INFORME DE LABORATORIO

MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLÓGICOS Y MÉTODOS DE SIEMBRA

1ra Parte: Preparación de Medios de Cultivo en Caja Petri

Cuestionario:
1. Siguiendo las instrucciones detalladas en el manual Merck o Difco, describa
todos los pasos para preparar lo siguiente:
a) 15 cajas de tripticasa soya agar (TSA)
Solubilidad: 40 g/litro (Merck, 2000)
Volumen de cada medio: 25 ml
𝑉 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑟𝑠𝑒 = 𝑁° 𝑐𝑎𝑗𝑎𝑠 × 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑎𝑗𝑎
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 15 × 25
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 375𝑚𝑙
375𝑚𝑙 × 40𝑔
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑇𝑆𝐴 =
1000𝑚𝑙
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑇𝑆𝐴 = 15 𝑔

- Pesar 15 g de medio TSA y colocar conjuntamente con 375 ml de agua

destilada en un matraz de 500 ml (dejar reposar 5 min).
- Calentar la mezcla anterior agitando suavemente hasta observar la disolución
completa de la misma.
- Colocar un tapón de gasa envuelto en papel empaque en el matraz asegurando
este con un hilo y proceder a llevar al autoclave por 15 a una temperatura
aproximada de 121 ºC.
- Dejar temperar el matraz para la posterior vertido y distribución del contenido
aproximadamente 25 ml por caja Petri.
- Dejar solidificar y refrigerar.
b) 30 cajas de agar EMB (Eosin methylene blue lactosa sucrose agar)
Suspender 36g/litro, Autoclave, pH: 7,1 ± 0,2 a 25 ºC
Volumen de cada medio: 25 ml
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑟𝑠𝑒 = 𝑁° 𝑐𝑎𝑗𝑎𝑠 × 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑎𝑗𝑎
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑟𝑠𝑒 = 30 × 25
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑟𝑠𝑒 = 750𝑚𝑙
 750𝑚𝑙 × 36𝑔
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝐸𝑀𝐵 =
1000𝑚𝑙
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝐸𝑀𝐵 = 27 𝑔
- Pesar 27g de agar EMB y medir 750 ml de agua destilada en una bureta. Mezclar
en un matraz de 500 ml para su dilución (no se diluye completamente).
- Calentar la mezcla agitando suavemente hasta observar la disolución completa
del medio, permitir su ebullición en dos ocasiones sin que se derrame la mezcla.
- Retirar el matraz del calor y esperar a que la mezcla enfrié. Luego colocar un
tapón de gasa cubierto en papel empaque asegurado con un hilo y proceder a
llevar a la autoclave por 15 minutos a una temperatura aproximada de 121 ºC.
- Permitir enfriar el matraz (temperatura soportable al tacto), verter
aproximadamente 25 ml del medio liquido en cajas Petri.
- Dejar solidificar a temperatura ambiente (Las placas son claras y de color marrón
rojizo a marrón violeta), para posterior empaquetar y refrigerar.
- Si está cultivando Cándida, agregue 0,1 mg de clorhidrato de tetraciclina / Litro
después de la autoclave y mezcla homogéneamente (color azul).
(KGaA, Merck, 2008) y (KGaA, Merck, 2010)

c) 10 cajas de agar VRB (Violet red bile agar)

Solubilidad: 39,5 g/1000 ml
Volumen de cada medio: 25 ml
𝑉 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎𝑟𝑠𝑒 = 𝑁° 𝑐𝑎𝑗𝑎𝑠 × 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑎𝑗𝑎
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 10 × 25
𝑉 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 250𝑚𝑙
250𝑚𝑙 × 39,5𝑔
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑉𝑅𝐵 =
1000𝑚𝑙
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑉𝑅𝐵 = 9,87 𝑔
- Pesar 9.87g de medio VRB y colocar conjuntamente con 250 ml de agua
destilada en un matraz de 500 ml (dejar reposar 5 min).
- Calentar la mezcla anterior agitando suavemente hasta observar la disolución
completa del medio.
- Colocar un tapón de gasa envuelto en papel empaque en el matraz asegurando
este con un hilo y proceder a llevar al autoclave por 15 a una temperatura
aproximada de 121 ºC.
 - Dejar temperar el matraz para el posterior vertido y distribución del contenido
aproximadamente 25 ml por caja Petri.
- Dejar solidificar a temperatura ambiente y refrigerar.

2. Indique las condiciones de temperatura, presión y tiempo que el proceso de

autoclavar con calor húmedo requiere.
Según (Gómez, 2001) nos indica que “la condición óptima de funcionamiento del
autoclave para la desinfección de los materiales y para eliminar todos los
microorganismos incluyendo las esporas bacterianas es a una temperatura de 121ºC a
1,1 atmósferas durante 15 minutos. Este proceso es el principio que aplica el autoclave
en los laboratorios de control microbiológíco”; sin embargo existen otras condiciones
de temperatura y presión de acuerdo a los parámetros que se manejen en laboratorio:

Tiempo de
Temperatura °C Presión (atm)
Exposición (min)

100 0 >60
116 0.68 60
121 1.02 20
132 1.83 10
(Pérez-Uz, Silóniz, Torralba, & Vázquez, 2011)

Bibliografía
- KGaA, Merck. (17 de Octubre de 2008). EMB Agar (Eosin Methylene-blue Lactose
Agar). Obtenido de 64271 Darmstadt:
file:///C:/Users/PC/Documents/Maria%20Fer%20CP/Microbiologia%20general/lab
oratorio/101342.pdf

- KGaA, Merck. (22 de Octubre de 2010). EMB Agar (Eosin Methylene-blue Lactose
Sucrose Agar). Obtenido de 64271 Darmstadt:
file:///C:/Users/PC/Documents/Maria%20Fer%20CP/Microbiologia%20general/lab
oratorio/101347_EMB%20Agar_Okt_2010.pdf

- Merck. (2000). Merck Microbiology Manual 12th Edition.

- Gómez, J. S. (2001). Manual de Laboratorio Microbiología. Chile. Retrieved from
http://www.etpcba.com.ar/DocumentosDconsulta/ALIMENTOS-PROCESOS Y
QUÍMICA/Manual-de-Microbiología.pdf
- Pérez-Uz, B., Silóniz, M. I. de, Torralba, B., & Vázquez, C. (2011). Metodología de
esterilización en el laboratorio microbiológico. REDUCA (Biología) (Vol. 3).
Madrid: Ana García Moreno. Retrieved from
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/818/833