc¡ras -----T---%
%
48 horas
árr* esterilizado destapad* boca abajo -v en sentidc contrari* a la corne*€e a una :A^
r'.a,"¿1iJ¿l;;- ;-**l.'' ¿* rs e1a mismo
3c cm r-uego Y
-T:::':.::"3::
$ii -qe tor¡* "i:,:::i:se
la muestra en embalses
a-scendente, tapardo inmedialamelrte
hesta' ma-< G Í$el}ss' una profundidad
sumerge el frasco esterlllzad+ destaparÍo boea ab$r;
iresÉa ia superficie' tapando ei
dc 3O cm -v rápidanrenle se i*rie¡te el frasca -v sJa-.cienrJe
frasca inmediatamente. a A ó,a \
iea:Ba:a1ura { c:enor a 1$ "C }. &
b} *espués que cap-ge la rm¡eatra. debe n:antene:ia abaja
ui'! e;i1''ase esn i}ncs c*bit*s de
tal efbcti-r -o- pafe su iraslado al lebcratono, puede utili;:as
c*¡r lo:rruestra'
lri*lo, ir:égo coiccar dentrc i1*l rr¡isrrc el irasco
"
1l L
qrmryagi ó1 ¡lel nunrero try:lb"l3
:.:^T:tr
-"üi,7*i,r ái1,.,' io cterar*onacrón del nirmero total de bact*rias
pcr 1.:
voiurnen de
ffij,].i,i"
muestra erpresado r*idudes fl;¡-nnarlor¡s de colanias {L;FCllr'i}
"o**
mi
21
seffii*r*"*to*iór, tuuo *rlttiple para miemLrros del gupo1 de los
f,-- -l
"n
colif-r-¡rmes l.a nri*n'¡a ei,rript-eltii* UeS pfutrbas. lo
pt*uniiva' la ccnfirmati"'3 y la final'
presr:nti:'ay ia cc'nhntra*v3' esie uitima si
solo se reailzarár en ia prác',ic.a dtr pr.iebas. la
la nules!,ra ln arnerita
PrEreba presuntiva:
Le serlrr prcporciona,Jos 9 ¿*b*s de culiivos con ei r*edia Ce cultivo laurii triptcsa" a !os'
a-)
cu¿¡les les cr.,iccará lcs sig*ientes ','¡-riúmenes de
nruesÉra:
ltrb*:s ag egllL¡el*- ;t cada unt de elNos. 1{i n{ <ie 1:¿ m*esira^
utiiizenda ia-q
' ¡\ 3 ios tubcs rle
pipe{a:; eseeriií¿a}n-s qr;e !* son s*rninislfí1das. Tape inrnediataürente
culti'.'o rtespués cie agr*g.ar l:i n:u¿slrr¡'
o ¡\ 3 iui;*s agregi:ei*]'¿ria.ja u** ¡Je e11*s- I ¡ni ds ia lr?llesirÍ¡- utili;:ar:do ias'lipetas
'fape inniediatarnenÉe los tubos de cultivc
esie¡.iliza6as q,!e ie son s,-lniinisirada-q.
despues ri* agregar la ¡-¡::i;eslra
, i
¡\ 3 tuSos a¿ireli;el-e. a carirr un* <ie eil¡:.., ¡rri de l* n¡i:eska <iiir-¡ida l.i{1. Esla
estérii' Los net
r{il**¡i¡n se reaiizará ¿::;! r i.:rii: ! m} r}e la rnue*qt¡'a a 9 ml de agua I
r.!* igua cs:éni ie:;er¡¡¡: prcpc.r*it'urt*r"rÜ et'¡ *n 1*b+ d* cul'lir.r-r' Lfc'¿eie bieil' iffil de
¡r'i
la mueslradiiui¿Ía l.l{.} iepre*enti¡ ufi valr¡men ¡!e niuesÉn¡deii"t
bi {}:i*qrre i*s l*lx;s erll li¡ ir:ci¡h¡dr¡ri¡ a 35 "C'
de lc¡s tub¿'s
c! A liis 24 hi¡ras cl-rsen'e i¡¿ prcs*eicia 1¡ ¿ursencie de burbg.ias 'le aire dentrtr
ver flg' 2{i ! -r
$uri¡3*i. Aqr:eli<;s lubr::: i¡u,; prc:ceñl-s* brirl,uu.iix se lcs c*¡'nSidcrrs prls¡liYüs {
pt'i:*i:a C+nfirrt'atl*'a Aq**!icS tub';:; que n6r plcsenien
i,U;:*nxr. i¡¡nreiii¿l¿l;rer¡:,i- ;: i;: p*r 24 !:*r¿ir máS' qUe
L,;rbui::,t 3c l¡3 ¡ri,::Sir-irl:'3 ncg:-!ili* i .ilr r¡i"ltxií:,'!'*:i l:: il':Cub¡u:i''rra
cr;rr*sprir:.j,; ¿¡ ¡-¡¡r t*lal 'r"" .-iii !:lir¡is *r¡ Jll iitcub;¡r^lCfi¿ irllr'a e:la ¡:rr-icira
,J) ,4 ls¡; "lil l¡,::r;¡-r r,,¡¡¿!.,¿;,-:; r,b!;{í...Lir iir ptilseffii-1 i.::¡us*c:r:ie ic h*-rbqii:s rie
ai-'e den{r¿"- ti¿
c) Tap'e, i::¡taediata¡:rente ei fubo de cr¡ltivo que co!?tiene la i"at¡estra 1' e.tr caldo lact*sado de
bilis verde brillante. Lléveic a la incubadcra a 35 "C . Descarfe e! tubo positivo de la
prueba presuntiva.
d) A las 24 horas obsen e la presencia o ausencia de bwbuies de eire dentro de ios fubcs
Durharn. Aquelios tubas que presanten burbujas se ies c*rxidera positivos en la prueba
confirmativa -v podrián ser descartadcs. Aqueltrcs tubos qu.e no pr€seüten burbujas se les
ccnsidera negativc 3' se quedm en la incub¡dora pcr 24 horas mik, que correspontfe a un
total de 48 horas en la incubadora.
d) A las 48 horas vueiva a obser".ar la presencia o ausencia de burtn:j*s de dre dent¡c de
los tubos Durharn. Aqr:ellos tubos que prese$te;l burbujas se les cor.sidera positivos en la
prueba canfirrnatira.v podran ser descartadas. Aquellos tubos que nG presenten burbujas se
ies considera negsiivo en la prueba confin:rafiva y podrán ser descariados.
Anotacio¡¡es:
Realice una tabla con nueve columnas q*e corresponde al eomportamiento de cada wro de
los tubos de cultivo en las diferentes pruebas- para las diferentes volurnenes sembredcs
Eiemplo:
VOLUMEN DE MUESTRA
PRLTEBAS
PRESI-TNTT]íA
24 horas
48 horas
CONFTRh{ATIVA
24 horas +
48 horas T
Datcsrosultantes: I I CI I I 0 1 0 0
Lo cual indica que: de lres lubos ccn l0 n:1, dos result¿r'r¡n positivcs.
de {res tubas con 1 ml" dos resultaron positn'cs
de lres tul-ros con t),1 m¡, unc resultó positivo
Clálculo del Nü{Pi tO¡J ml
En la Tabla "8" ubique el valor del N$'1P1100 ml coruespcndiente al número que dan
reacción F*sitila entre 3 de i0 r¡rl. 3 de I ml -v 3 de t).i mi Para el ejernpio citad+
anteriorrnente este valor serh 2t3
NMP/iü{} ml:28
Si en la tabla "8" no se entilcnüra la combinación obtenida de tubos positivos- eiltsnces
ulilice Ia siguiente fórmt¡la.
NMPll0{iml: ______@_1_l0ir
¡nl de muesLra en lubos negativ*s * m} de mile{lra e¡r todos los tubosi
tr, Ltfr"Jtl:in ".:::?i,:^0,,:l^T l ¡;Ancia o ausencia <!e burbujas cie aire denrro de
$#',ffi1T;*t.:"i"T::*:ii:T:i":F:{ü:T:?H:*3",::#T.*"1i;
':"T:f=::Lí
il#f#.1ff *:ffiT:.,.:_33To,:;d;;;;*&,#,¿-_T_::T,ff
3H3*f_:H:='.{lanesati,a;1;p;;;ñ;rtr;;:?#:::-:::#r3J
F¡"¿¡eba c¡¡afi ¡maÉiva :
y esterilizela con la Eama der mecirero.
nll:*:_:,:,ta fe-1oc1ración
:]-Hiiír*:J: ffi -i*T',- ^::-jlrl Fcaldo .':-"* :?Til.?;sitivc de, a prueba
liTH:'",::-Rr_:11,* :1lvo 3ue 1o,rti"** tactcs"¿" J*;ü;ñ: ffi,"i_J
j-X;"Jjl1"_i-#ñ3?lH?*"0"
"y?.:ll*:,*,*,'1,,".*"ñ,¡#"
;il.1:;ffi :Xi::13 Llévelo a lu t,,cuuxora a 35 "c .
l*:_:"i,Í:_.t*ii3r"
pr.leba presuntiva.
"*"ri1r_ir"T,r-;jfiH"::Í;
$}*f,j:i'i|;:ff,:11Íl.il1.r::-::-o,1r,*:iu deburbuias de aire crenrrc de ros rubos
j#.ffJ;:,i,ff
,'.Tiih,#:.i::,*-::"T"-":"::"ly^r:.o'*:?ff "l :'-*"X*fi *H;
i::T.-';nii'r1^'::i::;T"la^i""¡ú'ñ{G;oÍ.r"HTT":"l"jl',?:::
"ff de.18 horas en
i".,T'$JeTffi,il"i:::%*:*nro*"JJo;ü',uil;*,,*T;:.:"?n?T*i:f;
fotal la incubadora.
lJaÉosresultr¿u:¿es: I I
l-o cual indica que: de lres lubos I 0 i {} I 0 0
ccn I() ml, dos resultarern po*iii"or"
de tres t*bos con I mi- dos rc,sr¡!{aron
de tres rubos ccn {).1 nr}.
ñ;;;:.
{'álcr¡lo rt*l Ni}lpi l0O ¡nt "*o
plli¡r*
,*=_Lá
fr.n la Tabla "*"'ublquc cl
r¡itoi deJ NMp/tii{.} ¡¡¡i c*rresp*ridrenle
rca¿cit¡n posriila erilre :l aj ni:nrero que dan
de lii ¡r¡1. : ,¡* I nil r i ¿* t,-i *¡- para
¡ur{eiii:rn¡e¡r1e *sle varcr será el ejemplc citaclo
?rJ !:sie;;;,;,i,*u,0.-,l"por
r¡'¡lümer,es uilri,rados en ro$ tubos r{} debido a que
son r"r1., ,r.,i .'r¡,rii nir l, -'r, r{} ¡nr: rrnr:0.r
c{}mo ar}a..,ccn .,n ra rabla ll r,eror 1r,r 'os
mr:
tier Nil.{pi iqi{} *¡ -.*i,i *nion*"i a*,,
ia"j'rl:)ll{Xi
r¡:g,. 2.qi)
!¡r c*r¡bin¿¡c¡cin i-¡br*nid¿¡ cic
:;,;:"'i'i,lj;:*,il;1Xi:,::r{:ue¡¡€¡-:r rubus posiri,,os. enronces
NMPi;uiinit ,
.l .lii{¡
li,l-_c.¡slubcsp-cr¡_tt!r:o'¡
mt rlc n:usirr¿ cn rübc:s nesariiilrl;;ü;;,;rii,i*o ,,n:*, r.,, *AorI_
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Fig ltt Prrrebn positir.a
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