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PRACTICA 2: ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN

Aricapa- Trujillo Leidy Lorena, Ospina-López Leiza Danitza, Forero-Trujillo Luis Felipe
Estudiantes de la Universidad de la Amazonia, Facultad de Ciencias Básicas,
Programa de Biología
Florencia, Caquetá

PRE-LABORATORIO

1. Establezca la diferencia entre esterilización y desinfección

El principal objetivo de la esterilización es la destrucción de cualquier tipo de vida


microbiana, este proceso elimina todos los agentes microbiológicos quedando
completamente limpio de un agente patógeno. Un ejemplo de proceso de
esterilización se aplicaría en instrumentos quirúrgicos.
La desinfección, por otro lado, es un proceso durante el cual se destruye buena
parte de la vida microbiana o se intentan inhibir los efectos nocivos de los
microbios en humanos, este se emplea donde no es posible realizar una
esterilización. La desinfección, por ejemplo, ocurre cuando limpiamos un
inodoro(Syed, 2011)

2. Dibuje la autoclave con sus partes


3. Cuáles son los métodos, fuente y tipos de agentes utilizado en la
esterilización microbiológica.

 Los métodos de esterilización pueden ser por medios físicos o químicos. Los
físicos incluyen las radiaciones (rayos solares y ultravioletas), el calor que
puede ser seco (flameo, estufa, horno y horno con ventilador) o húmedo
(ebullición y vapor de agua a presión) y por filtración. Los químicos lo
constituyen las soluciones químicas (glutaraldehído, formaldehído,
hipoclorito de sodio y otros) y el gas de óxido de etileno(Windows,
Corporation, Hori, & Sakajiri, n.d.)

1. Térmicos (físico)
 Vapor bajo presión / calor húmedo
 Aire caliente / calor seco
 Microondas / radiación no ionizante

2. Químicos
 Óxido de etileno gaseoso
 Formaldehido gaseoso
 Peróxido de hidrogeno plasmático / vapor
 Ozono gaseoso
 Solución activada de glutaraldehído
 Solución de ácido paracético
Esterilización: Agentes físicos

Calor
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del
calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de
las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.
La efectividad del calor como método de esterilización depende de:
 Temperatura
 Tiempo de exposición

Calor Húmedo
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos
efectos se deben principalmente a dos razones:
 El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras
biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc) son producidas por reacciones que
eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podrían dañar a la célula a
causa de la producción de productos tóxicos. Además, las estructuras
secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan mediante uniones
puente de hidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos
por el agua a altas temperaturas.
 El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más
elevado que el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor
mucho más rápidamente que los materiales secos debido a la energía
liberada durante la condensación.
La autoclave es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 °C. Una temperatura de 121 °C (una
atmósfera de sobrepresión) con un tiempo de exposición mayor a 15 minutos sirve
para destruir organismos formadores de esporas.(Ibarra, 2013)

Calor Seco
El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados
de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas. Estos efectos se deben
a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en
contacto con éstos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra más
lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La acción destructiva del
calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está
seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las proteínas se
estabilizan mediante uniones puente de hidrógeno intermoleculares que son más
difíciles de romper por el calor seco.
La estufa de esterilización es el artefacto utilizado en los laboratorios para
esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición
que la autoclave. La temperatura varía entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos
tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5 horas de exposición,
mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de exposición.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden ser
esterilizados a más de 160°C.

Esterilización: Agentes químicos

Dentro de los compuestos químicos podemos encontrar agentes esterilizantes,


desinfectantes y antisépticos.
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actúan.
 Concentración: varía con el tipo de agente y de microorganismo, pues una
misma concentración del agente puede producir un efecto diferente en
distintos microorganismos.
 Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma
forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.
 pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes químicos. El
aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los
microorganismos afectando la concentración del agente sobre la célula. El
pH determina el grado de disociación y la efectividad del agente químico,
pues a menor disociación mayor permeabilidad y efectividad.(CSIC, 2008)

METODOLOGÍA

La práctica de laboratorio ejecutada en la universidad de la amazonia tuvo como


enfoque principal realizar la esterilización y desinfección de los implementos que
serán utilizados a lo largo del curso de (microbiología), siendo orientada por la
docente Yineth Paola Cruz, se inició siguiendo las normas establecidas por la
OMS para realizar el lavado de manos adecuado, por último se realizó una
capacitación por parte de la docente para realizar el uso adecuado del (autoclave).

Procedimiento.

1. Esterilización del material de bioseguridad


En este procedimiento se realizó la esterilización del material de bioseguridad
dentro de él se encuentran (gorros, guantes, tapabocas, escobillones y baja
lenguas),luego fueron llevados al autoclave por 60 minutos a una temperatura de
121°C, esta se realizó utilizando un método de control para la verificación del
material, el cual conciste en un control químico en el que se adhiere cinta de
esterilización al material que ha ingresado al autoclave, si la cinta forma una
línea de color negro o gris indica que la esterilización se realizó de manera
adecuada.

2. Control de verificación de zona de trabajo


Para la verificación de limpieza de las zona de trabajo se usó un control
microbiológico con una caja de Petri en un medio de cultivo con crecimiento
bacteriano (Agar Plate Count), fue colocado por 15 minutos en la zona de trabajo
expuesto al ambiente por ultimo fue llevada a la incubadora por 48 horas para
después realizar el conteo de las bacterias mesofílicas El cual fue evaluado de la
siguiente manera:
1. 0 = satisfactorio
2. <3 = aceptable
3. >3 = no aceptable

3. Control de verificación de material de vidrio

En la verificación de limpieza de los materiales de vidrio se usaron dos


Erlenmeyer estos fueron sometidos a dos métodos de verificación, el primero para
analizar la presencia o no de grasas, el segundo para detergentes y el ultimo para
desinfectantes.
El primer método para determinar grasas consiste en agregar al Erlenmeyer 1/4
de agua destilada, mezclándola hasta finalmente descartarla del material para
luego verificar por medio de las gotas que se observan en el material, si hay
presencia o ausencia de grasas.
Para el método de detergentes, se depositó la misma cantidad de agua destilada y
luego se le agregaron dos gotas de azul de Metileno, posteriormente se realizó el
mismo procedimiento de mezcla en ambos materiales. Si la solución al mezclarla
presenta un precipitado de color verde la prueba significa positiva para
detergentes y si la solución presentaba un color blanco significa que es negativo.
Finalmente, la profesora aclaro que para obtener una desinfección se utiliza dos
gotas de nitrato de plata a 0,001N, si la solución presenta un leve precipitado, el
recipiente se determina positiva para la prueba.

RESULTADOS

1. Esterilización de los materiales de bioseguridad:


Para la esterilización de los materiales de bioseguridad (gorros, guantes,
tapabocas) y los bajalenguas y escobillones se usó un control de esterilización
químico (cinta de esterilización) que arrojo el siguiente resultado:

Figura 1. Cinta de esterilización como


control químico para los materiales de
bioseguridad, indica la invalidación del
proceso, ya que no alcanzó la
temperatura esperada (121°C)

2. Control de limpieza de material de vidrio:


Para el proceso de verificación de material de vidrio se tienen en cuenta las grasas
(figuras 3), los detergentes (figuras 4), y se encontró o siguiente:
Figura 2. Control de verificación de Figura 3. Control de verificación de
grasas en material de vidrio, indica detergentes en material de vidrio, indica
la presencia de grasas en el la presencia de detergentes en el
erlenmeyer Erlenmeyer (satisfactorio), sin embargo,
se resalta que el reactivo no fue el
indicado por eso no cambio de color

3. Control de verificación de zonas de trabajo:


En la verificación de zonas de trabajo como lo es el mesón del laboratorio se
obtuvo el siguiente resultado:

Figura 4. Control de verificación


microbiológico Agar Plate Count,
muestra 13 UFC por lo tanto No es
aceptable el lugar de trabajo.
ANÁLISIS DE RESULTADOS

Es de vital importancia que dentro del laboratorio de microbiología se dé a


entender acerca de la observación y aprendizaje de la esterilización, desinfección,
manipulación e identificación de materiales, se debe comprender como algunos
microorganismos influyen directamente en nuestras vidas. Por tal razón para la
esterilización de los materiales del curso de microbiología se va a utilizar el
método por calor húmedo mediante un autoclave. Este equipo tiene la ventaja de
producir un elevamiento de la temperatura en forma rápida y no deja residuos
tóxicos en el material que se ingresó a esterilizar, por tal motivo es imprescindible
que haya un buen empacado con el fin de que no exista contacto alguno con el
medio ambiente.
Para este caso se realizó un control químico (Cinta de esterilización), donde se
evidencio que la cinta usada si presento un color café oscuro cuando se expuso al
proceso de esterilización a vapor de tal modo como lo muestra la (figura 1), lo cual
nos indica que nuestros materiales si quedaron totalmente esterilizados.
Posteriormente se realizó el control de limpieza de material de vidrio, donde se
logró la verificación de grasa, restos de detergentes y desinfectantes, efectivamente
como lo muestran las (figuras 2,3) el material se les registra estos dos procesos de
control de limpieza dándonos como un resultado poco factible al momento de
realizar cualquier tipo de práctica o utilización de este material. Seguido del mismo
se realizó el control de verificación de zonas de trabajo para la verificación de
bacterias, donde nos demuestra la (figura 4) el conteo de 13 UFC por lo tanto no es
aceptable, para el control microbiológico.

CONCLUSIONES

 La limpieza, desinfección y esterilización son tareas fundamentales para


reducir los riesgos en entornos donde se presenta una alta carga micro
bacteriana, principalmente aquellos asociados con la contaminación y
especialmente los que afecten a nuestra salud.
 Respecto a los resultados obtenidos se desarrollaron habilidades, para
esterilizar el material de laboratorio mediante el método escogido calor
húmedo lo cual corresponde a las necesidades de esterilización como lo son
el tiempo de esterilización y la cantidad de material que se tenía por tal
razón se debe de tener en cuenta que se necesita más atención a momento
de esterilizar una autoclave que cumpla con el procedimiento.
 Se resalta la importancia de la limpieza que se debe realizar en el espacio de
trabajo donde se preparan los materiales para la esterilización, así como el
manejo a tener en cuenta después de pasar por la autoclave.

POS-LABORATORIO
1. Cuáles son los métodos para verificar la efectiva esterilización de la
autoclave
Existen métodos o controles pueden ser de tres tipos físicos, químicos y biológicos:

Controles químicos
Los controles químicos se realizan comúnmente mediante productos comerciales,
consistentes en sustancias químicas que cambian de color si se cumple uno o varios
elementos clave (temperatura, humedad, presión, concentración del agente
esterilizante) en el proceso de esterilización.
Para el caso de los controles químicos de funcionamiento para autoclaves como el
Bowie y Dick, que consiste en ubicar una lámina de control en el centro de un
paquete textil estándar, para detectar la penetración del vapor en el interior del
paquete. Se realiza siempre en las mismas condiciones: primer ciclo del día, cámara
vacía, el paquete es situado en la zona más fría (anteroinferior, sobre la llave de
purgado), en horizontal, a 134ºC durante 210 segundos. El indicador debe cambiar
de manera uniforme y en toda su longitud (7,18).

Controles biológicos
Los controles biológicos son los únicos universalmente aceptados y sirven para
verificar la eficacia de la esterilización. Consisten en preparaciones estandarizadas
de esporas de microorganismos muy resistentes, que son procesadas en el
esterilizador para comprobar si se han destruido o no y, por tanto, si se ha llevado
a cabo o no el proceso de esterilización.
Una espora de Bacillus stearotermophilus se utiliza para los procesos de
esterilización con vapor de agua o con vapores químico. Tras el proceso de
esterilización se incuban durante 24-48 horas y, posteriormente, en el caso de que
haya esporas vivas éstas volverán a su forma vegetativa, y se reproducirán
teniendo lugar un crecimiento bacteriano que será detectable por la aparición de
turbidez o por la modificación de color en el medio de cultivo, lo que pondrá de
manifiesto un fallo en la esterilización.

Controles físicos
Los controles físicos consisten en un registro del ciclo que documenta que se ha
alcanzado la presión, temperatura y tiempo adecuados, siendo elementos tales
como: termómetros, manómetros, sensores de carga, entre otros. Si se aprecia
alguna anomalía en estos parámetros la carga no puede ser considerada estéril, por
lo que a pesar de ser de utilidad no son un medio eficaz de comprobar la
esterilización. Deben realizarse todos los días y en todos los ciclos, al inicio, en su
transcurso y al finalizar el ciclo(Unidad & Los, n.d.)

2. Que método de esterilización utilizaría para cada uno de los siguientes


ejemplos
 Medio de cultivo con crecimiento bacteriano: utilizaría el método de
esterilización con autoclave
 Frascos Schott: se puede esterilizar en autoclave
 Tubos de vidrio: la esterilización se realiza en una estufa

BIBLIOGRAFÍA
CSIC. (2008). Agentes químicos: conceptos básicos y clasificación. Servicio de
Prevención de Valencia, 1–9. Retrieved from
http://www.iata.csic.es/IATA/segl/Riesgos/TOXICIDAD DE AGENTES
QUIMICOS.pdftox
Ibarra, E. (2013). Revista del Club Español de Esterilización. Retrieved from
https://www.cedest.org/publicaciones/autoclave_18_1.pdf
Syed, S. (2011). Limpieza, desinfección y esterilización. Conceptos Básicos de Control
de Infecciones de IFIC, 183–202.
Unidad, D., & Los, C. De. (n.d.). Los contenidos de esta Unidad son. Retrieved
from https://www.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf
Windows, M., Corporation, M., Hori, K., & Sakajiri, A. (n.d.). No Title阪大生のため
のアカデミック・ライティング入門.