Aislamiento Bacteriano

Universidad Nacional Daniel Alcides Carrión
Facultad de Ingeniería
Escuela de formación profesional de Ingeniería Ambiental
I. INTRODUCCIÓN:
Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de

microorganismos a partir de muestras complejas (suelo, agua,
alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad microbiana, así
como para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Para el estudio e identificación de microorganismos estos deben

aislarse o separarse a partir de un cultivo mixto o de poblaciones que
se encuentran en la naturaleza. Existen varias técnicas para el
aislamiento de microorganismos y la obtención de cultivos puros.
Para el estudio e identificación de microorganismos éstos deben aislarse o separarse a

partir de un cultivo mixto o de poblaciones que se encuentran en la naturaleza. Existen
varias técnicas para el aislamiento de microorganismos y la obtención de cultivos puros,
dentro de las más utilizadas se encuentra:
a. Siembra por estrías en caja de Petri o tubo de ensayo.
b. Aislamiento de bacterias con una varilla angular de vidrio.
II. OBJETIVOS:
 Con esta práctica se pretende estudiar las diferentes técnicas
de aislamiento de un microorganismo.
 Aprender la técnica fundamental empleada para la
transferencia.
 Explicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y
condiciones de incubación para el aislamiento de
microorganismos con características específicas.
 Aislar bacterias por siembra en estrías.
Microbiología-- Técnicas de aislamiento Bacteriano--

Escuela de Formación Profesional de Ingeniería Ambiental
III. MATERIALES:
tubos de ensayo con agar

macConkey.
 caja Petri con agar macConkey.
.Asa de Kolle. . Asa

digralsky.
Mechero . Muestra mixta de agua

IV. MARCO TEORICO
TÉCNICA ASÉPTICA:
 Limpiar perfectamente la mesa de trabajo con alcohol.

 Lavarse las manos con jabón y después
frotárselas con un algodón con alcohol.
 Colocarse las mascarillas y guantes
quirúrgicos a fin de evitar contaminación al
medio de cultivo.
 Colocar los tubos y demás material en una
posición adecuada en la que se puedan alcanzar
sin dificultad y si n peligro de quemarse.
 Trabajar siempre
junto al mechero, ya que
este proporciona una
zona de esterilidad de
aproximadamente 20 cm. de radio.
 Antes de realizar cualquier siembra, esterilizar el
asa o aguja a fuego directo hasta el rojo vivo,
enfriar cerca del mechero, sembrar y volver a
esterilizar.
 Durante la siembra, deben permanecer cerradas
las puertas y ventanas y no se debe hablar.
V. PROCEDIMIENTO

SIEMBRA DE MEDIO SOLIDO:

1. Tomar una muestra de agua residual
doméstica.
2.
3. Colocar la
muestra en un tubo
de ensayo
4. Tomar la caja Petri, reposarla

sobre la palma de la mano, abrirá
la tapa con el pulgar y el dedo
medio.
5. Colocar el inoculo en el borde

del agar y hacer una estría
inicial sin despegar el asa,
presionando, sin perforar el
agar, hasta cubrir la cuarta
parte de la caja.
6. Bajar la tapa de la caja y esterilizar el asa.

7. Girar la caja Petri un cuarto de vuelta,

levantar la tapa y con el asa hecha el
agua residual doméstico.
8. Tapar la caja y repetir. Marcar con plumón

.Incubar la caja de manera invertida.
METODO DISEMINADO (SOLIDOS):

1. Con la pipeta sacamos la muestra de
agua residual doméstica.
2. Vaciamos 0.2ml a
la caja Petri.

3. Con el asa Digralsky dejamos que

enfrié.
4. implantamos a la caja Petri gotas y

esparcimos,
PROCESO FINAL
Colocar las muestras inoculadas con el

agua residual en la incubadora a una
temperatura de 38ºC

VI.
CONCLUCIONES
En la práctica pudimos observar formas de técnicas de aislamiento
bacteriano, cada una con características específicas, siempre con las
medidas de bioseguridad para el manejo de los medios de cultivo y la
muestra que se tendrá contacto directo, para evitar la aparición de
otros microorganismos en nuestros cultivos sembrados.
Se colocó los cultivos preparados en la incubadora a una temperatura

condicionada para su crecimiento, la temperatura fue de 38 °C.
VII. Bibliografía:
http://www.plagasydesinfeccion.com/desinfeccion/generador-de-ozono-para-
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen
/uni_02/56/cap309.htmn
https://www.google.com.pe/search?
q=aislamiento+de+microorganismos&biw=1366&bih=667&tbm=isch&imgil
=7cYr2EknDxaBLM%253A%253BuGocSLyKtAStrM%253Bhttp%25253A
%25252F%25252Fwww.faba.org.ar%25252Ffabainforma
%25252F429%25252FABCL.htm&source=iu&pf=m&fir=7cYr2EknDxaBLM
%253A%252CuGocSLyKtAStrM%252C_&usg=__y8aWSbvnMAAStAnIUllj-
qmTWGY
%3D&ved=0ahUKEwjzoZ3CuNLMAhWJRiYKHTTdDkYQyjcIRQ&ei=r10zV7OOH
4mNmQG0uruwBA#imgrc=bs7ghzJC-ZdEnM%3A
VIII. CUESTIONARIO:
1. ¿A qué temperatura se encuban las muestras sembradas?
 se encuban a una temperatura de 35°C por 48 horas
2. ¿Por q se flamea el instrumento de inoculación antes y después

de cada inoculación?
Se utiliza para la esterilización de asas e hilos de siembra, La incineración se

emplea para destruir microorganismos presentes en el ambiente y evitar que
tengan contacto con nuestra siembra y no alterarla.
y así no observar otro tipo de microorganismos de los que se sembró.

Técnicas de
aislamiento.
Se realiza un aislamiento de los

microorganismos presentes en un
cultivo mixto en caldo ordinario,
sobre agar nutritivo. Se siembran
dos placas de agar nutritivo, una
mediante la técnica
del agotamiento de asa y otra
mediante la de estrias escocesas.
Estas técnicas pretenden diluir la

carga microbiana que se deposita
sobre el medio de cultivo de forma
que, en los últimos trazos de la siembra, haya tan pocas células que queden suficientemente
separadas unas de otras y puedan desarrollar colonias independientes.

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una serie de

diluciones seriadas a partir del cultivo mixto Con esta técnica conseguimos además de aislar
colonias, obtener un recuento del número de bacterias que tenemos en el cultivo.
Método de aislamiento por

siembra por estría en placa.
Para obtener un cultivo

axénico: (a) esterilizar un asa
de siembra por flameado en la
llama de un mechero, (b)
introducirla en la suspensión
bacteriana para recoger una
muestra, (c) sembrar haciendo
estrías sobre la superficie de
un medio sólido en una placa
Petri, y (d) volver a esterilizar
el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo
grupo de estrías en una región nueva de la placa. Repetir el proceso
una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de
células se diluyan y se separen células aisladas. (e) Después de la
incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que
el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una
colonia aislada y sembrar por estrías una segunda placa.
Método de vertido en placa.

Para obtener un cultivo axénico mediante este método, (a) hacer diluciones
seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una muestra con sólo unos
pocos cientos de bacterias, (b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión,
mezclar y verter el contenido en una placa Petri. (c) Después de la incubación, se
desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie (más grandes).


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Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de

Para el estudio e identificación de microorganismos estos deben

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a. Siembra por estrías en caja de Petri o tubo de ensayo.

b. Aislamiento de bacterias con una varilla angular de vidrio.

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tubos de ensayo con agar

 caja Petri con agar macConkey.

.Asa de Kolle. . Asa

Mechero . Muestra mixta de agua

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IV. MARCO TEORICO

 Limpiar perfectamente la mesa de trabajo con alcohol.

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SIEMBRA DE MEDIO SOLIDO:

4. Tomar la caja Petri, reposarla

5. Colocar el inoculo en el borde

6. Bajar la tapa de la caja y esterilizar el asa.

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7. Girar la caja Petri un cuarto de vuelta,

8. Tapar la caja y repetir. Marcar con plumón

METODO DISEMINADO (SOLIDOS):

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3. Con el asa Digralsky dejamos que

4. implantamos a la caja Petri gotas y

Colocar las muestras inoculadas con el

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Se colocó los cultivos preparados en la incubadora a una temperatura

 se encuban a una temperatura de 35°C por 48 horas

2. ¿Por q se flamea el instrumento de inoculación antes y después

Se utiliza para la esterilización de asas e hilos de siembra, La incineración se

Microbiología-- Técnicas de aislamiento Bacteriano--

Se realiza un aislamiento de los

Estas técnicas pretenden diluir la

Microbiología-- Técnicas de aislamiento Bacteriano--

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una serie de

Método de aislamiento por

Para obtener un cultivo

Método de vertido en placa.

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