PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIODEGRADACIÓN

MICROBIANA DE COLORANTES: INFLUENCIA DE LA

FUENTE DE CARBONO EN LA DEGRADACIÓN DE
COLORANTES POR SACHAROMYCES CEREVISAE

Resumen— Aquí debe ir el objetivo general de la Práctica. La hipótesis de trabajo, cómo lo hizo y el resultado más importante. Por
ejemplo. El objetivo general de esta práctica es verificar o refutar la segunda ley de Newton. Se supone una relación lineal entre fuerza
aplicada y cambio de velocidad producida para una partícula que es jalada por una cuerda a lo largo de un plano inclina-do sin rozamiento. La
partícula es un carrito con ruedas y fricción despreciable en los ejes. Se ha encontrado que se verifica la teoría con un error del 7 %. La idea es
que en esta parte del informe no se extienda más de 7 renglones. Mantenga el margen, observe que es más angosto que el resto del cuerpo del
artículo. Si va a pegar algo, utilice pegado especial, luego texto sin formato. No cambie absolutamente nada en este formato. Nunca coloque
aquí ecuaciones. Tampoco lleva punto aparte. Solo punto seguido. Es importante no cambiar los logos de este formato, ni el tipo de letra, ni
los márgenes. Si no está bajo este formato, no se recibe el informe de laboratorio. Nota: ¡No cambie los logos!!! Son unos autores de la
universidad tratando de publicar en una revista externa. Este informe no se recibe sin la hoja de dato firmada por el Profe. No hay excusa. Ojo
no cambie el tamaño ni el tipo de letra en ninguna zona de este formato. Deben ser claros, concisos y coherentes.

Palabras claves— Primera palabra clave, segunda palabra clave, tercera palabra clave.

sistema eucariota, con una complejidad sólo

I. OBJETIVOS ligeramente superior a la de la bacteria pero que
comparte con ella muchas de sus ventajas técnicas.
 Conocer la utilidad que tienen los Además de su rápido crecimiento, la dispersión de
microorganismos en la degradación de las células y la facilidad con que se replican cultivos
y aíslan mutantes, destaca por un sencillo y versátil
colorantes.
sistema de transformación de ADN. Por otro lado,
 Reconocer las diferentes fuentes de carbono
la ausencia de patogenicidad permite su
utilizadas por la levadura. manipulación con las mínimas precauciones.
 Familiarizarnos con el proceso de una muestra
de suelo, realización de diluciones y recuento en S. cerevisiae es un sistema genético que, a
placa de microorganismo. diferencia de la mayoría de los otros
microorganismos, presenta dos fases biológicas
II. MARCO TEÓRICO estables: haploide y diploide. La fase haploide
permite generar, aislar y caracterizar mutantes con
La levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae mucha facilidad, mientras que en la diploide se
Meyen ex E.C.Hansen, de Saccharo azúcar, myces pueden realizar estudios de complementación. Una
hongo y cerevisiae cerveza) es un hongo unicelular, levadura haploide contiene 16 cromosomas que
un tipo de levadura utilizado industrialmente en la varían en tamaño de 200 a 2200 kilobases (kb).
fabricación de pan, cerveza y vino.
En su ciclo de vida alternan dos formas,
una haploide y otra diploide. Ambas formas se
reproducen de forma asexual por gemación. En
condiciones muy determinadas la forma diploide es
capaz de reproducirse sexualmente. En estos casos
se produce la meiosis en la célula formándose
un asca que contiene cuatro ascosporas haploides.
S. cerevisiae es uno de los modelos más adecuados
para el estudio de problemas biológicos. Es un

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Una ventaja adicional de este microorganismo
consiste en que se conoce la secuencia completa de
su genoma y se mantiene en constante revisión. Ello
ha permitido la manipulación genética de los casi
6600 genes que codifica el genoma de levadura, el
uso extensivo de micromatrices de ADN para
investigar el transcriptoma y estudios a escala
genómica de, entre otros muchos aspectos,
la expresión génica, localización de proteínas y la
organización funcional del genoma y el proteoma.
La maquinaria molecular de muchos procesos
celulares se encuentra conservada tanto en
levaduras como en plantas y en mamíferos. Esto se
ilustra con el hecho de que rutinariamente se han
introducido genes de eucariotas superiores en
levaduras para el análisis sistemático de su función.
Por estas razones, S. cerevisiae se ha convertido en
una importante herramienta a gran escala de análisis
de genómica funcional, proporcionando un punto de
partida para el análisis de organismos eucariotas
más complejos. Al ser un organismo unicelular con
una tasa de crecimiento rápida, la levadura se puede
utilizar para los estudios de células que resultarían
muy complicados o costosos en organismos
multicelulares.
Actualmente, el resultado del desarrollo industrial y
el progreso tecnológico a originado diversas formas
de contaminación, las cuales alteran el equilibrio en
la naturaleza. La vía más común para desechar
contaminantes es por medio del agua, siendo ésta
una fuente fundamental para la vida. Las aguas que
contienen contaminantes son conocidas como aguas
residuales, sin embargo, estas pueden alterar el
orden del medio en donde son evacuadas si no son
tratadas adecuadamente. Las aguas residuales
recogidas en comunidades y municipios deben ser
conducidas, en última instancia, a cuerpos de agua
receptores o al mismo terreno. La compleja
pregunta acerca de que contaminantes contenidos
en el agua residual – y a qué nivel – deben ser
eliminados de cara a la protección del entorno,
requiere una respuesta específica en cada caso
concreto. (Metcalf & Eddy, 1996). Los
contaminantes que se encuentran en las aguas
residuales pueden ser microorganismos (agentes
patógenos provenientes de desechos orgánicos), los
cuales requieren oxígeno, sustancias químicas
orgánicas e inorgánicas, sedimentos o material no
soluble que se encuentra disperso, sustancias
radiactivas, entre otras. Los procesos para eliminar
estos compuestos, no siempre son factibles
económicamente.
El 22 de marzo de 2008, día mundial del agua, se
llevó a cabo una asamblea general por las Naciones
Unidas la cual es llamada “El Agua, fuente de
Vida” donde el saneamiento de las aguas fue uno de
los temas a tratar. Así, el tema del Agua, en un
tiempo no muy lejano, será uno de los principales
temas de estudio en el mundo, y la importancia de
implementar nuevas tecnologías para la eliminación
de contaminantes en el agua ya es necesaria,
llevando consigo un proceso sustentable
económicamente. Algunas industrias tales como las
textiles, papel, colorantes y plásticos, usan
colorantes al orden de teñir sus productos y también
consumen volúmenes sustanciales de agua. Como
resultado, ellos generan una gran cantidad de aguas
residuales contaminadas con colorantes. Es visto
que la percepción pública de la calidad del agua,
está realmente influenciada por el color ya que es el
primer contaminante a ser reconocido en las aguas
residuales. La presencia de pequeñas cantidades de
colorante en el agua (menos de 1 ppm para algunos
colorantes) es altamente visible e indeseable (Banat,
et al., 1996, Robinson, et al., 2001). Debido a que
han incrementado las restricciones del contenido
orgánico de los efluentes industriales, es necesario
eliminar los colorantes de los efluentes antes de ser
descargados.
Los colorantes sintéticos son compuestos orgánicos
que pueden dar brillo y color firme a otras
sustancias. Éstas normalmente contienen una
estructura molecular de compuestos aromáticos,
tales como benceno, naftaleno, tolueno y xileno,
principalmente, los cuales posiblemente provengan
de derivados de hidrocarbonos. Las estructuras
moleculares de complejo aromático de los
colorantes los hacen más estables y más difíciles de
biodegradar (Fewson, 1988; Seshadri ,et al., 1994).
Dentro de las industrias que usan colorantes, las
textiles consumen dos terceras partes de ellos. Los
colorantes usados por las industrias textiles
2
contienen diferentes estructuras, las cuales son en
mayor abundancia los colorantes ácidos, básicos,
dispersos, azo, diazo, antraquinonas básicas y
colorantes-complejo-metal (Banat, et al., 1996). En
la actualidad no se conoce exactamente el número
de colorantes producidos a nivel mundial, pero se
tiene un estimado de 10,000 colorantes con una
producción mayor a 7 X 105 toneladas y un
aproximado de 5-10% del colorante permanece en
los efluentes (Mohan, et al., 2002).
El azul de metileno (AM) es un colorante
ampliamente usado en la industria textil para la
tinción de lana de oveja y para fibras de algodón. El
azul de metileno es un colorante catiónico y es
conocido por su alta adsorción en alimentos sólidos
(Khan, et al., 2005). Variedad de métodos han sido
estudiados para el tratamiento de aguas residuales
(Banat, et al., 1996), donde las tecnologías se
dividen en diferentes categorías: biológicos,
químicos y físicos. Debido al alto costo y problemas
de disposición, algunos de estos métodos
convencionales para el tratamiento de aguas
residuales no son aplicados a gran escala para las
industrias textiles y para la de papel (Crini, 2006).
El azul de metileno, cuyo nombre científico es
cloruro de metiltionina, es un colorante orgánico
que se usa para tratar una enfermedad llamada
metahemoglobinemia. Es un compuesto químico
heterocíclico aromático con fórmula molecular:
C16H18ClN3S.
El azul de metileno es un colorante que tiene un
amplio uso en la industria, como tintes para el
cabello, forma parte de colorantes para papel,
algodones, lanas y pieles de animales. De este
colorante, se ha determinado que en materia
sanitaria la exposición a elevadas concentraciones
causa aumento del ritmo cardiaco, vómitos, mareos,
la cianosis y la necrosis de tejido expuesto, además
la mayor parte de los colorantes son mutágenos y/o
cancerígenos lo que convierte a este tipo de
compuestos en un problema de salud pública, en
este sentido, este trabajo presenta una alternativa
para la degradación usando como molécula modelo
al cloruro de metiltionina comúnmente conocida
como Azul de metileno, el estudio de esta molécula
puede extenderse en buena medida a compuestos
que contienen grupos azo como fertilizantes y
plaguicidas entre otros, ya que es este grupo el que
genera el mayor grado de toxicidad. La coloración
que presentan las aguas residuales es un indicador
de la contaminación de la misma a causa de
azocompuestos tales como las tintas (Azul de
metileno, Rojo Congo, Naranja de metileno, etc), la
coloración es notoria incluso con una concentración
de 0,5 ppm en el medio acuoso, por lo que la
descarga de estas aguas residuales en el ecosistema
es una fuente dramática de contaminación y
perturbación de la vida acuática impidiendo el paso
de luz para que se realicen los procesos
microbiológicos necesarios para el equilibrio del
ecosistema.
3

Células epiteliales teñidas con azul de metileno
Como una medida de protección al medio ambiente
se ha promulgado la resolución 0631 de 2015, que
tiene por objetivo regular la concentración de
contaminantes en vertimientos. Con el fin de tratar
los diferentes efluentes que se han visto afectados
por la coloración de sus aguas, se han hecho uso de
varios procesos de tipo fisicoquímicos, por ejemplo,
la floculación, oxidación química, fotoquímica,
ozonización, filtración, intercambio iónico,
irradiación y adsorción por carbón activado, entre
muchos otros ejemplos. A pesar de que se han
obtenido resultados considerablemente
satisfactorios en la medida en que se ha logrado
disminuir los factores de contaminación en aguas
contaminadas, estos procesos se han visto limitados
por su costo exorbitante y la eliminación incompleta
del contaminante a tratar, que conlleva en muchos
casos a la generación de lodos. Otro tipo de proceso
que se ha evaluado es el biológico, y aunque ha
ofrecido una buena remoción, no se ha investigado
lo suficiente al punto que no se ha establecido la
completa remoción del colorante.
La biodegradación de colorantes se lleva a cabo
mediante distintos procesos. Se pueden utilizar
cultivos mixtos que contengan dos grupos generales
de especies, el primero conformado por organismos
que no participan en la degradación del colorante,
pero que estabilizan el consorcio microbiano, y un
segundo grupo que incluya a las especies
involucradas en el rompimiento del grupo funcional
de la molécula y la transformación de los productos
metabólicos resultantes. Otra manera de llevar a
cabo la biodegradación es mediante
microorganismos aislados que son capaces de
degradar los colorantes. Por último, para llevar a
cabo la biodegradación se puede emplear la
remediación enzimática (A Cortazar-Martínez,
2012)
Los colorantes no fijados en la etapa de tintura,
representan un factor importante en la
contaminación del agua, ya que en el proceso de
teñido con colorantes reactivos se fija entre el 60-
80% (Sudip, 2016 y Ruiz, 2011). La presencia de
colorantes en el agua reduce el paso de la luz solar,
lo que puede generar desequilibrio en los
ecosistemas acuáticos y provocar desagradables
efectos visuales en el paisajismo natural (Quintero y
Cardona, 2009). Sin embargo, es de gran
importancia evaluar la capacidad degradativa de los
hongos, levaduras directamente sobre colorantes
industriales. Existen microorganismos capaces de
degradar estos colorantes, la mayoría son hongos de
la podredumbre, bacterias y levaduras.
Azul de metileno es uno de un grupo de químicos o
colorantes conocido como fotosensibilizador
(Graham, et al., 1972). A la luz visible en el rango
de 585 – 670 nm excita la estructura de fenotiazina
a un estado de radical libre o triplete. En solución,
AM en estado triplete pasa electrones a oxígeno
diatómico, permitiendo la formación de radicales
superóxido. El radical superóxido es una 9 molécula
biológicamente dañina (Foote,1976), conocida a
oxidar ADN, polisacáridos y lípidos directamente o
por generación secundaria de otros radicales
(Fridovich, 1976).
III. METODOLOGÍA
SUSPENSIÓN
LEVADURA
Pesar 5 g de levadura y colocar en 100
ml de agua destilada estéril.
Calentar a 33°C (mantener a esta
temperatura)
Soluciones de azúcar con colorante
4
 Rotular material: Rotule cada tubo que
contiene los diferentes carbohidratos
del 1 al 4 y marcar el control.
Cada 5 minutos anotar el volumen de
gas desprendido que se genera en la
Adicione a cada tubo 3 gotas de azul de parte superior de la pipeta graduada.
metileno.

Al tubo 1 adiciones aproximadamente 7 Fin

ml de suspensión de levadura, agite .
suavemente para homogeneizar, con
esta solución completar un tubo
graduado de 10 ml. Utilice la pipeta
Pasteur para llenar completamente el
tubo graduado.

Selle el extremo abierto del tubo con

Parafilm (pinche el Parafilm generando
un agujero pequeño).

Incubar al baño María a 33°C por cinco

minutos.

IV. RESULTADOS

V. DISCUSIÓN

VI. CONCLUSIONES

Anotar el tiempo que tarda cada

solución para perder la coloración 5
azul, registrar la información en un
REFERENCIAS