Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
1
ÍNDICE
Unidad 2: Célula:
Práctica No. 2: Microscopía
Práctica No.3: Célula: Crenación, Hemólisis, Plasmólisis y
Turgencia.
Práctica No. 4: Permeabilidad selectiva del eritrocito.
Práctica No. 5: Tejidos vegetales y Aislamiento de cloroplastos.
Unidad 3: Genética
Práctica No. 6: Acción de lisosomas.
Práctica No. 7: Mitosis y Meiosis.
2
OBJETIVOS
La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo
dar herramientas al estudiante para comprender las interacciones bioquímicas,
genéticas que se llevan a cabo en la célula y desarrollar su pensamiento científico
y crítico respecto a las relaciones que se dan en la Biología celular y Molecular.
3
INTRODUCCIÓN
El estudio de las ciencias biológicas siempre ha estado acompañado del uso del
microscopio; su uso contribuyó en la formulación de la teoría celular. Hooke estudió
las células de la superficie de una hoja, y las paredes celulares del corcho,
consideradas por primera vez como unidad del organismo. Durtrochet escribió que
todos los tejidos orgánicos estaban formados por células globulosas pequeñísimas
de adhesión simple. Schleiden dijo: “Todos los organismos están compuestos de
células”; Virchow dijo: “Donde haya una célula, debió haber antes una célula
precursora”. Los detalles microscópicos de la célula se hicieron evidentes al mejorar
el diseño del microscopio, de tal manera que para el siglo XIX se lograron identificar
casi todas las estructuras o componentes de la célula, las cuales actualmente
pueden describirse con el uso de diferentes tipos de microscopios; sin embargo, el
microscopio de luz es el más utilizado, permitiendo observar la estructura básica de
la célula. Con el microscopio compuesto, se pudieron apreciar organismos vivos
cuya existencia era desconocida para los primeros investigadores. Los
microscopios están formados por tres sistemas fundamentales: 1) el sistema
mecánico, que es el sostén de los sistemas complementarios y que permite el ajuste
del punto focal y las dioptrías; 2) el sistema óptico, que permite magnificar a
diferentes grados la muestra observada y 3) el sistema de iluminación, que permite
iluminar y concentrar los haces luminosos en el punto de interés, así como regular
la intensidad de la iluminación. Esta guía de laboratorio de “Biología Celular” se
incluye experimentos y actividades básicos que por principio debe conocer el
estudiante. La información contenida permite vincular los aspectos teóricos con las
actividades prácticas propuestas. Aunque esta práctica cumple con las actividades
propuestas, es importante que el estudiante profundice sobre algunos temas
sugeridos. La biología celular y molecular es una disciplina básica apoyada en
ciencias básicas y dan coherencias al entendimiento desde la biología, bioquímica
y genética a los distintos fenómenos celulares. El estudio de las propiedades de la
célula permite comprender el funcionamiento y la constitución de las estructuras y
las interacciones celulares, las aplicaciones de este conocimiento a desarrollo de
biotecnológicos.
4
DESCRIPCIÓN DE LA
ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 1
“BIOSEGURIDAD”
Introducción
Objetivo
Conocer las normas de bioseguridad en el laboratorio.
Procedimiento:
1. Normas de Bioseguridad
5
Usar guantes para manipular muestras y cultivos de
microorganismos, evitar contaminar el área de trabajo y los
implementos personales (esfero, libros, apuntes);
descartarlos cuidadosamente en la caneca roja.
6
Descontaminar las áreas de trabajo antes de iniciar la práctica
de laboratorio, cada vez que se derrame una sustancia y, una
vez terminada la práctica.
Descartar todo el material contaminado en los recipientes
destinados para ello.
Lavarse las manos luego de manipular cultivos, muestras,
animales y, antes de abandonar el Laboratorio.
Conocer las reglas del uso y cuidado de todos los equipos.
Leer y entender los pasos de cada procedimiento antes de
proceder a realizarlo.
Preguntar al docente cualquier duda sobre los procedimientos
a seguir.
No permitir el ingreso de personas ajenas a las áreas de
trabajo.
Notificar de inmediato al docente cualquier accidente.
7
El docente le indicará la manera adecuada de colocar, usar y retirar todos
y cada uno de los elementos de protección (bata, anteojos, mascarilla
respiratoria o tapabocas, guantes, etc.) a utilizar en el laboratorio.
EQUIPO CARACTERÍSTICAS DE
PELIGRO EVITADO
SEGURIDAD
Abertura trasera
Bata Contaminación de ropa
Cubren la ropa de calle
Lentes resistentes a los
Gafas de
Impactos impactos
seguridad
Protección Lateral
De látex, vinilo o nitrilo,
Contacto directo con
aprobados para uso
Guantes fluidos y/o
microbiológico, desechables
microorganismos
Protección de las manos
Varios diseños disponibles
Tapabocas/Masc
Inhalación de aerosoles Desechables
arillas
De cara entera o media cara
4. Lavado de manos.
8
Frotar la punta de los dedos de la mano derecha contra la
palma de la mano izquierda, haciendo un movimiento de
rotación y viceversa.
Colocar las manos debajo del chorro y dejar que corra el agua,
hasta eliminar completamente el jabón.
Secar perfectamente las manos con toallas desechables y con
la misma cerrar la llave.
Ahora sus manos son seguras.
Fuente:
http://www.who.int/gpsc/information_centre/gpsc_lavarse_manos_post
er_es.pdf?ua=1
9
2. Manejo de residuos
10
3. Uso de Reactivos.
4. Uso Equipos.
Microscopio:
11
Balanza:
Espectrofotómetro:
Estos equipos son muy delicados por lo cual es conveniente leer las
instrucciones de uso antes de ser utilizados.
12
Se pude calentar el material de contención, como: vaso de
precipitado, balón, tubos de ensayo, erlenmeyer.
Descartar el material de vidrio roto en el contenedor dispuesto para
tal fin.
Presentación de resultados
Cuestionario:
13
DESCRIPCIÓN DE LA
ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 2
“MICROSCOPÍA”
Introducción
14
Su sistema óptico posee un lente condensador (que concentra la luz
proveniente de la fuente), una serie de lentes objetivos (que recogen los
rayos difractados por la muestra), con diferentes poderes de aumentos
(usualmente 4x, 10x, 40x y 100x) y uno o dos lentes oculares (cerca de
los ojos) que generalmente proporcionan un aumento de 10x. Los
términos de aumento se expresan en x, de tal forma que un aumento de
10x (“diez por”) significa que una imagen está aumentada 10 veces el
tamaño original. El aumento total del microscopio es el producto de los
aumentos del lente objetivo más el lente ocular.
Objetivo
Procedimiento:
15
1. Funciones del Microscopio
16
2. Realización de Montaje húmedo
Encienda el microscopio.
Coloque el objetivo de menor aumento 4X.
Baje la platina completamente girando el tornillo
macrométrico.
Tome la lámina con la preparación.
Coloque la lámina con la preparación sobre la platina
sujetándola con las pinzas.
Procure que la preparación quede centrada, girando el tornillo
para desplazamiento del carro móvil.
Gire el tornillo Macrométrico en sentido contrario a las agujas
del reloj para subir la platina hasta el tope.
Debe hacerlo mirando directamente y no a través del ocular,
ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparación.
Cierre o abra el diafragma hasta una posición intermedia,
accionando su perilla en sentido contrario a las agujas del
reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado
tenue.
Inicie la observación con el objetivo de 4X.
17
Mirando a través de los oculares, separe lentamente el
objetivo de la preparación con el tornillo macro métrico en
sentido de las agujas del reloj hasta ver la imagen.
Cuando se observe algo nítido la muestra, gire el tornillo
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Gire el revólver.
Coloque el objetivo de 10X
Visualice con el objetivo de 10X y detalle las estructuras
Gire el revólver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con
el tornillo micrométrico y detalle las estructuras.
Al finalizar las observaciones, apaga la luz del microscopio y
deje el microscopio en posición de reposo; es decir con el
objetivo de menor aumento y la platina en su posición más
baja.
18
En esta preparación se muestran los glóbulos blancos, glóbulos
rojos y plaquetas coloreados con colorante de Wright.
Cuando termine limpie el objetivo de inmersión con un papel
especial para óptica y alcohol isopropílico.
Deje el microscopio en objetivo de menor aumento.
5. Comprobación de los poderes o capacidades del microscopio
Presentación de resultados
19
Cuestionario
20
DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD
PRÁCTICA No. 3
CÉLULA: CRENACIÓN, HEMÓLISIS, PLASMÓLISIS Y TURGENCIA
Introducción
Objetivo
Material
• Microscopio compuesto.
• 6 portaobjetos y 6 cubreobjetos.
• Vasija con agua destilada.
• Pipeta Pasteur.
• Solución de NaCl al 0.6%
• Solución de NaCl al 0.9%
• Solución de NaCl al 1.2%
• Solución de NaCl al 10%
21
Células sanguíneas
Células vegetales
Presentación de resultados
22
Cuestionario
23
DESCRIPCIÓN DE LA
Introducción
Objetivo
Material
24
Reactivos
Procedimiento
Nota
- Los datos obtenidos servirán para realizar la curva estándar para
Hemólisis de la sangre, graficando % de Transmitancia contra % de
Hemólisis.
*Posteriormente en un vaso de precipitados coloque 29.5 ml de una de
las soluciones
25
(Oxalato de amonio, Metanol, Fructosa, Butanol, Glicerol o Ácido cítrico),
en seguida adicione 0.5 ml de solución “STOCK”, agitando suavemente y
llenando una celda con la mezcla. Ponga la celda en el espectrofotómetro
calibrando de antemano y tome las lecturas cada 60 segundos hasta los
5 minutos o bien hasta obtener una lectura de 100% de Transmitancia.
Presentación de resultados
Cuestionario
26
DESCRIPCIÓN DE LA
“Acción de lisosomas”
Introducción
Objetivo
Material
• Microscopio compuesto Porta y cubreobjetos.
• Pipeta de un ml.
• Mechero de Bunsen
• 6 tubos de ensaye 15 x 150 mm.
• Gradilla.
• Pinzas
• Tela de asbesto.
• Tripie Recipiente para baño María.
• Pipeta Pasteur con goma.
• Termómetro.
• Hoja de papel aluminio.
27
Reactivos
• Solución de Rojo Congo al 0.4%
• Material biológico
• Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.)
• Cultivo de ciliados (Paramecium spp.) por cada equipo.
Procedimiento
1.- En tres tubos de ensayo, coloque en cada uno de ellos un mililitro del
cultivo de levaduras. Un tubo se pone en el refrigerador durante 10
minutos. Otro se coloca en el baño María a 30ºC, y el último se tapa con
papel aluminio y se pone en un baño María hirviendo durante 10 minutos.
28
Cuestionario
1.- Tomando en cuenta tus observaciones experimentales, ¿Qué ocurre
con las células de levadura dentro de los ciliados y por qué?
2.- Discuta el mecanismo que ocurre al calentar las levaduras y al agregar
el colorante.
3.- Realice en esquemas, el origen y las funciones de los diversos tipos de
lisosomas.
29
DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA No 6
“Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos”
Introducción
Materiales y Reactivos
• Lámpara con foco. Mortero y pistilo
• Pipeta de 10 ml.
• Pipeta de un ml.Vaso de precipitados de 100 ml. Tijeras.
30
• 6 tubos de ensaye 15mm X 150 mm.
• Gradilla.
• Embudo.
• Bolsa de hielo.
• Sobre de gasas.
• Papel milimétrico.
• Charola metálica.
• Pipeta Pasteur con goma.
• Cubeta con agua destilada.
• 3 espectrofotómetros.
• 6 celdas para espectrofotómetro.
• Una centrífuga clínica.
• 6 tubos para centrífuga.
• Solución de NaCl 0.35 M en Buffer de fosfatos 0.02 M, pH 8. (buffer
salino)
• Solución de DCPIP 0.3 M.
Material biológico
Hojas de espinacas o de acelgas (3 o 4 por equipo)
Procedimiento
31
El sobrenadante obtenido se coloca en tubos de ensaye fríos. Se
desecha el precipitado. Se coloca de nuevo el sobrenadante en
tubos de centrífuga y se centrifuga a 3000rpm durante 5 minutos.
Al final de este tiempo se descarta el sobrenadante y el precipitado
se suspende en buffer salino frío utilizando en total 2 ml por cada
tubo.
De esta manera se tiene preparada la suspensión de cloroplastos
intactos.
3
(este tubo
4
Tubo 1 2 no se
(Blanco)
expone a la
luz)
Solución de
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
DCPIP 0.3 M.
Buffer Salino 9.5 ml 9.5 ml 9.5 ml 9.5 ml
Suspensión
cloroplastos con 0.2 ml __ __ __
SHOCK osmótico
Suspensión de
Cloroplastos __ 0.2 ml 0.2 ml __
intactos
32
el espectrofotómetro obtenga las lecturas de absorbancia a 450 nm
de los tubos 1, 2 y 3 al tiempo de 0 minutos de exposición a la luz.
5. Enseguida exponga los tubos 1, 2 y 4 a la luz, colocándolos a una
distancia aproximada de 15 cm del foco durante un minuto. Al
término de este tiempo tápelos nuevamente con papel aluminio y
proceda a realizar las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos
1, 2 y 3 en el espectrofotómetro ya calibrado como en el paso 4.
6. Repita el paso 5, cuatro veces más, es decir, los tubos son
expuestos a la luz por un tiempo total de 5 minutos, en intervalos
de un minuto de exposición.
Presentación de resultados
Tubo/Tiempo de
0 min 1 min 2 min 3 min 4 min 5 min
exposición
Tubo 1.
Suspensión
cloroplastos con
SHOCK osmótico
Tubo 2.
Suspensión de
Cloroplastos
intactos
(expuesto a la
luz)
Tubo 3.
Suspensión de
Cloroplastos
intactos (no
expuesto a la
luz)
Tubo 4. Blanco
33
2. Realice una gráfica de absorbancia (450 nm) contra tiempo de
exposición a la luz en papel milimetrado.
Cuestionario
34
DESCRIPCIÓN DE LA
ACTIVIDAD PRÁCTICA No 7
“Meiosis y Mitosis”
Objetivo
Material
• Microscopio.
• Aceite de inmersión.
• Acetocarmín
• Metanol,
• Bisturí
• Micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis.
Procedimiento
1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o rosácea y
lave con abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de
sustancias con las que frecuentemente han sido tratadas para inhibir o
retardar la germinación de las raicillas.
2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla
sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede
inmersa en el agua.
3. Póngalo a germinar a 25°C o a temperatura ambiente durante 3 días,
al cabo de estos aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos
3 o 4 cm. de longitud.
4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual
es necesario rellenar con agua cada 24 horas.
5. Cuando las raíces tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes
de raíz de aproximadamente 2 – 3 mm a partir del ápice.
35
6. Colóquelas en una lámina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante
acetocarmín.
7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con ayuda
de la punta de una lanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos
sin romperlo, de modo que la raíz quede extendida.
8. Use papel absorbente para retirar el exceso de colorante realice una
suave presión, evitando que él cubre objetos resbale. Si la preparación
está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se
realice.
9. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para
evitar que se seque y de esta manera conservar la preparación durante
varios días.
10. Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el
objetivo de 10x e identifique las células.
11. Cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los
núcleos y cromosomas en color rosáceo – morado.
12. Ubique el objetivo de 100 x y escriba sus observaciones anotando
las diferencias en cada uno de los aumentos mencionados.
13. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga
células en interfase y células en división y dentro de estas, las
diferentes etapas de la mitosis.
Presentación de resultados
Cuestionario
36
¿Cuántos cromosomas poseen las células en mitosis?
¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis?
37
BIBLIOGRAFÍA
Pérez Avila, J., Valenciaga Rodríguez, J. L., Acosta, A., Nicolau Mena, O.,
Turcios Tristá, S. E. & Navaroli Fernández, F. (2012). Mecanismos
de acción hormonal a través de receptores ubicados en la
membrana celular. Retrieved 11/27, 2013, from
http://www.cpicmha.sld.cu/hab/pdf/vol11_1_05/hab08105.pdf
38