ENSAYOS

 MICROBIOLOGICOS  EN  
CONTROL  DE  CALIDAD:  
 ASPECTOS  RELEVANTES  
 

MSc.  María  Salas  Arruz  

Gerente  General  de  Hypa6a  S.A.  
Profesora  Principal  de  la  UPCH  
 
 ENSAYOS  MICROBIOLOGICOS  EN  CONTROL  DE  CALIDAD:  
 ASPECTOS  RELEVANTES  

 Temas:  
 
•  Ensayos  frecuentes:  Control  Microbiológico  (Limite  Microbiano),  
Esterilidad,  Potencia  AnIbióIca,  Endotoxinas  Bacterianas  –  
NormaIva  Fundamento  e  Interpretación  de  cada  ensayo.  
•  Manejo  de  Cepas  ATCC      
•  Cambios  recientes  en  USP  ó  BP  ó  en  las  BPL  de  la  OMS  para  
ensayos  microbiológicos.  
•   Infraestructura  requerida  para  reallizar  los  ensayos  
microbiológicos  Areas,  Equipos,  personal-­‐  Requerimientos  
mínimos  para  implementar  los  ensayos    
•  Controles  ambientales  requeridos  en  las  áreas  microbiológicas  
 FUNDAMENTO  E  INTERPRETACIÓN  :    
•  Control  Microbiológico  (Limite  Microbiano),  
•   Esterilidad,    
•  Potencia  AnIbióIca,    
•  Endotoxinas  Bacterianas  –  
 Fase Pre – analítica
Cepas
Control

Preparación
de medios y
diluyentes
Fase Analítica:

Promoción de
Crecimiento Validación
O Aptitud del
método de
prueba
 Control  Microbiológico  o  Limite  Microbiano  
Objetivo:
Permite determinar el número de bacterias mesófilas
(aerobias) y hongos que pueden desarrollarse en una
muestra así como determinar si en la misma se
encuentran microorganismos de riesgo para la Salud
(patógenos) como:
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomona
aeruginosa , Salmonella yBacterias gram negativas
tolerantes a la bilis
 Control  Microbiológico  -­‐  FUNDAMENTO:  
 
Mediante medios de cultivos óptimos se evalúa si la
muestra tiene gérmenes dentro de los límites establecidos
y que éstos no sean patógenos.

Medio de cultivo óptimo: se encuentra libre de gérmenes y

aptos para que sean capaces de generar el crecimiento de
microorganismos si estos estuvieran presenten en la
muestra.(Control de medios - Pruebas de Promoción de
crecimiento)

Se prevee y evalúa si la ausencia de crecimiento en la

muestra corresponde a inactivantes que se encuentren en
la formulación.(Pruebas de aptitud)
 Control  Microbiológico  o  Limite  Microbiano  

Medios de Cultivos:
Se debe evaluar que esten libres de gémenes, para lo
cual se les incuba por lo menos 48 horas y no debe
presentar crecimiento alguno.

Se debe evaluar que esten óptimos es decir que se

compruebe que puedan crecer microorganismos si la
muestra las tuviera, para lo cual se realiza la prueba de
promoción de crecimiento
 APTITUD DE LA PRUEBA - Validación

•  Se   debe   establecer   la   apItud   del   método   es   decir   la  

capacidad   de   la   prueba   para   detectar   los   microorganismos  
previamente   inoculados   (en   canIdad   conocida)   en   presencia  
del  producto  a  examinar.  

•  Permite   comprobar   que   el   método   sirve   para   el   fin   previsto  

en  la  formulación  a  evaluar.  
 
•  Para  estas  pruebas  de  apItud  se  deben  uIlizar  suspensiones  
estandarizadas   de   cepas   (ATCC:   American   Type   Culture  
CollecIon)  
 Control  Microbiológico  -­‐Partes  

El ensayo consta de 3 partes:

A.  Recuento Total de microorganismos aerobios.

(microorganismos aerobios que requieren oxigeno
para su desarrollo) TSA ( Tripticasa soya agar)

B. Recuento total combinado de Hongos Filamentosos y

Levaduras. Sabouraud agar

C. Determinación de patógenos. Se siembra la muestra

en caldo TSB tripticas soya borth y luego pasa a
medios diferenciales o selectivos.
 Control  Microbiológico  -­‐  Partes  

C. Determinación de patógenos. Se siembra la muestra en

caldo TSB tripticas soya borth y luego pasa a medios
diferenciales o selectivos.
Manitol  salado  –Staphylococcus  aureus  
Agar  Cetrimide  –Pseudomona  aeruginosa  
1 g muestra en TSB Mac  Conkey    -­‐  E.  Coli    

10 g muestra en TSB Caldo  Rappaport  /  XLD  –Salmonella  sp  

10 g muestra en TSB Caldo   Mosel/   VRD   Bacterias   gram   negaIvas  

resistentes  a  la  bilis  
 InacIvantes  
•  En  alguno  productos  con  posibles    inacIvantes  
es  necesario  adicionar  un  neutralizante.  Se  
requiere  evaluar  cual  es  el  apropiado  previo  al  
ensayo  
•  LeciIna  ó  Tween  80  
•  Hacer  inoculo  de  menos  de  100  ufc  y  la  
recuperación  de  ser  de  la  mitad  al  doble  
(factor  2)  
 PRUEBA  DE  MICROORGANISMOS  
ESPECÍFICOS  

Pseudomona Staphylococcus
aeruginosa aureus

Escherichia Salmonella sp.

coli
Especificaciones  –  USP/BP  
  Expresión  de  resultados  
Ensayo   Especificación   Resultado  

CONTROL  MICROBIOLOGICO      
102 UFC/g
(Máximo
•  Recuento  microbiano  de  
aceptable 200
aerobios  totales   UFC/g) Menor  de  10  UFC/g  
10 1 UFC/g
(Máximo
•  Recuento  combinado  de  de   aceptable 20
hongos  y  levaduras   UFC/g) Menor  de  10  UFC/g  
•  Determinación  de  patógenos:  
         Salmonella  sp   Ausente  en  1g   Ausente  en  1g  
         Pseudomona  aeruginosa   Ausente  en  1g   Ausente  en  1g  
         Staphylococcus  aureus   Ausente  en  1g   Ausente  en  1g  
         Escherichia  coli   Ausente  en  1g   Ausente  en  1g  
         Salmonella  sp   Ausente  en  10g   Ausente  en  10g  
 Dec  516-­‐  Res  1482  Comunidad  Andina(Julio  2011)  -­‐  
CosméIcos  
ÁREA DE APLICACIÓN Y
LÍMITES DE ACEPTABILIDAD
FASE ETARIA
  Productos para uso en a.  Recuento de microorganismos mesófilos
infantes (hasta 3 años) aerobios totales. Límite máximo 5 x 102 UFC/g ó
  Productos para uso en ml.
área de ojos. b.  Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en 1 g ó
  Productos que entran en ml.
contacto con las c.  Ausencia de Staphylococcus aureus en
membranas mucosas. 1 g ó ml.
d.  Ausencia de Escherichia coli en 1 g ó ml.
  Demás productos a.  Recuento de microorganismos mesófilos
cosméticos susceptibles aerobios totales. Límite máximo 5 x 103 UFC/g ó
de contaminación ml.
microbiológica. b.  Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en 1 g ó
ml.
c.  Ausencia de Staphylococcus aureus en
1 g ó ml.
d.  Ausencia de Escherichia coli en 1 g ó ml.
  Productos a ser a.  Ausencia de Candida albicans.
utilizados en los órganos
genitales externos
  TÉCNICAS  Y  ESPECIFICACIONES  (NormaIva)  
ENSAYO   MEDICAMENTO   DISPÓSITIVOS   COSMÉTICOS  
MÉDICOS   PRODUCTOS  
SANITARIOS  
CONTROL   USP,  BP   -­‐-­‐-­‐   DECISIÓN  516  
MICROBIOLÓGICO   EUROPEA   Técnicas   RESOLUCION    
(ANTES  LÍMITE   OTRAS   Propias   1482  (JULIO  
MICROBIANO)     2011  
ESTERILIDAD   USP,  BP   USP,  BP   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
EUROPEA,  OTRAS   EUROPEA  
OTRAS  
ENDOTOXINAS   USP,  BP   USP   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
BACTERIANAS   EUROPEA   BP  
OTRAS   OTRAS  
POTENCIA   USP,  BP   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
ANTIBIÓTICA   EUROPEA  
OTRAS  
 Esterilidad  
Consiste en evaluar si la
muestra esta libre gérmenes
viables.

Esta prueba se realiza en

medios de cultivo controlados y
óptimos (TSB y THIO)

También se evalúa la Aptitud de

la prueba, es decir si la muestra
no es capaz de inhibir el
crecimiento (6 gérmenes)
Ensayo  de  Esterilidad/Inhibidores  

Para Antibióticos:
Beta-lactamasa ó Penicinilasa
 
PENASA  es  el  nombre  
comercial,  enzima  que  degrada  
la  estructura  de  los  anIbióIcos    
conocidos  como  b-­‐lactámicos.  
Los  anIbióIcos  de  este  Ipo    
son  hidrolizados  por  las  b-­‐
lactamasas,  pierden  su  
acIvidad  anImicrobiana
 Especificación  y  forma  de  
expresión  de  resultados  

doEnsayo    Especificación    Resulta  

Esterilidad        Estéril          Estéril  
 
-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
   
 
Ausencia  de  crecimiento  microbiano  
El  ensayo  no  se  debe    repeIr  si  se  verifica  que  no  se  ha  comeIdo  error  ó  
contaminación  
 Valoración  microbiológica  
(Potencia  anIbióIca)  

•  Se  compara  la  acIvidad  anImicrobiana  de  la  

muestra  frente  a  un  estándar  de  
concentración  conocida.  
Potencia  AnIbióIca  .  USP  
Método  Cilindro  placa  
Se  emplean  15  placas,  de    
manera  que  se  obIene:  
S1=  9  lecturas  
S2=  9  lecturas  
S3=  45  lecturas  
S4=  9  lecturas  
S5=  9  lecturas    
M3=  9  lecturas  
Valoración  microbiológica  (Potencia  AnIbióIca)  
 
USP   BP  

Emplea  curva  de  5   Emplea  2  curvas,  una  del  del  

concentraciones    de  estándar   estándar  y  otra  de  la  muestra,  
y  1  de  muestra   cada  una  de  3  
concentraciones.  

La  curva  debe  tener  como   ………..  

máximo  factor  de  dilución  
1.25  

Se    debe  realizar  3   Se  debe  realizar  2  repeIciones  

repeIciones  independientes   independientes  
En  ambos  casos  los  promedios  de  las  repeIciones  se  obIene  
de  los  logaritmos  
 Diferencia  entre  USP  y  BP  
Halo   Halo
 
USP BP
  S3
S5
M3
S4 S2

S3  M3 M2
S1
S2
S1 M1

Log de Dosis
Log de Dosis
 Endotoxinas  Bacterianas  
•  Son  los  pirógenos  mas  toxigénicos.  
•  Es  facIble  cuanIficar  la  endotoxina  mediante  
una  técnica    in  vitro  denominada  LAL  
 Valoración  microbiológica  -­‐especificación  y  
expresión  de  resultados  
Ensayo   Especificación   Resultados  
Valoración   90.0%  -­‐110.0%  de  lo   95.2  de  lo  declarado  
Microbiológica   declarado  

Los promedios de las repeticiones se obtiene de los

logaritmos

Ejm
Forma  errada   Forma  adecuada  
Primer  Ensayo                    97.00  %   Primer  Ensayo          1.986771734            (97)  
Segundo  Ensayo            99.00  %   Segundo  Ensayo    1.995635195            (99)  
   
Promedio                                    98,00%   Promedio            1,991203465        97.995%  
 ¿QUE SON LAS ENDOTOXINAS
BACTERIANAS?

  Son lipopolisacáridos que se encuentran en la

membrana externa de la pared celular de las

bacterias gram negativas, compuestos por un
polisacárido y el lípido A.

  Inicialmente se les llamó endotoxinas ya que las

bacterias no la excretan al medio sino son

liberadas durante la lisis de la bacteria
 ¿QUE ES LAL?

  LAL (Limulus Amebocyte Lysate) o Lisado de

amebocitos del género Limulus, es un extracto
acuoso de amebocitos de la sangre de una
especie de cangrejo llamado Limulus
polyphemus ( Horseshoe Crab ), animal
prehistórico cuyo origen data del periodo
Cámbrico, de hace más de 500 millones de años,
por lo que se ha considerado como fósil
viviente encontrados en áreas costeras del este
de EE.UU y el Golfo de México.
Curso  de  Validación  de  Procesos  y  Técnicas  
AnalíIcas,  dictado  por  HypaIa  para  IPEN-­‐  
2014  
ETAPAS DE LA PRUEBA DE LAL
METODO GEL-CLOT
  Confirmación de la Sensibilidad del reactivo de

LAL

  Prueba de Factores de Interferencia (Inhibición

y magnificación)

  Prueba del Límite de endotoxina

LA PRUEBA DE LIMULUS (GEL CLOT)

 Fundamento:
•  Las proteínas
coagulables del
lisado de
amebocitos de
Límulus gelifican
en presencia de
las endotoxinas
baterianas
FOTO: ASSOCIATES OF CAPE COD.
 PRUEBA DE LIMITE
Y CUANTIFICACIÓN
Ejemplo: Sensibilidad Etiquetada (lambda) 0.25 EU/mL
MVD = 64
DILUCIONES DE LA MUESTRA D.I.= Dilución inicial
Tubos D.I. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 Control
Negativo C.P.= Control positivo
1 + + + - - - - -
2 + + + - - - - -
C.P.1 + + + + + + + +
C.P.2 + + + + + + + +

Concentración de endotoxinas= λ x IE
λ = Sensibilidad del reactivo
IE= Inversa de la última dilución positiva

Concentración de endotoxinas = 0.25 x 4 = 1EU/mL

 PRUEBA  DE  INHIBICIÓN  Y  MAGNIFICACIÓN  
 

Concentración  CSE  en  la  Solución  

Concentración  CSE  en  Agua  LAL   Solució
de  Muestra  (UE/mL)
(UE/mL) n  de  
Agua  
Tubos Muestr
2  λ λ 0,5  λ 0,25  λ LAL 2  λ λ 0,5  λ 0,25  λ
a    
(MDV)
1  +  +  +  +
 -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐
2  +  +  +  +
 -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐
3  +  +  +  +
 -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐
4  +  +  +  +
 -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐  -­‐
 Especificación  y  forma  de  expresión  

Ensayo   Especificación   Resultado  

 
Endotoxinas   No  mayor  de  10   Menor  a  10UE/
Bacterianas     UE/mg   mg  
MANEJO DE CEPAS ATCC
 Cepas  ATCC  
•  Staphylococcus aureus ATCC 6538
•  Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
•  Escherichia coli ATCC 8739
•  Salmonella typhimurium ATCC 14028
•  Bacillus subtilis ATCC6633
•  Candida albicans ATCC 10231
•  Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
 TIPOS DE CEPAS
-  Cepas de colección: Microorganismos definidos
por lo menos a nivel de género y especie,
depositados y mantenidos en una Colección de
Cultivos (CC) o Centro de Recursos Biológicos
(BRC) y catalogados con el acrónimo de la
colección/BRC seguido de un número identificativo.

-  En dicho catálogo se reseña el origen de la cepa,

sus condiciones de cultivo y, en muchas ocasiones,
algunas de sus características, así como la
equivalencia, si la hay, con otras colecciones. Es
equivalente a cepas de referencia, el proveedor
más conocido es ATCC.
 CEPAS
-  Cepas de reserva: cepas idénticas obtenidas
mediante un único subcultivo de una cepa de
referencia suministrada por el proveedor, o que
proceden directamente del proveedor como tales.

-  Cepas de trabajo: subcultivos primarios obtenidos

de una cepa de reserva. La USP indica que la cepa
sólo debe ser utilizada hasta la quinta generación.

-  Cepas comerciales: cepas suministradas por

casas comerciales diferentes de las colecciones de
cultivo o Centros de Recursos Biológicos, y que
pueden o no proceder de una colección de cultivos.

- Cepas salvajes: No proceden de CC ni de BRC.

 Solo es válido hasta el quinto pasaje

LIOFILO DE LA ATCC

Primer
Pasaje CEPAS  DE  RESERVA  
Primer Primer
Primer Primer
Pasaje Primer Primer Pasaje
Pasaje Primer Primer Pasaje
Pasaje Pasaje Pasaje Pasaje

Segundo Pasaje
CEPAS  DE  TRABAJO  
Segundo
Segundo Pasaje Pasaje
 Las  cepas  se  uIlizan  en  
Promoción de crecimiento de los
A
medios

Prueba de las propiedades B

inhibitorias de los medios

C
Prueba de las Propiedades
indicadoras de los medios

D
Ensayos de Aptitud del método de prueba
 Características
Medio de cultivo Microorganismo de prueba

C (-) C(+)

Agar VRB S.aureus E.coli Colonias rojas con precipitado

ATCC 6538 ATCC 8739 rojo al rededor
P.aeruginosa
ATCC 9027
Agar Mac Cokey S.aureus E.coli Colonias rojas o rosadas, que
ATCC 6538 ATCC 8739 puede tener precipitado al rededor

Agar Manitol Salado E.coli S.aureus Colonias amarillas con zona

ATCC 8739 ATCC 6538 amarilla al rededor
Agar Cetrimide S.aureus P.aeruginosa Colonias verdosas por formación
ATCC 6538 ATCC 9027 de piocianina
Agar XLD S.aureus Salmonella Colonias negras
ATCC 6538 ATCC 14028
C a l d o R a p p a p o r t S.aureus Salmonella Turbidez del medio. Se pone
Vasiliadis ATCC 6538 ATCC 14028 ligeramente amarillo
Caldo Mossel S.aureus E.coli El medio se enturbia
ATCC 6538 ATCC 8739
P.aeruginosa
ATCC 9027
Infraestructura  requerida  para  realizar  los  
ensayos  microbiológicos  Areas,  Equipos,  
personal-­‐  Requerimientos  mínimos  para  
implementar  los  ensayos    
Instrumentos  
necesarios  
PERSONAL  
   
Los  ensayos  microbiológicos  deben  ser  realizados  y  
supervisados  por  una  persona  experimentada,  
calificada  en  microbiología  o  su  equivalente.  
 
 El  personal  debe  tener  entrenamiento  básico  en  
microbiología  y  experiencia  prácIca  relevante  antes  de  
ser  autorizado  a  realizar  el  trabajo  que  implican  los  
ensayos  microbiológicos.  
   
 INSTALACIONES  -­‐  Microbiología  
Laboratorio  de  microbiología;  
 
 Separado  de  áreas  como  las  de  producción  
 Diseñada  para  sus  acIvidades  y  evitar  la  
     contaminación  y  la  contaminación  cruzada  
 Materiales  de  construcción  para  limpieza,    
     desinfección  y  minimizar  los  riesgos  de      
     contaminación    
 De  acceso  a  personal  autorizado  
 INSTALACIONES  
Personal  del  laboratorio  debe  conocer;  
 Procedimientos  de  entrada  y  salida    
 El  uso  de  las  áreas  
 Las  restricciones  de  trabajo  en  cada  área    
 Razón  de  las  restricciones  
 Niveles  de  contención      
 INSTALACIONES  
Sistemas  de  aire  acondicionado;  
 
 Separado  de  áreas  como  las  de  producción  
 Incluir  temperatura  y  humedad  controlada  
 El  aire  no  debe  ser  fuente  de  contaminación    
 INSTALACIONES  
Clasificación  de  áreas  ;  
 De  acuerdo  a  los  productos  y  acIvidades  a    
     desarrollar  
 El  ensayo  de  esterilidad  debe  ser  ejecutada  en    
     condiciones  de  operaciones  de  manufactura        
     estéril/  asépIca    

Equipamiento;
 NO DEBE SER COMPARTIDO
    
AREAS  –IMPLEMENTACION:  
 
Definir  hacer,  solo  para    lo  que  ha  espacio  suficiente  
   
Control   Esterilidad   Potencia   LAL  
Microbiológico   AnYbióYca  
Preparación  de   X   X   X   …….  
medios  
Área    de  lavado   X   X   X   X  
de  sucio  
Área  de  lavado   X   X   X   x  
de  limpio  
Áreas   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐   x   …….   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
clasificadas  
Área  no   x   x   x  
clasificada    
Espacio  para   2   2   1  a    3   ….,  
Incubadoras  
 Validación de métodos de ensayo
Los métodos de ensayo estándares (farmacopeicos) se
consideran validados. Sin embargo, se necesita demostrar que
el método de ensayo es adecuado para su uso en la
recuperación de microorganismos en presencia del producto
específico.

Los métodos de ensayo que no se basan en las farmacopeas u

otras referencias reconocidas deben ser validados antes de su
uso. La validación debe incluir, cuando sea apropiado,
determinación de la exactitud, precisión, especificidad, límite de
de- tección, límite de cuantificación, linealidad y robustez. Los
potenciales efectos inhibitorios de la muestra deben tomarse
en cuenta al analizar diferentes tipos de muestra. Los
resultados deben evaluarse con métodos estadísticos
apropiados,
 Equipamiento

Cada equipo, instrumento u otro dispositivo utilizado para el

análisis, verificación y calibración debe identificarse
individualmente.

La validación inicial debe incluir estudios de desempeño

(distribución espacial de la temperatura) para cada ciclo
operativo y cada configuración de carga usada en la práctica.

Se debe repetir este proce- so después de cualquier

reparación o modificación significativa
 ENSAYOS  MICROBIOLOGICOS  

CABINA  DE  FLUJO  

LAMINAR  
HORIZONTAL  
 ENSAYOS  MICROBIOLOGICOS  
Cabina   de   bioseguridad  
que   permite   el   manejo  
de   cepas   y   sustancias  
peligrosas   como   por  
ejemplo  :  citostáIcos  
 
    
PRINCIPALES  EQUIPOS–IMPLEMENTACION:  
   
Control   Esterilidad   Potencia   LAL  
Microbiológico   AnYbióYca  
Incubadoras  dedicadas   2   3   1-­‐3   …….  

Incubadora  común   1   1   1  
para  medios  
pH  metro   X   X   X   x  

Cabina  de  flujo   X   x  

laminar  ó  de  
bioseguridad  
Cabina  de   x   ……   x   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
bioseguridad  
balanza   x   x   x  

Autoclave  de  limpio   x   x   x   x  

Autoclave  de  sucio     x   x   x  

 CAMBIOS  RELEVANTES  USP,  BP,  BPL  
ENSAYO   USP   BP  
CONTROL   ………armonizada   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐armonizada  
MICROBIOLÓGICO  
ESTERILIDAD   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐armonizada   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐armonizada  
VALORACIÓN   Mayor  énfasis   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐  
MICROBIOLÓGICA   estadísIco  
LAL   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐armonizada   -­‐-­‐-­‐-­‐-­‐-­‐armonizada  

EN  EL  2011  SE  PÚBLICA  BPL  DE  LA  OMS  ESPCÍFICA  PARA  
MICROBIOLOGÍA  
 Buenas  pracIcas  de  la  OMS  para  
laboratorios  de  microbiología  farmacéuIca    
WHO  TRS  961.  2011  
 7.  Instalaciones  
Los   ensayos   microbiológicos,   si   fueran   realizados,  
deben   ser   conducidos   en   una   unidad   del   laboratorio  
diseñada   y   construida   apropiadamente.   Para   mayor  
orientación  ver  el  proyecto  del  documento  de  trabajo  
Guía   de   la   OMS   sobre   buenas   prác4cas   para  
laboratorios   farmacéu4cos   de   microbiología  
(referencia  QAS/09.297)  
INSTALACIONES  
•  CONTROLES AMBIENTALES  
 CONTROLES AMBIENTALES

•  Los  controles  ambientales  permiten  evaluar  la  eficacia  de  las  

prácIcas  de  limpieza  y  desinfección    realizadas  y  que  podrían  
afectar  la  biocarga  del  ambiente.  

•  Dichos  controles  deben  darse  cuando  los  materiales  estén  en  

la   zona,   se   estén   desarrollando   las   acIvidades   de  
procesamiento  y  este  presente  el  personal  operaIvo.  
 MONITOREO  AMBIENTAL  
 Programa    
 Monitoreo  de  aire  
 Plaqueo  
 Placas  de  contacto  
 Temperatura  
 Diferenciales  de  presión  
 Limites  de  acción  y  de  alerta  
 Análisis  de  tendencias      
 LIMPIEZA,  DESINFECCION  E  HIGIENE  
 Programa    
 Resultados  del  monitoreo  ambiental  
 Procedimientos  en  caso  de  derrame  
 Lavado  y  desinfección  de  manos    
 INSTALACIONES  PARA  ENSAYO  DE  
ESTERILIDAD  
 Area  clasificada    
 Control  y  registro  de  presión  posiIva    
 VesIdor    
Especificaciones recomendadas por la
USP para controles del aire

Clases  de  Area   UFC/m3  de  aire  

100   Menos  de  3  

10  000   Menos  de  20  
100  000   Menos  de  100  
Especificaciones recomendadas por USP para
superficies de equipos o instalaciones

Clase  de  Area   UFC/placa  de  contacto  o  en    

30  cm2  
100   3  (incluido  el  piso)  
10  000   10  (piso)  
Especificaciones recomendadas por USP
para indumentaria del personal operativo

Clase  de   Guantes   VesYmenta  

Área   (UFC/placa  de   (UFC/placa  de  
contacto  )   contacto)  
100   3   5  
10  000   10   20  
 !Gracias por su atención!



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