UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA LABORATORIO DE

CARRERA DE INGENIERIA MICROBIOLOGIA

QUIMICA Fecha de realización: 29/04/19
Docente: MSc Alejandro Canaza Jorges Fecha de entrega: 6/05/19
Universitario: Andia Sánchez Sergio Grupo: Jueves 12:15 – 13:45
Carrasco Paichucama Jhuly
Rivas Lazarte Neyda
Sánchez Fukushima Camila

Práctica # 7

Extracción de ADN

1. INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula formada por dos cadenas de polinucleótidos unidas por puentes
de hidrogeno. Los nucleótidos que presenta son: la timina, adenina, guanina y la citosina;
las cuales forman los genes, que de acuerdo a la secuencia de orden en que se encuentran
determinan las características biológicas de todo ser vivo. Esta molécula también está
constituida de un azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato (Mogrovejo, Y. 2010).
Fue identificado en el núcleo celular por el investigador F. Miesher en 1869, y desde los
años 40 O. Avery y sus colaboradores descubrieron que el material genético está formado
de ADN (Castellanos, C. 2015).

Los organismos están formados por millones de células, el ADN está presente en todas
las células de estos seres vivos. En las células procariotas el ADN se encuentra disperso
en el citoplasma. Y por el contrario en las células eucariotas este se ubica dentro del
núcleo, donde está asociado con proteínas y ARN. (Betancourt, A. S/A)

La función principal del ADN consiste en transmitir los genes, es decir, los caracteres
biológicos de un individuo determinado, en dichos genes se encuentran grabadas las
instrucciones necesarias para la construcción de cada individuo completo. Siguiendo
dichas instrucciones, cada célula es capaz de sintetizar sus proteínas y de adoptar la forma
y función que corresponde a cada organismo. (Castellanos, C. 2015)

El ADN al ser una molécula larga puede ser visualizada y además al estar en todas las
células de todos los organismos, pude ser extraído con facilidad, para ello se requiere un

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procedimiento que implica la ruptura de las células, la separación del ADN de otros
componentes celulares y por último la precipitación de esta molécula viva (Mogrovejo,
Y. 2010).

En el presente laboratorio se realizó la extracción de ADN de una célula vegetal y una

célula animal, para mirar sus hilos de ADN se realizó la trituración de la sustancia además
de la separación de ella mediante un tampón, esto con una solución de cloruro sódico 2M,
posteriormente se le agrego detergente, esto para romper la membrana nuclear y la
membrana celular y por último se agregó alcohol a la sustancia para asi lograr ver la
separación de los cordones de ADN en la célula animal y vegetal.

2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
 Utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y
vegetal, y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.
3. MATERIALES
 Hígado de Pollo  Alcohol al 96 %
 Mortero  Cloruro sódico 2M
 Vasos de precipitado  Detergente
 Pipeta  Arena
 Probeta  Tela para filtrar
 Microscopios  Bisturí
 Porta y cubre objetos  Cebolla
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Extracción de ADN del Hígado de Pollo
 Con la ayuda de un bisturí se saco los nervios del hígado de pollo
 Posteriormente se trituro el hígado con una cantidad de arena en un mortero
y una vez realizado dicho paso se observó en un microscopio.
 Se añadió 50 mL de agua al triturado, y se removió hasta hacer una especie
de papilla.

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  Después se filtró sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
 Una vez realizado dicho paso se agregó 50 mL de cloruro sódico 2M y a
continuación se añadieron 5 mL de detergente.
 Posteriormente se observó dicha solución en un microscopio.
 Se extrajo 5 mL de la solución y se lo añadió a un tubo de ensayo al cual
se le agregaron después 5 mL de alcohol al 96 %.
 Por último, se agito el tubo de ensayo, observándose así las fibras de ADN.
4.2. Extracción de ADN del tejido vegetal de la cebolla
 Se extrajo un pequeño trozo del catafilo de una cebolla y se lo coloco en
un portaobjetos
 Posteriormente se lo tiño con azul de metileno.
 Por último, se lo llevo a observar al microscopio.

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5. RESULTADOS
5.1. Extracción de ADN del Hígado de Pollo

IMAGEN MICROSCOPIO OBSERVACIÓN

Figura 1: Hígado de pollo y arena
(Objetivo 10x)
Para poder observar en el microscopio la
disgregación del tejido del hígado de
pollo, se colocó el colorante azul de
metileno, debido a que este tiene afinidad
con los ácidos nucleicos y por ende tiñe
el núcleo.
En la figura 1 se observó el material del
tejido disgregado, así también pequeños
puntos azules los cuales corresponden al
núcleo de la célula donde se encuentra el
ADN.

Al añadir cloruro de sodio y detergente al

tejido disgregado se pudo observar con
más claridad los núcleos, debido a que el
cloruro de sodio disminuye la solubilidad
de las proteínas, lo que permite que se
separen más fácilmente del ADN y el
detergente liquido disuelve las grasas o
lípidos, lo cual provoca el rompimiento
de la membrana plasmática y por ende
Figura 2: Hígado de pollo +NaCl
permite la salida del ADN al exterior.
+Detergente (Objetivo 40x)

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 Al añadir alcohol al tejido disgregado, se
pudo observar dos fases, en la primera se
encuentra el alcohol y en la segunda el
tejido, el ADN se encuentra como unas
fibras con un color blanquecino en la
interfase

Figura 3 y 4: Hígado de pollo +

Detergente + NaCl + C2H5OH

5.2. Extracción de ADN del tejido vegetal de la cebolla

IMAGEN DE MICROSCOPIO OBSERVACION
En una capa del tubérculo de la cebolla se
encuentra una membrana llamada
catafilo, el cual al ser transparente se tiñe
con azul de metileno para poder observar
el material genético al microscopio.
En la figura 5 se pudo observar la pared
celular, en la cual existen unos pequeños
puntos azules, que corresponden al núcleo
Figura 5: Tejido vegetal de la cebolla de la célula donde se encuentra el ADN
(Objetivo 4x)

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6. DISCUSIÓN
Según Viña, J. (2018) para obtener material genético de un tejido animal, se requiere
una serie de etapas. Como primera etapa se necesita romper la pared celular y/o
membrana plasmática y así poder acceder al núcleo en el que se encuentra el ADN,
para lo cual en el experimento realizado se utilizó arena. Al colocar al microscopio
(objetivo 10x) el tejido disgregado, se pudo observar unos pequeños puntos azules, los
cuales corresponden al núcleo de la célula.

Según Viña, J. (2018) se utiliza diversas sustancias que ayuden a la obtención de

material genético, tales como cloruro de sodio, detergente líquido y alcohol. El cloruro
de sodio disminuye la solubilidad de las proteínas, lo que permite que se separen más
fácilmente del ADN para poder obtenerlo con mayor pureza.

El detergente liquido tiene como función disolver las grasas o lípidos, las cuales, al
ser componentes principales de las membranas, provocan el rompimiento de estas y
por ende permite la salida del ADN al exterior.

El alcohol es utilizado para poder aislar el ADN de un tejido vivo, esto se debe a que
el ADN es insoluble en alcohol y por ende precipita, provocando así dos fases, en la
primera se encuentra el alcohol y en la segunda el tejido vivo, mientras que hebras de
ADN se encuentra en la interfase, con un color blanquecino. Al colocar hebras de
ADN al microscopio se pudo observar los miles de fibras agrupadas de ADN.

Según García, C. (2014) Al ser la membrana de la cebolla (catafilo) transparente, esta

necesita de un colorante para poder observar el núcleo de la célula donde se encuentra
el ADN, por lo cual se utilizó azul de metilo. Al colocar al microscopio (Objetivo 4x)
se logró observar las membranas y el citoplasma, en las cuales apareció unos pequeños
puntos azules, los cuales corresponden al núcleo de la célula.

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7. CONCLUSIONES
Se logro la extracción del ADN de un tejido animal con la separación de interfaces y
seguidamente la obtención de hebras blancas que corresponden a miles de fibras de
ADN, así también se logró la extracción del ADN de una cebolla en la cual se
observaron las células vegetales y su forma hexaédrica, también se logro diferenciar
la membrana y el citoplasma, además de unos diminutos puntos que corresponden a
los núcleos.
El empleo de colorantes en la observación de células representa una gran ventaja ya
que permite identificar con mayor facilidad las estructuras básicas de la misma,
siempre y cuando se empleen concentraciones bajas, de lo contrario se convierte en
problema porque si el colorante es muy concentrado no deja diferenciar nada en la
célula.
8. CUESTIONARIO
 Investigue la función de algunas purinas en plantas
Químicamente son bases nitrogenadas heterocíclicas. algunas
nucleoproteínas muy conocidas son el material genético de la célula(ADN),
o el ATP, que es una molécula utilizada por la célula para obtener energía,
y que es fundamental para el correcto funcionamiento del sistema nervioso.

Sin las purinas, no sería posible la vida, puesto que no existiría la molécula
del ADN. las purinas pueden ser la adenina, guanina, o su precursor, la
inosina (Botanical, 2015).

 Averigüe sobre la triple y tetra hélice de ADN y sus funciones

ADN triple hélice o ADN-H: posible obtener tramos de triple hélice
intercalando oligonucleótidos cortos constituidos solamente por
pirimidinas en el surco mayor de una doble hélice. Este oligonucleótido se
une a pares de bases A-T y G-C mediante enlaces de hidrógeno tipo
Hoogsteen que se establecen entre la T o la C del oligonucleótido y los
pares A-T y G-C de la doble hélice. No se sabe la función biológica del
ADN-H aunque se ha detectado en cromosomas eucarióticos (UCM, 2014).

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 ADN cuadruplexo: se han obtenido cuartetos de Guanina (ADN
cuadruplexo) unidas mediante enlaces tipo Hoogsteen, empleando
polinucleótidos que solamente contienen Guanina (G). Los extremos de los
cromosomas eucarióticos tienen una estructura especial con un extremo 3'
OH de cadena sencilla en el que se repite muchas veces en tandem una
secuencia rica en Guaninas. Se piensa que el ADN cuadruplexo telomérico
serviría para proteger los extremos cromosómicos de la degradación
enzimática (UCM, 2014).

 Investigue, ¿Qué es el código genético y si existen muchos tipos o es

universal?
El código genético es el conjunto de reglas que define cómo se traduce una
secuencia de nucleótidos en el ARN a una secuencia de aminoácidos en
una proteína. Este código es universal y se encuentra conservado en todos
los organismos vivos. La información genética para el ensamblaje de
aminoácidos se encuentra almacenada en pequeñas secuencias de tres
nucleótidos que en el ARN se denominan codones. Cada codón representa
uno de los veinte aminoácidos empleados en la fabricación de proteínas
(Innovabiología, 2016)

 Indique proteínas transgénicas

Existen muchos productos derivados total o parcialmente del maíz, y entre
ellos la harina es uno de los más consumidos. La harina se produce
directamente del grano, y puede contener algunas trazas de proteínas
codificadas por genes introducidos mediante técnicas de ingeniería
genética (proteínas transgénicas) (Tabima y Chaparro, 2016).
La presencia de proteína derivada de cultivos GM en harinas de maíz se
determinó mediante la técnica de ELISA, utilizando estuches comerciales
tipo "sándwich" fabricados por Agdia. Las determinaciones para detectar
la presencia de cada proteína transgénica, se hicieron por triplicado en los

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extractos de harina provenientes del protocolo previamente seleccionado
(Tabima y Chaparro, 2016).
Se analizaron 27 muestras de harina de maíz, haciendo en cada una la
extracción y cuantificación de proteína soluble (Tabla 2).

Fuente: Tabima y Chaparro, 2016. Detección de proteínas transgénicas

En la Tabla 3 se presentan los resultados de la detección de proteínas

transgénicas en las harinas de maíz evaluadas. Las muestras B2, A3, O3 y
C2 presentaron valores de densidad óptica (D.O.) superiores a 0,2 para la
proteína CP4EPSPS. En cuanto a la proteína Cry1F fue detectada en las
muestras B2, B8, A3, O3, C1 y C2, presentando la harina B2 valores de
D.O. de 2,6, C1SP 2,7 y C2SP 2,9 (Tabla 3) (Tabima y Chaparro, 2016).

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Fuente: Tabima y Chaparro, 2016. Detección de proteínas transgénicas

La harina C2 contiene la proteína Cry1AB en un valor similar al que

presenta el grano de maíz transgénico NK603+MON810. Para la
proteína Cry34Ab1 se realizó ELISA de tipo cuantitativo. Se detectó
presencia en la harina A3 en una concentración de 0,1 pg/mg. En las 19
harinas comerciales evaluadas, no se detectó la presencia del evento de
transformación Cry2A (Tabla 3) (Tabima y Chaparro, 2016).

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9. BIBLIOGRAFIA
 Betancourt, A. S/A Extracción de ADN vegetal y animal. Última modificación: sin
información Online: https://www.monografias.com/trabajos91/informe-
experimento-extraccion-adn/informe-experimento-extraccion-adn.shtml
 Botanical, 2015 Purinas. Última modificación: 22 de abril del 2019. Online:
https://www.botanical-online.com/dietas/acido-urico-lista-alimentos-purinas
 Castellanos, C. 2015. Informe extracción de ADN. Última modificación: sin
información Online:
https://www.academia.edu/17019047/INFORME_EXTRACCION_DE_ADN
 García, C. 2014 Observación de las células vegetales. Última modificación: sin
información Online: https://es.slideshare.net/kathvasquez5/informe-vi-clulas-
vegetales.
 Innovabiología, 2016 El código genético. Última modificación: sin información
Online: https://www.innovabiologia.com/biodiversidad/diversidad-animal/el-
codigo-genetico/
 Mogrovejo, Y. 2010 Extracción del ADN. Última modificación: sin información
Online: https://es.calameo.com/books/001644667dee77767eeb7
 Tabima y Chaparro, 2016 Detección de proteínas transgénicas Última
modificación: sin información Online:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0124-
00642016000300013
 UCM, 2014 Estructura de los ácidos nucleicos Última modificación: sin
información Online: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/02-
Estructura%20de%20los%20%C3%A1cidos%20nucl%C3%A9icos.pdf
 Viña, J. 2018 Extracción casera de ADN. Última modificación: sin información
Online: https://www.aulagenyca.com/extraccion-casera-de-adn/

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