PRÁCTICA Nº 6

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRE PARA LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. INTRODUCCIÓN

Son muchos los componentes de un medio para cultivar material vegetal "in vitro":
- Sales minerales que incluyan todos los elementos esenciales tanto micro como macronutrientes
- Vitaminas tales como tiamina, piridoxina, ácido nicotínico, ácido pantoténico, Glicina, etc.
- Aminoácidos tales como L-glutamina, asparragina y cisteína
- Hexitoles como mio-inositol
- Hormonas y reguladores del crecimiento
- Fuente de carbono
- Agente gelificante
Un método de hacer menos tedioso el trabajo consiste en preparar lo que se conoce como "soluciones madre"
de algunos de estos componentes. Estas soluciones tienen una concentración que suele ser 10, 100 e incluso
1000 veces superior a la concentración final del medio. Su ventaja no estriba sólo en el hecho de que hay que
pesar menos veces cada vez que se prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que algunos
compuestos están tan diluidos en la solución final, que la pesada que habría que hacer estaría por debajo de
los límites de exactitud de las balanzas de precisión.

Las soluciones madre se conservan en frigorífico y en bote topacio durante algunos meses,
desechándose ante cualquier señal de precipitación.

Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los aminoácidos, hormonas y vitaminas,
mientras que la fuente de carbono y el agente gelificante se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades
muy elevadas y no se conservan bién en solución.

En el caso de las hormonas es mejor preparar una solución madre de cada una de ellas y medir
volúmenes determinados y congelarlos en un frigorífico de 2 a 4 oC.

2. OBJETIVO.

Preparar soluciones madre necesarias para la composición de los medios de cultivo que se emplearán
en el conjunto de las prácticas de la asignatura.

3. MATERIAL

 Botes de cristal o de plástico (preferiblemente de los primeros por su transparencia), que en algunos
casos habrán de ser de color topacio para proteger de la luz determinados compuestos que son
fotosensibles
 Balanza de precisión
 Espátulas de distinto tamaño para pesar
 Agitador magnético
 Imanes
 Vasos de precipitados
 Probetas
 Compuestos químicos
 Agua destilada

4. METODOLOGÍA

Se prepararán soluciones madre de las sales minerales, vitaminas, aminoácidos y hormonas necesarias para
los medios WPM . Veamos la composición de cada uno de ellos:

Enrazar a un litro y tomar 100 ml/1 litro de medio MS. Conservar en refrigerador

1
 NH4NO3 1.650 16.500
KNO3 1.900 19.000
CaCl2.2H2O 440 4.400
MgSO4.7H2O 370 3.700 Disolver separadamente
KH2PO4 170 1.700
Micro elementos (M2)
Cantidad Cantidad Volumen de la solución
Nombre Insumo
(mg/L) x 100 (mg/L) madre por litro de medio
MnSO4.4H2O 22,300 2.230,00 Disolver separadamente
ZnSO4.7H2O 8,600 860,00
H3BO3 6,200 620,00
KI 0,830 83,00
Na2MoO4.2H20 0,250 25,00
CuSO4.5H2O 0,025 2,50
CoCl2.6H2O 0,025 2,50
Quelatos de Hierro (M3)
Cantidad Cantidad Volumen de la solución
Nombre Insumo
(mg/L) x 100 (mg/L) madre por litro de medio
FeSO4.7H2O 27,85 2.785,00 Disolver en agua, la segunda
calentada y mezclada
Na2EDTA.2H2O 37,25 3.725,00
Vitaminas (M4)
Cantidad Cantidad Volumen de la solución
Nombre Insumo
(mg/L) x 100 (mg/L) madre por litro de medio
Acido Nicotínico 0,5 50,00
Piridoxina - HCl 0,5 50,00
Glicina 2 200,00
Tiamina - HCl 0,1 10,00

Normas generales a la hora de pesar

- Comprobar los cálculos. Y tener en cuenta que los valores de las soluciones madre están
expresados para un litro
- Leer las características del reactivo que se va a pesar. Algunos son tóxicos por inhalación o en
contacto con la piel y hay que mantener las debidas precauciones.
- Antes de pesar hay que tarar el recipiente donde se está haciendo la pesada. Nunca se debe pesar
directamente sobre el platillo de la balanza.
- Antes de introducir la cucharilla de pesar en un frasco de reactivo hay que asegurarse de que esté
limpia y seca. Es una precaución que evita la contaminación de los reactivos
- Hay que tener la precaución de tomar del frasco de reactivo muy poca cantidad de modo que en la
medida de lo posible se evite devolver al frasco parte de lo que se tomó.

Normas generales a la hora de preparar las disoluciones

- Si la disolución se va a remover con un agitador mecánico el mejor recipiente es un vaso de

precipitados. Si la agitación es manual, suele ser mejor un erlenmeyer.
- Antes de empezar a añadir los solutos se deberá poner un 70% del volumen total de agua
- Cuando una disolución incluya más de un reactivo, estos se añadirán uno a uno y teniendo la
precaución de no añadir uno hasta que el otro esté totalmente disuelto.
- Para enrasar al volumen final se utiliza un matraz aforado o una probeta, nunca un vaso de
precipitados o un erlenmeyer.
- Una vez preparada se debe guardar en un frasco perfectamente etiquetado en el que figuren los
siguientes datos:
- Tipo de solución. Ej. Macro de MS, (M1)
- Grado de concentración. Ej 100 X (100 veces más concentrada que la solución final)
- Fecha de preparación