BIOTECNOLOGIA

Fundamentación científica y ponencia argumentativa

Presentado por:
Diego Fernando Bermúdez Medina
Código: 1062083900
Grupo: 11

Presentado a:
Fedra Lorena Ortiz

Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD)

Escuela de Ciencias Básicas Tecnología e Ingeniería
Ingeniería de Alimentos
Popayán Cauca
09-03-18
 Actividades a desarrollar parte 1.

1. Realice el laboratorio virtual N. 1. Estudie los conceptos clave: Crecimiento

microbiano, curva de crecimiento, modelos matemáticos y ejemplo, luego realice el
procedimiento y responda las preguntas del cuestionario del laboratorio.

CRECIMIENTO MICROBIANO

CURVA DE CRECIMIENTO
MODELOS MATEMATICOS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

EJEMPLO
 CUESTIONARIO

 ¿Qué fases de crecimiento puede diferenciar en la práctica?

 Fase de latencia.
 Fase de aceleración positiva.
 Fase exponencial.
 Fase de aceleración negativa.
 Fase estacionaria.

 ¿Explique el comportamiento de la gráfica, desde el punto de vista metabólico?

En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las células sintetizan las enzimas
necesarias para la actividad metabólica que deben llevar adelante Cuando se hacen
mediciones del número de células en distintos tiempos dentro de esta fase, el valor no cambia
sustancialmente. En cambio, interiormente las células trabajan activamente adaptando el
equipo enzimático al medio de cultivo. La bacteria se prepara para hacer uso de los nutrientes
que este medio le aporta, por lo tanto es la fase de adaptación al medio, con aumento de la
masa celular pero no del número de células. La edad del inóculo va a influir en el tiempo de
latencia en el medio fresco debido a la acumulación de materiales tóxicos y a la falta de
nutrientes esenciales dentro de la célula durante el crecimiento anterior. En general, inóculos
viejos alargan la fase de latencia, Pasado este período, el cultivo entra en la denominada fase
de crecimiento exponencial, donde la velocidad de crecimiento es máxima. La velocidad de
crecimiento que alcanza un cultivo, depende del tipo de microorganismo que se trate y
diversos factores ambientales como son la temperatura, el pH, oxigenación, la velocidad de
crecimiento comenzará a disminuir hasta hacerse nula cuando alcance la fase estacionaria,
ya que ha sufrido cambios en la composición y concentración de nutrientes entre el cultivo
del inóculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la regulación de la actividad
enzimática esta fase se presenta por agotamiento del suministro de algún nutriente esencial o
por acumulación de productos metabólicos que sean tóxicos. También puede ser por la
disminución de la oxigenación o cambios en las condiciones de pH del medio de cultivo
(acidificación o alcalinización): En esta fase se equilibran el número de células nuevas con
el número de células que mueren.
Por último, el cultivo entra en la fase de muerte, en la que el número de células que mueren
se va haciendo mayor. La pendiente de esta fase puede ser más o menos pronunciada de
acuerdo al tipo de microorganismo de que se trate. Suelen presentarse pendientes menos
bruscas cuando el microorganismo presenta alguna forma de resistencia (esporas, glicocalix).

 ¿En la gráfica es posible observar todas las fases de crecimiento? Explique su

respuesta.

Si, ya que se muestra desde el inicio de inoculo que es la fase de latencia y hasta la fase donde
se da la muerte y lisis masiva, la fase estacionaria.

 Investigue otros métodos con los cuales se puede determinar la curva de

crecimiento.

Para determinar la curva de crecimiento microbiano se describen los siguientes métodos

divididos en dos grupos:

Métodos directos:
 Recuento del número de células en una cámara Thoma.
 Peso seco celular.
 Determinación de nitrógeno o de proteínas totales.
 Determinación de DNA.

Métodos indirectos:
 Recuento de colonias en placa.
 Recuento sobre filtro de membrana.
 Consumo de oxígeno.
 Liberación de dióxido de carbono.
 Concentración de un enzima constitutivo.
 Decoloración de un colorante.
  Incorporación de precursores radiactivos.
 Medida de la turbidez.

 ¿Cuál es la aplicación industrial de conocer la curva de crecimiento de un

microorganismo?

La microbiología industrial “Biotecnología blanca” está dedicada a la utilización comercial

de microorganismos e incluye procesos que tienen gran importancia económica, ambiental y
social.

 ¿Qué entiende por absorbancia?

Se define como la intensidad de la luz que sale e ingresa de una muestra permitiendo una
longitud de onda específica y que es pasada por una muestra. Esta depende de la
concentración y grosor de la muestra que se esté analizando, este proceso es realizado en el
equipo llamado espectrofotómetro.

 ¿Por qué es necesario utilizar una solución de blanco, cada vez que se hace una
nueva lectura en el espectrofotómetro?

Lo correcto es preparar un blanco o control que contenga todos los ingredientes de la reacción
menos el metal. Este blanco medido contra el agua nos dará un cierto valor positivo que
tendremos en cuenta en el cálculo final.

El resultado correcto será:

b) color de la muestra – color del blanco (control) = lectura incógnita.

¡Ahora sí!, este valor expresa la verdadera cantidad de metal presente en la muestra.

El blanco se define como la base que permite lograr ver la colorimetría que da el cambio en
la muestra.

 ¿Qué es lo que mide realmente el espectrofotómetro, y como se relaciona esto

con las fases de crecimiento microbiano?

Mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia (una medida de la luz transmitida a
través de la suspensión). Por supuesto, hay que realizar una curva estándar para relacionar
los valores de A con la masa bacteriana en una muestra problema.
2. Una vez realizado el laboratorio virtual y siguiendo el ejemplo Calcule el valor
de g (tiempo de generación) y de k (Velocidad de crecimiento) en un experimento
de crecimiento en el que se inoculó un medio con 𝟑 𝒙 𝟏𝟎𝟔 Células /ml de E. Coli
y que después de un período de latencia de una hora creció exponencialmente
durante 𝟖 horas, alcanzando una población de 𝟖, 𝟒 𝒙 𝟏𝟎𝟗 células / ml (5 puntos)

𝐶𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑒 𝑒𝑙 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑔 (𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛)

𝑁 = 𝑁2𝑛
𝑁 = # 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
𝑁0 = # 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
𝑛 = # 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠
𝑙𝑜𝑔2 = 0.301

(𝑙𝑜𝑔𝑁 − 𝑙𝑜𝑔𝑁0 )
𝑛−
𝑙𝑜𝑔2
Reemplazando se obtiene que:

𝑙𝑜𝑔(8.4 ∗ 109 ) − 𝑙𝑜𝑔(3 ∗ 106 )

𝑛−
𝑙𝑜𝑔2

(9.924) − (6.477)
𝑛−
0.301

𝑛 = 11.452 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛

Teniendo el número de generaciones reemplazamos en la siguiente formula.

𝑡
𝑔=
𝑛
8
𝑔=
11.452

𝑹𝑻𝑨: 𝑔 = 0.699 ℎ𝑜𝑟𝑎𝑠 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛

Teniendo el tiempo de generación (g) calculamos k (velocidad de crecimiento)

aplicando la siguiente formula.

𝐼𝑛2
𝑘=
𝑔
Reemplazando se obtiene

0.6931
𝑘=
0.699

𝑹𝑻𝑨: 𝑘 = 0.992 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜.

 3. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y
dé un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las
bases moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envés de
primarios.

Metabolitos secundarios Metabolitos primarios

Producidos durante la fase estacionaria son algunos
de los más comunes e importantes metabolitos de
interés industrial.
Son sustancias naturales que no son vitales para el
organismo que las produce.
Moléculas de bajo peso molecular que intervienen
como productos finales o intermediarios en las
distintas rutas metabólicas.
Participan en la nutrición y en los procesos
fisiológicos básicos.

Se consideran menos abundantes que los Parte de la duplicación de un gen relacionado con
metabolitos primarios y con frecuencia se un metabolito esencial.
encuentran en células u órganos especializados.
Se producen durante el crecimiento normal del
No son indispensables para la supervivencia microorganismo, pueden ser intermediarios o
inmediata de una célula o individuo pero si de la productos finales de vías metabólicas esenciales
especie. para el crecimiento.

Regulan interacciones plantas con otros Normalmente se producen en gran abundancia en

organismos empleando compuestos químicos. la fase logarítmica.

Ejemplo: Mentol, resinas, morfinas, antibióticos. Ejemplo: los azucares, aminoácidos y ácidos
nucleicos.
 Los metabolitos secundarios se deben a la
producción durante la fase estacionaria ya que
estos son algunos de los más comunes y más
importantes a nivel industrial.

 El metabolito secundario presenta claras

diferencias entre un organismo y otro.

4. De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio de un esquema

las etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de
los pasos.
 5. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el entorno de
conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el
escaldado desde el punto de vista de la aireación, la esterilización y el control del
proceso de fermentación. ¿Por qué están importante la estabilidad en un
fermentador industrial?

El mantenimiento de un ambiente aséptico y unas condiciones aeróbicas son, probablemente,

los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los fermentadores más
ampliamente utilizados a nivel industrial están provistos de mecanismos de agitación,
dispersión y aireación así como de sistemas para el control de la temperatura, pH y formación
de espuma.
En los reactores de tipo "air lift“, el mismo aire inyectado promueve la agitación.
Básicamente consiste en dos cilindros concéntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo
el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una circulación de líquido ascendente en
el compartimento interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado.

Factores fisicoquímicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales

1.- Oxígeno
2.-Temperatura
3.- pH
 Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya que
produce los siguientes efectos en las tres fases

a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio

líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que
se encuentra en disolución.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las
células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos
niveles de oxígeno y nutrientes. Impedir la formación de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies
de refrigeración del fermentador

6. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde

diferencie los tipos de fermentación industrial y los mecanismos de obtención de
productos fermentativo.

TIPO DE CONCEPTO PRODUCTO

FERMENTACION
Proceso biológico de fermentación en ausencia de Etanol, 𝐶𝑂2
Fermentación oxígeno, microorganismo que procesa hidratos de
alcohólica carbono. Ejemplo: vino, cerveza.

Proceso por el cual por medio de la glucosa se Lactato

Fermentación láctica obtiene energía en condiciones anaeróbicas.
Ejemplo: yogurt,
cuajada, Kumis.

Conversión de los glúcidos en acido butírico por Blutilerglicon, 𝐶𝑂2

Fermentación acción de bacterias clostridium butyricom en
butírica ausencia de oxígeno. Ejemplo:
medicamentos en
jarabe y cosmético.

7. En la ova sobre fermentación. Identifique los factores que pueden alterar la

producción de enzimas de interés económico a partir de microorganismos en un
proceso industrial, explique a través de un ejemplo cada uno de ellos.
Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireación y de la humedad,
por ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los cultivos en
medio líquido, profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes controles mediante
métodos modernos y reducen los riesgos de contaminación. Además se prestan mejor a las
operaciones de extrapolación y de optimización necesarias para el paso del fermentador
piloto de laboratorio al fermentador industrial.

Los factores que pueden afectar la producción de enzimas a partir de un proceso industrial
son:

 La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la hidrólisis
de macromoléculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con, frecuencia se
desconocen, el efecto global que se busca involucra, generalmente, la utilización de un
tipo preciso de enzima.

 El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable según las enzimas; algunas de
ellas, como la proteasa alcalina aún son activas a pH = 10, en tanto que las enzimas
fúngicas funcionan aún a pH = 3.

 El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder

disponer de enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas
conservan en parte la esterilidad del medio de fermentación.
 ACTIVIDADES A DESARROLLAR PARTE 2.
PONENCIA CIENTÍFICA.

Realice una ponencia científica: Estudie la tutorial unidad I – biotecnología de las enzimas,
cuyo link se encuentra en el foro de la Unidad 1. En dónde además de una breve
contextualización del tema encontrará un problema, en el que se han planteado tres hipótesis
que podrían explicar el fenómeno. A partir de la hipótesis escogida construya un texto
científico, de acuerdo al Modelo de Toulmin.

A. Plantee la Hipótesis. De acuerdo a lo leído escoja una de las tres hipótesis que se plantean
para explicar el fenómeno. (Recuerde que debe tener en cuenta los datos que se le dan en
el problema)

Hipótesis 3. Las variaciones en la actividad enzimática se deben a las diferencias del pH

final del medio de cultivo.

B. Analice la evidencia. Para ello, realice el laboratorio virtual 2, tome los resultados
obtenidos, para responder la pregunta uno que se plantea en el tutorial. A continuación,
lea detenidamente los documentos, los artículos científicos relacionados sobre el tema,
en especial “Inhibidores de la alfa amilasa en diferentes especies vegetales” cuyo link se
encuentra en las referencias complementarias del contenido de la unidad uno para escoger
su hipótesis.

¿Cuál de los microorganismos es el más efectivo?

Después de realizado el laboratorio # 2 y una vez aplicados todos los procedimientos de

operación el microorganismo que mostro más afectividad en su producción de biomasa
correspondió al número 2 debido a la presencia de mayor cantidad de producción de biomasa.
¿Cómo podría sustentar científicamente su propuesta?

Al concluir la totalidad del laboratorio # 2 poseemos los datos arrojados por los 3 caldos de
cultivos es sin dudad que el microorganismo # 2 fue el que en promedio genero la mayor
cantidad de biomasa arrojando los siguientes datos: Replica # 2: 28.80g, replica # 3: 31.50g.
Pero en la réplica # 1 el microorganismo # 2 no obtuvo el mayor resultado. Este arrojo 16.80g
de biomasa.
El microorganismo # 2 tuvo un resultado de 77.1g de biomasa, concluyendo así que fue este
el cultivo de que en promedio genero la mayor producción de amilasa.

ESTABLEZCA LA GARANTIA; Bases cientificas

El Ph es un factor fisicoquímico el cual puede desnaturalizar potencialmente una encima, por

lo tanto, se debe garantizar en los cultivos y en los reservorios de enzimas un Ph contante
durante el almacenamiento para así evitar que los enlaces intermoleculares de las enzimas se
lleguen a romper, y así no cumplan con su función de descomposición, de este modo no
modificaría el sustrato. Tenemos que el inhibidor se ubica en el sustrato sobre el cual va
actuar de la enzima e inhibe la formación del producto. En el caso de la inhibición
competitiva, la enzima compite con el inhibidor. En los sistemas biológicos es de vital
importancia la interacción de inhibidor, muchos de los organismos usan los inhibidores para
controlar el crecimiento o controlar la generación de diversas macromoléculas.

A. Esquema teórico de la formación de los productos por parte de una enzima X sobre
un sustrato Y.
B. Inhibición de la función encima, muestra como el sustrato se bloquea teóricamente.
RESPALDE LA GARANTIA.

La fermentación es un proceso bioquímico en el cual actúan diferentes bacterias las cuales

se han seleccionado para la utilización en sistemas de producción industrial. Existen diversos
métodos de fermentación basados en microorganismos, procesos que en la naturaleza se dan
de manera automática. En la industria se usan microorganismos para la elaboración de
diferentes productos como las diferentes biomasas. Los microorganismos cumplen con la
función de degradar algunos sustratos para generar productos de uso comercial e industrial.

La actividad enzimática está directamente ligada a funciones fisicoquímicas tales como el Ph

y la temperatura entre otras.

El Ph es uno de los factores más importantes que hacen posibles las raciones en la
fermentación, en diferentes cultivos, el cuidado de parámetros de Ph aseguran una correcta
formación de los productos deseados, la mortandad de los microrganismos está asociada a
un aumento o una disminución del Ph, esto es producto de la acumulación de las sustancias
de desecho de los microorganismos.1

‘’Los cambios fuertes de temperatura a los cuales son sometidas las células, desde la
temperatura de conservación a 4ºC hasta la temperatura del proceso de fermentación a 65ºC,
lo que probablemente causan un grado de estrés considerable ocasiona una disminución en
la producción de la enzima´´ 2

‘’La α-amilasa con valores de pH óptimo más alcalinos (8,0 y 9,0), hechoque se corresponde
con la alta sensibilidad a valores de pH ácidos. Estos resultados indican que la digestión de
los carbohidratos ocurre fundamentalmente en medio alcalino’’ 3

SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2

Fuente de carbono Harina de Yuca (10 g.L-1) Harina de trigo (10 g.L-1)

Fuente de Harina de Frijol (5 g.L-1) Harina de Sangre (5 g.L-1)

hidrogeno

Mezcla de K (1 ml.L-1) K (1 ml.L-1)

micronutrientes

Resultados de las muestras.

 Medio de cultivo Temperatura de pH final medio UA/enzimática
incubación de cultivo

M1 30°C 5.9 5.4

M1 35°C 5.4 4.6

M2 30°C 5.9 13.3

M2 35°C 5.2 14.2

Análisis

Muestras Temperaturas PH final Análisis

M1 y M2 30°C M1=5.9 Las dos muestras que contienen la misma

temperatura y pH final obtienen una variación
M2=5.9 diferente. A una temperatura ambiente se
puede dar mayor crecimiento.

M1 Y M2 35°C M1=5.4 Aunque las dos muestra se incuban a una

misma temperatura el resultado final es un PH
M2=5.2 final diferente por tanto su variación
enzimática en los resultados se muestra más
alta la de la M2 a un 14.2

En otras investigaciones realizadas con respecto al Ph en cuanto a la afectación enzimática.

Concluyen en que el Ph presenta variaciones en cuanto aumenta el tiempo con respecto a la
producción de la biomasa, se ha demostrado un aumento gradual del potencial de hidrogeno,
esto se corrobora con mediciones externa de los cultivos. Por lo tanto, así se ajuste un buffer
inicial, siempre tiende a aumentar el Ph. Algunas hipótesis sugieren que este incremento no
solo se debe a los desechos de los microrganismos si no que estos pueden usar otras fuentes
de carbono.
 ENCUENTRE LAS POSIBLES EXCEPCIONES.

 Puede que la variación no solo se presente por cambios en temperaturas y PH de

condiciones externas, existen diversos factores fisicoquímicos que alteran tanto el Ph
como la temperatura, algunas reacciones químicas involucran aumentos de temperatura
debido a la cinética de sus partículas. En particular, los cultivos deben monitorearse para
tratar de corregir estos aumentos. En teoría no es posible cambiar la cinética delas
moléculas ahí presentes, pero se puede modificar la temperatura exterior.

 Dependiendo del sistema, pueden acumularse sustancias de desecho, las cuales pueden
aumentar la acidificación del medio, esto daría como resultado la mortandad en los
cultivos por la subida de Ph.

 El error humano es la manipulación es las muestras es un factor que está latente en

cualquier momento, estos factores son en su mayor parte negativos, pero en ocasiones
han sido el punto de inicio de nuevos descubrimientos.

CONCLUYA.

Posiblemente las Variaciones en la actividad enzimática está dada por lo cambios bruscos de
temperatura y Ph al final de cada cultivo, esto vine dado por los enlaces iónicos los cuales se
ven afectados por el aumento de Ph, este aumento provoca variaciones es la estructura nativa
y hace que la enzima no se comporte de la misma forma.
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

- Ortiz, F. (2012). OVA de Fermentaciones. Universidad Nacional Abierta y a Distancia.

Recuperado de http://hdl.handle.net/10596/

- Bioquímica y biología molecular en línea http://laguna.fmedic.unam.mx. Visitada el

día 8 de marzo del 2018.

- Plataforma Stadium unad, laboratorio de biotecnología. Visitada el día 8 de marzo del

2018.

1
- Producción de biomasa y enzimas ligninolíticas por Pleurotus ostreatus en cultivo
sumergido Gricelda K. Guillén-Navarro1, Facundo J. Márquez-Rocha2 y José E.
Sanchez-Vázquez1 1 El Colegio de la Frontera Sur (ECOSUR) Visitada el día 8 de
marzo del 2018.

- 2
Producción De Α-Amilasa Con Células Libres E Inmovilizadas De Thermus sp.
Sarmiento VC, Vargas DH, Pedroza AM, Matiz A, Poutou RA.* Laboratorio de
Biotecnología Aplicada. Bogotá, D.C., Colombia. Visitada el día 8 de marzo del 2018.

- 3
Caracterización de la actividad α-amilasa en algunos espáridos mediterráneos. I.
Fernández, F. J. Moyano, M. Díaz y T. F. Martínez Departamento de Biología Aplicada.
Universidad de Almería. Visitada el día 8 de