TINCIONES BACTERIOLOGICAS

DEFINICION
La tinción bacteriológica es una serie de pasos o procedimientos destinados a poner en manifiesto la
morfología y estructuras bacterianas a través de sustancias químicas.
Colorante.- Sustancia química orgánica poseedora de color y tiene la capacidad de dar color a una sustancia o
dar contraste a la célula.
Grupo cromoforo o color radical: Es un grupo químico que da un color específico a un compuesto ligado a
un grupo auxocromo para formar un tinte.
Grupo auxocromo o color verdadero: Suministra la propiedad de formar sales y es el responsable de
transferir el color de un tinte a una substancia o material sobre el cual actúa. Proceso conocido como tinción.
Tinción bacteriológica
Por su apetencia es básica, ya que los elementos que vamos a teñir corresponden a células
procariotas protozoos, es decir aquellas que no poseen membrana nuclear que delimite el material
del núcleo ni estructuras membranosas. De esta manera encontramos al cromosoma bacteriano
desnudo donde se encuentra el ADN y ARN dando un resultado por la apetencia acida que tiene a
una apetencia básica.
PASOS GENERALES
1. Desengrasar: Se lava el porta-objetos con abundante agua y jabón, luego secar con un paño que no
desprenda pelusas y por ultimo dar 2 pasadas por la llama del mechero para que desaparezca la
grasa.
2. Identificar: Usar lápiz graso o lápiz diamante y elegir un extremo para identificar de manera
alfabético, numérico o alfanumérico.
3. Frotis:
 Se toma un portaobjetos previamente desengrasado y se coloca en el centro del
mismo una gota del cultivo líquido, mediante ansa de platino. Si el cultivo es sólido, se
coloca primero una gota de solución fisiológica o agua destilada estéril sobre el
portaobjeto. Luego, con ansa de platino se toma una colonia del medio sólido y se
emulsiona con la solución fisiológica. Se extiende con el ansa en forma de capa delgada y
uniforme.
 Se procede a la fijación del extendido. Para ello se pasa lentamente el portaobjeto, en forma
horizontal, sobre la llama del mechero manteniendo el extendido hacia arriba. La operación
se repite hasta sequedad total, cuidando evitar la combustión del extendido.
4. Fijación: Es el proceso por el cual matamos una célula pero de tal manera que todas sus
estructuras se mantengan indefinidamente los fijadores pueden ser físicos o químicos, en
este caso de bacteriología utilizaremos el fijador físico como ser el CALOR.
 TINCION GRAM
FUNDAMENTO.-
Membrana externa de las Gram (–)
 Es soluble en solventes orgánicos como el alcohol
 La capa de peptidoglicano es demasiado delgada como para retener el complejo cristal
violeta/yodo que se formó
 Por lo que va perdiéndose el color azul-violeta.

• Las Gram (+) no tienen su capa susceptible a la acción de solventes orgánicos

 Se deshidratan los poros y se cierran
 Reteniéndose el complejo cristal violeta/yodo y por consiguiente el color azul-violeta.

PARED DE LAS BACTERIAS GRAM (+)

 Peptidoglicano o mureina y mide entre 15 a 80 nm.
 Aminoácidos
 Hidratos de carbono
 Acidos teicoicos

Complejo Ribonucleato de Magnesio: Se forma interaptuando con el 1er colorante (violeta de

genciana o cristal violeta) + lugol = forman el complejo Violeta – Lugol también denominado Yodo
Color o Ribonucleato de Magnesio. Y esto solo pasa en las bacteias Gram (+) porque su pared
tienen acido teicoico que fijan el ion magnesio. Estas bacterias van adoptar el color del primer
colorante y se observan de color Violeta o Azul por el cristal violeta o violeta de genciana.
PARED DE LAS BACTERIAS GRAM (-)
 Peptidoglicano o mureina y mide 2 nm
 Aminoácidos
 Uniones Bayer*
 Membrana externa*

Su pared es mas compleja (mas patógena*).

Una vez teñido por el complejo violeta – lugol (el complejo ribonucleato de magnesio no se formo)
y después de ser tratados con alcohol acetona van a perder totalmente la coloración, lográndose una
estabilización de los poros (porinas) de las paredes, quedando tan amplios que perderían este
complejo, de ahí que solo son coloreadas con el colorante de contraste o secundario, adoptando la
tonalidad característica de las bacterias Gram (-) el rosado o fucsia por la fucsina básica.
REACTIVOS DE LA TINCION GRAM
1RA SOLUCION COLORANTE CRISTAL VIOLETA O VIOLETA DE GENCIANA
 Cristal de violeta 2 gr
 Alcohol 95% 20 mL

2DA SOLUCIÓN LUGOL:

 Yodo 1.5 gr.
 Yodato potásico 3 gr.
 Agua destilada 450 mL
Ojo: considerar la preparación de este sea actual (puede durar de 1 a 2 meses), porque si es muy
“viejo” el compuesto se oxidara por lo tanto los resultados serán inversos, las bacterias Gram (+) se
observaran como Gram (-) y viceversa.
3RA SOLUCIÓN DE ETER – ACETONA O ALCOHOL ACETONA
 Etil-éter (concentrado ) 125 mL
 Acetona 375 mL.
4TA SOLUCIÓN FUCSINA BÁSICA AL 0.5 %
 Fucsina básica 0.5 gr.
 Alcohol95º 5 mL
 Agua destilada 95 mL
PROCEDIMIENTO
1. Desengrasar
2. Identificar
3. Frotis
4. Fijación
5. Colorante Violeta de Genciana o Cristal Violeta. Cubrir totalmente el frotis (1 a 3min)
6. Lavar con agua corriente
7. Solución de Lugol actúa como Mordiente (30 seg a 1 min)
8. Lavar con agua corriente
9. Solución de Alcohol Acetona actúa como decolorante (30 seg a 1 min)
10. Lavar con agua corriente
11. Colorante Fucsina Básica. Cubrir toda la muestra (1 a 3 min)
12. Lavar con agua corriente
13. Secar en medio ambiente
14. Observar al microscopio con objetivo de 100X con aceite de inmersión
RESULTADOS:
 Morfología: cocos, bacilos o helicoidales
 Apetencia tintorial:
 Gram (+): observaran color violeta, azul o negro
 Gram (-): observaran de color fucsia, rojo o rosado
 Genero: staphylococcus spp, streptococcus spp, neisseria spp.