FUNCIONALIDAD DE MEMBRANA CELULAR

cell membrane functionality

Angie Assia.C,Eric Palmieri.S,Oscar Sierra.S,Maria del pilar Arias.A

Universidad de Sucre, Departamento de Biología, Facultad de Educación y

Ciencias. Fisiología Animal. Campus Puerta Roja. Sincelejo. Colombia.

Abstract

The objective of this practice was to identify factors that affect the integrity of the
membranes specifically of blood and sperm cells.for this they were used blood
samples and sheep semen fresh, collected in the farm "El perico" of the University
of Sucre. Semen and blood characteristics were evaluated both macroscopic and
microscopic.It was observed that the color of the semen was white-milky or pale
creamy, indicating that it was in good condition; In addition, with the completion
of extended blood and sperm with eosin and Chinese ink, blood cells
(erythrocytes) and sperm cells (sperm cells) could be observed in more detail ,
thus being able to differentiate the sperm that were dead thanks to the fact that
they take the color of eosin. Finally, certain saline solutions were added to semen
samples deposited in 3 ependorff tubes, in order to observe and analyze what
type of solution was presented in each sample (hypertonic, isotonic, hypotonic)
according to the conditions in which the cells were shown sperm.

Keywords: Semen, blood, Sperm, Eosin, Macroscopic, Microscopic.

 Resumen

El objetivo de esta práctica fue identificar factores que afectan la integridad de

las membranas específicamente de las células sanguíneas y espermáticas. para
ello se utilizaron muestras de sangre y semen de ovino frescas, colectadas en la
granja "El perico" de la universidad de sucre. Se evaluaron características
seminales y sanguíneas tanto macroscópicas como microscópicas. Se pudo
observar que el color del semen era blanco-lechoso o cremoso pálido, lo que
indica que se encontraba en buenas condiciones; además con la realización del
extendido de sangre y esperma con eosina y tinta china se pudo observar con
más detalle las células sanguíneas (eritrocitos) y las células espermáticas
(espermatozoides), pudiendo así diferenciar los espermatozoides que se
encontraban muertos gracias a que estos toman la coloración de la eosina.
Finalmente se agregó ciertas soluciones salinas a muestras de semen
depositadas en 3 tubos ependorff, con el fin de observar y analizar qué tipo de
solución que se presentaba en cada muestra (hipertónica, isotónica, hipotónica)
según las condiciones en que se encontraban las células espermáticas.

Palabras Clave: Semen, sangre, Espermatozoides, Eosina, Macroscópico,

Microscópico.

Introducción

La membrana de la célula animal se compone principalmente de una capa doble

constituida de fosfolípidos y proteínas que se encuentran integradas a ésta, a dicha
composición se le ha dado el nombre de mosaico fluido por la manera en que las
proteínas actúan en la membrana. Una de las funciones más importantes de la
membrana celular es el transporte de moléculas ya sea cargadas o no pues esto ayuda
a la estabilización del potencial de membrana en la célula, si el potencial electroquímico
intra y extracelular es cero se puede decir existe equilibrio lo que significa “balance” más
no igualdad, y es alcanzado cuando ese potencial electroquímico se equilibra. (1)

La fisiología estructural de una membrana está directamente relacionada con la

proporción y tipo de moléculas que conforman a esta (lípidos, proteínas y glúcidos) de
tal modo, la membrana de los eritrocitos de rata por ejemplo se conforma de un 50 %
de lípidos, 40 % de proteínas y un 10 % de glúcidos. Dicha proporción es similar y la
más común entre las membranas plasmáticas de todas las células eucariotas animales,
siempre con algunas excepciones (2).
El objetivo de esta práctica fue identificar factores que afectan la integridad de las
membranas específicamente de las células sanguíneas y espermáticas. para ello se
utilizaron muestras de sangre y semen de ovino frescas, colectadas en la granja "El
perico" de la universidad de sucre.

Materiales y métodos.

La metodología utilizada en la ejecución de la práctica del laboratorio, se basó

en la observación y el análisis de los procesos que ocurren en la membrana
dos tipos de células animales (células somáticas y células sexuales)
observadas con la ayuda de un microscopio óptico.

preparación de las muestras. El montaje se realizó sobre portaobjetos

previamente sometidos a un proceso de termorregulación utilizando una plancha
térmica, con el fin de conservar las muestras lo más frescas posible.

células sexuales. Este ensayo se dividió en 3 observaciones donde se utilizó

una muestra de semen ovino, para la primera observación se tomó una medida
de 0.5µl con la ayuda de una micropipeta seguido se realizó el respectivo
montaje al microscopio siendo observado en los objetivos 5x (sin
cubreobjetos),10 y 40X(con cubreobjetos) respectivamente posterior a ello se
realizó la segunda observación la cual se trató de un montaje donde se tomó la
misma medida de semen pero esta vez se le agregó 0,5 µl de eosina y 0,5 µl de
tinta china para realización un extendido sobre un portaobjeto creando una fina
película de la muestra que fue colocado sobre la plancha térmica para evaporar
la humedad luego fue observada sin cubreobjetos en los objetivos mencionados
y para la tercera observación, que fue con el fin de entender el funcionamiento
de la membrana, se tomaron tres medidas depositadas en tres tubos Eppendorf
individualmente: la primera con un volumen de 4 µl a esta se le añadieron 450 µl
de solución salina al 0.9%, la segunda medida fue de 50 µl y se le agregaron
450 µl de agua destilada y la tercera muestra de 5 µl y se le añadió 225 µl de
solución salina más 225 µl de agua destilada, posteriormente de las muestras de
cada tubo fue tomada una medida de 0.5µl y observadas en microscopios
distintos en el objetivo de 40X.

células somáticas. Para este ensayo se utilizó una muestra de sangre de ovino
y al igual que las dos primeras observaciones del ensayo anterior se tomando
0.5µl con la ayuda de una micropipeta y se realizó el respectivo montaje al
microscopio siendo observado en los objetivos 5,10 y 40X respectivamente
posterior a ello se realizó otro montaje donde se tomó una segunda medida de
0.5 µl y se le agregó 0,5 µl de eosina y 0,5 µl de tinta china para realización un
extendido sobre un portaobjeto creando una fina película de la muestra que fue
colocado sobre la plancha térmica para evaporar la humedad luego fue
observada sin cubreobjetos en los objetivos mencionados.

Resultados

Imagen 1. Muestra de semen de ovino (5x) Imagen 2. Muestra de sangre de ovino (5x)

Imagen 3. Extendido de sangre con eosina y tinta Imagen 4. Extendido de esperma con eosina y
tinta china.(40x) china.(40x)
Imagen 4. Eppendorf 1: 450 μl de solución salina Imagen 5. Eppendorf 2: 50 μl de semen y
al 0.9 % 450 μl, agua destilada.

Imagen 6. Eppendorf 3: 5 μl, 225 μl de sln salina

(+-) 225 μl de agua destilada

discusión

para estudiar La morfología espermática , se han empleado diferentes técnicas

dentro de las cuales se encuentra la tinción con eosina-nigrosina ,debido a que
la membrana de los espermatozoides evita el paso de tinciones al interior de la
célula, por tal razón se puede identificar cuales espermatozoides se encuentran
vivos o muertos puesto que cuando un espermatozoide se encuentra vivo
(Imagen 1), no deja pasar ningún tipo de colorante, mientras que los muertos
(Imagen 4) ,lo absorben.(3)

En cuanto a las células sanguíneas, se reconoce que la sangre es responsable

de importantes funciones como la respuesta inmunológica, transporte de
nutrientes, gases y desechos metabólicos para ser eliminados a través del
hígado y riñón, entre otros. En el extendido sanguíneo (Imagen 3), se pudo
observar la morfología de los eritrocitos, la cual puede variar por estados
fisiológicos. La morfología de los eritrocitos es una parte importante de la
evaluación del extendido de sangre, por lo que se debe incluir una descripción
con respecto a esta. En términos macroscópicos un extendido de sangre debe
ser de color rosa o purpura. En el microscopio los eritrocitos deben tener un color
anaranjado o rosa. Los extendidos deben realizarse de la mejor manera posible
para que no se presenten problemas al momento de identificar las células y de
evaluar su morfología. (4)
Los glóbulos rojos, son las células que se encuentran en mayor proporción
dentro del torrente sanguíneo. Transportan el oxígeno y distribuyen nutrientes a
través del organismo, transportan hormonas, eliminan productos de desecho
y mantienen el cuerpo en balance natural (por ejemplo, los niveles de pH y la
temperatura.

El tubo de ependorff 1, que contenía 450 μl de solución salina al 0.9 % presentó

una solución isotónica, es decir que contenía la misma concentración de solutos
que los espermatozoides. En la figura 4 se puede observar que los
espermatozoides permanecen sin cambios ya que no existe una diferencia
considerable en las concentraciones de agua o sal, se podría decir que el
movimiento de agua hacia adentro y afuera de la célula es bastante similar.

El tubo de ependorff 2, que contenía agua destilada presentó una solución

hipertónica, es decir, que las células empezaron a perder agua del citoplasma
hacia la solución salina del exterior, produciendo así un encogimiento. Este
proceso es conocido como crenación y la destrucción de la célula se produce por
deshidratación. (Imagen 5)

El tubo de ependorff 3, que contenía 5 μl, 225 μl de solución salina (+-) 225 μl de
agua destilada, Presentó una solución hipotónica En la que la concentración de
soluto es mayor dentro de la célula que fuera, por lo que habrá una ganancia
neta de agua en las células, que provocara un aumento de la presión intracelular
y las células se verán hinchadas. (Imagen 6)
 Referencias

1.Cunningham J, klein B. Bases moleculares y celulares de la regulación

fisiológica. en: Steven R. Heidemann. fisiología veterinaria. 5º edición.
Barcelona. editorial Elsevier; 2014.

2.Megías M, Molist p, Pombal M. Atlas de histología animal y vegetal

departamento de biología funcional y ciencias de la salud. facultad de biología.
universidad de Vigo. 2017

3.Delgado B. Evaluación espermática de semen de ovino tratado por la técnica

de gradiente de densidad. Universidad Ricardo palma.2013.

4. Álvarez Mendoza, F; Tamez cantú, E; Lazcano, D.; Setser, K.;Mociño Deloya.

Morfología de las células sanguíneas y perfil leucocitario de crotalus polystictus.
Redalyc. Universidad autónoma de nuevo león
Monterrey, México. 2011.

Preguntas

A) ¿Que observó en la primera muestra?

Al ser observada en un objetivo de poca proyección y sin cubre objeto lo cual no
permitió una visibilidad óptima, sólo se pudo visualizar en el borde de la muestra
la concentración o la densidad de espermatozoides.

B) ¿Qué le paso a las células al entrar en contacto con cada una de las
soluciones? ¿por qué?
Al someter las células espermáticas a distintas soluciones se apreciaron cambios
en cuanto a su morfología, teniendo en cuenta la concentración de soluto que
poseía cada solución. en la solución que contenía solución salina y agua
destilada, no se observaron cambios en la forma de las células estudiadas pues
estas se encontraban en un equilibrio, suponiendo que no existe ningún
movimiento neto del agua, donde no ocurre pérdida ni ganancia de esta.
las que estuvieron sometidas a una solución que contenía solución salina ocurrió
un cambio de tamaño o hinchamiento en la célula, debido a la entrada excesiva
de agua hacia en interior de la célula.
por último, las células que estuvieron en contacto con la solución que contenía
agua destilada tuvieron un cambio considerable en cuanto a la forma que
poseían que presentaban, donde se observó que perdieron tamaño debido a la
alta concentración de soluto en el medio exterior con respecto al medio
intracelular.
C) ¿Cuáles de las soluciones usadas fueron hipotónicas, hipertónicas e
isotónicas para los eritrocitos?
teniendo en cuenta los cambios en la morfología que presentaron las células
espermáticas se manifiesta que la solución con agua destilada es hipotónica, la
solución salina al 0.9% es isotónica y la solución de agua destilada más solución
salina se comportó como un medio hipotónico.

D) ¿En qué solución sucedió hemólisis de los eritrocitos y por qué?

las células que presentaron hemólisis fueron aquellas que estuvieron en contacto
con la solución que contenía 450 μL de agua destilada, que se comportó como
una solución hipotónica, a lo cual las células al encontrarse en un medio con baja
concentración de soluto tratan de equilibrar el medio intracelular y extracelular
generando así un flujo de entrada neto hacia el interior de las células
ocasionando la expansión de sus citoplasmas hasta en punto de romperse.

E) ¿Porque ocurrió la crenación?

porque las células fueron sometidas una solución hipertónica con alta
concentración de soluto, donde liberan agua de su citoplasma para tratar de
equilibrar el medio exterior ocasionando un encogimiento en su tamaño y cambio
en su morfología.

F) ¿Que indican los resultados acerca de la concentración de soluciones en el

plasma sanguíneo?
El plasma sanguíneo se comporta como una solución isotónica que mantiene un
equilibrio entre el medio extracelular e intracelular y a su vez tiene una capacidad
amortiguadora lo que permite la eliminación de ácidos y bases producidos por el
metabolismo manteniendo así el pH dentro de un margen adecuado.

G). para que se utilizó la tinta china y eosina en la observación de los dos tipos
de células?
esta técnica se basa en la exclusión de la eosina por parte de las células intactas
mientras que a las murtas o aquellas cuya membrana plasmática este dañada
absorben el color rojo de dicho colorante, mientras que la tinta china es utilizada
como una tinción de contraste para facilitar la visualización de células vivas no
teñidas.