UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FCCNM – EAP BIOLOGÍA BIOQUÍMICA I – 2017 PRÁCTICA

Reporte N° 12 Fecha de Entrega: 2017 – 07 – 11

Código, Apellidos y Nombres:
 2015003686, Betancourt Jiménez, Elizabeth
 2015003383, Flores Bancayan, Carlos Alonso
 2015231304, Valencia Velasco, Fernando Gabriel

PRÁCTICA N° 12: CINETICA ENZIMÁTICA III

MATERIALES Y MÉTODOS
 RESULTADOS
EFECTO DEL PH
Se analizó el efecto del pH en el sustrato de almidón, empleando 5 pHs diferentes de 3.6, 5.6, 7.4,
8.5 y 10, las mediciones de absorbancias se realizaron al espectrofotómetro con una longitud de
onda de 640 nm con respecto a un blanco de agua con sustrato.
Tabla 1. Datos para el análisis de Efecto de pH.
DATOS PARA ANALIZAR EFECTO DE pH
Tubo Ph [S]inicial (mg/mL) Absorbancia (S)inical Absorbancia (S)final [S]final (mg/mL) Velocidad de Reacción (mg/mL.min)
1 3.6 0.1 0.678 0.554 0.132 -0.006
2 5.6 0.1 0.393 0.266 0.063 0.007
3 7.4 0.1 0.172 0.154 0.037 0.013
4 8.5 0.1 0.549 0.493 0.117 -0.003
5 10 0.1 0.529 0.487 0.116 -0.003
Nota. Se analizaron 5 tubos estándares con sus respectivos blancos, la concentración inicial se
realizó utilizando la formula Ci * Vi = Cf * Vf en relación al sustrato de almidón, siendo su
concentración inicial de 500 mg/L igual a 0.5 mg/ml, volumen inicial para todas las muestras 0.5
ml, y volumen final de 2.5 ml. La concentración final fue hallada utilizando la formula,
[S] = Fc * ABS, nuestro factor de calibración (Fc), fue de 0.238. La velocidad de reacción fue
hallada con la siguiente formula, [S]inicial – [S]final / Tiempo, el tiempo empleado fue de 5
minutos.

Fig. 1. Se observa que el pH optimo se encuentra cerca del rango de 7.6; en los rangos de pH 3.6,
8.5 y 10 la velocidad de reacción tiende a ser mucho menor, es decir la actividad catalítica se
encuentra por debajo de una condición óptima para la degradación de sustrato.
 EFECTO DE TEMPERATURA
Se analizaron 5 muestras con sus respectivos blancos en 5 temperaturas diferentes de 0, 25, 37,
70 y 100 °C con respecto a la velocidad de reacción.
Tabla. 2. Datos para análisis de efecto de Temperatura con respecto a Velocidad de reacción
DATOS PARA ANALIZAR EFECTO DE T°
Tubo T° [S]inicial (mg/mL) Absorbancia (S)inical Absorbancia (S)final [S]final (mg/mL) Velocidad de Reacción (mg/mL.min)
1 0 0.1 0.504 0.430 0.102 0.000
2 25 0.1 0.468 0.408 0.097 0.001
3 37 0.1 0.485 0.357 0.085 0.003
4 70 0.1 0.462 0.427 0.102 0.000
5 100 0.1 0.455 0.346 0.082 0.004

Nota. La concentración inicial se realizó utilizando la formula Ci * Vi = Cf * Vf en relación al

sustrato de almidón, siendo 0.1 mg/mL para todos los casos. La absorbancia fue obtenida por
medio de espectrofotometría con una longitud de onda de 640 nm. La concentración final fue
hallada utilizando la formula, [S] = Fc * ABS, nuestro factor de calibración (Fc), fue de 0.238.
La velocidad de reacción fue hallada con la siguiente formula, [S]inicial – [S]final / Tiempo, el
tiempo empleado fue de 5 minutos.

Temperatura VS Vel. de Reacción

0.004
0.004
0.003
0.003
Vel. de reacción

0.002
0.002
0.001
0.001
0.000
-0.001 0 20 40 60 80 100 120

-0.001
Temeratura (T°)

Fig. 2. Se observa un aumento gradual de temperatura en relación a la velocidad de reacción

hasta el punto 3 con una temperatura de 37 °C y velocidad de reacción de 0.003 mg/mL.min, este
representaría el punto óptimo de temperatura y un descenso hasta el punto 4, con una temperatura
de 70 °C donde se asume que la proteína empieza a desnaturalizarse por el incremento de
temperatura. El aumento repentino de velocidad de reacción en el último punto con una
temperatura de 100 °C se asume ser el producto de errores independientes a los cálculos
realizados.
EFECTO DE INHIBIDORES
AQUÍ VA LO DE ITALO
 - Tipos de Inhibidores enzimáticos, y como afectan al valor de Km.
Un inhibidor es un efector que hace que disminuya la actividad enzimática, a través de
interacciones con el centro activo y otros centros específicos.
Existen dos tipos de Inhibidores:
 Isostéricos, los cuales ejercen su acción sobre el centro activo
 Alostericos, los cuales ejercen su acción sobre otra parte de la molécula, causando un
cambio conformacional con repercusión negativa en la actividad enzimática
Dentro de los Inhibidores Isostéricos se encuentran los reversibles y los irreversibles el
primero establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo enzima-sustrato o con
ambos, el segundo modifica químicamente a la enzima.
Existen 3 tipos de inhibición reversible:
 I. Competitiva: Aumenta el Km y no cambia la Vmax.
 I. No Competitiva: No afecta el km, sin embargo disminuye la Vmax.
 I. Acompetitiva: Disminuye el km y la Vmax. (Gutiérrez, A; 2012).

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Gutiérrez, A. (2012). Inhibición Enzimática. Perú: Universidad Nacional Federico Villareal. pp
1-10.