Tinción de Gram

La tinción de Gram es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un

colorante que permite observar las bacterias mejor que bajo el microscopio.
La Tinción de Gram es una técnica que permite observar las bacterias. Las
bacterias son microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser
humano. En muchos casos forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro
entorno sin ocasionar ningún peligro para la salud. En otras situaciones, las
bacterias pueden ser patógenas, es decir, producen infecciones de diversos tipos:
cutáneas, abdominales, óseas, etc.
Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes
clasificaciones atienden a diversos criterios y características bacterianas:
morfología, metabolismo, presencia de pared celular, etc.
Una de las maneras de diferenciar a las bacterias es en base a la presencia de
una pared celular. Así, hay bacterias con una pared gruesa (formada por
peptidoglicanos) y otras con una pared mucho más delgada.
En qué consiste
La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una
técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene
una gran utilidad en medicina.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias
que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están
formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y
una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al
microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo
de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de
atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o
negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.
Cómo hacer una tinción de Gram
El proceso es muy sencillo, y los pasos a seguir serían:
Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de
algodón).
Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El
lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de
penetrar en la pared de las células bacterianas.
Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir
las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con
un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color
violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.
En el caso de las bacterias gram positivas los complejos insolubles se quedan
atrapados entre las capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin disolver y
dando la coloración morada característica al observarlas al microscopio. En
cambio, en las bacterias gram negativas estos compuestos sí que se disuelven y
pierden su color. Al microscopio se verán incoloras o de color rosa-rojo, en función
de si se ha añadido la fucsina al final de la técnica de tinción de Gram.
Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el
Staphylococcus, el Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de bacterias gram
negativas son la Escherichia coli y la Pseudomona aeuruginosa.
Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la muestra,
el procotolo de tinción y además el hecho de que algunas bacterias no presentan
pared celular.
LO QUE DEBES SABER…
Es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que
tiene una gran utilidad en medicina y que permite observar las bacterias mejor que
bajo el microscopio.
La gran aportación práctica de la tinción de gram es que permite determinar el tipo
de antibiótico así como su eficacia.
El proceso para realizar la tinción es muy sencillo.
Tinción de Gram

La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos

tipos de bacterias según se coloree su superficie, aportando información muy útil
para orientar el tratamiento antibiótico.
La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica
de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de
las bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año
1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible
diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas.
La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no
solo para el estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas
rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para
tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier

origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no
identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras
unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el
colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso
permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación
de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma
diferente a cada tipo de antibióticos, por eso es una técnica útil para seleccionar el
fármaco antimicrobiano inicial ante una infección. Hay que tener en cuenta que en
ciertas situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento
antibiótico adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram se pide de
urgencia en muchas ocasiones.

La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen

pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrán identificar, al igual que los
virus. En esos casos la tinción no coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo
de la prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de
la infección. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiológico que se
acompaña siempre de un antibiograma para estudiar de forma exacta el antibiótico
más efectivo.