Asilamiento de DNA de guayaba, su caracterización

espectrofotométrica e Hidrólisis de RNA y DNA para la identificación

de bases púricas y pirimídicas por cromatografía en capa fina.
Gutiérrez Ortiz Carlos Arturo Grupo: 3IV1
Hernández de los Santos Rosalba Sección: 3
Instituto Politécnico Nacional, Ingeniería Bioquímica, Manuel Carpio 532, Plutarco Elías
Calles, Ciudad de México, CDMX.

Introducción. organismos vivos, desde las bacterias unicelulares

hasta los mamíferos multicelulares. Algunos virus
Los ácidos nucleicos, y el DNA en particular, son
usan RNA, no DNA como su material genético,
macromoléculas clave en la continuidad de la vida.
pero técnicamente no se consideran vivos.
El DNA lleva la información hereditaria que se
Cuando los nucleótidos se combinan, la cadena
transmite de padres a hijos y proporciona las
resultante se llama polinucleótido, los cuales se
instrucciones de cómo y cuándo hacer muchas
componen de tres partes: una estructura anular,
proteínas necesarias para construir y mantener en
que contiene nitrógeno llamada base
funcionamiento células, tejidos y organismos. Los
nitrogenada, un azúcar de cinco carbonos y al
ácidos nucleicos, macromoléculas compuestas de
menos un grupo fosfato. A diferencia del DNA, el
unidades llamadas nucleótidos, existen de manera
RNA generalmente tiene un a sola cadena. El
natural en dos variedades: ácido
nucleótido de una cadena de RNA tendrá ribosa
desoxirribonucleico (DNA) y ácido ribonucleico
(un azúcar de cinco carbonos), una de las cuatro
(RNA). El DNA es el material genético de los
bases nitrogenadas (A, U, G, C) y un grupo fosfato.

Objetivos.

Aislar, purificar y caracterizar DNA de guayaba. Separar las bases nitrogenadas del DNA y RNA por cromatografía
en capa fina a partir de hidrolizados de los mismos, identificándolos por la propiedad que tienen de absorber la luz
ultravioleta.

Resultados
Espectro característico del DNA
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
-0.1 170 190 210 230 250 270 290 310
Longitud de onda (λ)

Figura 1. Vista superior del frasco

conteniendo DNA de guayaba. Figura 2. Espectro característico del DNA
 Tabla 1. Rf’s calculados para DNA RNA y nucleótidos

Muestra Rf's
DNA 0.25 0.31 0.37 0.70
RNA 0.26 0.32 0.38 0.62
C 0.25
G 0.31
A 0.38
U 0.61
T 0.70

A (260nm) = 0.705

A (280nm) = 0.587

La pureza de la muestra se puede determinar

con la fórmula:
𝐴(260𝑛𝑚)
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 =
𝐴(280𝑛𝑚)
Figura 3. Cromatografía en capa
fina revelada con luz ultravioleta. 0.705
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = = 1.20
0.587

Para conocer la concentración de DNA en la muestra podemos hacerlo a través de una fórmula o también
determinarla mediante el nomograma.
Utilizando la fórmula:
𝐴(260𝑛𝑚)
𝐶= 𝑥 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
22500
0.705
𝐶= 𝑥 5 = 1.566𝑥10−4 𝑔/𝑚𝐿
22500
Utilizando el nomograma y multiplicando el valor obtenido por el factor de dilución tenemos:

[Ac. Nucleico] = 1.11x10-4 g/mL

[Proteína] = 1.85x10-3 g/mL

Discusión.

En la Figura 1 se observan unos filamentos que
parecen enredados o enrollados, los cuales
confirman la presencia de DNA ya que si bien,
este se encuentra en una estructura
superenrollada, al ir desarrollando la práctica,
pudimos romper la pared y membrana celular
que contiene al DNA para lograr aislarlo y
caracterizarlo.
En la Figura 2, se esperaría observar una curva
parecida a una campana angosta, ya que esto
evidenciaría la presencia del DNA sin proteínas y
buena pureza de este. En este caso no fue así y
pudo deberse a la falta de purificación o técnica
de asilamiento, ya que al momento de tomar el
DNA desenrollado se pudo tomar también parte
de las proteínas precipitadas en el frasco.
Aún con la forma del gráfico, se confirma la
presencia de DNA con la absorbancia más alta
que se generó en un rango de 260-280 nm,
característica del DNA por la presencia de
aminoácidos aromáticos.
Y por último con ayuda de la Figura 3 y la Tabla 1,
logramos identificar las bases nitrogenadas
presentes en el DNA, ya que para el Rf de la
Timina (T), se obtuvo un valor de 0.70 (renglón
azul de la tabla) que aparece también con el Rf
del DNA. Y aunque las demás bases nitrogenadas
coinciden con el RNA y DNA, la Timina hace la
diferencia en la determinación, ya que esta es
característica del DNA y no del RNA.
Conclusión.
Se logró caracterizar del DNA de guayaba por
espectrofotometría y también identificar las
bases nitrogenadas del DNA y RNA por
cromatografía en capa fina con la ayuda de luz
ultravioleta.
Se confirma DNA en la cromatografía por la
presencia de Timina.
Bibliografía.
Bohinsky, R. C. “Bioquímica” 5ª Edición Addison-
Wesley Iberoamericana. Argentina. Brasil. pp
227-242 (1991).