Cinética dos

Processos
Fermentativos
Cinética dos Processos Fermentativos
• O estudo de um processo fermentativo
consiste inicialmente na análise da evolução
dos valores de concentração de um ou mais
componentes do sistema de cultivo em função
do tempo de fermentação;
• Microrganismo ou biomassa (X);
• Produtos do metabolismo (P);
• Nutrientes ou substratos (S)
Cinética dos Processos Fermentativos
• Os valores experimentais de concentração
(X, P e S), quando representados em função
do tempo, permitirão traçar as curvas de
ajuste e assim poder determinar suas
concentrações instantâneas:
• X=X(t);
• P=P(t);
• S=S(t).
Cinética dos Processos Fermentativos

Curvas de crescimento de biomassa, de consumo de

substrato e de formação produto
Cinética dos Processos Fermentativos

Fases de crescimento de biomassa

Cinética dos Processos Fermentativos

Fases de crescimento de biomassa

Cinética dos Processos Fermentativos
• Dentre os produtos formados escolhe-se para
o estudo cinético o produto de interêsse
econômico e o substrato limitante;
Cinética dos Processos Fermentativos
• Quando determinados somente os valores
finais e iniciais destes parâmetros, não se
pode dizer que houve um estudo cinético;

• Para um estudo cinético de fato , é necessário

determinar os valores intermediários, para
definir os perfis das curvas e o modelo
matemático do processo.
COMO MEDIR A BIOMASSA?

CÂMARA DE NEUBAUER

Ao microscópio – aumento de 400X

COMO MEDIR A BIOMASSA?
COMO MEDIR A BIOMASSA?
• Matéria seca;
• Medidas óticas.

Separação de células por filtração

 COMO MEDIR A BIOMASSA?

Fonte Filtro Amostra Detector Leitura dos

de luz contendo sensível resultados
células á luz em absorbância
microbianas ou transmitância
no
espectrofotômetro

DETERMINAÇÃO DE CRESCIMENTO MICROBIANO POR

TURBIDIMETRIA
COMO MEDIR A BIOMASSA?

CURVA-PADRÃO PARA O CÁLCULO DE CRESCIMENTO

MICROBIANO POR TURBIDIMETRIA
 COMO MEDIR A BIOMASSA?

Coloração com azul de metileno para evidenciar células viáveis de leveduras

células azuis estão mortas;
células sem coloração são células vivas
 DIFICULDADES
• O microrganismo promove tranformações dos componentes
do meio em produtos, graças a milhares de enzimas;

• As sínteses são controladas pelo meio externo, portanto

identificar que medidas são realmente representativas do
processo de transformação é muito dificil, mesmo em
sistemas em que o sistema é bastante homogêneo;

• Muito mais complicado é quando o sistema for constituído

por cultura mista, meios com sólidos em suspensão, como por
exemplo em tratamentos de efluentes; (DQO e DBO);

• Sistemas de fermentação onde as células são filamentosas,

células imobilizadas, células em meio semi-sólido;

• Substratos parcialmente insolúveis, como hidrocarbonetos

líquidos ou sólidos, polímeros, minérios, etc.
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Velocidades instantâneas de transformação:
• Podem ser calculadas em qualquer tempo pela
inclinação das tangentes das respectivas curvas

dX
rx = (1)

dt
dS
rs = − (2)
dt

dP
rp = (3)

dt
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Uma velocidade especial e de interesse prático é
a Produtividade de Biomassa:
Xm − X0
PX = (4)
tt

• O mesmo pode ser aplicado para o Produto:

Pm − P0
PP = (5)
ttP
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Velocidades específicas transformação proposta
por Gaden:

1 dX
µx= ⋅ (6)

X dt
1 dS
µS = ⋅− (7)

X dt
1 dP
µP= ⋅ (8)

X dt
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Fatores de Conversão

X − X0
YX / S = (9)
S0 − S

X − X0
YX / P = (10)
P − P0

P − P0
YP / S =
S0 − S (11)
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Fatores de Conversão: se tais valores permanecem
constantes durante o cultivo, no final da fermentação,
onde X= Xm, P=Pm e S=0, tem-se:
Xm − X0 (12)
YX / S =
S0

Xm − X0
YX / P = (13)
Pm − P0

Pm − P0
YP / S =
S0 (14)
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• Eliminando Xo, pela Combinação das equações 9 e 12, vem:
X − X0 (9)
YX / S =
S0 − S Xm − X0
YX / S = (12)
S0

Tem-se: Xm − X
YX / S = (15)

S
A equação 15, pode ser mais confiável, porque, X0 apresentam,
erro experimentais mais elevados do que Xm.
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• O fator de conversão

YX / S
Foi originalmente definido por Monod, e tem sido útil nas análises
de alguns processos, como proteínas unicelulares a partir
carboidratos ou hidrocarbonetos.
Conhecido o fator de conversão, pode-se determinar X ou S,
quando conhecido um deles.
Muito útil para a determinação do substrato limitante
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
• O fator de conversão
Xm − X0
YX / S = (12)
S0

O substrato limitante que definirá a concentração máxima de Xm,

Então a equação 12, poderá ser escrita como:

X m = YX / S ⋅ S 0 + X 0 (16)

Em condições especiais, em meio homogênio, sem alteração de pH, e concentração de

S não muito elevada, pode-se verificar a constância de YX/S com o a equação 15
X m −X
YX /S =
S
Tranformada em X = X m − YX / S ⋅ S
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO

X = X m − YX / S ⋅ S (17)

Representação dos valores experimentais de X em função de S

PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Porém, se Y X / S ; Y X / P ;YP / S não forem constantes,

deverão ser levados em conta os valores instantâneos:

dX
YX / S = (18)
− dS

dX
YX / P = (19)
dP
dP
YP / S = (20)
− dS
PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Das equações:

X − X0
YX / S = (9)
S0 − S
X − X0
YX / P = (10)
P − P0

P − P0
YP / S = (11)
S0 − S

 X − X 0   P − P0   X − X 0 
  *  =   = Y X / P * YP / S = Y X / S
 P − P0   S − S 0   S − S 0 

OU SEJA: Y X / S = Y X / P .YP / S
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Em fermentações industriais, dificilmente são observados valores constantes destes
fatores de conversão;
Embora estes fatores dependam do microorganismo e da relação com o substrato,
outros fatores interferem , como tempo de mistura, tranferência de oxigênio, e
outros;
Além disso, os microrganismos utilizam energia de oxidação do substrato também
para sua manutenção:
Parte do substrato (So-S) não implica em aumento populacional (X-X0);
Mas esta fração do substrato, vai para manutenção das atividades vitais do
microorganismo;
Esse conceito introduzido por Pirt, através do consumo específico para a
manutenção (m):

(rS )m , onde (rs)m= Velocidade de consumo de

(25)
m= substrato para manutenção
X
 PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Então, a velocidade de consumo de substrato é:

rS = (rS ) C + (rS ) m (26)

(rs ) m = mX
rS = (rS ) C + m. X (27)

rX YX/S:
Y X′ / S =
Um novo fator de conversão para

(28)
(rS ) C Fator de Conversão Verdadeiro
PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Sua introdução na equação 27, vem:

rX
rS = + m. X (29)
Y X′ / S

(30)
µX
µ = + m
Y X′ / S
S

Se, m=0, então

Y X′ / S = Y X / S
PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Uma generalização mais ampla pode ser introduzida, ou seja o consumo
de substrato para geração de produto:

rS = (rs ) CP + (rs ) P + (rs ) mP (31)

(32)
rp
Y´ p / s =
(rs ) p

Aplica-se então um novo coeficiente específico para a manutenção

(rs )mP
mp = (33)

X
PARÂMETROS DA TRANSFORMAÇÃO
Também surge um novo fator de conversão para o crescimento:

rx (34)
Yx / s =
( rs ) CP

(35)
rx rp
rs = + + mP * X
Y ´´x / s Y ´ P / S

As velocidades específicas então ficam:

µx µp
µ S = + + mP (36)
Y ´´x / s Y ´ P / S
 CALCULO DAS VELOCIDADES
1. TRAÇAR AS CURVAS

Componentes do sistema de cultivo

[biomassa] = X;
[produdo] = P;
[substrato] = S em função do tempo de fermentação
200 60 1,08

3 1,07

Densidade do mosto (g/mL)

160 1,06

40
Extrato aparente (g/L)

1,05

Células (g/L)
120 2

Etanol (g/L)
1,04

1,03
80 20
1
1,02

40 1,01

0 0 1,00
0 20 40 60 80 100
0
0 20 40 60 80 100 Tempo (h)

Tempo (h)

Figura 1 - Consumo de Extrato Aparente - S Figura 2 - Células Totais em Suspensão - X

() e Produção de Etanol - P (), pela
Levedura S. cerevisiae 308 tipo lager, durante
a fermentação do mosto com adjunto de
banana a 17,50 0P e 15 0C, no ponto otimizado
da adição de nutriente (Carvalho, 2009).
(), da levedura S. cerevisiae 308 tipo lager,
e Densidade do mosto com adjunto de banana
() durante a fermentação a 17,50 0P e 15
0
C, no ponto otimizado da adição de nutriente
(Carvalho, 2009).
2. AJUSTE DAS CURVAS PARA DETERMINAÇÃO DAS
VELOCIDADES INSTANTÂNEAS
(dx/dt); (-ds/dt) e (dp/dt)

Le Duy & Zajic propõem um método de ajuste

 3. Parâmetros que Podem ser Determinados
Yx/s: Fator de Conversão de Substrato em Células (ex: gx/gs).

Yp/s: Fator de Conversão de Substrato em Produto (ex: gp/gs).

Yx/p: Fator de Conversão de Produto em Células (ex: gx/gp).

Y’x/s: F. C. Verdadeiro de Substrato em Células (ex: gx/gs).

rx; rs e rp: Velocidades Instantâneas de Consumo de Substrato; Crescimento Celular e

Formação de Produto (ex: g/L.h).

µx; µs; µp: Velocidades Específicas de Crescimento Celular (ex: h-1); Consumo de
Substrato (ex: gs/gx.h) e Formação de Produto (ex: gp/gx.h).

Qp: Produtividade Volumétrica do Produto (ex: g/L.h).

m: Consumo Específico para a Manutenção (ex: h-1).

Tg: Tempo de Geração do Microrganismo (ex: h).

X: Concentração de Microrganismo (g/L)

 dX
= µ max *X
dt

X
n = µ max (t − t i )
Xi

1. Fase Lag: Período de adaptação do mo.

(X=Xo);
2. Fase de Transição: inicio da reprodução
celular;
3. Fase Exponencial ou Logarítmica: (µx=µmáx)
velocidade específica constante e máxima:

X = X i * exp[ µ max (t − t i )]
Juntamente com a velocidade específica máxima, a fase
exponencial ou logarítmica de crescimento é caracterizada
pelo tempo de geração, que é o tempo necessário para o
microrganismo dobrar o valor da concentração celular (tg)
Então X=2Xi
2. Xi n 2 0,693 Conclui-se então, que o
n = µ max (t g ) µ max = = tempo de geração é
Xi tg tg
constante, porque µmax
está nesta fase.
4. Fase Linear: velocidade de reprodução
constante:

dX
rX = = rk
dt X = X C + rk (t − t C ) = rk * t + X C − rk * tc
X
deduz, que X é uma função linear do tempo.
∫ dX =
Xi
rK

X t

∫ dX = r ∫ dt
Xi
K
tc
4. Fase Linear: velocidade de reprodução
constante: X = X C + rk (t − t C ) = rk * t + X C − rk * tc
dX deduz, que X é uma função linear do tempo.
rX = = rk
dt
X

∫ dX =
Xi
rK 1 dX rk
= =
rk
X t
X dt X rk * t + X C − rK * t C
∫ dX = r ∫ dt
Xi
K
tc
µ, nesta fase não é constante, porque
diminui com o tempo de cultivo
5. Fase de Desaleração: diminuição de
crescimento celular (rX) e a velocidade
específica de crescimento celular (µX),
diminuem devido ao esgotamento de um
ou mais componentes do meio de cultura,
ou devido ao acúmulo de metabólitos
6. Fase Estacionária: Nesta fase X, alcança
um valor máximo Xm, onde há um equilibrio
entre a velocidade de crescimento e a
velocidade de morte do microrganismo.
7. Fase de Declínio ou Morte: A concentração
celular diminui a uma velocidade que
excede a velocidade de produção de
células, ocorrendo lise celular, autólise, ou
rompimento dos microrcanismos,
provocado pela ação de enzimas
intracelulares.
 Cinética dos
Processos
Fermentativos