DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE

NITRÓGENO POR EL MÉTODO MICROKJELDAHL

Fecha de Realización:
13 de agosto 2019 RESUMEN
Fecha de Entrega:
27 de agosto 2019

Palabras Clave:
Microkjeldahl, proteína,
Valoración,
Estandarización.

Para la estandarización del HCl, se realizaron

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS los Siguientes cálculos:
- Preparación de HCl
En la práctica se realizó la determinación de
0,02 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙 36,46 𝑔 𝐻𝐶𝑙 100 𝑔 𝑠𝑙𝑛
nitrógeno en una muestra de clara de huevo de 50 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝑥 𝑥 𝑥
marca doble A (AA), mediante el método de 1000 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 1 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙 37 𝑔 𝐻𝐶𝑙
Microkjeldahl, y se obtuvieron los siguientes 1 𝑚𝐿
datos: 𝑥 = 0,08 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝑐𝑜𝑛𝑐.
1,17 𝑔
Tabla 1. Masa de los reactivos - Masa de Na2CO3 para estandarizar
0,02 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3
Masa (g) INCERTIDUMBRE 15 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝑥 𝑥
1000 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 2 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙
Masa de la 103,98 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 100
1.15 ± 0.01 𝑥 𝑥
muestra
1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 99,5
Masa de la
mezcla 3:1 = 0,016 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3
0.21 ± 0.01
CuSO4- Para la estandarización del HCl, se usó el
MgO segundo punto de equivalencia, utilizando asi
Masa del
Na2S04
2.50 ± 0.01 como indicador el naranja de metilo mediante
Masa del la siguiente reacción:
0.81 ± 0.01
H3BO3 2HCl (aq) + Na2CO3 (aq)→ H2CO3 (l) + 2NaCl (aq)
Masa del Reacción 1: Estandarización HCl
0.0175 ± 0.0001
Na2CO3
Masa del
5.04 ± 0.01 Donde se gastó 16,5 mL de HCl y luego se
NaOH
Masa del
1.02 ± 0.01
calculó la molaridad de HCl estandarizada así:
Na2S2O3 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 2 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙
0,0175 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 𝑥 𝑥
105,98 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3
1 1000 𝑚𝐿
Tabla 2. Volumen de los reactivos. 𝑥 𝑥 = 0,0200 … 𝑀
16,5 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 1𝐿
Volumen
5.00mL ± 0.01
H2SO4
Volumen
16.50mL ± 0.01
HCl
A partir de los datos anteriores, se calculó su
respectiva incertidumbre de la siguiente
manera:
 𝑆𝑀 2 𝑆𝑚𝑐 2 𝑆𝑉 2
( ) = ( ) +( )
𝑀 𝑚𝑐 𝑉
𝑆𝑀 2 0,0001 2 0,05 2
( ) = ( ) +( ) acuerdo a la siguiente reacción:
𝑀 0,0175 16,50
𝑆𝑀 2
( ) = 4,1835𝑥10−5
𝑀
𝑆𝑀 = 0,000129
Por tanto, la molaridad de HCl estandarizada
queda de la siguiente manera:
𝟎, 𝟎𝟐𝟎𝟎 ± 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟏 𝑴
Luego se prepararon 20 mL de una solución 4%
de H3BO3 para recoger ahí en amoniaco
obtenido en la destilación de acuerdo al
siguiente cálculo:
4 𝑔 𝐻3 𝐵𝑂3 100 𝑔
20mL* * = 0.804 g
100 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 99.5 𝑔 𝐻3 𝐵𝑂3
No se realizaron más cálculos puesto que al
momento de agregar la solución salina al micro
destilador, el amoniaco obtenido se volatilizó y
no se pudo realizar la titulación, por tanto
tampoco se pudo realizar la cuantificación de la
proteína en la clara del huevo.
Análisis y discusión de resultados
Durante la práctica se determinó el porcentaje
de nitrógeno en una muestra de clara de huevo
de la marca doble A (AA) que contiene 25,4%
de proteína, a partir del método de valoración
microkjeldahl, el cual es un procedimiento
sencillo que no requiere equipos especiales y
fácilmente adaptable a un considerable número
de muestras. (1)
El método constó de diferentes etapas en el cual
se hizo uso de diferentes montajes y
compuestos. Lo primero que se realizó fue una
digestión en la cual se agregó al balón
microkjeldahl la muestra de clara de huevo
junto a una mezcla 3:1 CuSO4-MgO que actúa
como catalizador acelerando el proceso (3) , y la
sal Na2SO4 anhidro para elevar el punto de
ebullición de la mezcla, permitiendo así
someter a mayor temperatura el sistema y de
ésta forma disminuir el tiempo de digestión (4) y
finalmente añadiendo H2SO4 , el cual oxida al
C y el H , y reacciona con el N dependiendo
del estado de combinación en la proteína, de
CaHbNc + H2SO4 → aCO2 + bH2O + cHN4HSO4
Reacción 2. Reaccion quimica general de una proteína
con H2SO4, y las letras a, b y c indican las realciones
molares.
ya que por una parte si éste se encuentra en
aminas o amidas será convertido en el ion
amonio , pero si está presente en grupos nitro,
aza o azoxi, tienden a producir el elemento u
óxidos del elemento, que bajo las condiciones
de acidez y altas temperaturas del sistema serán
perdidos, lo cual puede evitarse pre tratando la
muestra con un agente reductor que forma
amidas y aminas (5), siendo esto una posible
causa de error en los resultados al no conocer la
forma en que se encuentra en la proteína el
nitrógeno de la muestra.
Para la segunda etapa se dejó enfriar la muestra
digestada en el balón microkjeldahl y luego se
vertió el contenido en el micro destilador para
iniciar el proceso de destilación después de
agregar a esta la solución alcalina de NaOH-
Na2S2O3 para producir el amoniaco buscado tal
como se muestra en la siguiente reaccion:
(NH4 )2SO4 + 2NaOH ∆ → 2NH3 (g) + Na2SO4
+ 2H2O
Reacción 3. Reacción de la muestra digestada con la
solución alcalina.(2)
Produciéndose aquí el principal error, y error
por el cual no se tuvo éxito en la práctica
realizada al no haber dejado atemperar la
solución antes de adicionar el álcali, lo cual
provocó una reacción violenta, debido a que en
el sistema de reacción, la velocidad de
generación de calor fue superior a la que esta se
elimina, produciendo un descontrol térmico,
porque la velocidad de autocalentamiento
incrementa exponencialmente con la
temperatura y la disipación solo aumenta
linealmente.(6) Éste fallo llevó a salpicaduras al
verter la solución que impidieron un rápido
sellado del equipo de microdestilación sencilla
con el tapón, perdiéndose en gran cantidad el
NH3 liberado en forma gaseosa, lo que impidió
el viraje del indicador que contenía la solución
de H3BO3 que recibiría el destilado, tal como
debia observarse siguiendo la reacción:
NH3 + H3BO3 → NH4H2BO3 → NH4+ + H2BO3-
Reacción 4. Reacción del amoniaco con el H3BO3(2)
En el proceso de destilación pueden presentarse
errores especialmente en el montaje, uno de
ellos al no asegurarse que la manguera que se
encuentra adaptada al extremo del condensador
esté bien sumergida en la solución de H3BO3 y
otra posible causa un incorrecto tapado del
microdestilador, en ambos ocurriendo errores
debido a la pérdida del NH3 que se encuentra en
estado gaseoso.
cuidados muy rigurosos, puesto que el método
está propicio a cualquier error y por ello no
obtener el resultado esperado.
La clave de este método está en la digestión de
la muestra con ácido, en donde se puede
acelerar el proceso con la adición de
catalizadores y sustancias que elevan su punto
de ebullición.
Para obtener un resultado optimo y efectivo se
deben tener muy en cuenta factores en las
diferentes etapas tales como temperatura,
hermeticidad del condensador, etc.
Referencias
(1) Skoog, D. A.; West, D. M.;
Holler, J.; Crouch, S. R.
Fundamento de Química
Anlitica; 2015. pp 388.

(2)
Finalmente, si se hubiera tenido éxito en el paso Owusu-Apenten, R. Food
anterior se realizaba una valoración de Protein Analysis; 2010. pp 10
neutralización, en la cual se tituló la base
(3)
conjugada del ácido bórico H2BO3- con la Villegas, E. Ortega, E.I. Bauer,
solución de HCl estandarizada(7) tornando de J. R. Métodos Químicos Usados
nuevo la solución de color azul-verdoso a rosa, En El CIMMYT Para
determinando así de manera directa la cantidad Determinar La Calidad de
de NH3 recibido de acuerdo a la siguiente Proteína de Los Cereales; 1985.
reacción: pp 6-7.
(4)
H2BO3- + HCl → H3BO3 Owusu-Apenten, R. Op cit, p. 9.
Reacción 5. Reacción de titulación(2)
(5)
Despues de realizado el procedimiento y tener Skoog, D. Op cit, p. 389.
una nula efectividad podemos decir que a pesar
(6)
de ser el método kjeldahl un procedimiento tan Calvet, S. Reacciones químicas
efectivo para la determinación de N, inclusive exotérmicas. Instituto Nacional
utilizado como referencia para nuevos de Seguridad en Quìmica de
métodos,(1) en la experiencia del laboratorio España; 2000, pp 2-4.
mostró ser práctico para la determinar la
(7)
presencia del elemento , pero no una adecuada Harris, D. C. Equilibrio Ácido-
cuantificación. Base Monopróticos y
Polipróticos. Análisis químico
cuantitativo 2007. pp 110-112

Conclusiones
A pesar de ser un método muy efectivo para
cuantificación de proteinas, el método
microkjeldahl se debe realizar con unos