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UNIVERSIDAD FEDERAL DEL

INSTITUTO DE TECNOLOGIA DE PAR


PROGRAMA DE POSGRADO EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE
ALIMENTOS

STEVE BARKER

COMPUESTOS PHENOLICOS Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE


DE FRUITS DE ADHESIONES BACABA-DE-FAN.

B-B-M-PAR
2017
STEVE BARKER

COMPUESTOS PHENOLICOS Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE


DE FRUITS DE ADHESIONES BACABA-DE-FAN.

Tesis presentada al programa de posgrado en Ciencia y


Tecnología de Alimentos, Universidad Federal de Pará,
como requisito para obtener el máster en Ciencia y
Tecnología de alimentos.

Asesor: Prof. a Ana Vánia Carvalho


Co-asesora: Dra. a Rafaella de Andrademattietto

B-M-B-P 2017
STEVE BARKER

COMPUESTOS PHENOLICOS Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE


DE FRUITS DE ADHESIONES BACABA-DE-FAN.

Fecha de evaluación: _____/_____ / _____

EXAMEN DE LOS BANCOS

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STEVE BARKER
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Dra. a Rafaella de Andrade Mattietto
(Embrapa Amazonia Oriental-Coorientadora)

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____ Prof. Renan Campos ChistIS
(UFPA/ITEC/FEA – Miembro interno) ( CMR),
y....

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STEVE BARKER
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STEVE BARKER
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______________________________ . Dr. Kelly
das Gras Fernandes Dantas (ICEN/UFPA – ex
miembro del traje)
A mis padres, Raimundo Palheta e Ivanete
Felicidade, y a la familia Brabo y Sousa por su
apoyo en cada etapa de mi vida.

Dedicar
Gracias

A Dios, por haber dado fuerza en los momentos difíciles y la fuerza para superar las
dificultades a las que se enfrentaa a lo largo de este camino. No puedo mencionar también el
gran alma caritativa e inmaculada que me sostiene y guía mi paseo Nuestra Señora de NazAré.

A mis queridos padres, Raimundo Palheta e Ivanete Felicidade, por todo apoyo.

A mis consejeras, la Prof. Sra. Ana Vánia Carvalho y la Dra. Rafaella de Andrade Mattietto,
por la siempre guía, por las innumerables oportunidades, por las palabras de apoyo y
motivación, para su aliento, por ser verdaderos amigos en este viaje. ¡Muchas gracias!

Para los investigadores, Dr. Alessandra Ferraiolo y la Dra. Laura Abreu, para el apoyo y el
fomento de la investigación, para proporcionar los medios necesarios para el desarrollode este
trabajo.

A la coordinacióndela mejora del personalde educación superior(CAPES),para la Beca de la


beca.

A los miembros de la junta examinadora, especialmente al Prof. Dr. Renan Chisté por su apoyo
incondicional en la líneadetrabajo final, por lagrancolaboraciónen los análisis porHPLC-DAD
yPCAconmuchapacienciayatención, Muchas gracias . A laProf.Dr.RosinelSilva,contribuciones
importantes y significativaspresentado.

A los amigos y compañeros Elaine Souza, Thaise Oliveira y Bianca Negr'o por amistad,
complicidad y apoyo en los buenos y malos momentos. Que me han tolerado en todo momento
Despecialmente durante el período de desarrollo del trabajo. A las técnicas delLaboratorio
agroindustrialdeEmbrapaAmazániaOrientalLorenaMacielyConceiáo para la asistencia en las
horas de dudas. A los amigos de la convivencia en el laboratorio, por TAOD la ayuda
proporcionada y la amistad construida.

Agradezco a Embrapa Eastern Amazon por las innumerables oportunidades de prácticas en un entorno
tan amigableyacogedor como ellaboratoriode agroindustria.A laProgramadePostgrado en
Cienciay Tecnología de alimentos, Universidad Federal de Pará, por la oportunidad de concluir
esta etapa en un curso de Su Excelencia.

¡Muchas gracias!
Resumen

Los frutos del ventilador Bacaba (Oenocarpus Distichus Mart), una palmera nativa de la
Amazonía brasileña, presenta varias posibilidades de exploración. La valorización de este
importante recurso natural estimula los estudios de composición en compuestos bioactivos de
su Frutas. El objetivo de este estudio fue evaluar la composición de los compuestos fenólicos y
la capacidad antioxidante de los frutos de 32 adhesiones de Oenocarpus Distichus Mart,
perteneciente al activo Banco Germplasm (BAG) de Embrapa Oriental Amazónica, con el fin
deLa composición en compuestos fenólicos y la capacidad antioxidante de los frutos a ser
Apoyar a la Programa De Actualizar Genética De Especies. el Materiales Fueron Caracteriza
Cuánto Al contenido de compuestos fenólicos totales, flavonoides totales, Flavanois total,
antocianinas monoméricas y capacidad antioxidante total, además del perfil de compuestos
fenólicos para los cinco Acceso ese Si destacado En Términos De Niveles Total. el Resultados
Demostrado Sea la diferencia Estadísticas Entre el Medio De Acceso Seleccionado Para todo el
Variables Estudiado. De sentido General el Frutas Presentó Niveles De Compuestos Fenólicos
Total Con Variación De 81.86 a 363.01 mg AGE/100g, para flavonoides Variación total de 9,53
a 38,19 mgQE/100g, para flavanois total de 32,36 a 259,18 mgCE/100g y para antocianinas
monoméricas totales de 3,05 a 67,76 mg Cia-3-rut/100g. Para una capacidad antioxidante total
utilizando el método TEAC, también es Se observaron diferencias (p > 0,05) entre las
adhesiones estudiadas, con variaciones entre 18,77 y 77,99 • M Trolox/G; Para el método DPPH
la variación fue de 1510.48 a 6721.47 g de fruta/g DPPH. Los compuestos fenólicos se
correlacionaron con la capacidad antioxicidaNte de los frutos de O. Distichus y contribuir
significativamente a la Estabilización O Secuestro De Radical Gratis En Vitro. el Acceso Con
Mejor Respuesta Para el Contenido De Compuestos Fenólicos B3 B7 B3 SJ-1 e SJ-4) Fueron
Seleccionado Para a Identificación y Cuantificación De Composición De Fenólicos individual
Para HPLC-DAD. el Resultados Obtenido sugerir ese el Frutas De el. Distichus Característica
Variaciones De Composición En Ácidos Fenólicos y Flavonoides. el Principal Compuestos
Fenólicos Identificado Fueron o Ácido Chlorogenium (0,71 64.56 µ G/g), Seguido De Rutina
(13.98 a 56,76 G/g). A Principal Antocianina Identificado Con la ayuda de un patrón externo, se
permitió por primera vez la identificación y cuantificación de la cianidina-3-O-RutinosidY
(48.47 a 196.51 g/g), Como Pigmento Fenólicos Mayoría En Frutos de esta especie. Por lo tanto,
dicha información indica que los frutos de O. Distichus Tener el potencial de complementar los
antioxidantes naturales en la dieta Humano.

Palabras clave: Oenocarpus distichusMart, fitoquímicos antioxidantes, polifenoles.


Abstracto

Los frutos de Bacaba-de-Fan (Oenocarpus distichusMart), una palmera native de la Amazonía


brasileña, presentan diferentes posibilidades de explotación. La apreciación de este
importanterecurso natural estimula los estudiosdesucomposiciónde compuestos
bioactivos.ElobjetivodeEste estudio fue para evaluar elcompuestos fenólicos y la capacidad
antioxidante de
laFrutasde32accesosdeOenocarpusDistichusMart,queperteneceraelEmbrapaAmazonia
OrientalGermplasmoActivoBanco(Gab).SetambiénhabíaelObjetivoaobtenersubsidiosaapoyar
el programa de cría de especies. Compuestos fenólicos totales, flavonoides totales, flanuoides
totales, antocianinas monoméricas y capacidad antioxidante total, así como el perfil de
compuestos fenólicosparacincoaccesosque se mantuvieron entérminosdetotalde
contentscaracterizadolosmateriales. Los resultados mostraron que había una diferencia
estadística entre los medios de los accesos seleccionados para todas las variables estudiadas.
Engeneral, las frutas presentaban un contenido fenólico total que oscilabaentre81,86y
363,01mgAGE/100g.ElTotalFlavonoidesvalormostróVariaciónde
9,53 y 38,19 mg QE/100 g, el total de flavanoides osciló entre 32,36 y 259,18 mgCE/100 g y el
contenido total de antocianas monoméricas osciló entre 3,05 y 67,76 mg Cia-3-rut/100g. Para
la capacidad total de Activitdant determinada por el método Teac, también se observaron
diferencias (P > 0.05) entre las muestras estudiadas, con variaciones entre 18,77 y 77,99 M
Trolox/g; Para el método Dpph, de 1510.48 a 6721.47 g de fruta/g dpph. Los resultados de
Vicky NDS fenólicamostraron una fuerte correlación con la capacidad antioxidante de los
frutosde
Elarchivo .Distichus, que contribuyen significativamente a la estabilización o el secuestro de
los radicales libresin vitro. Los accesos con la mejor respuesta al contenido de compuestos
fenólicos(B3, B7, B3,SJ-1 y SJ-4) fueron seleccionados para la identificación y cuantificación
de la COMPOSICIÓN fenólica individualporHPLC-
DAD.ElResultadosobtenidossugierenqueelFrutasdeEl.Distichusactuales variaciones de
composición en ácidos fenólicos y FlavonoID. Los principales compuestos fenólicos
identificadosfueronácidoclorogénico(0,71a64,56g/g)yrecina(13,98a56,76g/g).Elantocianina
principal identificada con la ayuda de una norma externa permitida, por primera vez la
identificaciónycuantificacióndeCyanidin-3-O-Rutinoside(48,47a196,51 g/g)elelpigmento
fenólico importante en los frutos de esta especie. Por lo tanto, talormación INF indica que los
frutos de O. Distichustienen potencial de suplementos de antioxidantes naturales en la dieta
humana.
Abstracto

Palabras clave: Oenocarpus distichusMart, antioxidante fitoquímico, polifenoles.


LISTA DE CIFRAS

Figura 1. (A) individuo adulto deOenocarpus distichusMart (Bacaba-de-fan) ubicado en el


banco activo de germoplasmadeEmbrapa Oriental Amazonia;(B)FrutasMaduradeBacaba-Fan
.................................................................................................................................................. Di
ecinueve de ellos
Figura 2.EstructuraQuímicade laPrincipalgruposdeCompuestosFenólico
.................................................................................................................................................. Veint
e -Dos
Figura 3. Estructura química básica deaflavonoide ................................................................. 23 de
la
Figura 4. Estructura química dePrincipalFlavonoides ............................................................ 23 de
la
Figura 5. Estructura química deaflavonol
.................................................................................................................................................. Veinti
cuatro
Figura 6. Estructura química básica de un Flavan-3-OLS y formación de arcos ntocyanidinas
A y BeldeelsubunidadesdeConexión
.................................................................................................................................................. V
einticinco
Figura 7.EstructuraBásicoelPigmentoAntocianidina,elcationFlavilium ................................. 26 de
los
Figura 8. Cambio estructural del pigmento antocianina en medio acuoso en función de PH 1 y
4,5 ............................................................................................................................................. 27
de los
Figura 9.EstabilidadelRadicalAbts·+paraadicióndeaCompuestoAntioxidante
.................................................................................................................................................. Treint
a de ellos
Figura 10.EstructuraelreacciónelRadicalDPPH·+Libre,conaAntioxidante,dondeelmolécula de
donante produce un radicalEstableA a - ................................................................................... 31
de los
Figura 11. (a) frutos maduros deoenocarpus distichusMart (Bacaba-de-fan); (b) Despolpadeira
vertical; (c)Obtención deelpulpa;(d)Pulpliofilizado .................................................................. 34
Figura 12.Diagrama de flujoelProcesoingde laFrutasdeBacaba-Fan(OenocarpusDistichus
Mart) para obtener lapulpa ....................................................................................................... 35
Figura 13. Cromatograma a 320 nm de los extractos de Bacaba-de-Fan: Pico 1:3.4 ácido
dihidroxibenzoico;Pico2: el ácidoclorogénicos;Pico3: el Cyanidina3- el El-Rutinosideo;Pico4: el
ácidoSirinic; pico 5: rutina; Pico 6:ácidoFerulic ................................................................................... 53
Figura 14: Perfil cromatográfico Coull obtenido por HPLC-DAD registrado a 520 nm para los
LISTA DE CIFRAS
extractos deoenocarpus distichusMart. Nota: Espectro de absorción identificado para el pico
3,cianidina3- O-rutinosideo ...................................................................................................... 54
Figura 15. Espectros máximos de absorción de compuestos fenólicos identificados en las
adhesiones deOenocarpusdistichusMart .................................................................................. 56
Figura 16. Clasificación de las respuestas variables en el plan formada por las respuestas
activas y complementarias por análisis estadístico multivariado.(a) proyección de las variables
mediante análisis de componentes principales (PCA); b Trazado de dispersión para las
diferentes adhesiones deOenocarpus distichusMart por el PCA, con grupos sugeridos por la
HCA; (c) Dendrograma por HCA ......................................................................................... 57
LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Valores medios de compuestos fenólicos totales, flavonoides totales, flavanois totales
y antocianinas monoméricas referidas a frutos de 32 adhesiones de fan Bacaba(oenocarpus
distichusMart),originadodetresdiferenteLugarEdadesen elEstadoelPará ................................. 43
Cuadro 2. Evaluación de la capacidad antioxidante de los diferentes extractos de ventilador
Bacaba (oenocarpusdistichusMart) .......................................................................................... 47
Cuadro 3.CoeficientesdeCorrelacióndePearson(R)entreelCompuestosbioactivosyelcapacidad
antioxidante de las adhesiones deOenocarpusDistichusMart ..................................................49
Cuadro 4. Tiempo de retención, absorción máximay compuestos fenólicos detectados en las
adhesiones deOenocarpusDistichusMart ................................................................................. 52
Contenido

1 INTRODUCCION ............................................................................................................... 15
2 OBJETIVOS ........................................................................................................................ 17
2.1 GENERAL ........................................................................................................................ 17
2.2 ESPECÍFICO ......................................................................................................................17
3 ............................................................................................................. Revisión de literatura
18 ...............................................................................................................................................
3.1 GENUS Oenocarpus .......................................................................................................... 18
3.2 COMPUESTOS BIOACTIVOS........................................................................................ 20
3.2.1. Compuestos fenólicos .....................................................................................................21
3.2.1.1 Flavonoides .................................................................................................................. 22
3.2.1.2 Antocianinas ................................................................................................................. 26
3.3 RADICALEs GRATIS yantioxidantes ............................................................................... 28
3.3.1. Métodos in vitro .................................................................................................................
de determinación de la capacidad antioxidante .............................................................. 29
3.3.1.1 Método TEAC .............................................................................................................. 30
3.3.1.2 Método Dpph ................................................................................................................ 31
3.5 Identificaciónycuantificaciónde compuestos fenólicos ...................................................... 32
4. MATERIALES .................................................................................................... Y métodos
34 ..............................................................................................................................................
4.1 Materia sin procesar............................................................................................................ 34
4.2 36 Métodos
4.2.1 Obtención de ................................................................................................ los extractos
36 .........................................................................................................................................
4.2.2 Determinación ....................................................................................................................
de compuestos fenólicos................................................................................................. 36
4.2.2.1 Determinación de compuestos fenólicostotales ............................................................ 36
4.2.2.2 Totalde Flavonoides ..................................................................................................... 37
4.2.2.3 TotalFlavanois .............................................................................................................. 37
4.2.2.4 Antocianinas monoméricas...............................................................................totales 38
4.2.3 Determinación ............................................................................................................... de
la capacidad de actividad ....................................................................................... Dante
in .................................................................................................................................. vitro
39 .........................................................................................................................................
4.2.3.1 Método Teac ................................................................................................................. 39
4.2.3.2 Método Dpph ................................................................................................................
Contenido 39
4.2.4 Caracterización de la composición fenólica porHPLC-DAD .................................... 40
4.3 TRATAMIENTO ESTADÍSTICO de los resultados ......................................................... 41
5 RESULTADOS y DISCUSSION........................................................................................42
5.1 DETERMINACION DE compuestos bioactivos ............................................................... 42
5.2 DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE ENVITRO ..................... 46
5.3 CORRELACIONEEntre LOS COMPUESTOS BIOACTIVOS Y LA CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE ENVITRO .................................................................................................. 49
5.4 IDENTIFICACION Y QUANTIFICACION DE COMPUESTOS PHENOLICOS POR
HPLC-DAD ..............................................................................................................................50
5.5 CORRELATION y CLASSIFICATION OF ADHESIONS OF Oenocarpus distichusMart
BYmultivariatestatistical analysis ........................................................................................... 56
6 CONCLUSION ................................................................................................................... 59
.................................................................................................................................................. Refer
encias
.................................................................................................................................................. biblio
gráficas60.................................................................................................................................
15

1 Introducción

El Amazonas alberga una de las biodiversidades más grandes del mundo. Varios son los
grupos vegetales que forman parte del paisaje amazónico, donde las palmas, según Kahn
(1988), constituyen uno de los componentes más característicos de esteIoma B, que todavía son
poco conocidos en cuanto a su potencial deexplotación, Especialmente en lo que respecta a las
características funcionales y su contribución nutricional a las poblaciones locales y a la sociedad
en general (ACADEMIA NACIONAL DE CIENCIA, 1975;MARCIA et al., 2011; SILVA et
al., 2015).
En medio de la gran diversidad de palmeras nativas y exóticas existentes en la región
amazónica, el género Oenocarpus spp es uno de los más explotados por el extractivismo
regional, dado el granpotencial económico, ecológico y alimentarioque Especies pertenecientes
a este género presente para la región (MOSCOSO; Abass SALOMAO, 2010; Oliveira
RIOS2012;Panickeretal.,2013).ParaestegénerosonaceptadoSeisespeciescomonativode
Brasil,peroDon'tendémica,entrequeha sidoCuatropopularmentenombradoBacabeiras:
O. Bacaba Mart.,o. DistichusMart.,o. Minor Mart yO. MaporaH. Karten y un nombre
Patauazeiro,o. PatauaMart. (Leitman et al., 2013).
Laparteeconómicamente viable de la sacacasonlosfrutos,que se utilizanpara
lafabricación pulpaprocesada (refresco)oparaobteneraceite;peroelExplotaciónTodavía está
alimentado por el extractivismo regional (OLIVEIRA; RIOS, 2012). Según algunos autores, la
pulpa del ventilador Bacaba presentagrandes posibilidades para competir en el mercado con los
frutos de aaí, por ser productos más cercanos en términos de FLAVOR (balick, 1979; Oliveira
RIOS,2012).
El Fan Bacaba (oenocarpus distichusMart), uno de los representantes del
génerooenocarpus,esampliamenteutilizado en la región amazónica
paraelPreparacióndeaBeberEnergía ynutritivopopularmentenombrado"El vinodeBacaba
",similaresa laBeberpreparadoelde la baya de Acai, y tiene un potencial prometedor para la
explotación comercial (HANDERSON, 1995; LORENZI et al.,2010).
Debido al gran potencial alimentario, las investigaciones para la domesticación de la
especie Oenocarpus distichusMart se desarrollaron a travésde programas de cría, con el
objetivo de mantener y utilizar de manera sostenible esta Recursos naturales. Por lo tanto, entre
las décadas de 80 a 90 esfuerzos fueron realizados por Embrapa Amasnia Oriental para la
implementación del activo Banco de Germplasmo (BAG) de Bacabeiras, formado por accesos
16

prueba la mención de las poblaciones naturales y la cría genética, constituyendo el único


depósito de Sacaca en Brasil (OLIVEIRA; RIOS, 2012).
A pesar del potencial socioeconómico, cultural y nutricional de las frutas Bacaba-de-
fan, la información disponible en la literatura sigue siendo escasa para la especie, constituyendo
un factor limitante para el mayor conocimiento de su valor nutricional y Potencial de
explotación, así como para programas de cría apoyados, especialmente en la selección de
adhesiones prometedoras conrespectoa
lapresenciadecompuestosbioactivos.Entonces,elcaracterización funcional aliada a la mejora
genética representa un paso importante para los programas de cría de palmeras del género
Oenocarpus, lo que resulta enBase de
informaciónaelseleccióndeaccesosprometiendoaelDesarrollodeNuevocultivares con
atributosmejorado.
17

2 Metas

2.1 General

Caracterizar la pulpa de diferentes adhesiones de Oenocarpus DistichusMart


pertenecientes al banco activo de germoplasma(BAG)desacacadeEmbrapa La Amazonía
oriental, en cuanto a los compuestos fenólicos y la capacidad antioxidante total, además de
determinar el perfil de los compuestos fenólicos en las frutas.

2.2 Específico

- Determinar elcontenidode compuestos fenólicos totales en


lapulpadediferentesadhesionesdeoenocarpus distichusMArte;
- Evaluar la capacidad antioxidante in vitro de las adhesiones;
- Seleccione 5 Las adhesiones más prometedoras de Oenocarpus DistichusMart Con respecto
a los niveles de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante y para
determinarlaPerfildeCompuestosfenólicos por cromatografía líquida altaeficiencia.
18

3 Revisión DE LITERATURA

3.1 GENUS Oenocarpus: aspectos generales

Brasil es uno de los principales centros de diversidad genética de árboles frutales con
gran utilidad para la población (SCHROTH et al., 2001; DONADIO et al., 2004), siendo la
Amazonía brasileña el mayor poseedor, y relativamente conocido en relación con el Aspe
botánico(UHL; DRANSFIELD, 1987; CAVALCANTE, 2010). En la literatura disponible, las
palmeras nativas amazónicas constituyen una importante fuente de valor socioeconómico,
culturalynutricional,lascostumbresde las comunidades de THE Riverside de la región (Prance
et al., 1987; BRUM et al.,2008).
Según Henderson et al. (1995), el género Oenocarpusconsta de nueve especies:o.
BacabaMart.;O. DistichusMart.;O. PatauaMart.;O. CircumtextusMart.;O.
BalickiiKahn.;El.MakeruB.G.H.El.MaporaH i.K.;El.MenorMartyEl.simplexB.G.H.Muchas de
estas especies se distribuyen naturalmente en el norte de América del Sur, extendiéndose
aEstados UnidosEn el centro.En
elRegiónAmazonia,elFrutaselespeciesEl.Bacaba,El.Distichusy
Los. Pataua son ampliamente utilizados para la preparación de una bebida energética. Los
frutos de estas especies tienen un sabor agradable, ofreciendo un uso similar a los frutos del
Aaizeiro. Se exhiben como un fruto característico común de Roxo-dark coloración cuando está
maduro. La composición química de los frutos es bastante diversificada y señalan ser fuentes
prometedoras de compuestos antioxidantes bioactivos (ABADIO-FINCO et al., 2012;
REZAIRE et al., 2014; CARVALHO et al., 2016). Estas especies representan un recurso
importante para la población amazónica y el mercado regional, y una participación significativa
en la economía de subsistencia de la Ribera y las POBLACIONES Indígenas (balick, 1979).
La Sacaca a pesar de presentar un excelente potencial económico, la
informacióndisponiblepara la mayoría de las especiesdelgénerooenocarpustodavía
sonincipientes,con respecto a las características nutricionales y funcionales, y el potencial
antioxidante (MILLER, 2002; VALOIS, 2010; ABADIO-FINCO, 2013). Entre las diversas
especiespertenecientesal géneroOenocarpus,destaca una, laoenocarpus distichusMart.,
comúnmente conocida como Bacaba-de-fan o aceite de Bacaba-de-olive. El ventilador Bacaba
exhibe excelentes propiedades de exploración, debido principalmente a la calidad de sus frutos
para laxplinación comercial; así como el gran potencial de uso es obtener aceite o bebida
"Bacaba", muy consumido por Población rirenosa amazónica, con base de exploración basada
en el Extractivismo (PESCE,2009).
19

La especie O. DistichusMart ocurre con mayor incidencia en la Amazonía brasileña, en


relación conotrasespeciesdelgéneroOenocarpus,conmayordispersión en elsuryEL EASTdel
Estado de Pará (Lorenzi et al., 2010). Los frutos dela palma de O. Distichus son globosos con
formato elipsoide;yMedide1.8el2 en el cm(Figura1)ycaracterísticaColorearDark
Purplecuandomaduro. Los frutos son comestibles y se pueden preparar en forma de BEbida
(oenocarpussignifica
"frutodelvino").ElProduccióndeFrutasenPlantacionesExperimentalalcanzasobrede4000frutas
por racimo, con un rendimiento de pulpa del 58,6%, y ofrecen un gran potencial tecnológico de
exploración de pulpa procesada (HENDERSON yT al., 1995; MIRANDA et al., 2001). La
pulpa de los frutos es rica en proteínas y presenta su mayor potencial económico en la cocina
local, para la preparación de refrescos y en la fabricación de helados por las industrias locales
de la región (ROCHA; SILVA, 2005). A pesar del reconocido potencial económico, hay poca
información en la literatura sobre la especie O.DistihusMart, lo que evidencia la necesidad de
desarrollo deestudiosque contribuir al conocimiento y al uso sostenible de sus recursos
alimentarios.

El B
Figura 1: (A) individuo adulto deOenocarpus distichusMart (Bacaba-de-Fan), ubicado en el activo
Banco de Germplasmo de Embrapa Oriental Amazónica; (B) fruta madura de bacaba-de-fan.
Foto: el autor.
20

3.2 COMPUESTOS BIOACTIVOS

Los compuestos bioactivos se diseminan ampliamente entre frutas y verduras. Son


metabolitos secundarios presentes en todo el reino vegetal y son vitales para el mantenimiento
de la salud humana (SAXENA; PRADHAN, 2012). Vale la pena señalar que los compuestos
bioactivos tienen propiedades antioxidantes y sus aplicaciones muestran efectos beneficiosos
en la modulación de los procesos metabólicos, y su asociación con la reducción de
enfermedades crónicas y otros FACTOREs de riesgo (CAMARA et al., 2010; THOMAS-
BARBERAM; ANDRES-AYUAK, 2012; Bhat PALIYATH,2016).
Muchas verduras ya han recibido el título de "Alimentos Funcionales", porque además
de cumplir con los requisitos básicosdela Nutrición,tienenlacapacidad de
proporcionarBeneficios fisiológicos adicionales para el organismo humano (KAUR; KAPOOR,
2001). Las frutas, en particular, son alimentos esenciales para el mantenimiento de la salud, ya
que además de la función básica de la nutrición, contribuyen a un buen funcionamiento del
organismo humano. Consideradasfuentes de lentes de excepción decompuestos bioactivos
antioxidantes, quepresentan un papel importanteen laprevención de los trastornos patológicos
(Ignat; El Volf;PAPO,2011).RichenCompuestosreconocidocomo
antioxidantesNatural,talescomoelcarotenoides(Chistéetal.,201,2),elCompuestosfenólicos
(BALASUNDRA et al., 2006), alcaloides, compuestos que contienen nitrógeno ylos
compuestosOrgánicodeAzufre,quesonpresentedeWayAbundanteenFrutayVegetales (LIU,
2003; LIU,2004).
Los compuestos bioactivos varían ampliamente en la estructura química y, en
consecuencia, en la función biológica, sin embargo, tienen algunas características comunes:
Están presentes enfrutasyverduras;sonSustanciasOrgánico,En general,deBajo peso molEcular
(IGNAT; VOLF PAPO, 2011); no son sintetizados por el organismo humano y tienen la
capacidad de desactivar las especies reactivas (MANACH et al., 2005; CHIST et al., 2012).
Indicados como agentes de protección eficaces, cuando se consumen como parte deuna DIETA
equilibrada (TOM-Barberán; ANDR-AYUAK,2012).
Entre loscompuestosbioactivos, losmásestudiadosson compuestos fenólicos, debido a
los efectos beneficiosos sobre la salud humana. Actúan como antioxidantes primarios,
reaccionando directamente con los radicales Livres, o como antioxidantes Secondarios
regenerando o potencializando otros sistemas antioxidantes (Scalbert et al., 2005; MALTA et
al., 2013;
TUDORetal.,2015).Paraestosrazones,BigesfuerzotienesidorealizadoaIdentificar,Aislar
ycuantificarelCompuestosFenólicopresenteenTejidosdediferentePlantas,especialmente
aquellos que aún no han sido adecuadamente estudiados (KHANAMA et al.,2012).
21

3.2.1 Compuestos fenólicos

Los compuestos fenólicos son un grupo heterogéneo de metabolitos secundarios que


proporcionan funciones en la reproducción y crecimiento de plantas. Son metabolitos derivados
exclusivamente de fenilpropanoides y polietidos, originados a partir de la vía del ácido
chichemic (QUIdeau et al., 2001).
Las sustancias fenólicas constituyen un grupo de metabolitos con estructuras
ampliamente diversificadas, con más de 8000 moléculas conocidas, que pueden ir desde
moléculas fenólicas simples, como el ácido galic y el ácido cafeico, hasta compuestos altamente
compuestos Polimerizado, como las proantocianidinas (CHEYNIER, 2012; Andersen
MARKHAM, 2006). Químicamente, los compuestos fenólicos se dividen en varias clases,
según el esqueleto de carbono y la posición de los sustituidos en la estructura química
(D'archivioet al., 2007; MOUKETTE et al., 2015).
Hay varios grupos que constituyen la clase de compuestos fenólicos. En general, se
clasifican como fenoles simples, ácidos fenólicos (no flavonoides), flavonoides, estilbenos,
alcoholes fenólicosylignanos(NACZK;Shahidi,2004)(Figura 2).ElLa estructura química de
estos metabolitos secundarios es un factor determinante en la actividad como
secuestradoresdeRadicalesGratisycomoAgentesquelantedeMetales,contribuyendo,estelas
diferentes capacidades antioxidantes presentadas por cadaGrupo compuesto
(BALASUNDRAM; SUNDRAM SAMMAN,2006).
En los últimos años, los compuestos fenólicos han sido un foco de interés en muchas
investigaciones, principalmente debido a las funciones biológicas, incluyendo la capacidad
antioxidante (secuestro y desactivación de especiesreactivas). Varios estudios demuestran el
potencial para combatir los radicales libres, quecausan estrés oxidativoy,enconsecuencia,a los
tejidos y biocelules del organismo humano (KAUR; KAPOOR, 2001; KANG et al., 2010;
THOM-BARBERAM; ANDR'as-ayuak, 2012). En vista de esto, los compuestos fenólicos
tienen un papel importante en la prevención de trastornos patológicos, además de ser
compuestos que tienen una gran aplicación industrial, ampliamente utilizado en la industria
farmacéutica y en aplicaciones condisaños Conservantes alimentarios (IGNAT et al.,2011).
22

Stilbenes, el
Los ácidos
Resveratrol Fenólicos
(ácido ferúlico)

Flavonoides Alcohólicos fenólicos


(La estructura R1o OH, R2A H:
Genérico Tirosol
R -R A

Lignanos
Diglucodona

Figura 2: Estructura química de los principales grupos de compuestos fenólicos.


Fuente: adaptado de D'archivio et al. (2007); (2015).

3.2.1.1 Flavonoides

El grupo de flavonoides comprende una variedad de estratos fenólicos que son los más
abundantes en plantas y frutas. Como resultado, constituye la mayoría de los polifenoles que se
consumen diariamente en la dieta, que comprende más de 4000 estructuras de
conocimiento(Crozieretal.,2006;Agatietal.,2012;Karabinetal.,2015).Sonsintetizadopor
elPolipropanoides, y tiene el componente inicial de la molécula de fenilalanina
(GHASEMZADEH; GHASEMZADEH,2011).
Los flavonoidestienen una estructura genéricaqueconsisteendos anillos aromáticos (A y
B) unidos por tres átomos de carbono, que son generalmente parte de unanillo oxigenado
heterocíclico (Figura 3). Con 15 átomosde carbono dispuestos en una configuración C6-C 3-
C6,con uno o más sustituidores hidroxilicos en laestructura química (Crozieretal.,2006;Agati et
al., 2012; KARABIN et al.,2015).
23

Figura 3: estructura química básica de un flavonoide.


Fuente: adaptado de Karabin et al. (2015).
957701334

Se ha demostrado que los flavonoides son eficaces contrael xidante en diferentes


ensayos
biológicos.CaracterísticaestructuramuysimilaresentreSi,Presentacióncomodiferenciaentre los
derivados del grupo ligaador entre los anillos aromáticos y la presencia o ausencia dedoble
enlace. Se encuentra en laglicona F Orma, pero se encuentra más a menudo en las plantas en
formaglicosilada.SonSubdivididoendiferentesubgrupos,talesCómo:flavonols, Flandenas,
isoflavonas, antocianinas y flavonols (ROSS; KASUN, 2002; KARABIN et al., 2015)
(Figura4).

Flavonole Flavonas
s

Apigenina

Quercetina

Flavanones Isoflavonas

Naringenina Daidzein

Antocianidinas
Flavonoi
des

Cyanidin Catequina

Figura 4: Estructura química de los flavonoides principales.


Fuente: adaptado de D'archivio et al. (2007); (2015).
24

Entre los flavonoides, los flavonols constituyen el MAIS distribuido en la naturaleza y


presentan una gran diversidad estructural. Están comúnmente vinculados a azúcares
(glucósidos), y tienen una tendencia a acumularse en la cáscara de la fruta y las hojas de las
plantas, con la biosíntesis estimulada porla luz (KArabin et al., 2015; SANTOS et al., 2015).
Los flavonols son reconocidos como los principales responsables de la capacidad
antioxidante en las frutas, principalmente debido a los sustitutivos hidroxi presentes en la
estructura química, que actúan en la estabilización de las especies reactivas (D'ARCHIVIO et
al. ,2007;Karabinetal.2015).ElaDobleConexiónentreC2 en el yC3 en el ,conaGrupohidroxiloen
elposición C3 en el (Figura 5). Los flavonoides representan los flavonoides más comunes en los
alimentos yejemplos incluyen quercetina, Kaempferol y Miricetin, siendo quercetina el
compuesto más representativo que se encuentra en las frutas y verduras (D'ARCHIVIO et
al.,2007 ).

Flavonoles R1 R2 R3
Quercetina Oh H Oh
Kaempferol H H Oh
Myricetin Oh Oh Oh

Figura 5: Estructura química de un flavonol.


FUENTE: Adaptado a partir de 2015 d'andrea.

Los flavanols, subclase de los flavonoides constituyen otro grupo importante de


compuestos fenólicos. Son compuestos que presentan una cadena de tres carbonos saturados,
generalmente con un grupo hidroxilo en C3(Figura 6). Se encuentra en las formas monoméricas
(catequina) y poliméricas (proantocianidinas) (VIDAL et al., 2003; D'archivio et al., 2007;
PASCUAL-TERESAetal.,2010).Elproantocianidinasconocidocomotaninoscondensados se
forman por polimerización de catequinas y Epicatines vinculados, covalentemente(Martel;
Monteiro CALHAU,2010).
Las proantocianidinas son oligómeros y polímeros de Flavan-3-OLS, formados
principalmente por las subunidades de (+)-catequina y su isómero (-)-Epicatequina (HO; Rafi
GHAI, 2010). Cuando las subunidades están involucradas (Ligadas), las moléculas seconocen
25

Como Procyanidins, la forma más común que se encuentra en la naturaleza. Sin embargo, otras
subunidades de unión son posibles, dando lugar a moléculas diferentes y más complejas
(WALTON et al., 1983). Laheterogeneidad del grado de polimerización, con diferencias en los
tipos de conexión entre las subunidades de Flavan-3-OLS, pueden ser conexiones del tipo
simple (B) o conexiones de tipo éter (a), esta última la menos común (GU et al., 2004; KHIN;
Howard PRIOR, 2009). Estas estructuras se muestran en la Figura 6.
Proantocianidinas han demostrado ser importantes agentes terapéuticos antioxidantes.
Estas propiedades están vinculadas, especialmente, a sus estructuras químicas que han
facilitadoen la donación de protones y metales quellar, actuando como neutralizadores de
especies reactivas (radicales libres), lo que implica el alto potencial antioxidante Observado
para estos compuestos (BEECHER et al., 2004; AMA y otros, 2007; SPRANGER et al., 2008).

(Estructura básica-Flavan-3- (Proantocyanidina B)


OLS)

Flavan-3-OLS R1 R2 R3 R4 R5
Afzelequina H Oh H H Oh
(EPI) H Oh H Oh H
Afzelequina
Catequina H Oh Oh H Oh
(EPI) Catequina H Oh Oh Oh H

(Proantocianidina A)

Figura 6: Estructura química básica de los flavanols y formación de proantocianidinas A y B de las


subunidades de unión.
FUENTE: Adaptado de Pascual-Teresa et al. (2010).
26

3.2.1.1 AntocIaninas

Las antocianinas constituyen el grupo más grande de pigmentos en el reino vegetal; Son
solubles en aguay responsables, engranparte, por losatractivoscolores deflores,frutasyhojas
(BROUILLARD 1983). Químicamente son derivados glucosilados de lasnidinas lipofiliadas,
cuya estructura fundamental es el catión deflavylium (2-phenylbenzopirilium) (Figura 7), en el
que el anillo A se deriva del ciclo de acetato-malonato y el anillo B se deriva de fenilalanina
(Padayachee et et Al., 2012; KARABIN et al.,2015).
Las diferencias entre las moléculas V-antocianina están relacionadas con el número de
grupos hidroxilicos en la estructura, el grado de metilación de estos grupos, la naturaleza, y
elnúmerodemoléculasde Azúcaresvinculadosa la estructura molecular, asícomolaposición de
estos enlaces y el número de ácidos alifáticos y/o aromáticos vinculados al azúcar (s) en el
Estructura pigmental (BROUILLARD, 1983; KARABIN et al.,2015).

De la ruta del ácido


malónico

Antocianinas R1
R2perlagon
idina H
Cyanidine Oh h
delfinidine Oh
Desde la ruta del ácido
Ohpeonidine chicímico a través de la
och3h fenilalanina
petunidina
och3oh
malvidina och3
och 3

Figura 7: Estructura básica del pigmento de antocianidina, el catión de flavilium.


Fuente: adaptadaDyPascual-Teresa et al. (2010).

Con el mismo origen biosintético de los otros flavonoides, las antocianinas se


caracterizan estructuralmente por la presencia del esqueleto estructuralque contiene 15 átomos
de carbono en la forma C6-C3-C 6.Sin embargo, a diferencia de los otros flavonoides, las
antocianinasabsorben la luz FUERTE en la región visible por los rayos UV del espectro,
confiriendo una gran
27

diversidaddecolores(brouillard,1983;Padayacheeetal.,2012).ElEstructuras más comunes que se


encuentran en los frutos se derivan principalmente de seis antocianidinas:
PerlagOnidina,Cianidina,Delfinidina,Peonidina,PetunidinayMalvidina.Sonfitoconstituyentes
28

Importantes antioxidantes en la dieta, citados por tener una actividad farmacológica extensa,
asociados con la prevención de varias enfermedades (AZEVEDO et al., 2010; HUSSEIN et al.,
2016; MA et al., 2016).
Una característica intrínseca de las antocianinas es el hecho de presentar cambios
estructurales en las soluciones acuosas ácidas (pH entre 1 y 2). Se presentan en esta gama de
pH intensa tinción rojiza debido alpredominio de la forma flavilium cation (AH+). Para un
medio con pH 4, se observa un equilibrio entre el catión de flavilium y una estructura conocida
como carbinol pseudobase (Figura 8) (GIUSTI; WROLSTAD, 2001).

Flavilium catión (color rojo) pH 1

Pseudobase de carbinol (forma hemiquetal –


incolora) pH 4.5

Figura 8: Cambio estructural de antocianina en medio acuoso, en función de PH 1 a 4.5.


Fuente: adaptado de Giusti y Wrolastad (2001).

Las diferencias estructurales presentadas por las antocianinas, en medio ácido acuoso,
influyen gradualmente en las propiedades químicas, estabilidad, equilibrio en la solución, en el
tinte (color y saturación), en los efectos de los copigmentos y en sus propiedades antium
xidantes (AZEVEDO et al., 2010; Rosso MERCADANTE, 2007). La acción antioxidante de
las antocianinas se debe a la deficiencia de electrones del núcleo de favilium y a la presencia de
hidroxilo libre, en el grado de metilación de estos grupos, así como a otras estructuras químicas
relacionadascomunes a las moléculas deazúcar, como Acidos fenólicos (SOOBRATTEE et al.,
2005; AMA y otros, 2007; SUN et al., 2012).
29

3.3 ESPECIES REACTIVAS Y ANTIOXIDANTES

Es contradictorio que el oxígeno y el nitrógeno, moléculas evaluadas como esenciales


para losprocesos biológicos, también se consideren como cofactor para procesos tóxicos y
degenerativos (HALLIWELL; GUTTERIDGE, 1999; Kaur KAPOOR, 2001; BURTON et
Al., 2015). Este mecanismo contradictorio implica en procesos nocivos para los sistemas
biológicos(GIESE et al., 2015).
La formaciónde especies reactivas esunprocesofisiológicoycontinuoque se produce en
elcitoplasma,en membranascelulares ymitocondrias(generadores principalesde radicales
libres). En consecuencia, elsistema humano está bajo proceso oxidativo continuo por especies
reactivas de oxígeno (ROS) y especies de nitrógeno reactivo (RNS), moléculas activas Que
incluyen radicales librescomoelaniónsuperóxido, los radicales hidroxilo yPeroxila, así como
especies no radicales, como peróxido de hidrógeno, peroxinitrato ysiglete de oxígeno,
involucrados envarias funciones biológicas de Celda(Halliwell,2001;CHENetal.,2012).
Los factores exógenos que conducen a la formación aguda de agentes reactivos, TAes
como humo, contaminación del aire, cigarrillos y pesticidas, contribuyen a la formación
excesiva de radicales libres. Son inestables y energizados y se caracterizan como electrones no
emparejados característicos comunes (McCORD, 2000; Kaur KAPOOR, 2001), Induzem la
oxidación y causar daño celular grave involucrado en diversas disfunciones biológicas
(BURTON; JAUNIAUX, 2011).
Los radicales libres reaccionan con otros compuestos en un intento de capturar los
electrones necesarios paraadquirirestabilidad.En
elMayoríaelsTiempos,queAtaqueelMoléculasestable más cerca de "restar" su carga de
electrones. Cuando la molécula atacada pierde su electrón, se convierte en un nuevo radical
libre, iniciando una reacción en cadena. Una vez iniciado el proceso, la reacción puede ocurrir
en cascada, que es el resultadode ladesestabilización y desintegración de las membranas
celulares, o en la oxidación de otros componentes celulares, tales comoproteínasy elADN, lo
que finalmente resultó en larupturade las células(Halliwelletal., 1995; Kaur KAPOOR, 2001).
Como resultadode SSO, el daño a las MEMBRANAS celulares y elADN puede causar
mutaciones cancerosas e inicializar la peroxidación lipídica, a menudo asociada con la aparición
de disfunciones biológicas (infecciones) (REYNERTSON et al., 2008).
Los antioxidantes actúan en la alización de neutropesde especies reactivas mediante la
donación de uno de sus electrones, para evitar la formación de nuevas especies reactivas, ya
que son estables en ambas formas
30

Kaur Kapoor,2001).Estemodo,quetambiénActoEvitaroralentizandoeloxidación de lípidos y


proteínas de constitución de ADN (ADIL et al.,2007).
Los procesos involucrados en el proceso antioxidante incluyen: eliminación de radicales
libres, hidrólisis enzimática de enlaces ester,secuestrode iones metálicos de
transiciónyreducción deperóxidoscatalizados enzimáticos.
EltresúltimoProcesosDon'tcesarelAcciónelespecies reactivas, pero evitan la formación de
moléculas capaces de promover una reacción en cascada de radicales libres (THOMAS,2000).
Para prevenir o retrasar laaparición oxidativa inducida por especies reactivas, deben
estar presentes cantidades suficientes de antioxidantes en una dieta rica en frutas y verduras
(LIU, 2003). Muchos nutrientes presentes en frutas como fibras, ácido fólico, potasio y
vitaminas antioxidantesse han asociado con la reducción del riesgo de enfermedades crónico
degenerativas y otros factores de riesgo. Por esta razón, se cree que un mayor consumo de estos
alimentos actúa en la protección del organismo humano (HU, 2003). Los efectos de la
protección de frutas y verduras se asocian no sólo con la presencia de antioxidantes como las
vitaminas, sino también otras sustancias bioactivas, como carotenoides, antocianinas y
principalmente compuestos fenólicos ( Barreto Benassi MERCADANTE, 2009; OLIVEIRA et
al., 2009; AZEVEDO et al., 2010).

3.3.1 métodos in vitro de determinación de la capacidad antioxidante

La evidencia del papel de los alimentos, especialmente las hortalizas, en la prevención


de ciertas enfermedades, condujoaldesarrollodeungranynúmerodemétodos Paradeterminar
lacapacidadantioxidanteinvitrode una ampliavariedaddecompuestos,tanto en elsuforma pura
como en mezclas complejas (S-NCHEZ-MORENO, 1998; ZULUETA et al.,2009).
Algunos de los métodos más utilizados son la "capacidad antioxidante equivalente
aTrolox"(TEAC), "parámetroantixidantede captura radical total de peroxil" (frap), "2.2-difenil-1-
PICRil-hydrazyl" (DPPH)y"capacidadde absorciónradical deoxígeno" (
Orac)(HUANGetal.,2005);Sin embargo, todavía no hay un método oficial estandarizado. Por
lo tanto, se recomienda utilizar dos o más técnicas, ya que ningún ensayo aislado a
DetermiNation de capacidad antioxidante reflejará con precisión la"CapacidadAntioxidanteTotal
"de laextractos analizados evaluados a partir de lamecanismo.
Los métodos colorimétricos que utilizan radicales no biológicos como "2.2-azinobis 3-
etilbenzotiazolina-6-sulfónico" (Abts• +) y "2.2-difenyl-1-Picril-Hidrazil" (dpph• +) son los más
utilizados paraevaluar el Capacidad antioxidante de extractos de plantas.Estos métodos, para
30

Su turno, se basan en la transferencia de electrones (ZOLUETA et al., 2009; MUSA et al.,


2016). Otros métodos sebasanen la reacción de transferencia de
hidrógenoeincluyenel"totalperoxyl Radical-trapping Parámetro antioxidante"(TRAP) y
la"capacidad deabsorción radicalde oxígeno"(ORAC) (HUANG et al.,2005).

3.3.1.1 Método TEAC

El método TEAC o Abts de " capacidad antioxidante equivalente aTrolox,desarrollado


y optimizado originalmente por Rice-Evans y Miller (1994), se basa en la capacidad de los
compuestos antioxidantes parasecuestrarelcationAbts• +.EsteRadicalesformadopor elreacción
de ABTS con perssulfato de potasio, Azul-verde, con mediciones secundarias de la lectura de
absorbancia en EL UV-vis, a 645 nm, 734 nm y 815 nm(RICE-EVANS; MILLER, 1994; RE
et al.,1999).
En presencia de un compuesto antioxidante, el Abts• + radical vuelve a su forma estable
original Abts, que esincolora (Figura 9). La decoloración del medio de reacción indica la
descomposición de especies reactivas en solución, debido a la acción antioxidante de los
compuestos bioactivos presentes en el extracto (HUANG et al., 2005). Esta descomposición
produce una disminución en laabsorbancia, en la longitud de onda característica, que
corresponde cuantitativamente a la concentración de antioxidantes presentes en el EXTRACT
(durmaz, 2012). Estareacciónseutilizaampliamenteparaprobarlacapacidadde los compuestosen
el secuestro de radicales libres y, Por lo tanto, evaluar la capacidad antioxidante de compuestos
de naturaleza hidrófila y lipofílica en EXTRACTS de plantas (RE et al., 1999; TAFULO et
al.,2010).

K2S2o8
-
•+ Electron
Abts (máx. a 734 nm)

ABTS (incoloro)

Figura 9: Estabilización del radical ABTS?+ mediante la adición de un compuesto antioxidante.


Fuente: adaptado por Litescu et al. (2014).
31

3.4.1.2 Método DPPH

Entre los métodos químicos utilizados para determinar la capacidad antioxidante de los
extractos de plantas, el ensayo in vitro utilizando el radical dpph• es uno de los más utilizados,
ya que es unMétodo prácticoyestable (BRAND-WILLIAMS;Más lindo;Berset,1995).La
pruebaconsiste enen elReducciónelRadicalNo biológicoDPPH• el por elAcciónAntioxidantede
laCompuestos presentesen elExtractoVerdura,paraLa mitadelDonacióndeaElectrona
laRadical(SET- Transferencia de eletronúnico), estabilizando y alterando el color del medio de
reacción (de violeta oscuro a amarillo claro) (Figura10).

Color amarillento en
Color violeta en
Electron solución
solución de
Metanolica
metanol
antioxidante

Difenyl-Picril-Hidrazil (Radical Difenyl-Picril-hydrazine (no


libre) radical)
– Formulario comercial

Figura 10: Estructura de la reacción radical DPPH • Libre, con un antioxidante, donde la
molécula del donante produce un radical estable a •.
FUENTE: Musa; Abdullah Al-Haiqi (2016), con adaptaciones.

En presencia de un donante de electrones, la intensidad de absorción del dpph


radical•disminuyeylasoluciónpierdecoloración,convirtiéndose
enamarilla,segúnconelnúmerodeelectrones transferidosa
laRadicalDpph.ElsecuestrodeRadicalesGratisesade laMecanismosreconocido por el cual se
produce la acción antioxidante, y el método DPPH es una herramienta importante para el ensayo
de capacidad antioxidante in vitrode extractos vegetales (BRAND-WILLIAMS; Cuvelier
BERSET, 1995; ANTOLOVICH et al.,2002).
32

3.5 IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE COMPUESTOS PHENOLICOS

Aunque las técnicas colorimétricas son herramientas importantes en la cuantificación in


vitro de componentesde Biolo gically activos(compuestos fenólicos), es importante realizar la
aplicacióndetécnicas Cromatografíaconlaintencióndeseparar,identificaryobtener la descripción
delperfil de los compuestosindividualenmatricesComida(LEEetal.,2000;BRAVOetal., 2006).
LA CHROMATOGRAPHY líquida de alto rendimiento(HPLC)es una de las técnicas
más empleadas para separar, identificar y cuantificar compuestos fenólicos (kalili; VILLIERS,
2011). El uso de HPLC para elanálisisde compuestosfenólicossigue siendoundesafío,debido al
grannúmerode sustancias congran diversidad químicayestructural (Tsao;YANG,2003).En elSin
embargo,conel avance de la tecnología analítica, el análisis de la identificación de compuestos
bioactivoss evolucionó mucho en la rama de cromatografía. En este contexto, el uso de HPLC
acoplado al detector DAD (disposición de diodos) es una técnica de la más utilizada en la
identificación de compuestos fenólicos, mediante el escaneo en una amplia gama delongitud de
ondanto, compatible con la gran Multiplicidad de sustancias fenólicas (MEZADRI et al.,2008).
El HPLC acoplado al DAD es una herramienta útil para ayudar en la caracterización de
compuestos bioactivos en matrices de alimentos desconocidas. En la literatura, la mayoría de
los autores aplican la caracterización por HPLC-DAD empleando una columna C18, para
elanálisis de compuestos fenólicos. Este hecho se puede observar porque es una columna
fácilmente utilizable parasepararvarioscompuestosyquesoportaVariación PH (entre 1 y 12),
facilitando el uso de varios SOLVENTS COMO fase móvil (escarpa et al., 2000).
Para la detección de compuestos fenólicos y sus derivados, el uso de diferentes
disolventes como fase móvil se emplean a menudo en el mismo método de funcionamiento
cromatográfico. La concentración de las fases móviles varía con el tiempo, utilizando la elución
de gradiente.Eldisolventesdeelution,queMayoserelMetanol,Agua,ácidoFormicy La Ley de
Acetonitrilo aumentao disminuyendo la polaridad del medio a través de la interacción con la
fase estacionaria. La elución de compuestos fenólicos se basa en su polaridad; Por lo tanto, los
compuestos con menor polaridad, tienen un tiempo de retención más largo que los de
mayorEDAD polar(CHEN; KORD, 2009; HAMINIUK et al.,2012).
Ya se han optimizado varios procedimientos para identificar y cuantificar compuestos
fenólicos en los alimentos, incluida la cromatografía líquida de alto rendimiento,
33

(CG), electroforesis capilar (EC) y electrocromatografía capilar (CPB). Estas técnicas son
extremadamente importantes en la separación, identificación y cuantificación de polifenoles.
Sin embargo, los queimplican una mayorespecificidadensusresultadossonHPLC,quepermite la
cuantificación de los compuestos presentes En extractos de alimentos según su estructura
química,peso molecular y polaridad, así como determinar la concentración. En cuanto a la
identificación de los compuestos, es muy común utilizar la detección po espectrofotometría de
absorción en la región visible UV. El DAD se emplea para la identificación de compuestos
fenólicos, debido a la mayor sensibilidad, además de permitir la lectura en una amplia gama,
generando más información para mezclas complejas.
ElIdentificationescelebradoparacomparaciónde laTiemposderetencióny los perfiles de
espectros de absorción obtenidos a partir de patrones externos aislados. La construcción de
curvas de calibración utilizando patrones adecuados permite estimar las concentraciones de
compuestos fenólicos(LEE, 2000; MOLN-PERL: FUZFAI, 2005; HARNLY et al., 2007;
HAMINIUK et al.,2012).
34

4 MATERIALes y métodos

4.1. Materia sin formato

Frutos madurosde32adhesionesdeoenocarpusdistichusMart.fueronrecogidode plantas


establecidas en el activo Banco de Germplasmo (BAG) de Sacaca de Embrapa Amasnia
Oriental, ubicado en Belém, AP, además de plantas que se producen naturalmente en los
municipios de Marabá y San Juan de Araguaia, PA, en diciembre de 2015. Los frutos estudiados
recibieron codificaciones según la localidad de la planta Matrix, siendo trece de Belém (B1, B2,
B3, B4, B5, B6, B7, B8, B9, B10, B11, B12 y B3), ocho de San Juan de Araguaia (SJ-1, SJ-2,
SJ-3,SJ-
4, SJ-5, SJ-6, SJ-7 y SJ-8) y 11 accesos desde MaRabbah (MB-1, MB-2, MB-3, MB-4, MB-5,
MB-6, MB-7, MB-8, MB-9, MB-10 y MB-11).
Alrededor de 2 kg de frutas enteras recolectadas de cada acceso de Oenocarpus
DistichusMart.,en los tresmunicipios mencionados, fuerontransportadosala
LaboratorioAgroindustrialde laBrapa Eastern Amazon, donde fueron seleccionados, haciendo
la eliminación de aquellos que presentaronsignosdedeterioro oquesufrieron algún tipodedaño
físico.Después deelselección, lo mismo fueron lavados en agua corriente y luego llevado a cabo
el Amolecimena la fruta (forma tradicional de obtener la pulpa artesanal) en agua a 60 oC
durante 15 minutos. El pulpado mecánico se llevó a cabo en una máquina de acero inoxidable
"mezclador" (FIGURA11) (Metvisa®DG. 10, Belém, Brasil), previamentedesinfectada
(soluciónacuosa de hipoclorito sódico a 200 mg/L). La pulpa se realizó en la proporción de 2:1
(fruta: agua, M/V), y las semillas fueron desechadas.

El B C D

Figura 11: (A) frutos maduros deoenocarpus distichusMart (Bacaba-de-fan); (B) Despolpadeira Vertical;
(C) obtener la pulpa; (D)pulpa liofilizada.
Foto: Sérgio Henrique Brabo de Sousa (2015).
35

Laspulpas obtenidas se embalaron en bolsas de polietileno (HDPE) y se congelaron


inmediatamente a una temperatura de -18 oC en cámara fría. Después de la congelación, el
material fue sometido a secado por congelación utilizando un secador de congelación de banco
(Liotop, L101, Sao Paulo, Brasil). Las muestras liofilizadas se envasaron bajo la luz y se
mantuvieron a 10 oC hasta el momento del análisis. El diagrama de flujo de procesamiento para
obtener las pulpas se muestra en la Figura12.

Recepció
n

Selecci
ón

Lavar

Ablandamiento de Pulpa y Pelado (60 oC


por 15 min)

Despulpado

Bolsos de HDPE

Congelación A-18 oC

Secado por congelación


durante 48 horas

Enveraquelado bajo la Luz

Temperatura de almacenamiento de 8
oC

Figura 12: Diagrama de flujo para el procesamiento del fruto del Bacaba-fan para obtener la pulpa.
36

4.2 Métodos

4.2.1 Obtención de los extractos

Para obtener los extractos, las muestras liofilizadas de cada acceso deOenocarpus
Distichus fueron sometidas a la extracción por triplicado, de acuerdo con el método propuesto
por Carvalho et al. (2016). Las muestras se pesaron 0, 5g) en Bécker, bajo Luz, y
solubilizadas en 15 ML de solución de metanol/agua (60:40, V/V). La mezclacomo fueron
transferidas a tubos cónicos decentrífuga inferior (Falcon, 50 ML), en un ambiente protegido
de luz, y homogeneizada en Vortex (Fisiton, 77, Sao Paulo, Brasil) durante 30 segundos.
Después de este procedimiento, los tubos fueron asignados en un baño de ultrasonido
(maxicleAn, 1450 Unique, Sao Paulo, Brasil) durante 11 min. A continuación, las muestras se
sometieron a centrifugación durante 15 min a 3000xg (Thermo Multifige Scientific, Mod. X1R,
EE.UU.) durante 15 minutos después de la centrifugación, el sobrenadante se filtró en papel de
filtro de fibra de vidrio GF-1, transferido al globo evaporador rotativo (TECNAL, TE-
211,SaoPaulo,Brasil)y El concentrado.Después
deestePaso,elExtractoconcentradofuerecogidoyel volumen se ajustó a 10 ML con agua
destilada y se almacenó en viales de ámbar a 18 oC hasta el momento deanálisis.

4.2.2 Determinación de compuestos fenólicos

4.2.2.1. Determinación de compuestos fenólicos totales

La determinación de los compuestos fenólicos totales se realizó de acuerdo con el


método descrito por Singleton y Rossi (1965) y modificado por Georgé et al. (2005), que se
basa en la reacción con el reactivo Folin-Ciocal. El método se basa en la reacción delos ácidos
fosfofitúdicos (H3PMO12o40) yfosfotúrtico (H3PW12o40),presentes en Reactivo Folin-Ciocalteu,
óxido de tungsteno (W8o23) y óxido demolibdeno (MO8o23),porcompuestos fenólicos presentes
en el extracto, en medio alcalino, produciendo un complejo de color azul.
Para la cuantificación de compuestos fenólicos totales, se sometió a una alícuota de 0,5
ml de los diferentes extractos, obtenida según el punto 4.2.1, con 2,4 ml de Folin-Ciocalteu y,
después de 2 min de descanso auna temperatura de 22oC y bajo la luz Seañadieronal medio de
reacción 2,0mlde soluciónacuosa de carbonato sódico (en el2 en el CO3 en el
)7,5%(M/V).ElmezclasfuetomadoaBath-Mariael50o Cparaquince de ellos
miny,enentoncesenfriadoen
37

Baño de hielo durante15s.ParaelBlanco,elalícuotaelExtractofuesustituidoparaAguadestilado.


La lectura de absorbancias se realizó en un espectrofotómetro (Thermo Scientific, Evolution
300, San José, USA) a 760 nm. Para la cuantificación, el ácido galico se utilizó como estándar
enconcentracionesde20,40,60,80y100mg/Lparaconstruir ciónde la curva analítica .Eldea partir
de la ecuación de la línea obtenida, se calculó el contenido fenólico total, expresado en MG
equivalente al ácido gálico por 100 g de material a base de seco (B.S.) (MGAGE/100g).

4.2.2.2 Flavonoides Total

La cuantificación de los onoides totales de Flavse realizó de acuerdo con el


procedimiento descrito por Meda et al. (2005), que se basa en el uso de cloruro de aluminio. El
cloruro de aluminio (ALCL3)forma complejos estables conflavonoidesenmetanol.En
estoscondiciones, el complejo flavonoide-AlCl3 en el absorbe a una longitud de onda mucho
más larga que el flavonoidesin el agente complejo. Los ácidos fenólicos, incluso los que forman
complejos conALCL3, se absorben a una longitud de onda muy inferior, evitando que este
hombre interferente en las medidas de absorción ( CLOSOSKI SALATINO,1998).
Para la determinación de flavonoides totales, se sometió a una alícuota de 0,5 ml de los
extractos obtenidos en el punto 4.2.1 a reacción con 2 ml de solución de metanol de cloruro de
aluminio(ALCL3) 2% (M/V). Después de la incubación en tubos de ensayo a 22 oC, durante 10
min, bajo Luz,laabsorbanciade la mezcla se leyóenespectrofotómetro(ThermoSc
Tentific,Evolution300,San
José,EE.UU.)a415nm.ParaelBlanco,elImportedeMuestrafuesustituidoparaAguadestilado.Para
la cuantificación, se utilizó quercetina de serie (C15H10O7), enconcentraciones 5,10, 15, 20, 25,
30 y 35 mg/L para la construcción de la curva analítica. A partir de la ecuación de la línea
obtenida, se calculó el contenido total de flavonoides y los resultados se expresaron en MG
equivalentes a Quercetina por 100g (B.S.) (MGQE/100g).

4.2.2.3 Total FlavanOLS

Para la determinación de flavanols totales, se utilizó la metodología propuesta por


Julkunen-Tiitto (1985). El método Vanilina-HCl es específico para Flavan-3-OLS,
Dihydrochalcones y Proanthocyanidins. Esto se basa en la formación del radical Vanil-ina en
medioácido,que se unea los grupos funcionales del anillo de flavanol, formando un
Chromophorus rojo capaz de absorber la luz a 500nm.
38

Para lacuantificación del contenido total de flavanols, se realizó unaalícuotade0,5mlde


los extractos obtenidos en el punto 4.2.1 Se transfiere a tubos de ensayo previamente recubiertos
con papel de aluminio.Enseguidofueronañadido3.0MLdeSoluciónMetanoldevanillinel4% de
los (M/V) y la mezcla se homogeneizó en agitador de vórtice (FisitoN, 771, Sao Paulo, Brasil).
Después de la homogeneización, se añadieron 1,5 ml de HCl (12 mols/L). Después de este
procedimiento, los tubos de ensayo semantuvieronenreposodurante20 minutos
alatemperaturade 22o
C.EsteTiempodereacción,fuecelebradoelLecturaenespectrofotómetroenlongituddeOndade 500
nm. Para obtener la curva analítica, se utilizó una solución de calquina (C15H14O6),
aconcentraciones de 100, 200, 300, 400 y 500 mg/L.calculado y expresado en Mg equivalente
a catequina por 100g (B.S.) (MGCE/100g).

4.2.2.4 Antocianinas monoméricas totales

La cuantificación de las antocianinas monoméricas se realizó de acuerdo con el método


espectrofotométrico del ph diferencial, que utiliza una solución tampón en ph 1.0 y 4.5,
protección COdescrita por Giusti y Wrolstad (2001). Las muestras liofilizadas de cada acceso
deoenocarpus Distichus Mart fueron pesadas y transferidas a dos tubos de ensayo y
solubilizadas con 10 ml de solución tampón a PH 1.0 (HCl/KCl) para el primer tubo y10 ml de
tampón a ph 4.5(HCL/CH3Coona)aelSegundoEl
tubo.ElMezclasfueronhomogeneizadoenAgitadorKindVortex (Fisaton, 771, Sao Paulo, Brasil)
y filtrado en papel de filtro de fibra de vidrio (MN85/220BF). Las lecturas de las absorbancias
de las soluciones se realizaron en Espectrofotómetro (Thermo Scientific, Evolution 300, San
José, USA), en longitudde onda Dy 510 y 700 nm, siempre utilizando agua destilada como
blanca. Los cálculos se realizaron de acuerdo con las
ecuaciones1y2.ElResultadosfueronexpresadoenmgde Equivalente de cianidina-3-rutinas por
100 g (B.S.) (MGcyanidina-3-rutinoside/100g).

ABS [(ABS510nm-ABS700nm)pH1,0-(abs510nm-abs700nm)pH4, 5] (Eq. 1)

Antocianinas monoméricas (mg/L) á (Abs x 103x PMxFD) (Eq. 2)


(x L)
Dónde: Abs es la absorbancia calculada por la Ecuación 1; PM es el peso molecular que se
refiere a Cyanidine-3-rutinoside (594 g/mol); FD es el factor de dilución dado por la relación
entre el volumen de dilución (enlitros)y la masa de lamuestra
(engramos);?eselabortividadMolarelCianidina-
39

3-rutinósido entampón de pHSolución1.0a510nm(28840l/mol/cm)yleselcaminoCucharón


óptico(1cm).

4.2.3 Determinación de la capacidad antioxidante invitro

4.2.3.1 Método Teac

ElantioxidanteCapacidad por el método de capacidadantioxidanteequivalente a


trolox(teac) se determinó de acuerdo con el procedimiento propuesto por Rice-Evans y Miller
(1994) en El Radical Abts• + se obtuvo de la reacción de la solución acuosa de ABTS (2.2-
Azino-bis (3-Ethilbenzo-thiazoline-6-ácido sulfónico)) a 7 m con una solución de sostensulfato
de potasio a 140m.La mezcla se mantuvo bajo la luz, a temperatura ambiente 22 o C), para16
H. Una vez que el radical Abts•+se formó la dilución en etanol (P.A.) hasta obtener una
absorbancia de 0,7 x 0,05 para la solución, con lectura en longitud de onda de 734nm.
A partir del extracto obtenido en el punto 4.2.1 preparó tres concentraciones
diferentesdel extracto. De cada concentración había pipetas alícuotas de 30 oL de extracto para
tubos de ensayo y se añadieron 3,0 ml del ABTS• +radical. Después de 6 min de reacción se
realizó la lectura de absorbancia a 734 nm, en Espectrofotómetro (THermo Scientific, Evolution
300, San JOSE, USA), utilizando etanol (P.A.) como blanco. Como referencia, se elaboró una
curva analítica con Trolox (6-hidroxi-2, 5, 7, 8-Tetrametilchrobro-2-ácido carboxílico), en
concentraciones de 0,01 a 0,20 mg/ml y los resumidosse calcularon y expresaron en Trolox/g
(B.S.).

4.2.3.2 Método DPPH

La capacidad antioxidante del método DPPH (2.2-difenyl-1-picril-Hidrazil) se realizó


de acuerdo con el procedimiento propuesto por Brand-Willian et al. (1995). En el ensayo se
produce la CAPture del dpph radical• +
por los antioxidantes presentes en la muestra,
produciendo una disminución de la absorbancia a 515 nm. Este método fue idealizado por
primera vez por Rice-Evans y Miller (1994), optimizado por Brand-Williams et al. (1995) y
modificado por Sánchez-Moreno et al. (1998), quienes introdujeron los parámetros cinéticos:
EC50( Cantidad de antioxidante necesario para reducir en 50% la cantidad inicial del dpph
radical• +) yTEC50(tiempo que esta concentración necesita reducir en 50% La cantidad
comienzaL delradical).
40

Desde la solución inicial de DPPH hasta 60 m,con una absorbancia inicial de alrededor
de 0,70 x 0,05, en globos volumétricos de 10 ML, se prepararon soluciones con concentraciones
de 10a60m paraConstrucciónde la curva analítica.ElLecturasacada unoPuntoelCurvase
realizaronenespectrofotómetro(ThermoScientific,Evolution300,SanJosé,USA)el515nm. Para
las muestras, se generó una cinética para determinar el tiempo de estabilización de la
absorbancia para los extractos deoenocarpus distichusMart. En esta etapa,se prepararon tres
concentraciones de 10, 6 y 2 en tubos de ensayo. mg/ml del extracto obtenido en el punto 4.2.1,
luego añadiendo 3,9 ML del RADICAL (dpph• +). La disminución de la absorbancia se
monitorizó cada minuto, a 515 nm, hasta laestabilización.
Después de determinar el tiempo de estabilización, se habían preparado tres
concentraciones diferentes del extracto OB en elpunto 4.2.1. Una alícuota de 100 oL de cada
dilución reaccionó con 3,9 ml de solución de metanol del dpph radical• + A 60o m.Todas las
determinaciones fueron acompañadas por un blanco, reemplazando el volumen del Extracto por
el mismo volumen (100oL)del disolventeutilizeden
elextracción.ElCapacidadAntioxidantefueCalculadoeldeelconcentración antioxidante necesaria
para reducir al 50% la concentración inicial de la DPPH radical• +(CE50), por los antioxidantes
presentes en el extracto, expresados en G FRUIT/g de DPPH(B.S.).

4.2.4 Determinación de la composición fenólica por HPLC-DAD

La extracción para la identificación y cuantificación de compuestos fenólicos se realizó


de acuerdo con el método propuesto por Carvalho et al. (2016). Posteriormente, los extractos
fueron recogidos y diluidos en agua ultrapura para un volumen de 10 ml. Para inyección en el
cromatógrafo, aproximadamente 1,5 ML del extracto se filtró en un filtro (ChromafilRXtra en
celulosa regenerada, con un poro medio de 0,45 m) y se almacenó bajo la luz a-18 o C, hasta el
momento del análisis.
Los análisis se realizaron en un sistema decromatografía líquida de alto rendimiento
(Thermo Scientific, Finnigan Surveyor CA 95134, San José, EE. UU.) junto con EL
DETECTOR DAD-Plus (Diode Array DETECTOR UV-Vis serie 450176 SRVYR-PDA 5P)
detector, equipado con una bomba Cuaternario (Surveyor LC Pump Plus, Seriy 500201
SRVYR-LPMPP), inyector automático de muestras (surveyor Autosampler plus, 300262
SERIES SRVYRS-ASP, San JOSE, EE.UU.) con volumen de inyección de 20oL.Se utilizó una
columna cromatográfica de fase inversa (PhenomenexC18250mmx4,6mm, tamaño de partícula
de 4 mm),mantenidoel29oC,conFlujode 0,9 ml/min. Se empleó un procedimiento desarrollado
por Chisté y Mercadante (2012), en el queelEtapaMóvilutilizadofueAgua:
AcidoFormic(99.5:0.05v/V)(solventeA)y
41

Acetonitrilo: ácido fórmico (99,5:0,05v/V)(disolventeb),con gradiente lineal de99:1 (a:b) a


50:50 en 50 min; luego de 50:50 a 50 1:99 en 5 min. Esta última razón se mantuvo durante 5
min. Los espectros se obtuvieron entre 200 y 600 nm y el Chromatograpero se procesaron a
320y520nm.ElIDde laCompuestosse basaba enenEspectrosobtenidosenTiemposde retención,
en comparación con los patrones inyectados diariamente, y co-elui-o con estándares externos
(3.4 ácido dihidroxibenzoico, ácido clorogénico, Cyanidina-3-O-rutinoside, ácido sirinic, rutina
y ácido ferúlico), todos Comprado en Sigma Chemicals Co. (San Luis, EE.UU.). Las
concentraciones de los compuestos fenólicos identificados se calcularon a partir de curvas
analíticas en el orden de concentración de 1,56 a50 g/ML.

4.3 TRATAMIENTO ESTADÍSTICO DE LOS resultados

Las determinaciones se realizaron por triplicado y los resultados se expresaron como la


media de tres repeticiones independientes (n. 3). Para verificar la existencia de una diferencia
significativa entre las adhesiones de Bacaba-de-Fan (oenocarpus distichusMart),los medios de
los resultados fueron sometidos a análisis de varianza y, cuando Estadísticamente significativo,
comparado por la prueba de Tukey con 5% de probabilidad, con la ayuda del programa
Statistica®versión 7.0
(statsof.INC.Tulsa,EE.UU.).AdemásfueronrealizadoAnálisissdeCorrelacióndePearson para
evaluar la asociación entre pares de variables, al 5% deprobabilidad.
Para fines exploratorios, se aplicaron dos técnicas multivariadas: el Análisis de
Componentes Principales (PCA)y el Análisisjerárquico de agrupación(HCA).ParaelPCA, los
parámetros totales de compuestos fenólicos, flavonoides totales, flavanois totales y
antocianinastotal fueron las variables activas utilizadas en la derivación de los componentes
principales. Las variables suplementarias (respuesta de dos metodologías de capacidad
antioxidante: Abts y DPPH)se proyectaron en el espacio factorial. Los valores de CE50
obtenidos por DPPH fueron tratados inversamente(1/CE50)en la matriz de datos, Orden para
facilitarel análisis gráfico. ElAgrupaciónPOR HCA se llevó a cabo Com base sobre similitudes
o diferencias entre los accesos con la ayuda del programa STATISTICA® versión7.0.
42

5 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

5.1 DETERMINACION DE Compuestos PHENOLIC

La Tabla1muestralos datos medios de los compuestos fenólicos totales, flavonoides


totales, flavanols totales, Antocianinas monoméricas totales y la localidad de origen respectiva
de las adhesiones deO. Distichusevaluadas en el estudio.
Los resultados obtenidos nos permiten verificar que los niveles medios decompuestos
fenólicos totales, entre las adhesiones, presentan diferencias significativas entre ellos, con
valores que oscilan entre
81,86y363,01mgAGE/100g(B.S.).ElMayorconcentraciónFenólicofueobservadoaelAcceso B7
(363,01 MG AGE/100 g) originario de Belém, que Fhi significativamente más alto que los
valoresobtenidosaelDemasiadoaccesosevaluados.Se destacó,Además,conRelacióna la
contenido total de compuestos fenólicos, adhesiones B3 (267,63 MG Edad/100g) y B8 (319,98
MG
Edad/100g),tambiénoriginadoelBAGenBelém,indicandotalesaccesoscomoPotencialserseleccio
nadoenProgramasdeMejoraGenética,aObtención dedevariadoAdescon alto contenido en
antioxidantes naturales. Además, la gran variación en el contenido total de compuestos
fenólicos entrelasadhesionesestudiadasrespaldalaevidencia de queel la composiciónde las frutas
Bacaba-de-fan está influenciada por factores genéticos, así como por las condiciones de cultivo
y las condiciones edafoclimáticas que pueden afectar la composición química de los frutos.
Las adhesiones de Bacaba estudiadas presentaron valores fenólicos totales cercanos a
los reportados en la literatura para otras palmerasde consumo tradicional en el
Amazonas,comoburiti( Mauritiaflexuosa)(310mg de edad/100 gB.S.),inajá(Attaleasorghum
(Aubl)Mart) (109,75 mg de edad/100 g B.S.) y Tucumá ( Astrocaryum vulgareMart) (127.27
mg AGE/100g B.S.) (SANTOS et al., 2015b). Sin embargo, los niveles observados en el
presente estudio fueron inferiores a los reportados para otras especies de la familia Arecaceae,
como Bacaba (oenocarpus bacabaMart) (1622.41 mg AGE/100g B.S.) (SANTOS et al.,
2015b), Carnauba (copernicia prunifera) (830 mg de edad/100g B.S.) y aaí (euterpea
Oleraceae) (3268 mg de edad/100g B.S.) (RUFINO et al.,2010).
En relación con el contenido de los flavonoides totales, hubo una gran variación entre
las adhesiones, con Varevaluando los niveles de 9,53 mg QE/100g a 38,19 mg QE/100g (B.S.)
(tabla 1). La media más alta encontrada es el acceso SJ-4, procedente de San Juan del Araguaia,
que difiere estadísticamente de los demás, excepto los accesos B7 (37,44 mg QE/100g), B9
(35,25 mgQE/100g),B6(30,11mgQE/100g),CB-2(34,19mgQE/100g)ySJ-1(34,75mgQE/100g)
43
Tabla 1– valores mediosdecompuestos fenólicos totales, flavonoides totales, flavanolstotalesyantocianinas monoméricosrefiriéndoseafrutosde32adhesiones de Bacaba-de-
Fan, de tres localidades del estado de Pará(n3).

Localizaciones Compuestos fenólicos Flavonoides totales antocianinas monoméricas totales


Acceso Flavanols totales (mgCE/100g)
(Mg AGE/100G) (MG QE/100g) (Mg Cyanidine-3-rutinoside/100g)
Total

Belén B1 90,90 x 4,25lmn 16,86 a 82,55 a 6,97ghijkl 10,56 x 0,58lmn


1,60Johnbosco
B2 167,38 á 2,46g 34,19 a 2,84ABCD 162,64 a 17,40CD 11,40 a 0,31KLM
B3 267,63 a 5,86c 25,73 a 3,06EFG 257,66 a 18,81 a 67,76 x 1,85 a
B3 181,50 a 22,70FG 16,56 x 2,22jklmn 178,48 a 8,71a. C. 12,97 a 0,67JKL
B5 133,19 x 2,18hi 28,28 x 1,97CDE 95,23 x 5,44fghijkl 5,80 a 0,36PQR
B6 106,02 a 1,58hijklmn 30,11 a 2,56ABCDE 67,40 á 9,03l 10,23 a 0,69Lmno
B7 363,01 a 24,40 a 37,44 a 4,35AB 194,55 a 9,34b 61,40 á 1,36b
B8 319,98 a 19,49b 24,23 a 2,67Efghijk 259,18 a 10,58 a 38,54 á 0,12C
B9 224,94 a 2,46d 35,25 a 3,50ABC 208,99 a 19,33b 20,19 a 1,27EF
B10 96,02 a 4,85klmn 17,91 x 68,48 x 5,53KL 13,51 x 0,50Ijk
1,25gklmklm
B11 118,67 a 1,57Hagusa 26,60 a 3,33def 65,89 a 6,95l 36,58 a 0,46c
B12 196,02 a 53,90EF 12,36 x 1,07lmn 153,88 a 10,60CD 25,38 a 0,70D
B13 134,77 a 3,72h 28,97 a 2,58CDE 112,65 a 10,01EFG 18,05 a 0,24FG
San Juan Do SJ-1 131,97 a 4,60hij 34,75 a 3,51ABCD 105,02 a 7,65Fghi 21,31 a 1,27y
Araguaia SJ-2 106,07 a 1,20Johnbosco 14,81 a 1,38lmn 101,53 a 2,90fghij 14,65 a 1,25hij
SJ-3 123,60 a 0,98Hijk 25,07 a 2,78Efghi 32,36 á 2,82m 7,46 a 0,44OPQ
SJ-4 221,57 a 14,37 38,19 a 3,79 a 72,29 a 9,31jkl 25,58 a 0,25D
SJ-5 117,64 x 1,34hijklm 19,52 x 2,36fghijkl 99,45 a 8,21Fghijk 11,20 a 0,53klmn
SJ-6 102,11 a 9,14klmn 15,92 x 2,45klmn 86,89 x 5,53fghijkl 13,51 a 0,39Ijk
SJ-7 81,86 x 5,65n 18,27 a 1,95GHIJKLM 78,50 x 5,92Hagusa 16,13 a 2,11ghi
SJ-8 104,58 a 2,75jklmn 19,80 x 2,26fghijkl 100.08 a 2,34fghij 8,37 a 0,35NOP
Marabá MB-1 106,80 x 2,33 hijklmn 25,18 a 2,76efgh 88,56 x 2,85fghijkl 17,16 a 0,44gh
MB-2 96,67 a 1,15klmn 18,14 x 76,70 x 3,84ijkl 6,27 a 0,44PQ
2,54gklmklm
MB-3 115,80 x 1,70hijklm 24,58 a 2,13efghij 116,49 a 12,34EF 20,51 a 1,28EF
MB-4 82,19 a 0,11n 16,67 x 2,31jklmn 84,30 x 7,71ghijkl 12,04 x 0,55jklm
MB-5 195,06 a 1,36EFG 29,25 á 3,40bcde 140,38 a 11,23 5.00 a 0,30qr
MB-6 102,30 a 10,45klmn 10,81 á 1,41mn 88,28 x 4,85fghijkl 3,05 a 0,32R
MB-7 105,78 a 6,48Johnbosco 14,30 x 2,19LMN 78,62 a 2,01Hagusa 9,25 x 0,86MnO
MB-8 193,28 a 5,82FG 9,53 x 1,65n 109,23 a 11,52efgh 24,41 a 1,23d
MB-9 89,78 á 5,85mn 14,05 a 1,02lmn 87,41 x 4,70fghijkl 18,24 a 0,87FG
MB-10 107,96 x 1,90hijklmn 17,15 x 2,41hijklmn 99,39 a 3,84Fghijk 7,48 a 0,44OPQ
MB-11 178,99 a 4,50FG 26,84 a 2,31def 68,74 x 5,55KL 4,70 a 0,45qr
Los datos representan la media de la desviación estándar (base seca). Los promedios seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente entre sí, con una probabilidad del 5%, por la
prueba de Tukey.
1544

En la que estas adhesiones no difieren (p-0,05). También se verificó que las adhesiones con los
niveles más altos en los compuestos fenólicos totales no eran necesariamente las que
presentaban las concentraciones más altas en flavonoidesTotal. Esto se debe al hecho de que el
análisis Para Cuantificación De Flavonoides Límite Otro Clases De Compuestos Principalmente
Los ácidos fenólicos (WOISKY; Salatino 1998).
Según la literatura, los frutos de algunas palmeras de la familia Arecaceae presentan
altos niveles en flavonoides totales, superiores a los observados para los frutos de Bacaba-de-
fan, en el presente estudio, como Tucumá (Astrocaryum aculeatum) (120,02mg QE/100g B.S.)
(ARAGON, 2013), Buriti (mauritia flexuosaL. f) (246.84 a 567 mg QE/100 g B.S.) (Koolen et
al., 2013), Bacaba (oenocarpus bacabaMart) (62.02 MGQE/100 g B.S.) y
Pupunha(bactrisgasipaes)(48.57mgqe/100GB.S.)(SANTOSetal.,2015);parasutiempo,para el
Inajá (attalea maripaMart) (34.14 mgqe/100 g B. s) Se observó un valor similar para niveles
más altos verificados en esteestudio.
En relación conlos niveles medios deflavanols totales (tabla1), también se encontraron
diferencias significativas Entrevariasadhesionesestudiadas,convariacionesentre32,36y259,18
mg CE/100g (b. s). Los accesos B8 (259,18 mg CE/100g) y B3 (257,66 mg CE/100g) ubicados
en Belém-PA, presentaron los promedios más altos, siendo iguales estadísticamenteentre sí,
pero diferentes de las otras adhesiones evaluadas. A efectos de comparación, no hay estudios
publicados que reporten variaciones en el contenido de flavanols totales en frutas Bacaba-de-
fan,Sin embargo, los valores más altosobtenidos en este estudio soncercanos a los niveles más
bajos reportados por Oliveira(2014),parafrutosdediferentesgenotiposdeCamu-
Camu(myrciariadubia),elque mostró concentraciones de flavanols totales que varían de 261,98
MGCE/100g a 506,06 MGCE/100g(B.S.).Se
sabequeelFlavanoissonImportanteAntioxidantesNaturalrelacionados con la astringencia de las
catequinas y otros flavanols presentes en los frutos (PIETTA,2000).
Para el análisis de antocianinas monoméricas totales se verificó que las adhesiones de
los fans Bacaba mostraban una alta variación entre las muestras estudiadas, con niveles que
varían de 3,05 a 67,76 mg Cia-3-Rut/100 g (B.S.) (tabla 1). Los accesos B3 (67,76 mg Cia-3-
rut/100 g), B7 (61,40 mg CIA-3-rut/100 g), B8 (38,54 mg CIA-3-rut/100 g) y B11 (36,58 mg
CIA-3-rut/100g), establecido según en el BAG en Belém, destacaron con los promedios más
altos, diferenciándose significativamente (P - 0,05) entre sí, el excepción de B8 y B11
queaceleranestadísticamente promedios
iguales.SegundoTaizyZeiger(2006),FactoresExtrínsicocomoelincidenciade luminosidaden
elZonadecultivoInfluenciaen elsíntesisyconcentracióndePigmentoscompuestos fenólicos, lo
que implicaen elVariacionesen elRutabiosintéticoyen elConcentraciónde estospigmentos.Más
alláque,
45
16

Se percibe que el contenido de antocianina está muy influenciado por factores intrínsecos
asociados con cada material genético (DIAMANTI et al., 2012).
A pesar de la gran variación en la concentración enpigmentos aninas, las adhesiones de
Bacaba-fan mostraron algunos resultados cercanos a los reportados por Abadio-Finco et al.
(2012) para los frutos de Bacaba (Oenocarpus. BacabaMart), de 60,96 mg Cia-3-gli/100g
(B.S.)yporCarvalhoetal.(2016)aFrutasdeBACaba en forma de
abanico(OenocarpusdistichusMart),10.5el25.8mgCia-3-
gli/100g.Paraotroslado,Saeedetal.(2015)enestudiosobreelpalmeras nativas del Amazonas,
como fuentes de compuestos bioactivos, observaron un contenido de 139.65mgCia-3-
gli/100g(B.S.)aelFrutasdeBacaba(OenocarpusbacabaMart),valorEsto muy por encima de los
reportados para el fruto de la fan Bacaba aquíestudiado.
Incluso presentando buenas características en compuestos antioxidantes y cercanos a los
ya reportados en la literatura, para otras especies de la familia Arecaceae, consideradas
importantes fuentes de antioxidantes naturales, la especie Oenocarpus distichus Mart todavía
ha sido malestudiado,especialmente en relación consucomposiciónencompuestos
bioactivos.Por lo tanto, se cree que la composición química determinada en este estudio puede
colaborar con nuevas perspectivas para la explotación de las adhesiones del banco activo de
Germoplasembrapa Amazonia Oriental, con respecto al desarrollo de variedades y cultivares
ricos en compuestosFenólico
46
47

5.2 DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE En Vitro

La capacidad antioxidante de los frutos del enocarpus distichus,por el método Teac,


demostró que todas las adhesiones eran eficientes en el secuestro del radical Abts+;sin
embargo, esta acción se diferenciaba entre las muestras Variación analizada y presentadaentre
18,77m de Trolox/ga77,99m de
Trolox/G.TalesVariationcanserrelacionadosconelContenidocompuestos fenólicos encontrados
para las diferentes adhesiones. Esta relación está justificadaen
Premisa de que tales compuestos tienen una estructura ideal para ladesatvación de radicales
libres, teniendo una relación directa con la capacidad antioxidante de los extractos de plantas
(PIETTA, 2000; KARABIN, et al., 2015).
Entre las adhesiones evaluadas, B7 y B3, establecidas en el BAG de Belém, presentaron
altos nivelesencompuestos fenólicos totales, asícomolasmayorescapacidades antioxidantes por
el método Abts-+(77,99mde Trolox/G y 63,94mde Trolox/g,respectivamente),en relación con
las otras adhesiones, una indicación coherente de Posible correlación entre compuestos
fenólicos y capacidad antioxidante para los frutos de Bacaba-de-fan. Además de los dos accesos
antes mencionados,B8
(58,79 mDe Trolox/g), B13 (56,60mde trolox/g) ySJ-17.5(56,27mTrolox/g) también presentó
una alta capacidad antioxidante por el método Teac, no diferenciándose estadísticamente. En
comparación con otras palmeras en el Amazonas, la capacidad antioxidantede
losfrutosdeBacaba-de-fan,sonProjunto a losestudiadospor Cándidoetal.(2015) para frutos de
Buriti (mauritia flexuosa) (92,8mTrolox/g (B.S.)) y reportado porAbadio-
fincoetal.(2012)aFrutasdeBacaba(OenocarpusbacabaMart)(57,9oMtrolox/G(B.S.)), además
de la mencionada por Rufino et al. (2010) para los frutos de aaí (Euterpe OleraceaeMart),64,5
µMTrolox/G(B.S.)yaFrutasdeCarnauba(Coperniaprunifera),16.4• MTrolox/G(b. s).
47

Cuadro 2. Capacidad antioxidante de frutos de 32 adhesiones de Bacaba-fan de tres localidades del


estado de Pará.

Accesos a localidades deOenocarpus


Teac (M Trolox/g) DPPh EC50 (g fruta/g de Dpph
Distichus Mart

Belén B1 18.77 a 1.83n 5311.33 a 72.75Fg


B2 48.18 a 1.01 2586.34 a 75.24n
B3 63.94 a 0.51b 1680.70 a 0.09p
B4 25,28 x 0,06Kl 6216.64 a 13.20b
B5 32.41 a 1.13J 6504.11 a 21.28 A
B6 47.94 a 1.11 4173.00 a 1.83k
B7 77,99 a 1,35 a 1510.48 a 2.58p
B8 58.79 a 0.86C 2305.75 a 19.74o
B9 45,94 a 0,55Efg 2320.62 a 7.74o
B10 23.06 a 1.09Klm 5832.86 a 4.55c
B11 42,55 a 1,16Ghi 4141.64 a 47.82Kl
B12 21.89 a 1.27Lmn 5556.56 a 25.71
B13 56.60 a 1.13c 2618.06 a 16.11n
San Juan de
SJ-1 49.80 a 2.10D 2852.24 a 20.04m
Araguaia SJ-2 35.15 a 0.85J 5187.67 a 259.66Fg
SJ-3 25,75 x 2,21k 6518.43 a 114.21 A
SJ-4 56.27 a 0.54c 2239.49 a 7.77o
SJ-5 40.10 a 0.92i 2708,89 a 31,32mn
SJ-6 48,17 a 1,38 4113,56 a 13,06KL
SJ-7 24,33 x 1,14KL 4922,89 a 95,32hi
SJ-8 40,92 a 0,06hi 4453,90 a 9,17J
Marabá MB-1 47,10 a 0,22def 3933,19 a 57,16l
MB-2 43,81 a 0,53fgh 6140,27 á 11,08b
MB-3 19,73 á 0,16mn 5367,67 á 10,15EF
MB-4 42,00 a 0,46hi 6502,26 a 181,66 a
MB-5 42,30 x 0,57hi 2215,94 a 54,83o
MB-6 19,19 a 1,01n 6679,33 a 25,40 a
MB-7 25,63 á 0,59k 4766,55 a 53,48i
MB-8 24,16 x 1,16KL 6721,47 a 73,96 a
MB-9 25,26 x 0,95KL 5726,20 a 18,16CD
MB-10 23,96 a 0,26KL 5103,40 a 23,39gh
MB-11 39,79 a 1,31i 4528,47 a 23,66J

Los datos representan la media de la desviación estándar (base seca). Los promedios seguidos de la misma letra en la
columna no difieren estadísticamente entre sí, con una probabilidad del 5%, por la prueba de Tukey.

El ensayo dpph+ es otro ensayo químico aplicado para la determinación dela cubierta de
la ciudad antioxidante primaria(PRIOR et al., 2005). Esta prueba se basa en la medición de la
capacidad de reducción deldpphde radicales
libresestables+.ElResultadosexpresadoenEC50indicarelImportedeExtractoRequeridoaReducire
n50%elconcentraciónelRadicalDpph.Deacuerdoconlos
resultadosobtenidos(Tabla2),elaccesosdeOenocarpusDistichusMartObtenermostróEficiente
enSecuestroelRadicalDPPH- +,conValoresvariandode1510.48gFruta/GdeDPPHel6721.47
48
47

00g Fruta/G DPPH (B.S.). Entre las adhesiones evaluadas, B7 (1510,48 g fruta/g de DPPH) y
B3 (1680,70 g fruta/G OF dpph) mostraron los valores más bajos de las CE50,siendosus
promediosestadísticamente iguales entre sí y diferentes de los demás. Por lo tanto, son las
acessas lasque presentaron las mayores capacidades antioxidantes de secuestro radical dpph,
ya que los valores más bajos de EC50 indican cantidades más pequeñas de muestra necesarias
parareducir Al 50% La concentración inicial del radical DPPH+. Ademásde estos DOI,los
accesos B8 (2305.75 g fruta/G OF dpph), B9 (2320.62 g fruta/g de dpph), SJ-4 (2239.49 g
fruta/G OF dpph) y MB-5 (2215.94 g fruta/g de DPPH) también presentaron alta capacidad
antioxidante, siendo sus promedios estadísticamente Iguales el uno al otro. ElInverso fue
observado para los accesos MB-6, MB-8, B5, SJ-3 y MB-4, evidenciando menor capacidad
antioxidante en comparación con los otros.
(2010) Evaluado la capacidad antioxidante de las frutas aaí (EuterpeoleraceaMart) y
Patauá(oenocarpus PATAUAMart) por el método Dpph y obtenida para las Frutas aaí 2447g
de fruta/gdedpph(b.s.)yparalosfrutosdePatauá2292g de fruta/gdeDPPH (B.S.), los valores
cercanos a los observados para las adhesiones de Bacaba que destacaron cuando la capacidad
antioxidante por el método the dpph. (2012) afirmaron que los extractos de frutas de Bacaba
son ricos en compuestos químicos,que son responsables de la alta capacidad antioxidante de
losfrutos.
En general, para ambos métodos utilizados, la evaluación de la capacidad antioxidante
mostró valores elevados paralosaccesosB7,B8yB3, EstablecidaenBelém, además de
lasadhesionesSJ-1ySJ-4, de SanJuandeAraguaia, que también mostró altas concentraciones en
compuestos fenólicos. En elLiteratura,variosautorestienencompuestos fenólicos con la
capacidad antioxidante de las frutas, que se pueden atribuir a las propiedades deReducción de
oxigenasde lamásvariadoPolifenoles,queJugarPapelimportante en la absorción y neutralización
de los radicales libres (RUFINO et al., 2010; BORGES et al., 2011; KARABIN et al., 2015).
Los resultados indican que estas adhesiones son prometedoras, con
altosnivelesencompuestosfenólicos y capacidadantioxidanteinvitroyaposibleprotección contra
las especies reactivas (radicales libres), y debe ser mejor explorado en el programa de cría de
la especie, para obtener variedades y cultivares con alto potencialantioxidante.
49
47

5.3 CORRELATION entre compuestos fenólicosy


antioxidante CAINVITRO

Los coeficientes de correlación de Pearson obtenidos entre los compuestos fenólicos


totales medios, flavonoides totales, flavonoides totales, antocianinas monoméricas totales y
capacidad antioxidante, evaluados por el método TEAC y DPPH, se presentan sen la mesatres
de ellos.

Cuadro 3. Coeficientes de correlación lineal de Pearson (r) entre los compuestos fenólicos y la
capacidad antioxidante de las diferentes adhesiones deOenocarpus Distichus.

Flavonoides Total Antocianinas


Compuestos
Variabl Totalflavanols monoméricas
fenólicos
e totales
totales

Teac 0.89 * 0.88* 0.72 * 0.54 *


Dpph -0.76 *- 0.71*- 0.78 *- 0.54 *
* P significativo a 0,05.

Los resultados encontrados en el presente estudio sugieren que los compuestos fenólicos
totales contribuyeron a la capacidad antioxidante in vitro de los frutos deO. Distichus,ya que
mostraron una correlación Lineal significativo (P a 0,05), con la correlación entre elmétodo
THETeac y negativo por el método DPPH. Se espera esta correlación negativa con el método
DPPH, ya que esta asociación negativa denota la relación inversa de los VALORES de
EC50(cantidad de muestra necesaria para reducir la concentración inicial del radical en un 50%
Dpph)conlacapacidad antioxidante, es decir,losvaloresmás bajosdeEC50 Representaruna mayor
capacidad del extracto en la reducción del radical dpph.
Los flavonoides totales también contribuyeron significativamente a la capacidad
antioxidante y mostraron una correlación positiva con el método TEAC (0.88) y negativo por
el método DPPH (-0.71), como se esperaba. Se sabe que los flavonoides son excelentes
antiumxidantes, ya que, según Roesch et al. (2003), las sustituciones de grupos hidroxilicos en
estructuras libres contribuyen al potencial redox. Tambiénse observó un comportamiento
similar paralacorrelaciónentreeltotal de flavanolsyelTioxidantes por los dos métodosutilizado.
Del mismo modo, las antocianinas monoméricas también contribuyeron a la capacidad
antioxidante por el método TEAC y DPPH; Sin embargo, la correlación se consideró moderada
(0,54 y-0,54), lo que indica que la capacidad antioxidante de losaccesos de un fan-jerk no
50
47

Está completamenteasociado con la acción aisladadel Grupo antocianina, peroposiblemente


losefectos sinérgicos y antagónicos entre Diferentes grupos de compuestos fenólicos y otros
compuestos. (2005) La actividad antioxidante no se produce por la contribución de uno u otros
compuestos aislados, sino por el sinergismo entre ellos, hecho que puede justificar la
correlación significativa de la capacidad antioxidante con las clases de compostLos compuestos
fenólicos analizados en estetrabajo.

5.4 IDENTIFICACION Y QUANTIFICACION DE COMPUESTOS PHENOLICOS POR


HPLC-DAD

Según los resultados obtenidos de la cuantificación de compuestos fenólicos (tabla


1) yla capacidad antioxidante(tabla2), se seleccionaroncincoadhesionespara la evaluacióndel
perfil fenólico por cromatografía líquida. Para este estudio se seleccionaron las adhesiones B7,
B8, B3, SJ-4 y SJ-1. Los picos identificados están numerados del 1 al 6 y corresponden a los
compuestos presentados en la tabla4.
La Figura 13 muestra el Cromatograma para las cinco adhesiones deO. Distichus,
monitoreado a320 nm. Se identificaron cuatro ácidos fenólicos: ácido dihidrozibenzoico 3.4,,
ácido clorogénico, ácido sirinico y ácido ferúlico, además de rutina y un derivado glucosilado
de la antocianina, cyanidina-3-O-rutinoside, monitoreado A 520 Nm (tabla 4). De acuerdo con
el tiempo de retención y la co-elui-o del patrón externo con los datos bibliográficos (CHIST;
MERCADANTE, 2012; PISTÓN et al., 2014; BOEING et al., 2017), la combinación de la
información obtenida autorizadapara identificarparaPeak 1, 3.4-dihydroxybenzoic acid in all
the adhesionsofO.Distichus.Variacionesentre0.55G/G(SJ-1)el1.65G/G(B7) (B.S.)fueron
encontradosentreelaccesosseleccionados,Inferiora lareportadoparaRobleetal.(2016) para frutos
deO. Distichusentre 2,66 y 7,61 g/g (en material liofilizado);Sin embargo,para el
accesoB7,elcontenidofueSiguientea lareportadoaelFrutasdeAcai
Berry(1,77g/G(B.S.))(Pacheco-PALENCIA et al.,2008).
En cuanto al pico 2,todos losaccesosdeO. Distichusmostraron ácido clorogénico con una
concentración relevante. Los datos espectrales de la absorción uv-visible revelaron, para el
ácido clorogénico, la absorción en ámax a 326 nm, según lo esperado para este ácido fenólico
(PISTÓN et al., 201,4). Para este derivado del ácido cafeico se atribuye alta capacidad de
secuestro de radicales libres, con acción retardada, en varias etapas de la autoxiación (XIANG;
NING, 2008; MARINOVA et al., 2009). Las concentraciones de este compuestoenlos
frutosdebac-aba-fanmostraronvariacionesentre0,71g/G(SJ-1)a 64.56
51
47

G/g (B7) (B.S.), con énfasis en el acceso B7, que mostró una concentración notoria, diferente
(p > 0,05) de los otros accesos seleccionados. Por otro lado, Bicudo et al. (2014) Al estudiar la
composición fenólica de los frutos de Jussara observaron un contenido medio de 13,3 g/g (B.S.)
y Whojdylo et al. (2008) Cuantificados en frutas aaí valores que van desde 0,2 á g/g a 16,4 g/g
(B.S.) , cerca de los niveles observados para las frutas Bacaba-de-Fan analizadas en el presente
estudio.
47
52

Tabla 4. Tiempo de retención, máxima absorción y compuestos fenólicos detectados en las adhesiones de Oenocarpus Distichus Mart.

Adhesiones de Oenocarpus Distichus


*
Pico •Máx(nm) Compuestos fenólicos
tR
(mi
n)

B3 B7 B8 SJ-1 SJ-4

1 14.1 298 3.4-Acido dihidroxibenzoico


0,98 a 0,09C 1,65 a 0,16 a 1,19 a 0,12b 0,55 a 0,03D 0,90 a 0,08C

2 16.6 326 Acido clorogénico 28,29 á 1,51b 64,56 x 2,75 a 5,44 a 0,77D 0,71 a 0,03y 16,18 a 0,16C

3 18.3 280, 516 Cyanidina-3-O-Rutinoside 76,39 á 1,63c 196,51 a 2,73 90,95 á 2,22b 48,47 a 1,55y 62,59 a 1,24D
a
4 21.6 275 El ácido sirínico 7,52 á 0,92ab 8,43 a 0,22 a 7,22 a 0,29AB 7,13 á 0,27b 8,42 a 0,10 a

5 23.9 268, 350 Rutina 27,89 á 1,03b 56,76 a 2,13 a 13,98 a 0,54D 23,85 á 2,54 a.C. 21,01 a 0,50c

6 27.5 323 Acido ferúlico 2,92 á 0,12b 12,57 a 0,93 a 1,45 á 0,08C 0,98 a 0,17C 1,18 a 0,16C

Total (g/g) 143.99 340.48 120.23 81.69 110.28

* Tiempo de retención en la columna C18 Synergi Hydro (4 m). Los datos representan la media de la desviación estándar (base seca). Los promedios seguidos de la misma letra, en línea, no
difieren entre sí, con una probabilidad del 5%, por la prueba de Tukey.
53
47

Acceso-B7

ElProceso-
B8

Acceso-B3

Access-SJ-4

Access-SJ-1

Figura 13: Cromatograma a 320 nm de los extractos de Bacaba-de-Fan(oenocarpus distichusMart).


Pico1;ácido3.4 ácido dihidroxibenzoico.Pico2. el ácidoclorogénicos.Pico3;Cyanidina3- el El-
Rutinoside.Pico 4; ácido sirinico. PiCo 5; rutina. Pico 6; ácido ferúlico.

La Figura 14 muestra el cromatograma completo a 520 nm para los extractos de


Oenocarpus Distichus. Cabe destacar que el tiempo de retención, un parámetro basado en la
polaridad de la molécula, está influenciado por el grado deilación de Glicos y por la naturaleza
de losazúcares presentes en la antocianina MOLECULES (Bicudo et al., 2014). Los datos
espectrales visibles a los rayos UV revelados,paraPeak3,dos bandas de absorción alrededor de
280nmy516 nm (Figura 15), que indicaba, por Co-elui con el patrón externo, la presencia
mayoritaria de Cyanidine-3-o-rutinoside, con variaciones medias para Las adhesiones
deBacaba-de-fan entre 48,47 g/g (SJ-1) y 196,51 g/g (B7) (B.S.). Esta Nina lipofiladatambién
ha sido detectadaen las frutas deAaí (Euterpeoleracea)(garznetal.,2017
),Jussara(Euterpeedulis)(Bicudo et al., 2014), Patauá (oenocarpus pataua)(Rezaire et al.,
2014), Bacaba (oenocarpusbacaba) (ABADIO-Finco,etal.,2012)yfrutosde lasbayasde
TIPO,comoBlackBerry, Frambuesayfresa(WUetal.,2006).ElVariacionesobservadoen
elpresenteestudioson coherentes con el hecho de que las características ambientales bajo las
cuales el desarrollo y maduración de los frutos tienen una gran influencia en la síntesis y
concentración de los compuestosResponsablepor elpigmentaciónde
laFrutas,peroelNaturalezayelconcentrations
54
47

De estas sustancias obedecen a un determinante genético relativo a la propia planta (TAIZ &
ZEIGER, 2006). A pesar de las variaciones observadas, el interés por los frutos de Bacaba-de-
Fan es el resultadodesusimilitudconlosfrutosdeaaí(EuterpeOleraceae),que ya son bien
conocidos por contener altos niveles en compuestos fenólicos, particularmente antocianinas
(Garzón et al.,2017).

Acceso-B7

Acceso-B8

Acceso-B3

Access-SJ-4

Access-SJ-1

Figura 14: Perfil cromatográfico completo obtenido por HPLC-DAD registrado a 520 nm para los
extractosdeoenocarpusdistichusMart.Nota:SpectredeAbsorciónidentificadoaelPico3 en el ,Cianidina 3-
El-Rutinoside.

El perfil espectral que se refiere al Pico 4mostró características deabsorción detectadas


para el ácido sirínico, por orden y tiempo de Co-elui-o con un patrón auténtico. El compuesto
detectado mostró una banda de absorción máxima en el UV visible de 275 nm (Figura 15).En
la tabla 4, los resultados de este estudio mostraron que las concentraciones de 7,13 g/g (SJ-1) a
8,43 g/G(B7)(B.S.)aelaccesosdeEl.DistichusDon'tpresentadoDiferencias(p > 0,05)yson más
altas que las notificadas por Carvalho et al. (2016) (1,94g/Ga 3,53 g/g). Por otro lado,se informó
de un estudio de lacomposición de los frutos de Aaí(Euterpeoleracea)valorde48g/g
(B.S.)(Garzónetal.,2017),yen los frutosdeJussara( Euterpeedulis)(47 á g/G00(B.S.))
55
47

(BICUDO et al., 2014), superior a los valores encontrados para las frutas Bacaba-de-fan en el
presente estudio.
Entre losflavonoides,elrutin,pico5,fuedetectadoporCo-elui-ocon patrón externo. Los
datos de absorción espectral emitieron dos bandas de absorción, max a 268 nm y 350 nm (Figura
15) característica de este flavonoide (BOING et al., 2017). Numerosos estudios han revelado
múltiples beneficiosen elusoderutinaenlos tratamientos de enfermedades divoice(MAetal.,
2017). Según los resultados, la concentración de rutina en las adhesiones de Bacaba evaluada
osciló entre 13,98g/G(B8) y 56,76g/G(B7)(B.S.), lo que representa la gran variación en la
composición fenólica Entre los accesos deO. DIstichus,con esnopeo acceso b7quese
destacóentrelosdemás.AestudioanteriorsobreelcomposiciónFenólicode laBacaba Fruits mostró
la mayoría de la presencia de rutina como el flavonoide predominante en esta fruta, con
Valminerales que van desde 15.24G/Ga 56,84G/G(CARVALHO et
al.,2016);encontraparte,enestudioconFrutasdeAcai Berry(Euterpeoleracea), Se observó34
ContenidoG/G(B.S.) (G-N et al.,2017).
Por último, el pico 6 se identificó por el tiempo deretención y el co-elui-o del patrón
externoy las muestras de ácidoferúlico.EsteácidoFenólicopresentadoBandade absorción con el
valor máximo a 323 nm (Figura 15) característico de este ácido fenólico (CHISTTM;
MERCADANTE,2012).Más alláque,elEstándaryelMuestrasFortificadoconelEstándaranálisis
externo en las mismas condiciones cromatográficas mostró características espectrales y tiempo
de retención para el compuesto mencionado. En cuanto a la concentración de ácido ferúlico, las
fraccionesdeo. Distichusmostraron diferencias de 0,98g/G a 12,57 g/g (B.S.), con
concentración notoria para el acceso B7, que presentaba la media más alta ( 12,57 g/g), superior
al valor reportado para el genotipo Black-05 deO. Distichus(10,8 g/g), reportado por Carvalho
et al. (2016);en elSin embargo,Inferiora layacuantificadoaelFrutasdeJussara(33
g/G(B.S.))(INADA et al.,2015).
La suma de los ácidos fenólicos y los flavonoides identificados, entre las adhesiones del
ventilador Bacaba, permitiódestacar el acceso B7, que exhibió la media más alta 340,48g/g(b.
s),entrelosaccesos Elegidoparaelestudio,conevidentevariaciónentrelosotrosaccesos según
Gobbo-NetoyLopes (2007),Hayvariosfactoresquepuedeninterferircon el contenido de
metabolitos secundarios en las plantas, de los cuales los ácidos fenólicos, Los flavonoides y
pigmentossonparte.Entre losestossonelestacionalidad,temperatura,Disponibilidady la
disponibilidad de nutrientes. (2008) Tambiéndestacan que las diferencias en las condiciones
agronómicas y ambientales pueden afectar el contenido fenólico presente en las plantas,
influyendo en las variaciones de composición.
56
47

Pico Uno. 3.4 Acido Pico 2. Acido clorogénico


dihidroxibenzoico
326 NM
Absorbencia (UA)

298
NM

Pico 3. Cianidina 3-O-Rutinosideo Pico 4. El ácido El


Siringico
516
280 NM
Absorbencia (UA)

NM
275
NM

264 Pico 5. Rutina Pico 6. Acido ferúlico


NM
350
Absorbencia (UA)

NM
323
NM

Figura 15 : Espectros máximosde absorción de compuestos fenólicos identificados en las


adhesiones de
Oenocarpus Distichus Mart.
57

5.5 CORRELATION y CLASIFICACIÓN de las adhesiones a Oenocarpus distichusMART


POR análisis estadístico multivariado

El análisis de componentes principales (PCA) se llevó a cabo para evaluar y clasificar


los datos sobre el contenido fenólico y la capacidad antioxidante yAccesos M Oenocarpus
DistichusPermitido a Condensación De Mayor Parte De Información relacionado Para Datos
Texto original en. el Dos componentes principales, PC1 y PC2, presentaron un porcentaje
acumulado del 86,9% de la varianza Total Explicó Por Dos ComponeEfore Principal Ser
Considera Alto o suficiente para representar todas las variaciones. El primer componente
principal (PC1) fue capaz de explicar 66,5% De Variación e a Segundo PC2 Explicó 20,4% De
Variación Total (Figura 16 (a)).

El B

Figura 16: Clasificación de las variables de respuesta en el plan formado por la fisiológica activa y
suplementaria por análisis estadístico multivariado. (a) proyección de las variables por Análisis de
componentes principales (PCA);(b)ScatterplotaeldiferenteaccesosdeOenocarpusDistichusMart POR
PCA, con grupos sugeridos por LA HCA; (c) Dendrograma porHCA.
58

En el gráfico de la dispersión de la puntuación de las adhesiones de Bacaba, para el


primer y el segundo componente principal (PC1 y PC2) es posible notar que las adhesiones
presentaban una tendencia a formar grupos y algunos aislados. Los datos de la Figura 16 b)
muestran que la ubicación geográfica, es decir, el municipio en el que se recogió la muestra, es
un factor determinante en las características de composición de los frutos de Bacaba-de-fan, ya
que las adhesiones B3, B7 y B8, cultivadas En la ciudad de Belém (tabla 1), presentaron una
tendencia al grupo, porque presentaban similitudes de composición fitoquímica, y son las
adhesiones que mostraron elmayor contenido fenólico. Además, de los accesos antes
mencionados, B7 se elimina aún más porque presenta la mayor concentración fenólica entre las
adhesiones evaluadas, lo quepermite diferenciarlade
laotraaccesosestudiado.Estehechoesrelevantes Con el fin de establecer estrategias genéticas de
conservación que permitan su uso como objeto de estudio en la mejora genética.
Los datos gráficos todavía permiten observar que las adhesiones que presentaron niveles
intermedios encompuestos fe-noic totales, flavonoides totales, flavanolstotalesyLas
antocianinas totales (B9, B2, SJ-4 Y MB-5) muestran puntuaciones cercanas entre sí (Figura 16
(b)), y están disponibles para la formación de grupos que puede ser observada parcialmente por
el dendrograma generado (Figura 16 (c)). Access SJ-1, aunque presenta un contenido
moderadoparacompuestos fenólicos totales, se destacóentrelospromedios más
altosenflavonoides totales(Cuadro1),quetiende a esta aproximación de las puntuaciones de las
adhesiones que presentaron valores intermedios. La información gráfica todavía indica que las
adhesionesque presentaron el contenido fenólico más alto, también mostraron una mayor
capacidad antioxidante por los ensayos Abts y DPPH y tendían a agruparse. De hecho,la
correlación de Pearson observó correlaciones lineales y significativas entre el contenido total
de compuestos fenólicos y los lazos antioxidantes capaci por los métodosAbts+y dpph+ (R a
0,89 y r a 0,76, respectivamente) (Tabla 3). Resultados similares fueron reportados en la
literatura para otras matrices de alimentos que presentaron una correlación significativaentre
compuestos fenólicos y capacidad antioxidante (RUFINO et al.,2010).
Según la Figura 16 b), se observa una tendencia a la formación de un grupo de
accesosmayoritarios recogidos en
elmunicipiodeMarabá.ElDisposicióndeAislamientopresentados por estas adhesiones que
presentaban una similitud relativamente alta, indican que sus contenidos fenólicos permiten
diferenciarlos de las adhesiones cultivadas en Belém y San Juan de Araguaia. Las adhesiones
de San Juan de Araguaia mostrarondiferencias de maioreentre sí, exponiendouna
mayordispersiónde los resultadosylatendenciaaDon'tObtener Vamos
.Eldispersióndepuntuaciones referenciatasa
laMayorlechadaformado,el¿QuéObtenerencuentrarelativamentemásde distanciaen el
58

El último cuadrante, se caracteriza por presentar las adhesiones de Bacaba-de-fan con niveles
más bajos en compuestos fenólicos totales, flavanoides totales, flavanols totales y antocianinas
totales, siendo distintas de los otros grupos formados. Para una mejor selección, deben
realizarse estudios de caracterización y composición química de las frutas Bacaba-de-fan con
la intención de seleccionar las mejores adhesiones por localidad de cultivo.
59

6.0 CONCLUSION

Los resultadosobtenidosen el presenteestudiosobrelos32accesosdeBacaba-Fan, nos


permiten concluirque:
La variabilidad genética y la localidad de cultivo influyeron significativamente en las
características del contenido y la composición fenólica.
Los resultados de este estudio indican que lasfracciones de Bacaba tienen variaciones
de composición en compuestos fenólicos, principalmente flavonoides, con concentraciones
equivalentes a las ya mencionadas para otros frutos de la familia Arecaceae.
Destacaron, como prometedores, con potencial para ser utilizados en los programas de cría, las
adhesiones B3, B7 y B8, ubicadas en Belém, además de las adhesiones SJ-4 Y SJ-1 de
SanJoaodo Araguaia,quepresentanaltosnivelesdecompuestos fenólicos y capacidad
antioxidante.
Correlacionesentrecompuestosfenólicos y capacidad antioxidantese observó para los
frutos debacaba-de-fan.
A través del análisis de cromatografía líquida fue posible identificar como un compuesto
fenólico importante la rutina, siendo identificaday cuantificada por primera vez la presencia de
ácido clorogénico y cyanidina 3-O-Rutinoside,presente En la pulpa Liofilizada de los frutos de
Bacaba-de-fan. Esta información es importante para la industria alimentaria y farmacéutica,
sabiendo que los frutos de Bacaba-de-fan son una fuente inexplorada de compuestos bioactivos.
60

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