IHEM

CONICET
DEHYDROLEUCODINE INDUCES A TRANSIENT
ARREST OF HeLa CELLS IN MITOSIS.
Costantino VV, Amaya MC, Bertoldi MV, Losinno AD y López L.A.
Laboratorio de Citoesqueleto y Ciclo Celular. IHEM-CONICET.
Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo. Mendoza, Argentina
vcostantino@fcm.uncu.edu.ar.
Introducción: Hay un gran esfuerzo en busca de agentes que puedan frenar el ciclo celular con la idea de bloquear la proliferación celular descontrolada. Actualmente hay un
gran interés en compuestos provenientes del reino vegetal. Las lactonas sesquiterpénicas (SL) son los componentes activos de una gran variedad de plantas medicinales y
presentan un amplio espectro de actividades biológicas, tales como: actividad anti-inflamatoria, citotóxica y actividad anti-tumoral. Deshidroleucodina (DhL) es una SL, aislada
de Artemisia douglasiana Besser, una planta del Centro Oeste Argentino. En este trabajo nos propusimos determinar el efecto de DhL en la capacidad proliferante de células
HeLa en cultivo. Para ello determinamos: el grado de proliferación, la viabilidad, la distribución en las fases del ciclo celular y la capacidad clonogénicas de células cultivadas en
presencia de DhL.

Resultados

1) DhL inhibe la proliferación y afecta la viabilidad 3) DhL genera una demora en la entada a
de células en cultivo mitosis y un aumento en la duración de la misma
A Células totales B
Células viables A
0µM
Concentración DhL

5µM
Concentración DhL
10µM
0 µM 20 µM

20µM Figura 1: A) Número de células

*
totales y número de células
30µM * viables en un cultivo de 48 h
sometido a 0-30 µM DhL. B)
0 10 20 30 40 Aspecto de las células en cultivo.
N° de células x 104 *p ≤ 0,05.

2) DhL induce arresto transciente en la fase G2/M

B C
del 1er ciclo celular y un arresto permanente en
0µM
Profase 10µM

G1 del 2 ciclo
20µM
do 0µM
Concentración DhL

0µM
Metafase
a Telofase
10µM **
A 0µM 10µM ** 20µM ***

0 hs 4 hs 8 hs 12 hs 16 hs 24 hs 48 hs 0µM
20µM ** Citocinesis 10µM **
20µM *
0 5 10 0 2 4 6
Duración MItosis (hs) Duración Fases Mitosis (hs)

20µM Figura 3: Momento de ingreso a mitosis y duración de las fases. A) Imágenes de

células indicando el inicio del tratamiento (00 00), el ingreso a mitosis (profase)
0 hs 4 hs 8 hs 12 hs 16 hs 24 hs 48 hs y a las distintas fases (metafase, anafase, telofase y citocinésis). B) Duración de
la mitosis en los distintos tratamientos. C) Duración de las fases de la mitosis. *p ≤
0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001. Barra 20µm

4) DhL disminuye la eficiencia de clonado

B 0µM
Fase G1 Fase S Fase G2/M 20µM
80 80 60
* * *
* 5µM
* * * *
60 60
% de células

Concentración DhL

* 40
* *
40 40 * 10µM **
20
20 20 Figura 4: Capacidad de
20µM *** formar colonias de células
0 0 0 tratadas con 5-30 µM DhL
0 4 8 12 16 24 48 0 4 8 12 16 24 48 0 4 8 12 16 24 48
Hs 30µM
por 48hs. % de colonias
***
formadas respecto al control
Figura 2: Análisis de las distribución de células en las fases del ciclo celular: A) ( 0 µM DhL) ** p ≤ 0,01, *** p
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Citometría de flujo de células tratadas (0-20 µM DhL) 48 hs. B) Distribución de ≤ 0,001.
Supervivencia Clonogénica
células en cada fase. *p ≤ 0,05.
(% Control)

Conclusión
Los resultados indican: 1.DhL inhibe el crecimiento de células HeLa de manera dosis dependiente. 2. DhL indujo un arresto transciente en G2/M del primer ciclo,
retrasando el ingreso de las células a M y mantuvo las células en las fases de mitosis por mas de 24 h. 3. Cuando las células completaron la fase M, quedaron
arrestadas en G1 del nuevo ciclo, perdieron la capacidad de formar colonias y presentaron características de células senescentes. Se interpreta que DhL inhibe la
proliferación de células HeLa en forma permanente y podría ser de utilidad para el tratamiento de tumores.