BASE DE MEDIO CROMOCEN® CGP

Cód. 4404

Base destinada a la preparación del medio cromogénico para el aislamiento, cultivo y diferenciación de
los microorganismos Gram-positivos, tales como Enterococcus, Streptococcus y Staphylococcus.

Fórmula g/L

Hidrolizado enzimático de caseína 3,0

Peptona bacteriológica S 6,0
Peptona de soya 6,0
Extracto de levadura 6,0
Extracto de carne 4,0
Dextrosa 0,1
Citrato de hierro (III) y amonio 0,5
Fosfato dipotásico 5,0
Cloruro de sodio 0,2
DL-fenilalanina 1,0
Mezcla de inhibidores selectivos 0,022
Tierra silícea 2,0
Mezcla de sustratos cromogénicos 0,15
Agar 13,0

pH 7,3 ± 0,2

Preparación

Suspender 47 g de la base en 1 L de agua destilada o desionizada y agitar suavemente. Calentar hasta

ebullición, si fuera necesario, hasta la total fusión del agar. Esterilizar en autoclave a 115 ºC durante 10
min. Enfriar hasta 45 °C. Enfriar hasta 45 °C. Adicionar 12 mL de una solución al 0,1 % (p/v) de 4-
nitrofenilfosfato sal disódica hexahidrato en una solución de fosfato disódico 0,01 M y mezclar bien.
Dispensar en placas de Petri estériles, agitando suavemente para homogeneizar. NO ESTERILIZAR
EN AUTOCLAVE A TEMPERATURAS SUPERIORES A 115 °C.

Precauciones: El medio contiene una sustancia muy tóxica por contacto con la piel, ingestión e
inhalación, con peligro de efectos acumulativos. Produce daño tras exposiciones prolongadas o
repetidas. Peligroso para el medio ambiente, con efectos negativos a largo plazo. Para manipular el
medio tome las medidas de protección necesarias. Mantenga el frasco bien cerrado. Deseche el medio
de forma segura.
Descripción

La Base de Medio CromoCen CGP (Cocos Gram Positivos) ha sido diseñada para promover el
metabolismo y desarrollo de las especies de microorganismos grampositivos poco exigentes como
enterococos y estafilococos y otros con requerimientos nutricionales especiales como especies de
estreptococos1. La adecuada combinación de diferentes bases nutritivas presentes en la formulación
proporcionan un amplio espectro de sustancias con alto valor nutritivo como proteínas hidrosolubles,
aminoácidos, péptidos, purinas, guanidinas, compuestos orgánicos, carbohidratos, minerales y
vitaminas1, 2-7.
La selectividad del medio de cultivo está dada por la combinación de inhibidores selectivos como el
acetato de talio y el ácido nalidíxico, los cuales inhiben de manera total o parcial el crecimiento de los
microorganismos gramnegativos. La efectividad de los mismos se debe a la capacidad del ácido
nalidíxico de interferir en la síntesis del ADN bacteriano 8, mientras que el acetato de talio se acumula
en la célula bacteriana y compite con el potasio y lo reemplaza, modificando la activación enzimática
de la ATPasa de Na+/K+; también interfiere con la estabilidad de los ribosomas y la síntesis de proteínas
y con sitios activos de varias enzimas y su interacción con los grupos amino-sulfhidrilo en este grupo
bacteriano9.
La dextrosa es fuente fundamental de energía para el metabolismo microbiano y el contenido de cloruro
de sodio permite su utilización como nutriente, así como el mantenimiento del equilibrio osmótico de la
célula bacteriana. El fosfato dipotásico garantiza el valor adecuado del pH del medio de cromogénico,
lo que favorece el crecimiento de las diferentes especies microbianas a detectar.
La presencia en la formulación de los sustratos cromogénicos 6-cloro-3-indoxil-beta-D-
glucopiranosido (rosa-glu) y 5-bromo-4-cloro-3-indoxil-beta-D-glucuronido, sal de ciclohexilamonio
(x-gluc) y el agregado de un suplemento estéril al medio de cultivo luego de esterilizado de una
solución de 4-nitrofenilfosfato sal disódica hexahidrato (PNP), permite detectar la actividad de
diferentes enzimas tales como beta-glucosidasa, beta-glucuronidasa y fosfatasa alcalina en las células
microbianas. Esto garantiza la diferenciación de las bacterias grampositivas por el color desarrollado en
las colonias y en el medio alrededor de las mismas, luego de 18 a 24 h de incubación. Esta
diferenciación se debe a la capacidad que tiene una enzima específica de romper el enlace entre el
sustrato específico de la reacción enzimática y un grupo cromóforo unido a dicho sustrato, que provoca
un cambio de color en las colonias desarrolladas en la superficie del medio cromogénico10.
La DL-fenilalanina permite detectar la actividad de la enzima fenilalanina desaminasa en Proteus
mirabilis, microorganismo, que junto a Pseudomonas aeruginosa, es capaz de crecer en el medio
cromogénico, mientras que el citrato de hierro (III) y amonio permite observar una coloración oscura
en las colonias y alrededor de las mismas de estas bacterias gramnegativas. La tierra silícea es una
sustancia contrastante inerte, que permite no solo una mejor visualización de las reacciones
cromogénicas sino también detectar la acción de la enzima fosfatasa alcalina. La concentración de agar
garantiza la solidez del medio cromogénico.
Las especies de Streptococcus, Enterococcus y Staphylococcus se diferencian según las siguientes
características culturales:

Microorganismo Características de las colonias aisladas Pruebas adicionales

Catalasa PYR
Enterococcus spp. Diferentes tonalidades de rosado - +
Streptococcus pyogenes Incoloras-blancas con cambio de coloración - -
del medio a amarillo
Streptococcus agalactiae Azul verdosas con cambio o no de coloración - -
del medio a amarillo
Streptococcus canis Diferentes tonalidades de rosado con o sin - -
centro más oscuro
Staphylococcus aureus Incoloras-blancas opacas con cambio de + -
coloración del medio a amarillo
Staphylococcus epidermidis Blancas + -
Staphylococcus saprophyticus Diferentes tonalidades de rosado + -
Staphylococcus haemolyticus Azul verdosas + -
Proteus mirabilis Grisáceas oscuras, pigmento negro en el
medio
Pseudomonas aeruginosa Grisáceas, pigmento verde o negro en el
medio
Escherichia coli Azul verdosas con cambio o no de coloración
del medio a amarillo
Otros gramnegativos NCB

Algunos microorganismos pueden presentar características culturales similares por lo que se

recomienda realizar las pruebas adicionales descritas anteriormente y coloración de Gram.
Algunas cepas de Escherichia coli pueden desarrollarse en el medio cromogénico pero generalmente
este microorganismos se encuentra inhibido

Almacenamiento

-Medio deshidratado: de 15 a 30 °C
-Medio preparado: Las placas con el medio preparado pueden ser conservadas hasta 7 días a
temperatura de 2 - 8 ºC, protegidas de la luz y de la deshidratación.

Control de la Calidad
Microorganismo de Método de ensayo Crecimiento Características de las
ensayo colonias aisladas

Staphylococcus aureus Inoculación por Bueno Incoloras-blancas opacas con

ATCC 25923 estrías de cambio de coloración del
agotamiento medio a amarillo
del inóculo en
Streptococcus agalactiae Bueno Azul verdosas- Azul con
la superficie del
ATCC 12386 cambio de coloración del
medio
medio a amarillo
cromogénico e
Enterococcus faecalis incubado por 24 h a Bueno Rosadas con diferentes
ATCC 29212 35  2 C. tonalidades

Escherichia coli Inhibido -

ATCC 25922

Referencias

1. Durán Vila A, Rodríguez Martínez C. Inventors; National Center of Biological products, assignee.
Selective culture medium for the isolation and/or detection of species in the Streptococcus genus. EP
patent 1 600 514 B1. 2011 Ago 31.

2. Hongfei Z, Fengling B, Fang Z, Walczak P, Xiangning J, Bolin Z, et al. Characterization of soybean

protein hydrolysates able to promote the proliferation of Streptococcus thermophilus ST. J Food Sci.
2013;78(4):575-81.

3. Zhurbenko R, Rodríguez Martínez C, Díaz Pérez M, Durán Vila A, López Hernández OD, Viera
Oramas DR, et al. Caracterización de la peptona de soya para el cultivo de microorganismos. Rev
Cubana Med Trop. 2006;58(2):109-18.

4. Zhurbenko R, Rodríguez Martínez C. Bases nutritivas para el cultivo de los microorganismos: Parte
1. Procesos tecnológicos. Salud (i) Ciencia. 2008;16(4):420-5.

5. Osmanov SK. Poluchenie I experimentalnoie izuchenie pitatielnikj sried s gidrlizatami krovi

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6. Meli F, Lazzi C, Neviani E, Gatti M. Effect of protein hydrolysates on growth kinetics and
aminopeptidase activities of Lactobacillus. Curr Microbiol. 2014;68:82-7.
7. Tsoraeva A, Zhurbenko R. Development and Characterization of a Mixed Nutrient Base for the
Culture of a Wide Range of Microorganisms. Rev Latinoam Microbiol. 2000;42:155-61.

8. Calvo J, Martínez-Martínez L. Mecanismos de acción de los antimicrobianos. Enferm Infecc

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9. Rodríguez JJ, Altamirano MA. Genetic toxicology of thallium: a review. Drug Chem Toxicol
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